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1 (2009): 39-46
Yama Snchez*, Oriela Pino*, Teresa M. Correa**, Eber Naranjo*, Aleika Iglesia*
*Grupo de Plagas Agrcolas, Centro Nacional de Sanidad Agropecuaria (CENSA) Apartado 10,
San Jos de las Lajas, La Habana. Cuba. Correo electrnico: ysanchez@censa.edu.cu;
**Laboratororio Anti-doping, Instituto de Medicina Deportiva (IMD). Direccin Postal: 100 y Aldab,
Boyeros, Ciudad de La Habana, Cuba
RESUMEN: El gnero Piper, perteneciente a la familia Piperaceae, ha sido objeto de estudios fitoqumicos
y biolgicos, motivados por sus numerosas aplicaciones etnobotnicas. Los aceites esenciales, obtenidos de
diferentes plantas pertenecientes a este gnero, inhiben el crecimiento de un amplio grupo de
microorganismos que causan infecciones importantes al hombre, las plantas y los animales. El objetivo
del trabajo fue realizar el estudio qumico y microbiolgico del aceite esencial de Piper auritum (Caisimn
de ans). La composicin del aceite de las hojas y tallos de esta planta, obtenido por hidrodestilacin
empleando un equipo Clevenger, fue investigada por CG/EM. El efecto antibacteriano del aceite esencial
se evalu utilizando el mtodo de difusin en agar sobre los serovares I y III de Xanthomonas albilineans
y Acidovorax avenae subsp. avenae. El componente mayoritario identificado en el aceite fue el
monoterpeno oxigenado safrol (74,29 %). El aceite present una actividad antibacteriana marcada,
observndose una inhibicin del crecimiento bacteriano de las especies evaluadas. El aceite esencial de
caisimn de ans es un candidato botnico con actividad microbiolgica promisoria.
(Palabras clave: aceite esencial; Piper auritum; Xanthomonas albilineans; Acidovorax avenae subsp.
avenae)
ABSTRACT: The Piper genus, belonging to the Piperaceae family, has been the objective of phytochemical
and biological studies because of its several etnobotanical applications. The essential oils of Piper species
have been used with many purposes. One of them is that they inhibit the growth of a large number of
human, animal and plant pathogens. The aim of this work was to carry out the chemical and
microbiological study of the essential oil of Piper auritum (Caisimn de ans). The composition of the
essential oil of leaves and stems of this plant, obtained by hydrodistillation in a Clevenger-type apparatus,
was researched by GC/MS. The essential oil was tested against Xanthomonas albilineans and Acidovorax
avenae subsp. avenae for antibacterial properties by using the agar diffusion method. The main
constituent of the oil was safrole (74,29%). The bioassay showed that the essential oil had a strong
bactericidal activity.
(Key words: essential oil; Piper auritum; Xanthomonas albilineans; Acidovorax avenae subsp. avenae)
Los aceites esenciales son usados como agentes split 20:1), acoplado con un espectrmetro de masas
carminativos, estimulantes, diurticos y antireum- de la serie Agilent 05973; ambos provenientes de la
ticos; algunos poseen propiedades insecticidas, firma Agilent Technologies. El espectrmetro de ma-
antifngicas y antibacterianas frente a microorga- sas trabaj en modo scan de adquisicin a 70eV. Se
nismos patgenos y han sido considerados como in- utiliz un analizador cuadrupolar a 150C de tempe-
gredientes activos en algunos plaguicidas botnicos, ratura del cuadrupolo, el detector trabaj en un rango
debido a su eficacia frente a un nmero considerable de masas de hasta 800 uma, las temperaturas de la
de plagas, su toxicidad mnima en mamferos y su interfase y de la fuente fueron 280C y 230C respec-
disponibilidad general (1,2,3,4). tivamente. Se utiliz una columna capilar SPB-5
(L=15m, DI=0,25mm, f=0,10mm) con una inyeccin
Aunque la actividad biolgica de los aceites esen-
de 2 mL. La temperatura del horno fue programada:
ciales ha sido confirmada en muchos estudios, los
60C (2 min isotrmicos), seguido de una rampa de
datos recogidos en esos materiales muestran una gran
calentamiento hasta 100C a razn de 4C.min-1, otra
variabilidad. Las causas de ese comportamiento pa-
rampa de 10C.min-1 desde 100C hasta 250C don-
recen ser las diferencias en la composicin del aceite
de finalmente permaneci durante 5 min isotrmicos.
esencial debido a factores genticos y ambientales y
Se utiliz Helio como gas portador con un flujo cons-
es por eso que resulta de inters la identificacin de
tante de 1,0 mL.min-1. La identificacin de los com-
los principales constituyentes responsables de la ac-
puestos se realiz mediante el uso combinado de las
tividad del aceite estudiado (2,5).
