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Institut fr Forstbotanik

Anpassung antioxidativer Systeme an Licht und


Temperatur: holzige und krautige Pflanzen im
Vergleich

Dissertation
zur Erlangung des Doktorgrades an der Fakultt fr
Forstwissenschaften und Waldkologie der Georg-August-
Universitt Gttingen

vorgelegt von
Detlef Peltzer
geboren in Helmarshausen

Gttingen 2001
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1. Gutachterin: Prof. Dr. Andrea Polle


2. Gutachter: Prof. Dr. Friedrich Beese

Tag der mndlichen Prfung: 28.Mrz 2001


3
Danksagung

Bei Frau Professorin Dr. Polle bedanke ich mich fr ihr intensives Engagement bei der
Betreuung meiner Arbeit. Ihrem Einsatz habe ich auch zu verdanken, da diese Arbeit
finanziell abgesichert war.

Herrn Prof. Dr. Beese danke ich, da er sich sofort bereit erklrte, sich als zweiter
Gutachter dieser Arbeit zur Verfgung zu stellen.

Herrn Dr. Schwanz gilt mein Dank fr die Bestimmung der Ascorbatkonzentrationen
mittels HPLC in Buntnesselblttern (Peltzer et al. 1999b) und die Durchfhrung der
Streversuche mit Methylviologen (Peltzer et al. 1999a). Desgleichen bedanke ich mich
bei ihm fr die Mithilfe bei den Streversuchen mit Methylviologen in unserem
Birmensdorf-Projekt (Polle et al. 2001).

Herrn Dr. E. Dreyer, Leiter der Equipe Bioclimatologie-Ecophysiologie, Unit


dEcophysiologie Forestire der INRA Nancy in Champenoux, danke ich fr die
kompetente Einfhrung in die Grundlagen der Chlorophyllfluoreszenz und seine
freundliche Betreuung whrend meines Aufenthaltes an der INRA von Mai bis Juli 1999.
Ich mchte mich auerdem sehr fr seine rasche und kritische Durchsicht unseres
Manuskriptes (Peltzer et al. 2001c) bei ihm bedanken.

Der Europischen Union verdanke ich die Finanzierung meines Aufenthaltes in


Champenoux, Frankreich im Rahmen eines PROCOPE Projektes.

Frau C. Rudolph danke ich fr die Mithilfe bei umfangreichen enzymatischen


Untersuchungen, die ich alleine nicht htte bewltigen knnen.

Frau M. Smiatacz hat die Versuchspflanzen hervorragend gepflegt und auch unsere
empfindliche Buntnesselvariante bei bester Gesundheit gehalten.
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Herzlichen Dank meinen Kolleginnen und Kollegen fr fachliche und manchmal auch
psychische Untersttzung. Besonders Herrn Dr. Schtzendbel fr Tips und Hilfen bei
Untersuchungen an der HPLC und der CE.
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Folgende Verffentlichungen sind integraler Bestandteil dieser Dissertationsschrift:

Peltzer D, Polle A (2001) Diurnal fluctuations of antioxidative systems in leaves of field-


grown beech trees (Fagus sylvatica): Responses to light and temperature. Physiologia
Plantarum 111: 158-163.

Peltzer D, Dreyer E, Polle A (2001) Differential temperature dependencies of


antioxidative enzymes under photosynthetic and non-photosynthetic conditions in two
species, Fagus sylvatica (L.) and Coleus blumei (Benth.). Plant Physiology and
Biochemistry (eingereicht).

Peltzer D, Schwanz P, Polle A (1999a) Charakterisierung der Anpassung von


Buchenblttern (Fagus sylvatica, L.) an unterschiedliche Lichtbedingungen: Bielefelder
kologische Beitrge, kophysiologie pflanzlicher Interaktionen 14 (II): 248-286.

Peltzer D, Schwanz P, Polle A (1999b) Preliminary studies of ascorbate metabolism in


green and albino regions of variegated leaves of Coleus blumei, Benth.. Free Radical
Research 31: 181-185.

Polle A, Peltzer D, Schwanz P (2001) Resistance against oxidative stress in leaves of


young beech trees grown in model ecosystems with different soil qualities, elevated CO2,
and lachnid infestation. Fostwissenschaftliches Centralblatt 120: 1-7.
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Anpassung antioxidativer Systeme an Licht und Temperatur:
holzige und krautige Pflanzen im Vergleich

Inhaltsverzeichnis:

I. Einleitung ..........................................................................................................................8

I. 1 Die Rolle von Standortfaktoren............................................................................................ 8

I. 2 Entstehung von oxidativem Stre bei der Photosynthese .................................................. 9

I. 3 Abwehr von oxidativem Stre durch antioxidative Systeme........................................... 11

I. 4 Ziel der Arbeit...................................................................................................................... 13

II. Methodische Grundlagen .............................................................................................13

II.1 Bestimmung von antioxidativen Substraten und Enzymen ............................................ 13

II.2 Gaswechsel und Chlorophyllfluoreszenz .......................................................................... 14

III. Ergebnisse ....................................................................................................................16

III. 1 Einflu hoher und niedriger Temperaturen auf Photosyntheseparameter in


unterschiedlichen Baumspezies................................................................................................. 16

III. 2 Thermotoleranz des PS II ................................................................................................ 17

III. 3 Erholung nach Photoinhibition ....................................................................................... 20

VI. Langzeitanpassung von Buchenblttern an unterschiedliche Lichtbedingungen .23

VII. Temperaturabhngigkeiten antioxidativer Enzyme in photosynthetisch aktiven und


inaktiven Geweben von Fagus sylvatica (L.) und Coleus blumei (Benth.)............................. 30

VIII. Untersuchungen zur Ascorbatsynthese ..................................................................32

IX. Reaktionen des antioxidativen Systems in Buchenblttern (Fagus sylvatica) auf


unterschiedliche Licht- und Temperaturbedingungen im Freiland..............................33

X. Zusammenfassung.........................................................................................................35

XI. Literatur .......................................................................................................................39

Lebenslauf...........................................................................................................................44
7
Abkrzungsverzeichnis

AA: Ascorbat
APX: Ascorbatperoxidase
DHA: Dehydroascorbat
DHAR: Dehydroascorbatreduktase
F0: Grundfluoreszenz nach Dunkelanpassung
Ft: Grundfluoreszenz im Licht
F0: steady-state Fluoreszenz, Grundfluoreszenz nach Abschalten des aktinischen
Lichtes
Fm0: maximale Fluoreszenz nach Dunkelanpassung
Fm: maximale Fluoreszenz im Licht
GR: Glutathionreduktase
GalDH: L-Galactose-Dehydrogenase
MDAR: Monodehydroascorbatradikale
MDAR: Monodehydroascorbatradikalreduktase
NPS: Nettophotosynthese
O2-: Superoxidradikale
OH: Hydroxylradikale
QA: Plastochinon A
PAR: photosynthetisch aktive Strahlung
SOD: Superoxiddismutase
PS I, PS II: Photosystem I und II
psII: relative Elektronentransportkapazitt des Photosystems II
8
I. Einleitung

I. 1 Die Rolle von Standortfaktoren


Pflanzen sind den herrschenden Umweltbedingungen ausgesetzt und mssen sich an
sich ndernde Faktoren, wie Licht, Temperatur, Wasser- und Nhrelementangebot
anpassen. Sie knnen sich kologisch einnischen, aber den Strefaktoren ihrer
Umwelt nicht ausweichen. Es wird zwischen zwei Arten der Stretoleranz
unterschieden: Avoidance (Strevermeidung) und Defense (Strebekmpfung).

Die Buche ist im atlantisch geprgten Mitteleuropa die konkurrenzstrkste Baumart. Sie
bildet potentiell auf fast allen Standorten Reinbestnde (Ellenberg 1988). Entsprechend
wird die Buche in modernen, naturnahen Waldbaukonzepten als Hauptbaumart bis in den
submontanen Bereich wieder in groem Umfang bercksichtigt (LWE-Projekt und
andere). Die Buche bildet Licht- und Schattenbltter aus (Eschrich et al. 1989), die sich in
ihrer Anatomie unterscheiden. Das bedeutet, da sie nach entsprechender Anpassung
direkte Sonne ertrgt und gleichzeitig im Unterstand sehr schattentolerant ist.
Bei Pflanzung auf der Freiflche oder nach Freistellung, die eine starke nderung des
Temperatur- und Lichtmikroklimas hervorruft, leidet die Buche unter den vernderten
Umweltbedingungen (Cochard et al. 1999). Andererseits ist sie auch im hohen Alter noch
in der Lage, auf ein erhhtes Lichtangebot nach Lichtungshieben mit verstrktem
Wachstum zu reagieren.
Aufgrund eines zu erwartenden Anstiegs des atmosphrischen CO2 ist es mglich, da in
Zukunft die Sommer heier und trockener werden. Es stellt sich die Frage, ob die Buche in
der Lage ist, auf hheren Temperaturstre mit einer Erhhung ihrer Stretoleranz zu
antworten. Es ist bisher wenig untersucht, welche Toleranzgrenzen die Buche gegenber
Vernderungen der Umweltbedingungen aufweist und welche physiologischen Faktoren
dafr ausschlaggebend sind. Die vorliegende Arbeit greift dieses Problem auf und fhrt
dazu kophysiologische Untersuchungen der Photosynthese (CO2/H2O-Gaswechsel,
Chlorophyllfluoreszenz, siehe Absatz II) sowie physiologische Untersuchungen
antioxidativer Schutzsysteme durch.

Um die Reaktionsweise der Buche besser zu verstehen, wurden vergleichend zwei Spezies
mit anderen kologischen Ansprchen in die Untersuchungen einbezogen: die Birke
(Betula verrucosa) und eine grn-wei panaschierte Form der Buntnessel (Coleus blumei).
9

Die Birke kommt hnlich wie die Buche auf fast allen Standorten in unseren Breiten vor.
Sie ist jedoch eine Pionierbaumart, die hohe Lichtansprche hat und deshalb im Laufe
einer normalen Sukzession in Mitteleuropa von der Buche verdrngt (ausgedunkelt)
wird. Die Buntnessel ist eine Zierpflanze aus den asiatischen und afrikanischen Tropen. Sie
ist an gleichmig hohe Temperaturen angepat und empfindlich gegenber niedrigen und
sehr hohen Temperaturen. An ihr konnten gleichzeitig Untersuchungen in grnen, das
heit photosynthetisch aktiven, und weien, photosynthetisch inaktiven Blattbereichen
vorgenommen werden. Damit konnte der Einflu von Licht und Temperatur auf das
antioxidative System unabhngig von der Photosynthese beobachtet werden.

