PROLOGO

El conjunto de Prcticas de Laboratorio del curso de HEMATOLOGA agrupadas

en el presente Gua de Prcticas, han sido especialmente diseadas para los alumnos de la
Escuela profesional y Acadmica de Biologa que estn orientados al rea de la Salud y a
todos los que deseen reproducir algunos experimentos y tcnicas fundamentales de esta
disciplina.

Se procura, con el presente gua, que el alumno realice personalmente los

experimentos para desarrollar su manualidad. Pero es indispensable que aprenda a observar
y a razonar, y, a travs de ello, las bases del mtodo cientfico.

La Hematologa no se concibe sin experimentos, pero el estudio terico siempre

debe acompaar y completar al prctico. Por eso, se aconseja a los alumnos estudiar
previamente los temas que habrn de ensayar luego en el laboratorio.

Como objetivos tenemos:

Conocer los reactivos y los materiales bsicos utilizados en el Laboratorio de Hematologa,
Saber manejar los instrumentos ms empleados en Hematologa
Saber preparar las muestras de sangre para la identificacin morfolgicas de sus elementos
celulares.
Ser capaz de realizar tcnicas hemocitomtricas
Entender el funcionamiento normal de las clulas sanguneas
Conocer las principales enfermedades que afectan a la sangre
El desarrollo completo de la gua permitir una mejor comprensin de las tcnicas
desarrolladas y nivel de conocimientos en el Curso de Hematologa

EL AUTOR

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2
 INDICE

Pg

PROLOGO ............................................................................................................................ 1
PRACTICA 1 ........................................................................................................................ 9
EXTRACCIN DE SANGRE .............................................................................................. 9
PRACTICA 2 ...................................................................................................................... 14
EXTENSIONES SANGUINEAS. ...................................................................................... 14
PRACTICA 3 ...................................................................................................................... 21
RESISTENCIA OSMTICA DE ERITROCITOS ............................................................ 21
PRACTICA 4 ...................................................................................................................... 27
HEMATOCRITO VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR ......................... 27
PRACTICA 5 ...................................................................................................................... 39
RECUENTO DE ERITROCITOS Y RETICULOCITOS .................................................. 39
PRACTICA 6 ...................................................................................................................... 48
HEMOGLOBINA SATURACIN DE OXIGENO ........................................................... 48
PRACTICA 7 ...................................................................................................................... 56
INDICES ERITROCITARIOS .......................................................................................... 56
CASO CLNICO ................................................................................................................. 61
PRACTICA 8 ...................................................................................................................... 62
RECUENTO DE LEUCOCITOS HEMOGRAMA DE SCHILLING ............................... 62
PRACTICA 9 ...................................................................................................................... 74
INDICES LEUCOCITARIOS ............................................................................................. 74
PRACTICA 10 .................................................................................................................... 80
TIEMPO DE COAGULACIN Y SANGRIA ................................................................... 80
PRACTICA 11 .................................................................................................................... 89
TIEMPO DE PROTROMBINA RECUENTO DE PLAQUETAS ..................................... 89
PRACTICA 12 .................................................................................................................... 98
TIPIFICACION DE SANGRE. ........................................................................................... 98
SISTEMA RH ..................................................................................................................... 99
PRACTICA 13 .................................................................................................................. 103
PRUEBAS CRUZADAS................................................................................................... 103
PRACTICA 14 .................................................................................................................. 108
BANCO DE SANGRE ...................................................................................................... 108
BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................... 113
REVISTAS ........................................................................................................................ 114

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 NOMENCLATURA
En trminos de uso comn para describir anomalas y artificios observados en los
preparados coloreados de glbulos rojos.

Acantocitos. Estos son unos glbulos rojos que tienen unas finas prolongaciones en su
superficie. Ocurren como anormalidad hereditaria asociada con metabolismo anormal de
los fosfolpidos.

Anisocitosis. Este trmino se utiliza para denotar variaciones del tamao de los eritrocitos.

Anillos de Cabot. En algunas formas de anemia severa aparecen como anillos purpreos
en el centro o cerca de la periferia de los eritrocitos.

Anulocitos. Como causa del menor contenido de hemoglobina estos eritrocitos exhiben un
rea grande de palidez central.

Cuerpos de Heinz. La polimerizacin y precipitacin de molculas de hemoglobina

desnaturalizada produce los cuerpos de Heinz, que se demuestra mejor mediante tincin
supravital con violeta de metilo.

Cuerpos de Howell-Jolly. Se trata de unos restos nucleares que aparecen como unas
inclusiones azules densas que pueden ser nicas o mltiples, por lo general cerca de la
periferia de la clula y medir hasta 1 m de dimetro. Los cuerpos de Howell-Jolly y los
anillos de Gabot ocurren en los frotis de sangre despus de la esplenectomia, y en forma
ocasional en los estados dishemopoyticos como anemia megaloblstica y las leucemia,
pero los anillos de Cabot, son menos frecuentes que los cuerpos de Howell-Jolly.