bases de datos automatizadas NBS-NISTASCI y Wiley
Las plantas del gnero Piper son ampliamente utili- 275 y el Atlas Registry of Mass Spectra Data (11).
zadas en la medicina tradicional para el tratamiento de
Las bacterias fitopatgenas utilizadas para la eva-
vaginitis, desrdenes intestinales y como citotxico y
luacin de la actividad antibacteriana del aceite esen-
antimicrobiano (6,7). Los metabolitos secundarios en-
cial fueron: Xanthomonas albilineans (Ashby) Dowson
contrados en extractos, obtenidos de diferentes partes
(los serovares I y III) y Acidovorax avenae subsp.
de estas plantas, muestran actividad antifngica, in-
avenae (Manns) Willems et al., ambas aisladas de
secticida, antialimentaria, estimulante, bactericida y
muestras procedentes de la Estacin Territorial de
citotxica (6,8,9). Sus aceites esenciales en particular
Investigaciones de la Caa de Azcar de Jovellanos
inhiben el crecimiento de un amplio grupo de
e identificadas mediante mtodos moleculares (12).
microorganismos que causan infecciones importantes
Para preparar el inculo, ambos serovares de la es-
en el hombre, las plantas y los animales, siendo parti-
cularmente tiles como antivirales, antimicticos y pecie X. albilineans fueron sembrados en medio de
antibacterianos (9). En este contexto el CENSA ha in- cultivo Wilbrink (BDH) e incubados a 28C durante 48
vestigado un grupo de plantas cubanas pertenecien- horas, mientras que A. avenae subsp. avenae se sem-
tes a este gnero y el objetivo de este trabajo fue rea- br sobre placas de agar nutriente (Biocen) y se incu-
lizar el estudio qumico y microbiolgico del aceite esen- b a igual temperatura durante 24 horas. Una vez
cial de Piper auritum Kunth (Caisimn de ans). activadas las bacterias en estudio, se prepararon sus-
pensiones bacterianas, hasta lograr una turbidez com-
parable al patrn de turbidez 0,5 Mc Farland. Esta
MATERIALES Y MTODOS comparacin se realiz visualmente y, mediante lec-
turas en el espectrofotmetro, a una longitud de onda
Las hojas y tallos de P. auritum se colectaron du-
de 625 nm, se ajust en el rango de 0,08 a 0,1 que
rante el mes de abril de 2008 en San Jos de las
equivale a 1-2 x 10 UFC.mL . De este inculo se to-
Lajas, provincia La Habana. Se parti del material
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vegetal fresco y no daado y la extraccin se realiz cin qumica y actividad biolgica frente a bacterias
por el mtodo de hidrodestilacin empleando un equi- fitopatgenas.
po Clevenger segn lo establecido en la norma ISO
La composicin qumica del aceite se determin
65-71:84 (10). El tiempo de destilacin fue de tres
en un cromatgrafo de gases de la serie Agilent 6890
horas. El aceite esencial se sec sobre sulfato de sodio
con un inyector del tipo split splitless (relacin de
anhidro y se guard en fro hasta su anlisis. Fue ca-
racterizado determinndose su olor, color, composi-
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siones bacterianas. La temperatura de incubacin fue un color amarillo claro. La identificacin de los com-
de 28C, la primera bacteria fue incubada durante 24 ponentes del aceite esencial y sus cantidades relati-
horas y la ltima durante 48 horas. Una vez transcu- vas se informan en la Tabla 1.
rrido este tiempo se midi el halo de inhibicin del
De los 32 componentes separados en el aceite
crecimiento bacteriano. La actividad de las concen-
esencial, 24 fueron plenamente identificados y repre-
traciones del aceite se clasific en marcada, modera-
sentan aproximadamente el 99,45 % de la composi-
da, ligera o sin actividad, segn los rangos de la es-
cin relativa; de ellos, 12 constituyen hidrocarburos
cala utilizada por Toda et al. (14). En todos los casos
monoterpnicos (20,17%), siete hidrocarburos
la evaluacin se realiz por triplicado y se emple un
sesquiterpnicos (3,54 %) y cinco compuestos oxige-
control del crecimiento bacteriano y un control positi-
nados (75,73%), los que representan la mayor pro-
vo de Cloranfenicol (30 g.disco-1) (Imefa) para cada
porcin desde el punto de vista cuantitativo en el aceite
bacteria en estudio.
esencial. El componente mayoritario fue el
monoterpeno oxigenado safrol (74,29%) y se puede
RESULTADOS Y DISCUSIN considerar la presencia de - terpineno (6,21%), -
terpinoleno (4,96 %), - pineno (2,99 %), - terpineno
El aceite esencial extrado de las hojas y tallos de (2,65%), - pineno (1,79%) y trans-cariofileno (1,43%).
