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Efecto mitotoxico del Cadmio en clulas meristematicas de la cebolla Allium cepa L.

Mitotoxic effect of Cadmium on meristematic cell of the onion Allium cepa L.
David Ariza D.; Angie Pinilla R.
davida.arizad@utadeo.edu.co; angiec.pinillar@utadeo.edu.co
Universidad de Bogot Jorge Tadeo Lozano
Resumen.
El cadmio es un metal pesado que se encuentra a lo largo de la corteza terrestre, en la actualidad es
ampliamente utilizado en la industria y es considerado como un contaminante ambiental por sus efectos
txicos debido a su acumulacin en los organismos principalmente por la ingesta de alimentos, agua y aire
contaminados y en altas concentraciones provoca alteraciones estructurales a nivel celular. En el presente
informe se realiz una comparacin detallada de los cambios morfolgicos en clulas vegetales producidos
por el cadmio, as como los principales estadios mitticos presentes en las clulas expuestas al metal en
meristemos radiculares de cebolla (Allium cepa L). A objetivo de esclarecer y comprobar los principales
efectos estructurales del cadmio propuestos por otros autores. Las cebollas se cultivaron en agua destilada
y desionisada con el fin de promover el crecimiento radicular, algunas de las races desarrolladas se trataron
con una solucin de cloruro de cadmio 0.1M (CdCl2) y otras se dejaron reposar en agua durante
aproximadamente 1 hora en ambos casos. El anlisis microscpico revelo variaciones en estadios mitticos
en clulas expuestas al cadmio con respecto al control en agua, se observaron cambios en la estructura
celular tales como vacuolas de diferentes tamaos y deformacin de la pared celular. Los resultados
obtenidos indican que el cadmio produce un efecto citotxico y mitotoxico en las clulas induciendo
posibles alteraciones en el funcionamiento ptimo de la clula.
Palabras clave: Cadmio. Citotoxicidad. Alteraciones morfolgicas. Mitosis.
Abstract.
Cadmium is a heavy metal that is found along the Earth's crust, nowadays it is widely used in the industry
and is considered as an environmental contaminant by its toxic effects due to its accumulation in organisms
mainly by the Ingestion of contaminated food, water and air and in high concentrations causes structural
alterations at the cellular level. In the present report, a detailed comparison of the morphological changes in
plant cells produced by cadmium, as well as the main mitotic stages present in the cells exposed to the metal
in meristems root onions (Allium cepa L). A objective of clarifying and verifying the main structural effects
of cadmium proposed by other authors. The onions were cultivated in distilled and deionized water in order
to promote root growth, some of the roots developed were treated with a solution of cadmium chloride 0.1M
(CdCl2) and others were allowed to rest in water for approximately 1 hour in both cases. The microscopic
analysis revealed variations in mitotic stages in cadmium-exposed cells with respect to water control,
changes in cell structure such as vacuoles of different sizes and deformation of the cell wall were observed.
The results obtained indicate that cadmium produces a cytotoxic and mitotoxic effect in cells inducing
possible alterations in the optimal functioning of the cell.
Key words: Cadmium. Cytotoxicity. Morphological alterations. Mitosis.
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Introduccin.
El cadmio (Cd), es un metal pesado que se obtiene como subproducto del procesamiento de metales como
el zinc (Zn) y el cobre (Cu), con alto potencial contaminante y toxicidad. El metal se acumula en el ambiente
como resultado de las actividades industriales (7;14), La exposicin crnica al Cd puede causar efectos
adversos en rin, hgado, pulmn y pncreas (17); de forma que una exposicin prolongada puede causar
dao en el tbulo renal y alteraciones en el metabolismo de la vitamina D (13). Cuando se alcanzan niveles
crticos del metal en sangre (> 100 mg/g de tejido en humanos), se producen nefropatas, proteinurias y
glucosurias (7).
Los ros contaminados con Cd pueden irrigar tierras de cultivos, adems de que el Cd es capaz de combinarse
con otros elementos y formar compuestos tales como cloruros, xidos, sulfuros y de esta manera unirse
fuertemente a las partculas del suelo. Se considera que la mayor cantidad de Cd en el suelo proviene del
uso de fertilizantes de fosfatos para la agricultura, lo cual produce que se acumule a lo largo de la cadena
alimenticia en plantas y animales. En la planta, el cadmio se acumula preferentemente en la raz retenido en
la vacuola de las clulas, y solo una pequea parte es transportada a la parte area de la planta
concentrndose en orden decreciente en tallos, hojas, frutos y semillas (4). En las cebollas A. cepa la
exposicin a cadmio produce reduccin de la actividad ATPasa de la membrana plasmtica, (2), alteraciones
en la funcionalidad de la membrana plasmtica (6;16) y desequilibrios en el metabolismo del cloroplasto,
inhibiendo la sntesis de clorofila y reduciendo la actividad de enzimas implicadas en la fijacin de CO2
(1;9).
Investigaciones previas han sugerido que el estudio de las alteraciones en el ndice Mittico (IM), bloqueo
del crecimiento e induccin de aberraciones cromosmicas (AC), son dosmetros biolgicos para el estudio
potencial de sustancias mutagnicas y carcinognicas como el cadmio, presentes en el ambiente como
contaminantes (7;12), varios estudios previos tambin resaltan toxicidad a otros metales pesados tales como
el plomo, arsnico, zinc y aluminio, lo cual indica la susceptibilidad de las plantas a la toxicidad en el suelo,
agua y aire (10).
El objetivo del presente informe es evidenciar los posibles cambios morfolgicos inducidos por el cadmio
en las clulas radiculares de A. cepa, a fin de identificar cules son los efectos de una exposicin a una
concentracin determinada de cadmio en las clulas vegetales.
Materiales y Mtodos
Como material de estudio se utiliz meristemos radiculares de A. cepa, debido a que como las estructuras
radiculares se encuentran en constante crecimiento se hallan clulas en mitosis continua, este organismo se
considera uno de los mejores modelos biolgicos para el estudio del efecto de contaminantes ambientales
por ser de bajo costo, fcil manipulacin y tener cromosomas fciles de observar. (11;8).
Se utilizaron 15 bulbos de cebolla y se mantuvieron en agua destilada y desionisada por aproximadamente
10 das, una vez que las races alcanzaron una longitud optima, se retiraron los meristemos apicales y se
coloraron algunos en agua (control) y otros en una solucin acuosa de cloruro de cadmio 0.1M (CdCl2)
durante aproximadamente 1 hora, el anlisis se llev a cabo con un meristemo de aproximadamente 4mm
por procedimiento, para cada control se realiz con 5 repeticiones y un solo procedimiento para el
meristemo con cloruro de cadmio.
Posteriormente, se procedi a realizar el montaje de las placas. Se coloc cada meristemo en un portaobjetos
de vidrio de 8cm * 2.5cm, A cada meristemo se le adiciono inicialmente una gota de cido clorhdrico 0.2N
(HCl) y se dej en reposo por 3 minutos, luego de este tiempo se procedi a eliminar el exceso y se le
adiciono una gota de Orceina A y se dej reposar nuevamente durante 5 minutos, al cabo de este tiempo se
retir el exceso y se adiciono una gota de Orceina B al cabo de 1 minuto se lav el exceso. Finalmente se
coloc el cubreobjetos sobre cada meristemo y se presion hasta el punto de dejar una capa uniforme de
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masa celular. Se procedi a realizar el anlisis microscpico por medio de un microscopio Primo Star marca
Carl Ceiss.