I. 2 Entstehung von oxidativem Stre bei der Photosynthese


Die Entstehung reaktiver Sauerstoffspezies ist im Zellmetabolismus aerober
Organismen unvermeidlich (Asada 1994, Winston 1990, Scandalios 1993). Diese
Belastung wird als oxidativer Stre bezeichnet. Extreme Temperaturen und hohe
Lichtintensitten sind natrlich auftretende Faktoren, die oxidativen Stre
hervorrufen (Polle und Rennenberg 1993, Polle 1996). Reaktive Sauerstoffspezies
fhren im lebenden Gewebe zur unspezifischen Oxidation von Proteinen und
Lipiden, damit unter anderem zu Membranschden.
In photosynthetisch aktiven Geweben ist die Sauerstoffkonzentration besonders hoch.
Damit ist eine hhere Belastung durch oxidativen Stre verbunden. Whrend Sauerstoff im
Triplettzustand (3O2) verhltnismig reaktionstrge ist, kann durch Anregung das
Sauerstoffmolekl in die stark reaktiven Formen des Singulettsauerstoffes (1O2) berfhrt
werden (Scandalios 1993) oder durch sukzessive Reduktion weitere reaktive
Sauerstoffspezies wie Superoxidradikale (O2-), Wasserstoffperoxid (H2O2) und
Hydroxylradikale (OH) (Elstner 1983) gebildet werden (Gleichung 1).

h e- 2H+ e- e- H+ + e-
(1) 1
O2 3
O2 O2- 2 OH H2O2 H2O

Unter gnstigen Bedingungen knnen Pflanzen die Blattemperaturen durch erhhte


Transpiration senken (Mahan et al. 1994, Yordanov et al. 2000). Hufig jedoch sind hohe
10
Temperaturen mit Trockenstre verbunden. Um einen zu hohen Wasserverlust zu
vermeiden, schlieen sie die Stomata (Chaves und Peirera 1992). Dies unterbindet den
CO2-Austausch zwischen Atmosphre und Mesophyll. Damit wird die Assimilation im
Calvin-Zyklus eingeschrnkt, und weniger NADP+ steht als terminaler Elektronenakzeptor
der Primrprozesse der Photosynthese zur Verfgung (Polle 1996). Andererseits steigt die
Rate der Photorespiration aufgrund der kompetitiven Bindung von CO2 und O2 durch die
Ribulosebisphosphatcarboxylase/Oxygenase, die sich dann zugunsten des Sauerstoffes
verschiebt. Durch die Freisetzung von CO2 fungiert die Photorespiration als effektive
Elektronensenke (Wu et al. 1991, Osmond und Grace 1995, Heber et al. 1996) und schtzt
so die Pflanze vor den Folgen einer berreduktion.
In Abbildung 2 wird schematisch der Elektronentransport in Thylakoiden bei Belichtung
dargestellt. Beim zyklischen Elektronentransport werden Elektronen vom Ferredoxin des
Photosystems I wieder auf den Cytochrom b6f bertragen. Dieser Mechanismus erhht die
Energetisierung der Thylakoiden und fhrt zu einer zustzlichen Bildung von ATP durch
den hherer Protonengradienten zwischen dem Thylakoidlumen und dem Stroma des
Chloroplasten (Heber et al. 1995).

H+
A k z e p to r
e-
STR O M A
PQH2
e- e-
PQ
P 680 P 700
PC
e- LUM EN
H 2O O2
H+ H+

P S II C yt b6 f PS I

Abb. 1: Schematische Darstellung des Elektronentransportes in Thylakoiden bei


Belichtung. Die Pfeile stellen die Bewegungsrichtung der Elektronen und
Protonen in und zwischen den integralen Membranproteinkomplexen,
Photosystem II (PS II), dem Cytochrom b6 f-Komplex (Cyt b6 f) und Photosystem
I (PS I) dar. Abkrzungen: PQ Plastichon, PC Plastocyanin. Aus: Jahns et al.
1988.
11
Ein Teil der photosynthetisch gebildeten Elektronen kann durch die Mehler-Reaktion
(pseudozyklischer Elektronentransport) auf Sauerstoff bertragen werden (Mehler 1951,
Furbank und Badger 1983, Asada 1994). Die Rate der Mehler-Reaktion, die am Ferredoxin
mit der Reduktion von NADP+ konkurriert, betrgt im Blatt 4 7% unter normalen
Bedingungen. Unter Stre werden dabei Werte von bis zu 30% erreicht (Bieler und Fock
1996, Asada 1999). Einerseits wird damit der Elektronendruck auf QA verringert
(Ventilwirkung), andererseits trgt die Mehler-Reaktion in Stresituationen damit zu einer
erhhten Produktion von reaktivem Sauerstoff bei (Polle 1996).

Das bei diesem Proze entstandene Superoxidradikal wird im weiteren Verlauf durch SOD
entgiftet (Abb. 2). Dabei entsteht als Zwischenprodukt H2O2. Die Akkumulation von H2O2
mu verhindert werden, da es zusammen mit O2- zur Entstehung der extrem reaktiven
Hydroxylradikale OH fhren kann. OH verursacht in isolierten Chloroplasten eine
Inaktivierung des PS I und PS II (Jakob und Heber 1996).

I. 3 Abwehr von oxidativem Stre durch antioxidative Systeme


Im lebenden Blatt sind die Entgiftungsmechanismen fr reaktive Sauerstoffspezies so
effektiv, da es unter normalen Bedingungen nicht zu einer Inaktivierung der
Photosysteme kommt (Jakob und Heber 1996, Asada 1999). Eine wesentliche Rolle spielt
dabei die Verbindung Ascorbat (Vitamin C), die im Ascorbat-Glutathion-Zyklus (Foyer
und Halliwell 1976, Nakano und Asada 1987) und in der Mehler-Peroxidase-Reaktion
(Asada 1994) an der Entgiftung von H2O2 beteiligt ist (Abb. 2).
12

N A D PH NADP+ P h o to re s p ira tio n

GR
G SSG G SH T a r tr a t +
O x a la t
H 2O
DHAR

DHA

APX M DAR*
(F e rre d o x in )
M DAR

AA
H 2O 2
N A D (P )H N A D (P )+

O2
O2 SO D O 2 -. F e rre d o x in
e-
Abb. 2: Metabolismus von Ascorbat im Ascorbat-Glutathion-Zyklus (verndert nach
Foyer et al. 1994). Abkrzungen: AA: Ascorbat, APX: Ascorbatperoxidase, DHA:
Dehydroascorbat, DHAR: Dehydroascorbatreduktase, GR: Glutathionreduktase,
GSH: Glutathion, GSSG: Glutathiondisulfid, MDAR: Monodehydro-
ascorbatradikale, MDAR: Monodehydroascorbatradikalreduktase, SOD:
Superoxiddismutase. Schematische Darstellung, nicht stchiometrisch.

Ist NADP+ an der Akzeptorseite von PS I nicht in ausreichender Menge vorhanden, kann
Sauerstoff anstelle von NADP+ reduziert werden. In diesem kompetitiven System dient O2
als Ventil fr die berschssigen Elektronen zum Schutz vor Photoinhibition (Polle
1996). Die entstehenden Superoxidradikale werden enzymatisch ber die
Superoxiddismutase (SOD) entgiftet (Abb. 2). Hierbei entsteht H2O2. Unter Oxidation von
Ascorbat zu Monodehydroascorbatradikalen (MDAR) reduziert die Ascorbatperoxidase
(APX) in einem folgenden Schritt H2O2 zu H2O (Abb. 2) (Nakano und Asada 1987).
Monodehydroascorbatradikale knnen spontan zu Dehydroascorbat und Ascorbat
13
dissoziieren (Abb. 2). Dehydroascorbat wird durch die Dehydroascorbatreduktase
(DHAR) unter Oxidation von Glutathion zu Glutathiondisulfid reduziert. Letzteres wird
durch die Glutathionreduktase (GR) unter Oxidation von NADPH zu NADP+ wieder
reduziert (Abb. 2).

Parallel zum Ascorbat-Gluathion-Zyklus gibt es ein weiteres Enzym zur Reduktion der
MDAR zu Ascorbat, die Monodehydroascorbatradikalreduktase (MDAR). Sie katalysiert
die Reduktion der MDAR unter Verbrauch von NADH oder NADPH (Borracino et al.
1989). Zum anderen knnen MDAR auch direkt durch Ferredoxin reduziert werden (Abb.
2) (Miyake und Asada 1984).

I. 4 Ziel der Arbeit


Die vorliegende Arbeit befat sich mit Ascorbat als Antioxidans und mit den Enzymen, die
fr seine Reduktion, Oxidation und Synthese verantwortlich sind. Es war das Ziel dieser
Arbeit zu untersuchen, welchen Einflu Licht und Temperatur auf die Entgiftung von O2-
durch das antioxidative System haben. Es sollte dabei zwischen kurzfristigen und
langfristigen Anpassungsmechanismen an Licht und Temperatur unterschieden werden und
dabei der Einflu dieser beiden Parameter voneinander getrennt werden. Dafr wurden
enzymatische und nichtenzymatische Komponenten antioxidativer Systeme in
Experimenten bestimmt. Um dabei Informationen ber den Elektronentransport im PS II
und eine mgliche oxidative Belastung des Blattgewebes zu gewinnen, wurden
Chlorophyllfluoreszenz und Photosynthese bestimmt. Des weiteren wurde unterschieden
zwischen dem Einflu, den Licht direkt auf das antioxidative System hat und dem Einflu,
den Licht indirekt ber die Photosynthese auf das antioxidative System ausbt.

II. Methodische Grundlagen

II.1 Bestimmung von antioxidativen Substraten und Enzymen


Die Aktivitten antioxidativer Enzyme wurden photometrisch bestimmt nach Nakano und
Asada (1987) fr APX, Borracino et al. (1989) fr MDAR und Foyer und Halliwell (1976)
fr GR. Die Bestimmung der Aktivitten der GalDH erfolgte wie in Peltzer et al. (1999b)
beschrieben. Ascorbatkonzentrationen wurden mittels HPLC oder Capillar-Elektrophorese
14
(Peltzer et al. 1999b) oder photometrisch bestimmt (Peltzer et al. 1999a, Peltzer und
Polle 2001, Peltzer et al. 2001), Glutathionkonzentrationen wurden mittels HPLC
bestimmt, wie bei Peltzer et al. (2001) beschrieben.