P. auritum tiene un olor penetrante, caracterstico y
TABLA 1. Composicin qumica del aceite esencial de Piper auritum./ Chemical composition of the essential oil of
Piper auritum
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Se han efectuado estudios acerca de la composi- Al evaluar la accin antimicrobiana del aceite fren-
cin qumica de varios aceites esenciales del gnero te a las bacterias estudiadas, cuando se usaron 20
Piper, encontrndose como constituyentes principa- L del aceite puro, se observ una inhibicin total
les fenilpropanoides, monoterpenoides y del crecimiento bacteriano, y no la formacin de
sesquiterpenoides (8,9,15). Los trabajos relacionados halos de
con la composicin de P. auritum coinciden con la pre-
sencia de safrol como componente mayoritario. Por
ejemplo Castro y Poveda (16) y Gupta et al. (17) in-
formaron como constituyente principal del aceite esen-
cial de caisimn el safrol, encontrndose en un rango
de 70 a 85 % de la composicin total. Recientemente,
Blanco et al. (18) plantearon que el aceite esencial de
esta especie contiene una fraccin oxigenada como
componente mayoritario, la cual es rica en safrol, -
linalol, cineol y acetato de terpineol, as como una frac-
cin hidrocarbonada rica en sesquiterpenos.
En nuestro pas, el aceite esencial de las hojas de
P. auritum, obtenido mediante hidrodestilacin con
equipo Clevenger a partir del material vegetal seco,
present un 64,5% de safrol como principal compo-
nente. Se destaca adems la presencia de -
cariofileno (4,65 %), germacreno (3,11 %), cis-nerolidol
(2,8%), linalol (2,29%), - terpineno (2,19%),
terpinoleno (1,87 %), - terpineno + p- cimeno (1,79%),
- pineno (1,45%) y biciclogermagreno (1,26%) (19);
la mayora de ellos presentes en el aceite evaluado,
aunque en diferentes proporciones.
Las discrepancias relacionadas con la composi-
cin del aceite, en cuanto al contenido de safrol y la
abundancia relativa de los otros componentes pre-
sentes como componentes minoritarios, pueden ex-
plicarse considerando que variaciones en las condi-
ciones ecolgicas (clima, tipo de suelo, estacin del
ao, lugar geogrfico) en que se desarrolla la planta;
as como las condiciones de extraccin (mtodo de
extraccin, tiempo, condiciones de la materia prima),
pueden producir en el aceite cambios cualitativos y
cuantitativos (2, 5). Por ejemplo: en un estudio reali-
zado en la costa colombiana con el aceite esencial de
P. auritum obtenido mediante hidrodestilacin asisti-
da por microondas (MWHD) durante 30 min, se infor-
m un contenido de 93,2% de safrol y 4,3% de
miristicina y 90,3% de safrol y 5,8% de miristicina para
los aceites de hojas e inflorescencias de esta planta,
respectivamente (20). En otra localidad colombiana,
bajo iguales condiciones de extraccin, se inform una
composicin qumica de 91,4% de safrol y 4,8% de
miristicina como componentes mayoritarios del acei-
te esencial de las hojas de caisimn de ans (3).
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A B
C D
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eugenol (componente mayoritario del aceite de cla- 3. Castaeda ML, Muoz A, Martnez JR, Stashenko
vo) y el cinamaldehido (componente de la canela) E. Estudio de la composicin qumica y la
actan inhibiendo la produccin de enzimas actividad biolgica de los aceites esenciales de
intracelulares, tales como amilasas y proteasas, lo que diez plantas
provoca el deterioro de la pared y un alto grado de
lisis celular (30,33).
Aunque ha sido extensamente estudiada y com-
probada la actividad antibacteriana de diferentes ex-
tractos de P. auritum (18), la accin de sus aceites
esenciales frente a las bacterias en estudio se infor-
ma por primera vez; estas bacterias provocan enfer-
medades de importancia para el cultivo de la caa de
azcar. A. avenae subsp. avenae y X. albilineans son
responsables de las enfermedades conocidas como
la raya roja y la escaldadura foliar respectivamente, esta
ltima considerada la enfermedad bacteriana ms im-
portante de este cultivo y que provoca prdidas millo-
narias en la produccin caera de Cuba y el mundo.
Resulta necesario realizar nuevas evaluaciones
que permitan determinar la concentracin mnima
inhibitoria del aceite frente a cada bacteria; pero es-
tos resultados sirven de punto de partida para experi-
mentos posteriores, adems de demostrar la activi-
dad antibacteriana promisoria del aceite esencial de
caisimn de ans frente a las bacterias evaluadas.
Nuevos plaguicidas basados en este aceite podran
constituir una alternativa eficaz y ambientalmente se-
gura para el control de enfermedades bacterianas en
el cultivo de la caa de azcar, tomando en considera-
cin la amplia disponibilidad y facilidad de cultivo de
esta especie vegetal, as como la gravedad de las afec-
taciones provocadas por los fitopatgenos estudiados.
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