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Lisado de sangre
Utilizar el protocolo siguiente para preparar el lisado a partir de muestras de sangre
(nucleadas o No nucleados).
Nota: Si est procesando> 200 l de muestra de sangre, debe comprar
PureLink Litio Genmico / Tampn de Unin y Proteinasa K adicionales
(Pgina 43 ).
1. Coloque un bao de agua o un bloque de calor a 55 C.
2. En un tubo de microcentrfuga estril, aada 200 l de muestra de sangre fresca o
congelada (si Utilizando <200 l de muestra de sangre, ajustar el volumen de la
muestra a 200 L usando PBS).Para el procesamiento de muestras de sangre> 200 l
y 1 ml,
En consecuencia.
3. Aadir 20 L de proteinasa K (suministrado con el kit) a la muestra.
4. Agregue 20 L de RNasa A (suministrada con el kit) a la muestra, mezcle bien por
breve Vrtex, e incubar a temperatura ambiente durante 2 minutos.
5. Aadir 200 l de Lisis Genmica PureLink / Binding Buffer y mezclar bien por
Vrtex para obtener una solucin homognea.
6. Incubar a 55 C durante 10 minutos para promover la digestin de protenas.
7. Aadir 200 l de etanol 96-100% al lisado. Mezclar bien vortexando 5 segundos
para producir una solucin homognea.
8. Proceder de inmediato a Binding DNA (pgina 23 ).
Manchas de sangre
Utilice el siguiente protocolo para preparar el lisado de manchas de sangre secas.
1. Coloque un bao de agua o un bloque de calor a 55 C.
2. Coloque 2-5 punzones de mancha de sangre seca (2-3 mm de tamao) en un estril
Tubo de microcentrfuga.
3. Aadir 180 L de PureLink Genomic Digestion Buffer y 20 L de Proteinase K
(Suministrado con el kit) al tubo. Mezclar bien vortexando. Asegrese de que las
piezas estn Completamente sumergido en tampn.
4. Incubar a 55 C con vrtex ocasional durante 30 minutos.
5. Centrifugar la muestra a velocidad mxima durante 2-3 minutos en la habitacin
Temperatura para granular fibras de papel. Transferir la muestra a un lugar limpio y
estril. Tubo de microcentrfuga.
6. Aadir 20 L de ARNasa A (suministrada en el kit) al lisado, mezclar bien por breve
Vrtex, e incubar a temperatura ambiente durante 2 minutos.
7. Aadir 200 l de Lisis Genmica PureLink / Binding Buffer y mezclar bien por
Vrtex para obtener una solucin homognea.
8. Aadir 200 l de etanol 96-100% al lisado. Mezclar bien por vortex durante 5
segundos Para dar una solucin homognea.
Nota: Al procesar mltiples muestras, puede preparar un buffer maestro / Etanol
Mezcla mezclando 200 l de Lisis / Bfer y 200 l 96-100%
Etanol para cada muestra.
9. Proceda de inmediato a Binding DNA (pgina 23 )
DNA de unin
1. Retire una columna PureLink Spin en un tubo de recoleccin del paquete.
2. Aadir el lisado (~ 640 l) preparado con PureLink Genomic Lysis / Binding
Tampn y etanol a la columna PureLink Spin.
3. Centrifugar la columna a 10.000 xg durante 1 minuto a temperatura ambiente.
Nota: Si est procesando> 200 L de material de partida tal como sangre,
Hisopos o saliva preservada Oragene , es necesario realizar una carga mltiple Del
lisado transfiriendo cualquier lisado restante al mismo PureLink Spin Columna
(arriba) y centrifugar a 10.000 xg durante 1 minuto.
4. Deseche el tubo de recogida y coloque la columna de centrifugado en un purificador
PureLink Tubo de recogida suministrado con el kit.
5. Proceda a Lavar DNA