II.2 Gaswechsel und Chlorophyllfluoreszenz


Die Photoassimilation wurde anhand von Gaswechselmessungen (HCM-1000, Walz,
Effeltrich, Deutschland) bestimmt. Das zu untersuchende Blatt wurde in eine Kvette mit
Lichtaufsatz eingespannt, und bei unterschiedlichen Lichtintensitten wurden die Raten der
Nettophotosynthese (NPS) gemessen. Dabei bestimmte das HCM-1000 die Differenz des
CO2-Gehaltes im Luftstrom vor dem Eintritt und nach dem Austritt aus der Kvette mit
einem Infrarot-Gasanalysator. Analog dazu wurden Vernderungen der H2O-Gehalte vor
und nach passieren der Kvette bestimmt. Die Temperatur in der Kvette wurde auf 24C
eingestellt.

Die Chlorophyllfluoreszenz wurde mit einem pulsmoduliertem Fluoreszenzmesser (Mini-


Pam, Walz, Effeltrich, Deutschland) nach Genty et al. (1989) und Krause und Weis (1991)
untersucht:

F0 (Ft): Grundfluoreszenz im Dunkeln (im Licht)


Fm 0 (Fm): maximale Fluoreszenz im Dunkeln (im Licht)
und berechntet
Fm0-F0 = FV (Fm-Ft = FV): variable Fluoreszenz im Dunkeln (im Licht)
(FV)/Fm0 = relative Elektronentransportrate nach Dunkelanpassung, bzw.
(FV)/Fm = relative Elektronentransportrate bei aktinischem Licht
PSII = (FV)/Fm0 (im Dunkeln) oder (FV)/Fm (im Licht)

Das Fluoreszenzsignal ist zu etwa 95% auf das Chlorophyll a, das an das PS II gebunden
ist, zurckzufhren (Krause und Weis 1991). Liegt der gesamte Pool von QA im oxidierten
(offenen) Zustand vor, wird nur ein geringer Teil der einfallenden Energie in Form von
Fluoreszenz abgestrahlt. Dieser Zustand kann nur nach Dunkelanpassung erreicht werden,
F0 zeigt dann seinen niedrigsten Wert (Abb. 3). Wenn in diesem Zustand ein sttigender
Lichtblitz (>2000 mol s-1 m-2) gegeben wird, wird der hchstmgliche Fluoreszenzwert
ermittelt, Fm0 (Abb. 3). QA wird durch den Lichtblitz vollstndig reduziert, die Fluoreszenz
zeigt in dem Moment den Wert an, der der maximalen photochemischen und der
15
maximalen nichtphotochemischen Energielschung entspricht. Werden die gleichen
Messungen bei Belichtung durchgefhrt, liegt QA teilweise bereits im reduzierten Zustand
vor. Dem entspricht Ft (Abb. 3), das hher ist als F0, da ein Teil der auftreffenden
Lichtenergie durch den bereits reduzierten Anteil an QA nicht photochemisch genutzt
werden kann. Fm, das wiederum nach einem sttigenden Lichtblitz gemessen wird, ist
niedriger als Fm0 (Abb. 3). Da der Lichtblitz kurzfristig die Elektronentransportkette
vollstndig aufreduziert und damit die Photosynthese blockiert, spiegelt die Differenz aus
Fm0 und Fm den Anteil nichtphotochemischer Energielschung wider. PSII ist ein
Ausdruck fr die maximale Elektronenleitfhigkeit im PS II, die im gesunden Blatt fest bei
0.832 0.004 liegt (Krause und Weis 1991). PSII im Licht gibt deshalb einen Hinweis auf
den Redoxstatus von QA bei der gegebenen Belichtung. Je hher dieser Wert ist, desto
mehr Elektronen flieen durch das PS II; je niedriger der Wert ist, desto mehr Elektronen
werden aktuell nichtphotochemisch entsorgt. Ein hohes F0 und niedrige Werte von PSII
weisen auf eine Schdigung des PS II hin (Willert et al. 1995).

0
Fm

Fm

pulsmoduliertes aktinisches Licht aus


langwelliges Rotlicht

Ft
F0

F 0

Lichtblitz aktinisches LichtLichtblitz

Abb. 3: Schema der Fluoreszenzinduktion nach Anregung der Antennenpigmente


durch schwaches, langwelliges und pulsierendes Rotlicht nach Dunkelanpassung
der Bltter (F0), nach kurzfristiger Reduktion aller Elektronenakzeptoren im
Photosystem II durch einen sttigenden Lichtblitz (Fm), nach Einschalten
aktinischen (=photosynthetisch aktivierenden) Lichtes (F0) und nach erneutem
sttigendem Lichtblitz whrend der Belichtung durch aktinisches Licht (Fm).
16

III. Ergebnisse

III. 1 Einflu hoher und niedriger Temperaturen auf Photosyntheseparameter in


unterschiedlichen Baumspezies
Um zu untersuchen, ob die Reaktion der photosynthetischen Elektronentransportrate von
Buchen und Birken sich bei unterschiedlichen Temperaturen unterscheidet, wurde PSII im
Licht und im Dunklen an beiden Baumarten bei verschiedenen Temperaturen von 10 bis
40C gemessen. Um zu berprfen, ob der Photosyntheseapparat der Buche empfindlicher
als der der Birke auf Temperaturnderungen reagiert, wurde PSII im Temperaturbereich
von 10C bis 40C bestimmt (Abb. 4).

Buche Birke

0.8
600
0.7

0
FV / Fm
500 0.6
F0

400 0.5
0.4
300
0.3
A C

0.8
600
0.7 F V / F m
500 0.6
Ft

400 0.5
0.4
300
B 0.3
D
10 20 30 40 10 20 30 40

Tem peratur (C)

Abb. 4: Fluoreszenz 3jhriger Buchen (Fagus sylvatica, A und B) und Birken


(Betula verrucosa, C und D) im Licht (B und D) und Dunkeln (A und C) bei
unterschiedlichen Lufttemperaturen (10 bis 40C). Die Daten stellen Mittelwerte
dar mit n=25 (5 Individuen 5 Bltter) SD. : FV/Fm0 und FV/Fm, O: F0 und
Ft. Die Pflanzen wurden jeweils 3 Tage lang in einer Klimakammer an die
jeweilige Temperatur angepat bei 16 Stunden Beleuchtung pro Tag (300 mol
s-1 m-2).
17

Die relative Elektronentransportrate der Buche im Dunkeln (PSII) stieg nach Erhhung der
Umgebungstemperatur von 10 auf 20C um 11% und blieb bis 28C relativ konstant (Abb.
4 A). PSII der Buche zeigte einen gegenstzlichen Verlauf nach Dunkelanpassung. Erst bei
40C sanken diese Werte. Gleichzeitig wurde ein Anstieg von F0 beobachtet (Abb. 4 A).
Im Licht war eine hnliche Situation zu beobachten. Whrend bei steigenden
Temperaturen bis 35C F0 sank, stieg PSII im Licht an (Abb. 4 B). Bei 40C stieg F0
wieder an, whrend PSII im Licht abrupt fiel (Abb. 4 B).
Die Birke verhielt sich deutlich indifferenter gegenber hohen Temperaturen als die Buche
(Abb. 4 C, D). Nach Dunkelanpassung wurden bei der Birke etwas erhhte Werte von F0
bei 10 und bei 40C, niedrigste Werte bei 28C beobachtet (Abb. 4 C). Dies lt vermuten,
da etwa hier die Optimaltemperatur fr die Aktivitt des PS II lag. PSII zeigte nach
Dunkelanpassung durchweg optimale Werte von etwa 0.83 (Abb. 4 C). Im Licht stieg PSII
in Birkenblttern bis 35C und zeigte nur einen leichten Einbruch bei 40C (Abb. 4 D).

Schlufolgerung: Die Beobachtungen der Chlorophyllfluoreszenz von Buchen und Birken


bei unterschiedlichen Temperaturen entsprechen den mikroklimatischen Gegebenheiten
der natrlichen Standorte dieser Baumarten. Die Buche wchst im Bestand in einem
ausgeglichenen Klima, damit besteht fr sie nicht die Notwendigkeit, sich stndig starken
nderungen ihrer Umwelt anzupassen. Der photosynthetische Elektronenflu der Birke als
Pionierbaumart ist regelmig auftretenden groen Temperaturschwankungen besser
angepat als der der Buche. Damit ist jedoch noch nicht geklrt, ob die beobachteten
Vernderungen der Chlorophyllfluoreszenz eine Strevermeidung oder einen
Abwehrmechanismus anzeigen.

III. 2 Thermotoleranz des PS II


Pflanzen sind in der Regel in der Lage, ber Transpiration oder Vernderung der
Blattausrichtung ihre Blattemperatur zu senken (Mahan et al. 1994, Yordanov et al. 2000).
Um zu untersuchen, ob die unterschiedliche Toleranz gegenber vernderten
Lufttemperaturen, die zwischen Buche und Birke gemessen wurde (Abb. 4), darauf
zurckzufhren ist, da die Birke den Temperaturanstieg im Blatt vermeiden kann, wurde
die kritische Temperatur des PS II ermittelt.
18

2250

2000

1750
F0

1500

1250

1000

750

28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52
Blattemperatur C

Abb. 5: Ermittlung des kritischen Temperaturpunktes des PS II am Beispiel der


Buntnessel (Coleus blumei, grner Blatteil). Eine Blattscheibe wurde in die
entsprechende Vertiefung eines beheizbaren Aluminiumblockes gelegt und die
Temperatur ber ein Pelletierelement pro Minute um 1C erhht. Dabei wurde
F0 gemessen (offene Symbole). ber den anfnglichen Verlauf von F0 und im
Bereich, in dem F0 anstieg wurde eine Gerade gelegt. Der Schnittpunkt dieser
Geraden bezeichnet den kritischen Punkt fr das PS II (Pfeil unten, 43C). Ab
49C war das PS II irreversibel geschdigt (Pfeil oben).