Drepanocitos (critrocitos falciformes). En casos de anemia hemoltica (anema

drepanoctica) ocurre esta anomali en la que muchos eritrocitos exhiben una forma
semilunar franca y toman el colorante de mucho ms que los eritrocitos circundantes.

Eliptocitosis. Estas clulas tienen unas especulas distribuidas con uniformidad en su

superficie como consecuencia de una alteracin del ambiente intracelular y extracelular. El
trmino es sinnimo de eritrocitos espinosos.

Eritrocitos crenados. Este artificio suele deberse al mal secado del frotis de sangre.

Eritrocitos en blanco de tiro. En estos eritrocitos existe un rea central redondeada de

citoplasma coloreado normalmente, rodeada por un rea clara que, a su vez est rodeada
por un anillo perifricos normocrmico.

Eritrocitos espinosos. Estas clulas tienen varias saliencias aguzadas que semejan las
espinas de ciertas plantas. Son poiquilocitos y es fcil confundirlos con las formas
crenadas.

Eritrocitos pinzados. Estos eritrocitos dan la impresin de que una parte de su sustancia
hubiese sido indentada con una pinza. Es probable que esto represente el proceso de
fragmentacin.

Esferocitos. Clula a esferoides que ocurren en muchos tipos de anemia hemoltica,

incluso esferocitosis hereditaria, anemia hemoltica inmune y en las quemaduras.

5
Esquistocito. Estos son productos de la fragmentacin de los glbulos rojos que pueden
adoptar una forma triangular o elptica pequea con indentacin o presentarse como
eritrocitos crenados en forma irregular. Son comunes en la anemia hemoltica.

Estomatocitos. Glbulos rojos en los cuales el rea bicncava central aparece como una
hendidura y como una concavidad circular. Se han notado grandes cantidades de este tipo
de eritrocitos en un tipo infrecuente de anemia hemoltica hereditaria.

Hipocroma. Se refiere a la reduccin de la intensidad de la tincin, que puede variar desde

un ligero incremento de la zona de palidez central hasta un rea de gran tamao rodeada
por un pequeo borde de citoplasma hemoglobinizado.

Leptocito. Fino glbulo rojo hipocrmico de dimetro normal y de VCM disminuido.

Suele ocurrir en la talasema.

Microcitos. Son ms pequeos y ms plidos que los eritrocitos normales.

Microesferocitos. Eritrocitos de forma esfrica ms pequeos que los eritrocitos normales

que por su forma esfrica no exhiben un rea de palidez central. Existen en las
enfermedades hemolticas.

Picnocito. Glbulos rojos distorsionados y contrados similares al equinocito.

Poiquilocitosis. Dcese de la presencia de eritrocitos de formas irregulares. El trmino

comprende alteraciones morfolgicas como eritrocitos espinosos, eliptocitos, eritrocitos,
primiformes y desgarrados y drepanocitos.

Policromasia. Este trmino denota que la clula toma los colorantes cidos y bsicos al
mismo tiempo por alteracin en el contenido de hemoglobina del eritrocito, de modo que
exhibe en gran medida la misma coloracin que se ve en la etapa intermedia de la
eritropoyesis. En este caso el citoplasma se ha atrasado respecto del ncleo en su
maduracin y no ha perdido del todo su cido ribonucleico.

Punteado basfilo. Estos pequeos grnulos azules se forman mediante condensacin de la

sustancia basfila del citoplasma de modo que le imparten un aspecto punteado. En estados
como anemia severa estos grnulos pueden ser muy gruesos.

Siderocitos. Estos son eritrocitos que contienen uno o ms grnulos de distribucin

despareja que contiene hierro y se reconocen por la reaccin positiva con el azul de Prusia.
En ocasiones se disciernen como unos puntos basfilos en los frotis coloreados con los
mtodos de Romanowsky y entonces pueden conocerse como cuerpos de Pappenheimer.
Estas clulas ocurren en la sangre perifrica en los trastornos asociados con compromiso
de la sntesis de la hemoglobina, como talasemia. Tambin existen en la sangre despus de
la esplenectomia, cuando se ha hecho sta para tratar ciertos estados hemolticos.

