Bioprospeccin, aislamiento y caracterizacin de microalgas del lago del

Jardn Botnico de Medelln.

Juan Diego Ortega Mesa; Maria Fernanda Gutirrez; Carolina Arias Gallego

Las microalgas son seres protistas cintica molecular. Si bien, en hiptesis el

unicelulares, en mayora, de metabolismo proyecto buscaba la produccin de

fotoauttrofa del que se conocen ms pigmentos a partir de microalgas

29000 especies, lo que indica su

Semana 0. Recoleccin de la muestra:
diversidad. Tienen una estructura simple,
El muestreo se llev a cabo el da 18 de
se reproducen por mitosis y pueden ir
abril de 2016 al medioda en medio de una
desde 1micormetro hasta varios
poca de altas temperaturas y escasez de
centmetros de longitud. Por otra parte, su
lluvias en el lago del Jardn Botnico de
estudio comenz a principios del siglo
Medelln Joaqun Antonio Uribe tras haber
XIX con el fitoplancton y hasta hoy en da
obtenido el permiso del directivo
se le han atribuido diversas aplicaciones y

se ha reconocido su importancia en la

evolucin. En cuanto a sus cultivos,

pueden producir gran cantidad de biomasa,

tienen alta eficiencia fotosinttica,

Imagen 1. Lago del Jardn botnico de
requieren nutrientes simples y luz sin Medelln. Foto recuperada de:
https://www.youtube.com/
necesidad de tierra cultivable. En este watch?v=pYF4mOxku0Y

proyecto se busca principalmente la encargado del lago. Como hiptesis se

determinacin y caracterizacin de tiene que, debido a la notoria reduccin del

microalgas al igual que su seguimiento de nivel del lago por la sequa, la

concentracin de microorganismos, la morfologa encontrada est dentro de

especialmente de microalgas, en el lago estas variedades: Scenedesmus,

era mayor por lo que posteriormente se vio Pedastrum, Tetraedron y Chlamydomonas

beneficiado el cultivo realizado. La

muestra presenta un color verde-amarillo

ligeramente turbio. Para conservar la

muestra, se deja en reposo hasta el da Imagen 2. Muestras recolectadas en el lago del

Jardn Botnico de Medelln.
siguiente en un lugar fresco y con el ya que son algas verdes en lago con

recipiente tapado. Sin embargo, al cabo de condiciones diversas. No se realiza una

unas horas se nota una ligera precipitacin cuantificacin en la cantidad de muestra ya

verde similar a lama, pero se ignora la que es irrelevante a la hora de realizar las

causa y se agita el recipiente para tener disoluciones sucesivas, mtodo por el cual

homogeneidad de nuevo. Debido al color, se tratarn las muestras para el posterior

se espera, segn Edward G. Bellinger et all cultivo en cajas de Petri con medio CHU.

en el libro Freshwater Algae:

Semana 0. Siembra de la muestra:
Identification, Enumartion and use as
La muestra seleccionada es la primera de
bioindicators en la tabla 1.8. Ecological
izquierda a derecha en la imagen 2. De esta
Diversity of Freshwater Green Algae, que

Imagen 3. De izquierda a derecha: Diluciones de la muestra original en medio CHU lquido de 10-
1
, 10-2 y 10-3. Caja de Petri con siembra de dilucin 10-1. Caja de Petri con siembra de dilucin 10-2.
Caja de Petri con siembra de dilucin 10-3.
se realizan disoluciones seriadas de las
siguientes concentraciones en medio CHU
lquido en tubos de ensayo y agar en cajas
de Petri: 10-1, 10-2 y 10-3. Para la
disolucin 10-1, se hizo siembra por
agotamiento; para 10-2, siembra por estra
y para 10-3, siembra por agotamiento. Para
ambos medios, se observa que las muestras
no afectan el color de los medios, por lo
tanto, en los tubos se contina viendo un
lquido de leve consistencia transparente y
las cajas de Petri conservan su color caf
traslcido debido al agar.
1 Semana: Observacin microscpica
de dilucin 10-1 y determinacin
morfolgica:
En un primer instante, se sabe que
macroscpicamente no hay aparente
contaminacin de la muestra. Eso se
evidencia al mirar a travs del microscopio
y observar una morfologa caracterstica
de microalgas que se mostrar con mayor
detalle ms adelante. Una apreciacin
general de la vista de los microorganismos
es, diminutas formas que se movan
aleatoriamente a travs del medio acuoso
sobre el portaobjetos. Visibles sin
necesidad de tinciones debido a la
presencia de clorofila (color verde)
generada por los cloroplastos soportado
por las condiciones necesarias para su
crecimiento: medio de cultivo con
nutrientes y gran cantidad de luz continua
para facilitar la fotosntesis y favorecer su
crecimiento.
Macroscpicamente, se ven pequeas
Imagen 4. Paste superior: Cultivo de microalgas
con dilucin de la muestra original 10-1 tras 1
semana. Parte inferior: Cultivo 10-1 tras 2
semanas.
colinas dispersas de coloracin verde, este
verde indica que son microalgas clorofitas
fotosintetizadoras. La colonia en la

Imagen 4 denota que no puede

determinarse a simple vista qu microalgas

Scenedesmus quadricauda
de encuentran en crecimiento, por lo que

es necesario realizar observaciones a nivel

microscpico como se ve en la Imagen 5.