Abbildung 5 zeigt anhand eines Beispieles, wie die kritische Temperatur des PS II ermittelt
wurde. F0 verndert sich zunchst mit steigender Blattemperatur kaum, bis eine kritische
Temperatur erreicht wird. Bei Erreichen der kritischen Temperatur steigt F0 zunchst stark
an. Sobald das PS II irreversibel zerstrt wird, sinkt F0 wieder ab. Wird der Verlauf von F0
in Abhngigkeit von der Blattemperatur aufgezeichnet, kann je eine Gerade durch den
Anfangsverlauf (F0 niedrig) und durch den Verlauf nach Erreichen einer kritischen
Temperatur (F0 stark ansteigend) gelegt werden (Abb. 5). Der Punkt, an dem sich die
19
beiden Geraden schneiden, bezeichnet den kritischen Temperaturpunkt fr das PS II
(Lazr und Ilk 1997).
Es wurden verschiedene europische Baumarten miteinander verglichen, die zu
unterschiedlichen Zeitpunkten in der natrlichen Sukzession auftreten. Die Untersuchung
sollte Aufschlu darber geben, ob es eine Korrelation zwischen der Stellung der Bume
im Ablauf der Sukzession und der Toleranz ihres Photosyntheseapparates gegenber
starker Erwrmung gibt (Abb. 6).

50
Kritische Blattemperatur (C)

48

46

44

42

a c c c c b
40
B. verrucosa

A. pseudopl.
F. excelsior

F. sylvatica
Q. petraea

Q. robur

Bauma rten

Abb. 6: Kritische Temperaturen von PS II in Blttern von Birke, Traubeneiche,


Stieleiche, Esche, Bergahorn und Buche. Die Messungen erfolgten wie in
Abbildung 5 beschrieben. Unterschiedliche Buchstaben geben signifikante
Unterschiede mit P0.05 an. n = 9 SD. Die Pflanzen wurden vor dem
Versuch optimal gewssert und ber Nacht an eine Temperatur von 20C und
Dunkelheit angepat.

Deutliche Unterschiede zeigten sich zwischen den Baumarten, die in Abb. 6 nach
steigender Schattentoleranz geordnet sind. Birke zeigte die geringste Toleranz gegenber
Hitze. Bereits bei 42.5 0.1C war der kritischer Punkt ihres PS II erreicht, der bei der
20
Buche bei 45.9 0.5C, bei den anderen Baumarten zwischen 46.8 und 47.1 C lag
(Abb. 6).

Schlufolgerung: Eine Korrelation zwischen dem kritischen Temperaturpunkt des PS II


und der Stellung der Baumart in der natrlichen Sukzessionsfolge konnte nicht beobachtet
werden. PS II der Birke war signifikant weniger tolerant gegenber hohen Temperaturen
als alle anderen untersuchten Baumarten. Damit kann angenommen werden, da die Birke
dem Hitzestre ausweicht, indem sie durch hohe Transpirationsraten ihre Blattemperatur
senkt. Als weitere Strategie der Strevermeidung bei der Birke kann vermutet werden, da
ihre Bltter an den dnnen Blattstiele mit jedem Luftzug schwanken und damit die
Blattstellung wechselt.

III. 3 Erholung nach Photoinhibition


Photoinhibition kann reversibel (dynamisch) und irreversibel (chronisch) sein.
Reversible Photoinhibition beruht auf einer berreduktion des PS II und bedeutet, da
Elektronen auf der Donorseite schneller produziert werden als an der Akzeptorseite
abgenommen werden. Dies erfordert eine Herabsetzung des Elektronentransportes oder
zunehmende Reduktion alternativer Akzeptoren wie zum Beispiel O2. Irreversible
Schdigungen sind nur bei dauerhaftem Stre, bei niedrigen Temperaturen oder extrem
hohen Temperaturen zu erwarten. Sie beruhen hufig auf einem verstrktem Abbau von
D1-Proteinen oder auf Schdigungen des Elektronenakzeptors QA im PS II (Osmond und
Grace 1995). In der Folge werden Chlorophylle und Carotinoide zerstrt, und das Blatt
bleicht aus (Osmond und Grace 1995).

Da beobachtet wurde, da das Photosystem II der Birke bei niedrigeren Temperaturen


geschdigt wird als das der Buche (Abb. 5), war es interessant zu wissen, ob die Schden,
die im PS II auftreten, reversibel oder irreversibel sind. Da die Birke ein ungebundenes
Wachstum aufweist und damit Bltter schneller ersetzen kann als die Buche, wurde
vermutet, da die Blatterhaltung fr die Birke weniger bedeutsam ist als fr die Buche und
daher eher zu irreversiblen Schden neigt.

Um diese Vermutung zu berprfen, wurden Buchen und Birken wie in Abbildung 4


beschrieben bei unterschiedlichen Temperaturen von 10 bis 40C akklimatisiert und Bltter
21
fr 10 Minuten mit Starklicht (>2500 mol m-2 s-1) bestrahlt und anschlieend
abgedunkelt. Nach dieser Behandlung zeigten beide Baumarten Anzeichen von
Photoinhibition. In Abb. 7 wird die Dauer der Erholungsphase nach Photoinhibition fr die
beiden Baumarten in Abhngigkeit von der Umgebungstemperatur dargestellt. 10 Minuten
nach Abschalten des Lichtes erreichten beide Baumarten konstante Werte fr PSII (Abb.
7). Im Vergleich mit Abb. 4 (A und C) zeigte sich, da die Buche bei 35C
Umgebungstemperatur deutlich niedrigere Werte (0.450 statt 0.810) als Endwert erreichte
(Abb. 4 A, Abb. 7, 35C). Nach der photoinhibitorischen Behandlung bei 40C lag PSII
bei der Buche um 45% unter dem Wert, der ohne vorherige photoinhibitorische
Behandlung beobachtet wurde (Abb. 4 A, Abb. 7).

Die Elektronentransportrate der Birke erholte sich bei 10C Umgebungstemperatur nach
Photoinhibition nicht mehr vollstndig (Abb. 7, 10C) und erreichte Werte, die um 25 %
unter dem Optimalwert von PSII lagen (Abb. 4 C). Bei Umgebungstemperaturen von 20
und 28C wurde 10 Minuten nach Abschalten des Lichtes eine Erholung des
Photosyntheseapparates beobachtet (Abb. 7). Bei 35C lagen die Werte von PSII auch
nach 30 Minuten Abdunkelung um 40 % unter dem Optimalwert (Abb. 7, 35C). Bei 40C
Umgebungstemperatur erholte sich der Photosyntheseapparat der Birke nicht mehr. Bei
dieser Umgebungstemperatur stieg der mittlere Wert fr PSII innerhalb von 30 Minuten
nach Abschalten des Starklichtes nicht ber 0.150 (Abb. 7).
22

0.8

0
F V/F m
0.6
0.4
0.2
10C
0.8
0

0.6
F V/F m

0.4
0.2
20C
0.8
0

0.6
F V/F m

0.4
0.2
28C
0.8
0

0.6
F V/F m

0.4
0.2
35C
0.8
40C
0

0.6
F V /F m

0.4
0.2

5 10 15 20 25 30 35

Zeit (m in)

Abb. 7: Erholungsphase der Elektronentransportkapazitt (FV)/Fm im


Anschlu an Photoinhibition bei verschiedenen Temperaturen. Buchen und
Birken wurden 3 Tage lang bei der angegebenen Umgebungstemperatur
gehalten (16 Stunden Licht am Tag, 300 mol s-1 m-2 PAR). Im Anschlu
wurden sie 10 Minuten lang mit kaltem Licht gestret (PPFD >2500 mol s-1
m-2), anschlieend wurde (FV)/Fm alle 5 Minuten ber einen Zeitraum von 30
Minuten gemessen. : Birke, : Buche. n=5 SD. Zwischen den Messungen
wurde das Blatt vollstndig abgedunkelt.
23

Schlufolgerung: Die Birke ist empfindlicher als die Buche gegenber dem durch
Photoinhibition hervorgerufenen Stre in Verbindung mit Temperaturen um 10C und ber
30C. Es ist zu vermuten, da die Birke dem Stre zu hoher Temperaturen vor allem durch
eine Senkung der Blattemperatur ausweicht. Dieser Ausweichmechanismus scheint
effektiv zu sein und im Normalfall eine hohe photosynthetische Kapazitt selbst bei
drastischen nderungen der Lichtbedingungen aufrecht zu erhalten (Abb. 4 C, D). Die
Buche ist aufgrund ihres determinierten Wachstums nicht in der Lage, geschdigte Bltter
schnell zu ersetzen. Stre durch hohe Temperaturen, die direkt auf das Blatt wirken,
bewirkt ebenso wie Starklicht eine Senkung von PSII. Diese Reaktion ist jedoch im
Gegensatz zu der von Birken deutlich schneller reversibel.

VI. Langzeitanpassung von Buchenblttern an unterschiedliche Lichtbedingungen

Bei der Buche knnen lichtexponierte Bltter und Bltter aus dem Bestandesinneren
anatomisch (Eschrich et al. 1989) und physiologisch (Peltzer et al. 1999a) unterschieden
werden. Da Lichtbltter hufig einer sehr hohen Strahlung ausgesetzt sind, besitzen sie im
allgemeinen hhere Nettophotosyntheseraten (NPS) als Schattenbltter (Tognetti et al.
1997). Eine hhere NPS kann jedoch auch mit einer hheren oxidativen Belastung
verbunden sein. Das sollte insbesondere dann der Fall sein, wenn die auf das Blatt
treffende Strahlung hher ist als der Lichtsttigungspunkt. Regelmig auftretender
oxidativer Stre mte zu einer erhhten antioxidativen Kapazitt fhren, die sich auch in
einer hheren Stretoleranz gegenber anderen Strefaktoren uern sollte. Um diese
Vermutung zu berprfen, wurden in der vorliegenden Arbeit 3jhrige Buchen 3 Jahre
lang unter Schattierungsnetzen gehalten (10% PAR) oder ohne Schattierungsnetz.
Anschlieend wurde in Licht- und Schattenblttern Photosynthese und
Chlorophyllfluoreszenz gemessen und physiologische Parameter erhoben. Eine
Untersuchung mit Methylviologen, einem Herbizid, das oxidativen Stre erzeugt, sollte
zeigen, ob Lichtbltter toleranter gegenber oxidativem Stre sind als Schattenbltter.