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 VALORES HEMATOLGICOS NORMALES

HEMOGLOBINA
Neonatos de trmino, sangre del cordn 13,6-19,6 g/dl
Nios de 1 ao 11,2 g/dl
Nios de 10 aos 12,9 g/dl
Hombres 13,5-18,0 g/dl
Mujeres 11,5-16,4 g/dl
GLBULOS ROJOS
Neonatos de trmino, sangre del cordn 4,0-5,6 x 106/ul
Nios de 1 ao 4,5 x 106/ul
Nios de 10 aos 4,7 x 106/ul
Hombres 4,5-6,5 x 106/ul
Mujeres 3,9-5,6 x 106/ul
VOLUMEN CELULAR CENTRIFUGADO (VCC)
(Hematcrito Ht)
Neonatos de trmino, sangre del cordn 0,44-0,62 1/l
Nios de 1 ao 0,35 l/l
Nios de 10 aos 0.3759 l/l
Hombres 0,40-0,54 l/l
Mujeres 0,36-0,47 l/ll
VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (VCM)
Adultos 80-96 fl
Hemoglobina corpuscular media (HCM)
Adultos 27-32 pg
Concentracin de hemoglobina corpuscular media (CHCM)
Adultos 32-36 g/dl
RETICULOCITOS
Neonatos de trmino, sangre del cordn 2-6%
LEUCOCITOS
Neonatos de trmino al nacer 10-25 x 109/1
1 ao 6-18 x 109/1
4 a 7 aos 6-15 x 109/1
8 a 12 aos 4,5-13 x 109/1
Adultos 4-10 x 109/1
RECUENTO LEUCOCITARIO DIFERENCIAL
Relativo Absoluto por
7000 leucocitos
Adultos: Neutrfilos 40-75% 2800-5250
Linfocitos 20-45% 1400-3150
Monocitos 2-10% 140-700
Eosinfilos 1-6% 70-420
Basfilos < 1% 0-70
Plaquetas 150000-400000 x u1
Recuentos diferenciales en mdula sea
Hemohistioblastos 0,1-2%
Hemocitoblastos 0,1-1%
Mieloblastos 0,1-3,5%
Promielocitos 0,5-5%
Mielocitos
Neutrfilos 5-20%

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 Eosinfilos 0,1-3%
Basfilos 0-0,5%
Metamielocitos
Formas iniciales 10-30%
Formas en cayado
Polimorfonucleares
Neutrfilos 7-25%
Eosinfilos 0,2-3%
Basfilos 0-0,5%
Linfocitos 5-20%
Monocitos 0-02%
Megacariocitos 0,1-0,5%
Clulas plasmtica 0,1-3,5%
Pronormoblastos 0,5-5%
Normoblastos
Iniciales y formas intermedias 2-20%
Formas tardas 2-10%
Relacin mieloide-eritroide 2,5-15;1

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 PRACTICA 1
EXTRACCIN DE SANGRE
INTRODUCCION.

La hematologa viene ser el estudio de la sangre a travs de sus componentes

sanguneos y los correspondientes rganos hematopoyticos que lo producen, por lo tanto
dentro del rea de hematologa se van a realizar diferentes pruebas o anlisis destinados a
determinar si las muestras de sangre respectivas presentan anormalidad en cuanto al
nmero, concentracin, etc. O si existe algn tipo de variacin en estos elementos (forma,
aspecto, etc.) para ello es necesario seguir ciertas condiciones bsicas que empiezan desde
la toma de muestra. El lugar de venopuncin para la obtencin de sangre venosa, es
preferentemente en la regin antecubital (vena cubital interna y la ceflica), ya que se trata
de una regin anatmica de fcil acceso por tratarse habitualmente de venas superficiales y
de un grosor adecuado para la puncin.

MATERIALES:
Lancetas descartables.
Torundas de algodn con alcohol yodado.
Agujas 20.5 mm
Vacuteiner

METODOLOGIA
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TOMA DE MUESTRA

Para las tcnicas hematolgicas, es fundamental que las muestras de sangre sean
tomadas en forma adecuada y precisa, ya que el menor detalle o error puede alterar la
totalidad o exactitud del examen.

Algunos procedimientos hematolgicos como recuento de leucocitos, recuento de

reticulocitos, todos estos exmenes requieren solo de una pequea cantidad de sangre, las
cuales son obtenidas de la puncin venosa.:

PUNCION CAPILAR

Se puede recurrir a la puncin capilar en caso de que las cantidades de muestra sangunea a
utilizar sea muy pequea o haya dificultades para practicar una puncin venosa. El sitio
mas utilizado es el pulpejo del dedo, lbulo de la oreja o taln del pie en el recin nacido;
para ello se utilizan lancetas estriles desechables que tienen un tope para evitar
profundizar ms de lo aconsejable (2.4 mm en taln y 3.1 mm en el pulpejo del dedo)

Utilizamos la zona ungual lateral de la yema de los dedos o del borde del lbulo de la
oreja, o en los nios en la superficie plantar del taln.