Scenedesmus ecornis
De acuerdo con la imagen 5 se pueden

observar las siguientes morfologas que

permiten saber qu microalgas se

reproducen en la muestra tomada bajo Semana 2. Inculo y preparacin del

condiciones ptimas para el metabolismo medio de cultivo.

de estos microorganismos.
En esta parte del proceso, se realiza el

Cenobios: tienen formas bien aislamiento del inculo que es una muestra
definidas, de tamao y nmero de
clulas constante.

Filamentos: Clulas organizadas

en filas.

Chroococcus turgidus: En estas se

puede observar turgencia en cada
una de las clulas presentes.
Tabla 1. Composicin de medio de cultivo
CHU.
representativa de la colonia a aislar cultivo con significativa densidad de

depositada en un tubo de ensayo con el microorganismos.

medio preparado. Como fue mencionado

anteriormente el medio que se consider
como el ms acertado para el cultivo fue
CHU, del cual se muestra su composicin
en la Tabla 1, sin embargo, no fue
necesario realizar este procedimiento pues
ya estaba listo para depositar en el
erlenmeyer donde se
seguimiento de la
microorganismo.
Por otra parte, se realiz el aislamiento del
inculo en un tubo de ensayo con el medio
tomando con el haza una parte de un
Semana 3. Resultados. Cintica de los
microorganismos.
Tras realizar la preparacin del medio y
conservar bajo nevera, se incorpora el
medio del tubo de ensayo donde se
encuentra el inculo al Erlenmeyer y se
realizan las mediciones de absorbancia y
realizara el
conteo celular durante 6 das. El
cintica del
procedimiento se realiz de la siguiente
manera durante los 6 das: Se toma 1ml de
muestra del medio de cultivo en la cmara
de extraccin bajo condiciones de asepsia
incorporando este en una celda de

espectrofotmetro. Leer la absorbancia a

Crecimiento
438nm y posteriormente, de la celda tomar
0,7
0,6
Absorbancia (438 nm)

0,5
10microlitros y depositar en la cmara de
0,4
0,3 Neubauer. Observar en el microscopio y
0,2
0,1 realizar el conteo celular en los cuadros
0
0 5 10
Tiempo (das)
extremos. Vale aclarar que no todos los

das se llev a cabo el conteo y por ello ste

Grfica 1. Crecimiento de microalgas en
Absorbancia (a 438nm) vs. Tiempo (das). se tom como una experiencia que
 permiti ver la movilidad de las clulas y Fase de latencia: Es el periodo de

una forma de sustentar el proceso de adaptacin de un microorganismo al

crecimiento, reproduccin y muerte medio de cultivo. En este caso, podemos

celular. observar que la fase de latencia esta entre

los valores de absorbancia de 0.097 y

Las siguientes graficas presentan la
0.099.
informacin sobre el crecimiento de las

microalgas en el seguimiento realizado por Fase exponencial: fase en que se da el

durante ocho das. aumento regular de la poblacin que se

duplica a intervalos regulares de tiempo.

Crecimiento
y = 0,0915x - 0,1164 Podemos notar que la grfica tiene una
0,7
0,6 fase exponencial de crecimiento mayo
Absorbancia (438 nm)

0,5
0,4 entre los das 3 y 4 donde el valor de la
0,3
0,2
absorbancia vario en mayor cantidad: de
0,1
0
0 5 10 0.099 a 0.296.
Tiempo (das)

Fase estacionaria: Cese de crecimiento por

Grfica 2. Tendencia lineal del crecimiento
de las microalgas y su respectiva ecuacin. agotamiento de nutrientes, entre otras
Esta primera grafica es de absorbancia
causas. En la grfica se nota una fase
(que fue la manera en que se midi la
estacionaria entre los das cuatro y cinco
biomasa) vs el tiempo en das que dur el
(donde no hay pendiente o es muy
seguimiento.
pequea) Indicando que durante esos das

La grfica nos permite identificar las fases

del crecimiento de los microorganismos:

el crecimiento se detuvo o disminuyo La tercera grafica proporciona

significativamente. informacin sobre la velocidad especifica

mxima de crecimiento (max) que se

Fase de declinacin o muerte: Fase en la
obtiene a partir de tomar los valores del
que el nmero de clulas que mueren es

mayor al nmero de clulas que se dividen.