Lichtbltter zeigten in der vorliegenden Arbeit einen Lichtkompensationspunkt von etwa


25 mol s-1 m-2 PAR (Abb. 8). Die maximale NPS wurde in Lichtblttern bei 450 mol m-2
s-1 und hheren Lichtintensitten beobachtet. Sie betrug etwa 9 mol CO2 m-2 s-1 (Abb. 8).
hnliche Werte wurden von Tognetti et al. (1997) und Tognetti et al. (1998) in
24
Lichtblttern einjhriger Buchen gemessen (6 und 8 mol CO2 m-2 s-1). Schattenbltter
zeigten in der vorliegenden Arbeit ihre maximale CO2-Fixierung (bis 3 mol O2 m-2 s-1) bei
Lichtintensitten von etwa 200 mol s-1 m-2 PAR und hher (Abb. 8). In einjhrigen
Buchen verschiedener italienischer Herknfte wurden an Schattenblttern geringere NPS
gemessen, die zwischen 1 und 2 mol O2 m-2 s-1 lagen (Tognetti et al. 1997, Tognetti et al.
1998). Der Lichtkompensationspunkt der Schattenbltter wurde in der vorliegenden Arbeit
bei etwa 14 mol O2 m-2 s-1 beobachtet (Abb. 8).
NPS (m ol CO 2 m s )
-1

8
-2

-2

0 150 300 450 1200 1500 1800


-2 -1
PAR (m ol m s )

Abb. 8: Nettophotosyntheseraten von Licht- und Schattenblttern 6jhriger


Buchen, in Abhngigkeit vom Licht. Die Pflanzen wuchsen unter
Schattierungsnetzen auf (ca. 10% PAR, ) und ohne Schattierung (100%
PAR, ).

Licht- und Schattenbltter der Buche unterschieden sich entsprechend ihrer


photosynthetischen Anpassung an Licht. Dies zeigte sich auch in signifikant hheren
25
Proteingehalten und Blattgewichten in Lichtbltter als in Schattenblttern (Tab. 1).
Neben 25 bis 75 % niedrigeren Aktivitten antioxidativer Enzyme, weisen Schattenbltter
hhere Gehalte an Gesamtchlorophyll als Lichtbltter und geringere Mengen an
Chlorophyll b auf, entsprechend ein niedrigeres Verhltnis zwischen Chlorophyll a und
Chlorophyll b (Tab. 1). hnliche, wenngleich weniger deutliche Unterschiede in den
Chlorophyllgehalten in Licht- und Schattenblttern der Buche beobachteten Garca-
Plazaola und Becerril (2000). Mit der Anpassung an Licht war offenbar neben der
Notwendigkeit, die Pigmentgehalte zu erhhen, auch die Anpassung des antioxidative
Systems verbunden (Tab. 1).

Tab. 1: Blattgewichte, Protein- und Pigmentgehalte sowie Aktivitten antioxidativer


Enzyme in Licht- und Schattenblttern der Buche im Vergleich. Die Proben wurden am
24.7.1997 geerntet. Die Ascorbatdaten wurden in Licht- und Schattenblttern der Buche
gemessen, die am 21.8.2000 geerntet wurden. APX: Ascorbatperoxidase, DAHR:
Dehydroascorbatreduktase, MDAR: Monodehydroascrobatradikalreduktase, GR:
Glutathionreduktase. n = 3, unterschiedliche Buchstaben geben signifikante Unterschiede
mit P0.05 an. Methoden: siehe Peltzer et al. 1999.

Schattenbltter Lichtbltter P
Blattgewicht (g m-2) 52.7 3.3 a 115.1 23.5 b 0.0019
0.35 0.03 a 0.46 0.03 b
-1
TM FM 0.0020
Proteine (mg g-1 FM) 17.8 3.8 a 27.8 3.8 b 0.0093
Chlorophyll a (mg g-1 FM) 1.30 0.15 b 0.64 0.05 a 0.0002
Chlorophyll b (mg g-1 FM) 0.67 0.08 b 0.14 0.03 a 0.0002
Carotinoide (mg g-1 FM) 0.57 0.08 b 0.33 0.03 a 0.0007
Chl. a Chl. b 1 2.82 0.15 a 4.72 0.85 b 0.0046
3.11 0.07 b 2.68 0.05 a
-1
Chlorophyll (a+b)Carotinoide 0.0001
Ascorbat (mol g-1 FM) 4.31.2 a 12.81.1 b 0.0000
Gesamtascorbat (mol g-1 FM) 6.11.1 a 17.61.8 b 0.0000
APX (nkat g-1 FM) 106.7 42.0 a 433.5 144.6 b 0.0049
MDAR (nkat g-1 FM) 16.8 7.4 a 38.8 12.5 b 0.0233
1.5 0.3 a 4.2 1.3 b
-1
DHAR (nkat g FM) 0.0068
16.6 1.8 a 39.8 7.8 b
-1
GR (nkat g FM) 0.0011
26
Einige Autoren zeigten, da Lichtbltter der Buche abhngig von der Jahreszeit bis zu
20 mol Gesamtascorbat pro Gramm Frischgewicht enthalten knnen (Luwe 1996, Polle
und Morawe 1995). In eigenen Untersuchungen wurden im August 2000 in Lichtblttern
geringere Werte etwa sechsjhriger Buchen von einer Versuchsflche in den Nhe des
Forstbotanischen Institutes in Gttingen gemessen (12.81.1 mol g-1 FM, Tab. 1). Dies
entsprach etwa dem dreifachen Wert dessen, was in Schattenblttern gemessen wurde
(10% PAR im Freiland unter Schattierungsnetz, unverffentlichte Daten). In beiden
Blatttypen lag Dehydroascorbat zu etwa 30% am Gesamtascorbat vor (Tab. 1).

Um zu prfen, ob lichtangepate Buchenbltter aufgrund hherer Aktivitten


antioxidativer Enzyme und hherer Ascorbatkonzentrationen als in Schattenblttern auch
eine hhere Entgiftungskapazitt aufwiesen, wurden sie mit Methylviologen inkubiert.
Methylviologen ist ein Herbizid, das oxidativen Stre induziert, indem es Elektronen am
PS I aufnimmt, Radikale bildet, die ber die Reduktion von O2 zu O2- wieder oxidiert
werden. Als Folge zeigen Bltter, die mit Methylviologen inkubiert werden, zunehmende
Membranschden. Diese knnen nachgewiesen werden durch den Ionenaustritt, der zu
einer Erhhung der Leitfhigkeit in der Lsung fhrt, in denen die Blattscheiben
schwimmen.

Trotz unterschiedlicher Ausstattung mit Entgiftungssystemen (Tab. 1) wurden keine


signifikanten Unterschiede zwischen Licht- und Schattenblttern beobachtet (Abb. 9). In
einem Fall wurde sogar eine hher Toleranz von Schattenblttern als von Lichtblttern
gefunden (Peltzer et al. 1999a). Dies widerspricht der Annahme, da Lichtbltter besser
vor einer berproduktion reaktiver Sauerstoffspezies geschtzt sind als Schattenbltter.
27

Relative elektr. Leitfhgigkeit (%)


80

60

40

20

0
0 4 8 12 16 20 24
Inkubationsdauer (h)

Abb. 9: Zunahme an Membranschden durch Inkubation mit Methylviologen.


Vergleich zwischen Lichtblttern ( ) und Schattenblttern ( ).Blattscheiben
(n=9) wurden in einer 4 mM Methylviologenlsung bei einer Belichtung von 350
mol m-2 s-1 inkubiert. Die brigen Versuchsbedingungen waren wie in (Peltzer et
al. 1999a beschrieben. Es wurden keine signifikanten Unterschiede zwischen den
beiden Blatttypen gefunden (P=0.1408) Die Proben wurden am Hengstberg
(Nhe Gttingen) geerntet.

Aufgrund der besseren Lichtnutzung von Lichtblttern knnte die Ursache fr die hnliche
Streempfindlichkeit von Lichtblttern und Schattenblttern darin liegen, da bei gleicher
Belichtung in Lichtblttern relativ mehr reduzierende quivalente gebildet werden als in
Schattenblttern. Die Zahl der Elektronen, die pro Mol CO2-Fixierung durch das PS II
flieen, lt sich nach Genty et al. (1989) anhand des Ausdruckes PSII und NPS
bestimmen:
(2) k = (FV/Fm x Ii)/(NPS x Ia)-1

Dabei ist Ii die auf das Blatt treffende Strahlung (PAR) und Ia der Anteil dieser Strahlung,
der zur Anregung von PS II beitrgt. Dieser Anteil wurde gleich 0.5 gesetzt, unter der
Annahme, da das Licht von PS I und PS II zu gleichen Teilen genutzt wird.
28
Stchiometrisch werden 4 Mol Elektronen zur Assimilation von 1 Mol CO2 bentigt.
Whrend in Schattenblttern etwas mehr als doppelt so viele Elektronen maximal zur
Assimilation eines Mols CO2 durch das PS II flieen, wurden in Lichtblttern maximal
Werte gemessen, die um bis zu 600% darber lagen (Abb. 9). Die Elektronenfluraten
waren im Bereich von 90 bis 1200 mol m-2 s-1 bei jeder Lichtintensitt signifikant hher
als in Schattenblttern (P0.05). Das bedeutet, da in Lichtblttern ein hherer oxidativer
Stre zu erwarten ist als in Schattenblttern, wenn die Elektronen statt fr die CO2-
Assimilation durch das Herbizid Methylviologen vor allem O2 zu O2- reduzieren.