Resultados y discusin
El anlisis morfolgico de las clulas del meristemo apical de la cebolla A. cepa revela variaciones de las
clulas expuestas al cadmio en una concentracin de 0.1M como se muestra en la figura 1a en la que se
observa como presentan un marcado proceso de vacuolizacin producido por dicho metal, una notable
pseudolobulacion del ncleo (Fig. 1a), deformacin de las paredes celulares y alta condensacin de la
cromatina (Fig. 1b). del mismo modo se puede evidenciar como el ndice mittico disminuye al observar
que la fase mittica predominante es la interfase seguida por unas menos frecuentes profases como se
registra en la tabla 1. Existen reportes que establecen que el Cadmio altera el metabolismo del perxido de
hidrogeno (H2O2) ocasionando un cambio en la permeabilidad de la membrana plasmtica en las clulas
(15). Dicho esto, un posible mecanismo mediante el cual el cadmio ejerce su toxicidad puede ser debido a
la accin inhibitoria del cadmio sobre la actividad de la enzima glutatin reductasa, enzima que se encarga
de la reduccin del perxido de hidrogeno y del lipoperoxido. Tanto el perxido como el lipoperoxido son
txicos para todos los tejidos debido a que al oxidarse se transforman en compuestos no metabolizables por
las clulas, y tambin se ha establecido que el cadmio altera el gen que codifica la enzima
ganmaglutamilcisteina sintetasa requerida para la biosntesis de glutatin reductasa (18). Otra posibilidad
podra ser por su accin inhibitoria sobre la actividad de la ATPasa Na+/K+ y ATPasa Mg+2, que ha sido
reportado por Carfagna et al. (3). al compararlas con las clulas mitticas observadas en agua (Fig. 2) en
donde se observa la integridad de los diferentes organelos celulares y sus diferentes estadios mitticos (Fig.
3). en unas circunstancias normales, podemos evidenciar el claro efecto citotxico a nivel morfolgico
causado en las clulas.

Tabla 1. Cuantificacin de clulas mitticas y sus estadios mitticos

Profase Metafase Anafase Telofase
1 control 19 8 5 2
2 control 23 10 7 4

3 control 25 5 7 1
4 control 20 7 8 3

5 control 22 9 9 5
PROMEDIO 21.8 7.8 7.2 3
CADMIO 17 5 4 1

Tomando en cuenta los datos obtenidos de la cuantificacin de las clulas mitticas, se puede observar una
disminucin notable en el ndice mittico en las clulas expuestas al cloruro de Cadmio, esto puede ser
debido a lo anteriormente propuesto.
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Figura 1a. Clulas en interfase en cadmio con Figura 1b. Clulas en cadmio con alta
vacuolas (v) muy grandes y pseudolobulacion del condensacin de la cromatina y deformacin de
ncleo. la pared celular.

A. B.

C. D.
Figura 3. Clulas en agua en sus diferentes
Figura 2. Clulas en agua sin vacuolas muy estados mitticos: Profase (A), Metafase (B),
desarrolladas y sin pseudolobulacion del ncleo. Anafase (C), Telofase (D)
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Figura 4. Cromosomas mitticos de Allium cepa en

tratamiento control.

Conclusiones
Se concluye que el cadmio produce un efecto citotxico en meristemos radiculares de Allium cepa L, por
la absorcin continua de dicho metal en las vacuolas celulares, lo cual produce una alta concentracin de
este en la clula aumentando su toxicidad. La sensibilidad de esta especie a la contaminacin por cadmio,
representa un factor de riesgo para la salud humana por el consumo de este y otros vegetales cultivados en
regiones contaminadas. El efecto citotxico se pudo evidenciar por las alteraciones celulares producidas en
su morfologa, entre los cuales se pueden mencionar: vacuolizacin, deformacin de la pared celular,
pseudolobulacion del ncleo, condensacin de la cromatina. Del mismo modo se observ una disminucin
notable en el ndice mittico como se pudo evidenciar en el conteo realizado

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