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felipe.arenass@usach.cl
Adrian Brown
Brown and Henri investigated the
substrate-dependence of an enzyme-
catalyzed reaction and found that the
reaction reached a maximum velocity at
high substrate concentrations (Vmax)
Brown and Henris conclusion:
Leonor Michaelis (January 16, 1875 Maud Leonora Menten (March 20, 1879
October 8, 1949), German-born July 26, 1960), Canadian medical
American biochemist, physical chemist, scientist
and physician
Cintica enzimtica
Enzimas michaelianas: producen curvas hiperblicas
cuando se grafica velocidad de reaccin versus
concentracin de sustrato.
Ejemplo: chimotripsina
Hiprbola Sigmoide
Cintica Enzimtica
Ecuacin de Michaelis-Menten
Ecuacin de Michaelis-Menten
[P]
Vo1
d P - dS
[S1]
v
dt dt
Tiempo
Ecuacin de Michaelis-Menten
k2
k-1 k-2
k2
k-1 k-2
Ecuacin de Michaelis-Menten
k1 k2
E+S ES E+P
k -1
Km = constante de michaelis
Concentracin de sustrato
a la cual la velocidad de la
reaccin es de Vmax.
Km grandes: complejo ES dbil
Km pequea: complejo ES ms estable
Significado de Km
Ecuacin de Lineweaver-Burk
Y=mx+n
Conclusiones de la ecuacin de Michaelis - Menten
PERFECCION CATALITICA
Constantante Catalitica (kcat)
o Nmero de Recambio
NUMERO DE RECAMBIO
- Inhibidor competitivo
- Inhibidor no competitivo
- Inhibidor acompetitivo
Irreversible: Generalmente es un compuesto que se une covalentemente a la
enzima. Forma enlaces covalentes o enlaces no-covalentes fuertes. El sitio de unin
es un grupo aminoacdico que participa en la reaccin enzimtica normal
Inhibidor competitivo:
Semejante al sustrato normal y compite por el mismo sitio de unin.
El inhibidor se fija al centro activo de la enzima libre
Ki = constante
de disociacin
para el inhibidor
Inhibidor competitivo
V
Vmax Sin inhibidor
1/V Con inhibidor
1/[Vmax]
[S] -1/[Km]
1/[S]
Interacta con una parte que es importante para la funcin de la enzima, pero
no impide la unin del sustrato al sitio activo.
V
Vmax Sin inhibidor
1/V Sin inhibidor
1/[Vmax]
Inhibidor acompetitivo:
El inhibidor se une solamente al complejo ES una vez formado, impidiendo
la accin cataltica.
Inhibidor acompetitivo
Con inhibidor
1/[Vmax]
-1/[Km] 1/[S]
1. Regulacin alostrica
3. Activacin proteoltica
Regulacin alostrica
Modificacin covalente
Quinasa
Fosfatasa
Activacin proteoltica
Activacin proteoltica
Serin-proteasas
Serin-proteasas
Quimiotripsina
Mecanismo cataltico de una serin
proteasa
Laboratorio
Fosfatasa
Fosfatasa
Parmetros Cinticos
A partir de los siguientes resultados determine:
Cul es el valor de Km:
Cul es el valor de Vmax:
14
12
10
Series1
Vmax= 14.97 8
Logartmica
Km= 0.398 6 (Series1)
4
0
0 1 2 3 4 5
1.-
A partir de los siguientes resultados determine:
Cul es el valor de Km:
Cul es el valor de Vmax:
[S] mM V (mmol/ml/min)
0,1 3,33
0,2 5,0
0,5 7,14
0,8 8,0
1,0 8,33
2,0 9,09
1.- Uno de los parmetros cinticos importantes es el valor de Km. Mientras mayor sea
el valor de Km, menor es la afinidad de la enzima por el sustrato. Es correcta esta
aseveracin? Explique brevemente y fundamente su respuesta.
2.- Se mide la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima en funcin de la
concentracin del sustrato. Esta reaccin se realiza en presencia y ausencia de un
inhibidor especfico (I). Los datos obtenidos se indican en la siguiente tabla:
Velocidad (mol/min)
[S] (M) Sin inhibidor Con inhibidor
0.3 x 10-5 10.4 4.1
0.5 x 10-5 14.5 6.4
1.0 x 10-5 22.5 11.3
3.0 x 10-5 33.8 22.6
9.0 x 10-5 40.5 33.8