30
Elektronenflu (e CO2 )
-1

25
-

20

15

10

0
0 200 400 600 800 1000 1200
-2 -1
PAR (mol m s )

Abb. 10: Elektronenfluraten durch PS II in Licht- und Schattenblttern


6jhriger Buchen in Abhngigkeit von der Lichtintensitt. Die Pflanzen
wuchsen unter Schattierungsnetzen auf (bei 10% des normal auftretenden PAR,

) und ohne Schattierung (100% des normal auftretenden PAR, ). Die Daten

berechneten sich aus den Werten aus Abb. 8 und Fluoreszenzmessungen vom
14. und 17.8.2000. Den Daten wurden sigmoide Kurven angepat.
29
Neben den hier beschriebenen Untersuchungen zum Einflu von Licht, wurde die
Streresistenz der Buche auch unter weiteren genderten Umweltbedingungen geprft, wie
der Stickstoffverfgbarkeit, der Basensttigung des Bodensubstrates und erhhtem CO2. Es
ist bekannt, da diese Umweltfaktoren die antioxidative Kapazitt verndern (Schwanz et
al. 1996, Schwanz und Polle 1998, Polle et al. 2000). Es wurde untersucht, ob auerdem
auch die Streresistenz verndert war. Dazu wurden Buchenbltter wie zuvor beschrieben
(Abb. 9) Methylviologen ausgesetzt. Das Material stammte aus Open-top Kammern, in
denen Buchen ambienten und erhhten CO2-Konzentrationen, saurem und basischem
Bodensubstrat, einer erhhten Stickstoffdngung und keiner Stickstoffdngung ausgesetzt
waren und wurden auf ihre Streresistenz getestet (Polle et al. 2001). Dabei wurde eine
signifikante hhere Toleranz der Buchenbltter gegen oxidativen Stre beobachtet, die auf
basischem Boden wuchsen. Weder hohe Stickstoffgaben noch erhhte CO2-
Konzentrationen trugen zu einer hheren Toleranz bei (Polle et al. 2001). Die Ergebnisse
lassen eher darauf schlieen, da Buchen auf sauren Standorten mit hohen
Stickstoffeintrgen anflliger gegenber zustzlich auftretendem Stre sind.

Schlufolgerung: Chronischer Lichtstre fhrte in Lichtblttern der Buche zu hheren


Aktivitten antioxidativer Enzyme und hheren Konzentrationen an Ascorbat als in
Schattenblttern (Tab. 1). Die hhere photosynthetische Kapazitt der Lichtbltter
gegenber den Schattenblttern (Abb. 8) war gleichzeitig mit einer hheren Effizienz der
Elektronennutzung fr die Assimilation von CO2 verbunden (Abb. 10). Unter
Methylviologen-induziertem oxidativem Stre fhrte die bei allen Lichtintensitten hhere
Elektronentransportrate in den Lichtblttern im Vergleich zu den Schattenblttern zu einer
hheren oxidativen Belastung. Es ist anzunehmen, da das die Ursache dafr war, da
Lichtbltter sich nicht als resistenter gegenber oxidativem Stre erwiesen als
Schattenbltter (Abb. 9).
30

VII. Temperaturabhngigkeiten antioxidativer Enzyme in photosynthetisch


aktiven und inaktiven Geweben von Fagus sylvatica (L.) und Coleus blumei (Benth.)
Eine Reihe von Autoren berichten, da Stre durch Klte, Hitze oder Starklicht sowie
Kombinationen aus temperaturbrtigem Stre mit Starklicht eine Erhhung antioxidativer
Enzyme (Foyer und Mullineaux 1994, Foyer et al. 1994, Polle und Rennenberg 1993) oder
eine Erhhung der Konzentrationen an Ascorbat und Glutathion bewirken (Ye et al. 2000).

Unter Freilandbedingungen wurden auffllige Fluktuationen antioxidativer Systeme


beobachtet (Schupp und Rennenberg 1988, Badiani et al. 1993, Polle und Morawe 1995,
Peltzer und Polle 2001). Unter kontrollierten Bedingungen fhrten extrem hohe
Lichtintensitten in nicht angepaten Pflanzen (Arabidopsis) zu einer starken Zunahme der
Konzentrationen an H2O2 und einem starken Anstieg der mRNA der cytosolischen APX
Isoenzyme (Karpinski et al. 1997). Ob die Aktivitten antioxidativer Enzyme entsprechend
der jeweiligen Lichtintensitten angepat werden, ist unklar.
In der vorliegenden Arbeit wurde versucht, Streantworten auf Licht und Temperatur zu
unterscheiden und photosyntheseabhngige und unabhngige Streantworten zu trennen.
Dazu wurden Buchen als stretolerante und Buntnesseln als stresensitive Pflanzen
miteinander verglichen. Die Enzymaktivitten wurden bei den Temperaturen im Test
gemessen, denen das Blatt zum Zeitpunkt der Ernte ausgesetzt war. Dabei wurde
beobachtet, da die Aktivitt der APX bei den niedrigen Temperaturen (10C) am
hchsten war und Licht diese Reaktion verstrkte (Peltzer et al. 2001). Im Gegensatz zur
APX wurde die Aktivitt der GR durch hohe Temperaturen erhht, wobei Licht diese
Reaktion ebenfalls verstrkte (Peltzer et al. 2001). In beiden Fllen ist fraglich, ob die
photosynthetische Aktivitt an sich fr die Lichtreaktion notwendig war, da die Aktivitten
der GR und APX in grnen wie in weien Blatteilen der Buntnessel etwa gleich hoch
waren (Peltzer et al. 2001). Die Aktivitt der MDAR wurde bei niedrigen Temperaturen
eher geringer und zeigten keinen klaren Temperatureffekt (Peltzer et al. 2001). In beiden
untersuchten Arten waren die Ascorbat- und Glutathionkonzentrationen bei hohen
Temperaturen hher als bei niedrigen (Peltzer et al. 2001). Offensichtlich war das
Vorhandensein eines funktionellen Photosyntheseapparates notwendig, um die
Ascorbatkonzentrationen hoch zu halten. Weie Blattbereiche der Buntnessel wiesen nicht
nur signifikant niedrigere Ascorbatkonzentrationen, sondern auch einen hheren Anteil an
DHA auf. Im Gegensatz zu dieser Beobachtung verursachte Dunkelheit keine signifikante
31
Abnahme an AA in Buchenblttern. Mglicherweise waren die nderungen jedoch so
gering, da sie aufgrund der insgesamt hohen Konzentrationen an AA in Buchenblttern
nicht gemessen werden konnten. Obgleich die Glutathionkonzentrationen in
Buntnesselblttern allgemein niedriger waren als in Buchenblttern, waren die
Vernderungen geringer als die von Ascorbat. Eine photosynthetische Aktivitt war fr
den Erhalt von Glutathion nicht notwendig (Peltzer et al. 2001).
Wie bereits in einiger vorherigen Untersuchungen gezeigt wurde (Lee DH und Lee CB
2000: Cucumis sativus, Hong-Xu et al. 1999: Plantago major, Badiani et al. 1997:
Sorghum bicolor, Leipner et al. 1997: Zea mays, Brggemann et al. 1999: Lycopersicum
esculentum), beruhte die kurzfristige Anpassung von Buchen und Buntnesseln an niedrige
Temperaturen auf einer Zunahme der Aktivitten der APX und der SOD, aber nicht der
Aktivitten der GR. Eine Anpassung an hohe Temperaturen zeigte sich an einem Anstieg
der GR Aktivitten und hheren Konzentrationen an AA und GSH. Diese Beobachtung,
die auf eine Zunahme nichtenzymatischer Entgiftung reaktiver Sauerstoffspezies bei hohen
Temperaturen hinweist, deckt sich weitgehend mit den Daten, die an Hirse erhoben wurden
(Badiani et al. 1997).
Auf der Basis von Frischgewicht enthielten Buchenbltter hhere Konzentrationen an
Antioxidantien als Buntnesseln, abgesehen von der SOD. Allerdings, auf der Basis von
Chlorophyll- oder Proteingehalten enthielt Coleus hnliche oder sogar hhere
Konzentrationen an Antioxidantien. Daher kann ein einfacher Zusammenhang zwischen
den Konzentrationen an Antioxidantien in photosynthetischen Geweben und Stretoleranz,
nicht hergestellt werden. Jedoch zeigte sich, da die empfindlichere Buntnessel bei hohen
Temperaturen keine mebaren Aktivitten der APX aufwies, whrend bei niedrigen
Temperaturen die Aktivitt der GR stark gesenkt war. Bei hohen Temperaturen ist der
aufflligste Unterschied zwischen den beiden Arten, da in der Buntnessel die APX
empfindlicher war als die APX in der Buche. Whrend sie bei 25C noch mebar war,
konnte bei 35C im Test keine Aktivitt mehr beobachtet werden.
Bei niedrigen Temperaturen zeigte sich ein anderes Muster: beide Arten schienen nach
einer Anpassung an 10C eine noch ausreichend hohe Aktivitten der GR aufzuweisen,
wenn die Enzymaktivitt bei 25C gemessen wurde. Allerdings sanken die Aktivitten der
GR stark, wenn sie bei 10C bestimmt wurden. In Coleus war diese Abnahme hher als in
der Buche und korrelierte entsprechend mit einem Verlust an GSH und einem signifikanten
Anstieg an GSSG. Wie Foyer et al. (1995) an Pappeln zeigten, haben die GR und GSH
eine wichtige Funktion bei der Anpassung an niedrige Temperaturen. Das wurde auch an
32
transgenen, klteempfindlichen und klteunempfindlichen Pflanzen gezeigt (Fadzillah et
al. 1996).

Es kann eher vermutet werden, da die geringere Temperaturtoleranz der Buntnessel


daraus resultierte, da einzelne Komponenten des antioxidativen Systems versagten.

Schlufolgerung: Die Untersuchungen zeigten, da kurzfristige Vernderungen des


antioxidativen Systems aufgrund von schwankenden Temperaturen erfolgten, die durch
Licht noch verstrkt werden konnten. Diese Reaktionen scheinen nicht ausbalanciert zu
sein, so da sie zum Versagen des antioxidativen Systems des Ascorbat-Glutathion-Zyklus
fhrten. Wenn die Aktivitt der APX sich im Blatt genauso verhlt wie im Test, ist es
wahrscheinlich, da Buntnesselbltter bei hohen Temperaturen infolge des APX-Verlustes
mit hohen Konzentrationen an H2O2 vergiftet werden. Das wrde eine Inhibition des
Calvinzyklus zur Folge haben (Kaiser 1979) und damit der CO2-Assimilation. Als Folge
mte der photosynthetische Elektronentransport herunterreguliert werden. Dies wird
durch eigene Untersuchungen belegt (Peltzer und Polle 2001). Erhhte Konzentrationen an
H2O2 htten auerdem bei fehlender Kompensation eine oxidative Degradation zur Folge.
In der Buche war das antioxidative System ber den gesamten Temperaturbereich
wesentlich stabiler als das der Buntnessel. Diese Ergebnisse weisen darauf hin, da
wahrscheinlich die hhere Thermotoleranz der Enzyme und nicht so sehr ihre absoluten
Aktivitten fr die Streanpassung von Bedeutung sind.