Se puede notar que la grfica termina en

crecimiento (fase exponencial) debido a

que el seguimiento no fue durante tanto

tiempo como para poder comenzar a notar

una fase de declinacin. Tabla 2. Datos correspondientes a la Grfica

3.

En la curva puede notarse una disminucin

Tiempo (das)
debido al cambio de la absorbancia entre 0
Ln de biomada (Lnabs)

0 1 2 3 4 5
-0,5
los das 1 y 2, que disminuyo de 0.097 a y = 1,1x - 5,61
-1

0.097 por errores en el espectrofotmetro -1,5

-2
utilizado. Es por eso que a partir de ahora
-2,5

utilizaremos la segunda grfica, Velocidad especifica de crecimiento

despreciando el valor obtenido entre los
das 1 y 2.
La Grfica 2 slo tiene en cuenta los
valores obtenidos del da 2 al 6, para poder
obtener una lnea de tendencia acorde con
el crecimiento de los microorganismos.
Grfica 3. Velocidad especfica de crecimiento
determinada a travs del tiempo y el logaritmo
natural de biomasa.
logaritmo natural de la biomasa, en este
caso medida usando la absorbancia. As, se
tomarn rectas con esos valores, y las
pendientes de dichas rectas sern la
velocidad especifica de crecimiento.
Para la grfica se toman los dos valores del

Ln(Absorbancia) correspondientes a los

dos das entre los que se dio el mayor

crecimiento exponencial de las microalgas Tabla 3. Datos correspondientes al conteo

1.
(siendo estos los das tres y cuatro). De
= 2.5 104
este modo se obtiene la recta que va a tener
= 25000

la mayor pendiente, siendo esta la
Segundo conteo:
velocidad especifica MAXIMA de

crecimiento. En la ecuacin de la recta

obtenida es posible afirmar entonces que la

max es 1.1.
Tabla 4. Datos correspondientes al conteo
2.
Conteo de clulas y concentracin de
Cantidad total de microorganismos: 17
clulas obtenidas:
17
Promedio: = 4.25
4
Primer conteo:
= 104

La dilucin se desprecia nuevamente.

Entonces se tiene que:
= 4.25 104

= 42500

Imagen 5. Capturas del primer conteo en
cmara de Neubauer.
Cantidad total de microorganismos: 10
10
Promedio: = 2.5
4
= 104

La dilucin se despreciar. Entonces se

tiene que:
Ultimo conteo: debido a su mitosis. Si bien no hay una alta

diversidad morfolgica en este y se asume

que lagos con caractersticas similares al

trabajado pueden tener el mismo tipo de

algas encontradas. No se realiz

produccin de pigmentos como fue

propuesto inicialmente debido al trabajo

Imagen 6. Capturas del ltimo conteo en
en baja escala.
cmara de Neubauer.
Se us el cuadro del centro. Se contaron
Durante los procedimientos realizados en
28 unidades de microorganismo.
28 las practicas se llev a cabo correctamente
Promedio: = 1.12
25
los mtodos de siembra en las cajas de
=
(4 106 )
Petri, los procedimientos de esterilizacin,
Nuevamente se desprecia la dilucin,
entonces se tiene que: las condiciones de incubacin y el manejo

1.12 de implementos como el microscopio.

=
4 106
Igualmente es notable que, las condiciones
= 280000

Conclusiones. de incubacin fueron las adecuadas

evidenciado por la presencia de clulas

A pesar de la variedad de especies de
turgentes y por la no presencia de rastros
microalgas existentes en la naturaleza, se
de lisis.
obtuvo como resultado de esta experiencia

prctica que el agua del Jardn Botnico de Referencias.

Medelln est compuesta por algas verdes Hoek, C. Van den, Mann, D.G., Jahns,
clorofitas fotosintticas con una alta H.M. (1995). Algae. An introduction to
capacidad para reproduccin celular
phycology. Cambridge University Press. Uruguay. Recuperado de:

Cambridge. limno.fcien.edu.uy/pdf/teorico_microalga

s.pdf
Quevedo, C., Morales, S., Acosta A.

(2008) Crecimiento de Scenedesmus sp en Fernndez, J.M. (2014) Microalgas:

diferentes medios de cultivo para la definicin y caractersticas. Universidad

produccin de protena microalgal. de Almera, Espaa. Recuperado de:

Revista Vitae. Medelln, Colombia. http://www.ual.es/~jfernand/ProcMicro70801

Recuperado de: 207/tema-1---generalidades/1-1-

https://aprendeenlinea.udea.edu.co/revista microalgas.html

s/index.php/vitae/article/viewFile/762/65

(s.f.) Microalgas. Instituto de biologa,

Universidad de la repblica de Uruguay,