VIII. Untersuchungen zur Ascorbatsynthese

In Blttern von Buche und Buntnessel wurden hhere Ascorbatkonzentrationen bei hohen
Temperaturen (35C) als bei niedrigen Temperaturen (10C) gemessen (Peltzer et al.
2001). In Buntnesseln wurden signifikant hhere Ascorbatkonzentrationen in grnen
Blatteilen als in weien Blatteilen beobachtet. In den grnen Blattabschnitten wurde mehr
Ascorbat bei 35C als bei 10C Umgebungstemperatur whrend der Ernte bestimmt
(Peltzer et al. 2001). Es wurde vermutet, da die erhhten Ascorbatkonzentrationen auf
eine erhhte Synthese von Ascorbat zurckzufhren waren.
Um zu berprfen, ob die Ascorbatsynthese in Buntnesseln abhngig ist von
photosynthetischer Aktivitt im Blattgewebe oder von Licht, wurde ein Schlsselenzym
der Ascorbatsynthese, die GalDH (Pallanca und Smirnoff 1999) untersucht. Buntnesseln
33
wurden im Licht und im Dunkeln geerntet und die Aktivitt der GalDH in grnen und
weien Blattbereichen getrennt gemessen. In grnen wie auch in weien Blattbereichen
wurden hhere Aktivitten der GalDH in belichteten Blttern beobachtet als in
unbelichteten Blttern. Die GalDH, zeigte fast doppelt so hohe Aktivitten in weien
Blatteilen wie in grnen (bezogen auf Proteingehalte) (Peltzer et al. 1999). Auf
Frischgewicht bezogen, korrelierten die Aktivitten dieses Enzyms mit den
Ascorbatkonzentrationen (Peltzer et al. 1999) in den jeweiligen Blatteilen. Wenn die
Temperatur im Test verndert wurde, wurde in grnen, belichteten Blttern eine hchste
Aktivitt des Enzyms bei 25C beobachtet, whrend sie bei den anderen
Versuchsbedingungen dieses Optimum bei 30C noch nicht erreicht hatte (Peltzer et al.
1999).

Schlufolgerung: Die Korrelation zwischen den Ascorbatkonzentrationen und den


Aktivitten der L-GalDH in grnen und weien Blatteilen der Buntnessel untersttzt die
Hypothese von Smirnoff und Pallanca (1999), da dieses Enzym an der Ascorbatsynthese
beteiligt ist. Nach den Ergebnissen der vorliegenden Arbeit ist die Ascorbatsynthese
lichtabhngig (auf die Blattflche bezogen), aber nicht abhngig von einem
funktionierenden Photosyntheseapparat. Da dieses Enzym in belichteten grnen
Blattabschnitten eine andere Reaktion auf unterschiedliche Temperaturen bei den
Messungen zeigte als im Dunkeln und in weien Blattbereichen bei Belichtung, ist es
mglich, da eine photosynthetische Aktivitt die Aktivitt der L-GalDH beeinflut. Es
knnten aber auch unterschiedliche Isoenzyme in grnen und weien Blattbereichen aktiv
sein.

IX. Reaktionen des antioxidativen Systems in Buchenblttern (Fagus sylvatica) auf

unterschiedliche Licht- und Temperaturbedingungen im Freiland

Im Freiland sind die Umweltbedingungen komplexer als bei den vorherigen


Untersuchungen, bei denen Temperatur, Licht und Luftfeuchte in Klimakammern
kontrolliert wurden. Auerdem wurden die Pflanzen ausreichend gewssert und im Laufe
ihrer gesamten Entwicklung optimal mit Nhrelementen versorgt. Neben den
mikroklimatischen Bedingungen kommen im Freiland noch der UV-Anteil im Licht dazu
und mgliche Belastungen durch Luftschadstoffe. Ziel der vorliegenden Untersuchungen
34
war es, zu prfen ob im Freiland eine Abhngigkeit des antioxidativen Systems der
Buche von Licht und Temperatur beobachtet werden kann.

Diurnal ber den Verlauf mehrerer Tage gemessenen Aktivitten der APX, MDAR und
GR zeigten hohe Schwankungen insbesondere bei den Aktivitten der APX und der
MDAR. hnlich wie unter kontrollierten Bedingungen waren die Aktivitten der APX und
der MDAR in erster Linie mit der Temperatur korreliert (Peltzer und Polle 2001). Es
existierte auch eine schwchere Korrelation mit Licht. Diese ist vor allem darauf
zurckzufhren, da Licht und Temperatur im Freiland eine positive Korrelation
aufweisen. Die GR in Buchenblttern zeigte im Freiland weder eine Abhngigkeit von
Licht noch von der Temperatur, whrend sie bei Untersuchungen unter kontrollierten
Bedingungen deutlich niedrigere Aktivitten in Buchenblttern bei 35C als bei 10C
zeigten (Peltzer et al. 2001). Jedoch wurden die Enzymaktivitten dieser drei Enzyme nur
unter Standardbedingungen (25C im Test) gemessen.
An einem sonnigen Sommertag wurden signifikant hhere Ascorbatkonzentrationen um
14.00 Uhr gemessen als morgens und abends, gleichzeitig stieg der prozentuale Anteil an
DHA (P0.05). Zum Abend fielen diese Werte wieder ab. Der Ascorbatspiegel nahm
bereits ab, als noch minimale Werte fr PSII um 0.2 gemessen wurden (Peltzer und Polle
2001). Erhhte Ascorbatkonzentrationen wurden in der Klimakammer aber auch bei
Temperaturerhhungen beobachtet. Hier zeigten Buchenbltter signifkant erhhte
Ascorbatkonzentrationen bei 35C gegenber denen, die bei 10C wuchsen (Peltzer et al.
2001). Im Gegensatz zu den Beobachtungen von Badiani et al. (1997) in Hirse reagierten
Lichtbltter der Buche auf akuten Stre im Freiland (Licht, Hitze, eventuell
Wassermangel) kurzfristig mit einer Erhhung der Ascorbatkonzentrationen, aber nicht mit
einem gleichzeitigen Anstieg der Aktivitten antioxidativer Enzyme.

Schlufolgerungen: Die Reaktion des antioxidativen Systems auf Licht- und


Temperaturstre ergibt sich aus einem Zusammenspiel zwischen enzymatischen und
nichtenzymatischen Komponenten. Berechnet man anhand der gemessenen Werte von PSII
die gesamte Elektronentransportrate, stieg im Freiland der Elektronentransport von 16
mol m-2 s-1 am Morgen bis auf 120 mol m-2 s-1 am Nachmittag, obgleich PSII von 0.81
auf etwa 0.2 heruntergeregelt wurde. CO2-Assimilationsraten der Buche liegen unter 20
mol m-2 s-1 (siehe Abschnitt VI). Das wrde einem Bedarf an 80 mol Elektronen m-2 s-1
35
entsprechen. Damit mte an unbewlkten Tagen im Freiland etwa ein Drittel der
Elektronen in andere Prozesse als die CO2-Assimilation abgeleitet werden. Dies wre der
durch antioxidative Mechanismen maximal zu entgiftende Anteil. Bieler und Fock (1996)
berichteten, da unter Strebedingungen bis zu 30% der im Photosyntheseapparat
transportierten Elektronen in die Produktion von O2- flieen knnen. Wird dieser
schlimmste Fall angenommen, wren Aktivitten der APX von mindestens 20 mol m-2 s-1
notwendig, um die auftretende Belastung an H2O2 zu kompensieren. In der vorliegenden
Untersuchung wurden an sonnigen Tagen Enzymaktivitten der APX von 220 nkat g-1
Frischgewicht beobachteten, was auf die Blattflche umgerechnet eine Aktivitt von etwa
20.2 mol m-2 s-1 ergibt. Dies wre ausreichend, um eine Akkumulation von H2O2 zu
vermeiden.

X. Zusammenfassung

Ungnstige Umweltbedingungen knnen in aeroben Organismen oxidativen Stre


auslsen. Das Ziel der vorliegenden Arbeit war es, den Einflu von Licht und Temperatur
auf das antioxidative System der Buche (Fagus sylvatica) zu untersuchen, da bisher wenig
bekannt ist, welche Toleranzgrenzen die Buche gegenber Vernderungen der
Umweltbedingungen aufweist. Parallel dazu wurde die Nettophotosynthese durch
Gaswechsel- und Chlorophyllfluoreszenz charakterisiert. Bei der Untersuchung des
Ascorbat-Glutathion-Zyklus und der photosynthetischen Kapazitt der Pflanzen wurde
zwischen kurz- und langfristigen Anpassungsmechanismen unterschieden.
Um die Rolle von Licht und Temperatur im Hinblick auf oxidativen Stre besser zu
verstehen, wurden im Vergleich zur Buche die Birke (Betula verrucosa) und eine grn-
wei panaschierte Form der Buntnessel (Coleus blumei) untersucht. Die Buche ist eine
Klimaxbaumart, die sowohl Bltter, die an hohe Lichtintensitten angepat sind, als auch
schattentolerante Bltter im Bestandesinneren entwickelt. Die Birke ist im Gegensatz zur
Buche eine lichtbedrftige Pionierbaumart. Die Buntnessel zeichnet sich als eine krautige
Pflanze aus den asiatischen und afrikanischen Tropen aus, die nicht an
Temperaturschwankungen in ihrem natrlichen Habitat angepat ist. An den panaschierten
Blttern der Buntnessel konnten gleichzeitig Untersuchungen in photosynthetisch aktiven
und weien, photosynthetisch inaktiven Blattbereichen vorgenommen werden. Damit
konnte der Einflu von Licht und Temperatur auf das antioxidative System unabhngig
von der Photosynthese untersucht werden.
36
Die Birke wies bei hohen Lufttemperaturen hhere Elektronenfluraten als die Buche
auf. Weitere Untersuchungen ergaben Hinweise darauf, da diese hhere Toleranz
gegenber hohen Temperaturen darauf zurckzufhren ist, da die Birke dem
Temperaturstre ausweicht: durch hohe Transpirationsraten wurde die Blattemperatur
gesenkt. Das Photosystem II der Buche zeigte sich gegenber hohen Blattemperaturen
toleranter als das der Birke. Eine Kombination aus ungnstigen Temperaturen mit hohen
Lichtintensitten beantwortete die Buche mit einer frhen Herunterregulation des
photosynthetischen Elektronenflusses, allerdings war ihr Photosyntheseapparat weniger
anfllig fr irreversible Strungen als das der Birke.
Lichtangepate Bltter der Buche wiesen hhere Aktivitten der antioxidativen Enzyme
Ascorbatperoxidase, Monodehydroascorbatradikalreduktase und Glutathionreduktase
sowie hhere Konzentrationen an Ascorbat auf als Schattenbltter. Eine mehr als doppelt
so hohe Nettophotosyntheserate der Lichtbltter gegenber den Schattenblttern war
gleichzeitig mit einer niedrigeren Effizienz der Elektronennutzung fr die Assimilation von
CO2 verbunden. Dies kann, wenn andere Elektronensenken im Blatt fehlen (z. Bsp.
Photosynthese, Schwefel- und Stickstoffassimilation) eine zweifach hhere oxidative
Belastung der Lichtbltter im Vergleich zu Schattenblttern bedeuten. Diese Beobachtung
war unabhngig von der Beleuchtungsstrke. Dies knnte die Ursache dafr sein, da
Lichtbltter gegenber zustzlichem, knstlich induziertem oxidativem Stre nicht
resistenter waren als Schattenbltter, obgleich sie deutlich hhere antioxidative
Enzymaktivitten besaen.

Im Gegensatz zur Buche zeigte die Buntnessel ein sehr enges Temperaturoptimum der
relativen Elektronentransportraten von 20-25C. Bei hheren oder niedrigeren
Temperaturen wiesen die Pflanzen starke Stresymptome auf. Die Buche reagierte auf
unterschiedliche Temperaturen deutlich indifferenter als die Buntnessel.

Um zu berprfen, ob die bessere Temperaturtoleranz der Buche mit einer erhhten


Fhigkeit zur Strekompensation zusammenhing, wurde das antioxidative System
untersucht. Die Aktivitt der Ascorbatperoxidase in Buchen und Buntnesseln stieg mit
sinkenden Temperaturen. Eine gleichzeitige Belichtung der Bltter verstrkte diesen
Effekt. Im Gegensatz zur Ascorbatperoxidase reagierte die Glutathionreduktase eher auf
hohe Temperaturen, wobei Licht diese Reaktion ebenfalls verstrkte. Die Reaktionen der
Ascorbatperoxidase und der Glutathionreduktase auf Licht war jedoch unabhngig von der
photosynthetischen Aktivitt, da sie auch in belichteten weien Blattabschnitten der
37
Buntnessel beobachtet wurden. Die Aktivitt der MDAR sank bei niedrigen
Temperaturen und zeigten keinen klaren Lichteffekt.
Bei hohen Temperaturen stiegen die Konzentrationen an Ascorbat und Glutathion in
beiden Pflanzenarten, wobei die photosynthetische Aktivitt notwendig schien, um die
Ascorbatkonzentrationen aufrecht zu halten, jedoch nicht fr den Erhalt der
Glutathionkonzentrationen erforderlich war. Eine kurzfristige Anpassung von Buchen und
Buntnesseln an niedrige Temperaturen zeigte sich anhand der Zunahme der Aktivitten der
Ascorbatperoxidase und der Superoxiddismutase. Die Glutathionreduktase war an der
Anpassung an niedrige Temperaturen nicht beteiligt. Eine Anpassung an hohe
Temperaturen zeigte sich zudem an einem Anstieg der Glutathionreduktaseaktivitten und
hheren Konzentrationen an Ascorbat und Glutathion.
Die geringere Temperaturtoleranz der Buntnessel im Vergleich zur Buche war
offensichtlich darin begrndet, da einzelne Komponenten ihres antioxidativen Systems
versagten, whrend dieses bei der Buche nicht der Fall war. Bei hohen Temperaturen
bestand der aufflligste Unterschied zwischen den beiden Arten darin, da in der
Buntnessel die Aktivitt der Ascorbatperoxidase erheblich hhere Verluste zeigte als in der
Buche. Bei niedrigen Temperaturen zeigte sich ein anderes Muster: Beide Arten schienen
nach einer Anpassung an 10C noch ausreichend hohe Aktivitten der Glutathionreduktase
aufzuweisen, wenn die Enzymaktivitten unter Standardbedingungen (25C) gemessen
wurden. Allerdings sanken die Aktivitten der Glutathionreduktase stark, wenn sie bei
Blattemperatur gemessen wurden. In Coleus war diese Abnahme grer als in der Buche.
Stre durch niedrige Temperaturen fhrte in der Buntnessel zu einer relativ starken
Abnahme an Glutathion und zu einem signifikanten Anstieg an Glutathiondisulfid. Da
Glutathion ein wichtiges Antioxidans bei der Klteanpassung ist, scheint das
Glutathionsystem in der Buntnessel der schwache Punkt bei zu niedrigen Temperaturen zu
sein.
Die Anpassungen des antioxidativen Systems an schwankende Temperaturen, die durch
Licht noch verstrkt werden konnten, waren in der Buntnessel bei hohen und bei niedrigen
Temperaturen nicht effizient, weil entweder die Ascorbatperoxidase oder die
Glutathionreduktase und Glutathion im antioxidativen System ausfielen. Somit fiel das
Entgiftungssystem fr reaktiven Sauerstoff aus. Falls die Aktivitt der Ascorbatperoxidase
sich in situ im Blatt genauso verhlt wie in vitro im Test, ist es wahrscheinlich, da
Buntnesselbltter bei hohen Temperaturen durch eine Akkumulation von H2O2 vergiftet
werden. Das wrde eine Inhibition des Calvinzyklus und damit der Photosynthese zur
38
Folge haben. Das knnte der Grund dafr, da der photosynthetische
Elektronentransport bei nicht optimalen Temperaturen in Buntnesselblttern
herunterreguliert wurde.

In der Buntnessel wurde des weiteren gezeigt, da die Temperatur und die
photosynthetische Aktivitt einen Einflu auf die de-novo-Synthese von Ascorbat haben.
Dazu wurde die Enzymaktivitt der L-Galactosedehydrogenase, ein Schlsselenzym der
Ascorbatsynthese, in Extrakten aus grnen und weien Blatteilen bei unterschiedlichen
Temperaturen untersucht. Die L-Galactosedehydrogenase zeigte im allgemeinen steigende
Aktivitten mit steigender Temperatur. Dieses knnte ein Grund fr die verstrkte
Akkumulation von Ascorbat bei hheren Temperaturen sein.
Bei diurnalen Untersuchungen an Lichtblttern der Buche im Freiland wurden hohe
Schwankungen des antioxidativen Systems, insbesondere der Ascorbatperoxidase und der
Monodehydroascorbatradikalreduktase, beobachtet. Die Aktivitten zeigten auch unter
diesen Bedingungen eine Korrelation mit der Temperatur, aber nicht mit dem Licht. Die
Glutathionreduktase zeigte eine verhltnismig geringe Fluktuation, aber keine
signifikante Abhngigkeit von Licht oder Temperatur. Unter hohen Lichtintensitten
wurden signifikant erhhte Konzentrationen an Ascorbat in den Blttern beobachtet, die
aber innerhalb von vier Stunden etwa wieder abgebaut werden. Jedoch ist aus den
Untersuchungen unter kontrollierten Bedingungen zu schlieen, da hohe Temperaturen
und nicht Licht die magebliche Rolle spielte.
Die Ergebnisse der Arbeit zeigen, da Strereaktionen der antioxidativen Schutzenzyme
anders als bislang in der Literatur hufig vermutet, vor allem durch die fluktuierende
Temperatur ausgelst werden. Die Richtung der Streantwort der antioxidativen Enzyme
hatte nicht immer eine hinreichende Strekompensation zur Folge. Wenn aufgrund zu
hoher oder zu niedriger Temperaturen die Funktion einer Komponente des antioxidativen
Systems versagte, war die Schutzfunktion nicht mehr gegeben.
39

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Lebenslauf

persnliche Daten

Name, Vorname Peltzer, Detlef


geboren 13.12.1968
in Helmarshausen
Adresse Grimmerfelder Str. 10
O
C/ Schoensee
37170 Delliehausen (Uslar)

schulische Ausbildung und beruflicher Werdegang

Schulabschlu Abitur im Mai 1990 in Uslar (Niedersachsen), Schnitt


1,6

Zivildienst Juni 1990 bis September 1991 im Naturpark Solling-


Vogler

Ausbildung Studium der Forstwissenschaften in Gttingen von


Oktober 1991 bis November 1996 mit dem
Schwerpunkt Biologie-kologie, Schnitt 2,7

studienbegleitende Ttigkeiten geobotanisches Biomonitoring in verschiedenen


Projekten der Niederschsischen Forstlichen
Versuchsanstalt in Gttingen;

momentane Ttigkeit seit dem 1. April 1997 Doktorand am Institut fr


Forstbotanik und Baumphysiologie mit dem Thema
der Dissertation Anpassung antioxidativer Systeme
an Temperatur und Licht: holzige und krautige
Pflanzen im Vergleich.
45

Auslandspraktika Mai bis Juli 1999: Untersuchungen zur Anpassung der


Photosynthese an Licht und Temperatur in Buche
(Fagus sylvatica, L.) und Birke (Betula verrucosa, L.)
bei der INRA Nancy, Equipe Bioclimatologie-
Ecophysiologie, Unit dEcophysiologie Forestire,
Champenoux, F-54280 Seichamps, Frankreich.

Posterbeitrge 8. bis 9. Mai 1998: Prsentation eines Posterbeitrages


auf der 3. Jahrestagung des Arbeitskreises
Experimentelle kologie der Pflanzen in Bielefeld.
Titel: The role of antioxidants in light acclimation of
beech (Fagus sylvatica).

2. bis 6. April 2001: Prsentation eines


Posterbeitrages auf einem Kongre der SEB (Society
of Experimental Botany) in Canterbury
(Grobritannien). Titel: Does ascorbate play a role in
protection from high light? Differential effects of
ascorbate feeding in sun- and shade-acclimated leaves
of beech (Fagus sylvatica).
46
Diese Arbeit wre ohne Hanna und Herbert Schoensee nicht mglich gewesen, die sich

mit grtem Einsatz um meine Ausbildung bemht haben.

Ganz herzlichen Dank!