Presionar longitudinalmente o un masaje suave en la zona para favorecer la vasodilatacin,

en nios puede ser necesario a veces sumergir el pie en agua caliente.

Desinfectamos la zona elegida con una torunda de algodn con alcohol yodado.

Ya evaporado este, realizamos la puncin con una lanceta desechable.

Desechamos las dos primeras gotas de sangre, y las gotas restantes se recolectan en
capilares heparinizados o directamente, de acuerdo a la prueba que se va a realizar.

PUNCION VENOSA

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Colocar al paciente en posicin cmoda, haciendo que su brazo descanse en una superficie
plana.

Colocar la ligadura alrededor del brazo del paciente con un nudo que sea corredizo,
evitando oprimir muy fuerte.

Pedimos al paciente que abra y cierre la palma de la mano enrgicamente, esto con la
finalidad de que las venas sobresalgan.

Desinfectar la zona elegida de la puncin, mientras el paciente mantiene el puo cerrado.

Colocar la aguja con el bisel hacia arriba e introducir la aguja en la vena, y esto se
introduce de 1 a 1.5 cm. Recolectamos la sangre en frasquitos con anticoagulante o en
tubos, segn el examen que pida.

Obtenida la muestra de sangre necesaria, procedemos a desligar el brazo del paciente.

Colocamos un pedazo de algodn con alcohol yodado sobre la aguja sin presionar el brazo
del paciente, ya al momento de retirar la aguja del brazo se presiona con el dedo el algodn
y se le comunica al paciente que debe permanecer de 3 a 5 minutos con el brazo doblado o
en todo caso con el brazo extendido.

NOTA.- La sangre que quede en la aguja se utiliza para realizar los extendidos o frotis
sanguneo esto ni bien se termina la extraccin sangunea, esto en caso que haya solicitado
la frmula diferencial de leucocitos o recuento de plaquetas en lmina.

ANTICOAGULANTES:
Los anticoagulantes se utilizan para obtener plasma o muestras de sangre total para
estudiar las caractersticas morfolgicas y realizar los recuentos celulares. Deben intentar
que las clulas sanguneas a estudiar se encuentren en el estado ms parecido al
fisiolgico, como cuando se encuentran circulando por el torrente sanguneo. Para ello los
anticoagulantes no deben alterar la morfologa de los leucocitos, el tamao eritrocitario, no
producir hemlisis e impedir la agregacin plaquetaria, posibilitando al mismo tiempo el

11
mximo perodo de conservacin de la muestra (generalmente no ms de 24 horas incluso
refrigerada a 4 C).
Los anticoagulantes ms utilizados son:
EDTA (C10H16N2O8) o sal disdica, dipotsica o tripotsica del cido
etilendiaminotetraactico, actuando mediante un efecto quelante sobre el calcio (Ca++),
impidiendo el proceso de la coagulacin al fijarlo. Este anticoagulante se utiliza
fundamentalmente para la realizacin de recuentos celulares, sobretodo en los
autoanalizadores y permite adems la realizacin del hematocrito y del frotis sanguneo
hasta dos horas despus de la extraccin de la muestra al mismo tiempo que impide la
aglutinacin de las plaquetas. Las sales de potasio tienen la ventaja con respecto a la de
sodio, por ser ms fcilmente solubles en sangre cuando las usamos a partir del producto
slido, sin embargo , las tres sales afectan el tamao del eritrocito, especialmente despus
del almacenamiento de la sangre anticoagulada por espacio de algunas horas. El
International Council for Standardization in Hematology (ICSH) recomienda la sal
dipotsica como anticoagulante para recolectar muestras sanguneas destinadas al recuento
y caracterizacin del tamao celular y especialmente cuando los valores del hematocrito se
requieren para la calibracin de los contadores automticos. El K2EDTA .2H2O posee un
peso molecular relativo de 404,1g; 1g quela 100 mg de calcio inico y el pH para una
solucin al 1% es de 4.8+/-1,0. La cantidad de EDTA dihidratado agregada a la sangre
debe ser de 1.5-2.2 mg/ml. de sangre total. Esta cantidad es un compromiso entre la
cantidad requerida para evitar la coagulacin y la cantidad a la cual se producen las
alteraciones celulares.

HEPARINA SDICA. HEPARINA DE LITIO, es un anticoagulante fisiolgico que acta

impidiendo que la protrombina se transforme en trombina. Estructuralmente es un
mucopolisacrido cido. Los frotis realizados con muestras sanguneas anticoaguladas con
heparina producen en las tinciones panpticas un color azulado y una pseudovacuolizacin
celular por lo tanto no se lo recomienda para tal fin. La proporcin adecuada es de 15-20
UI (0.1-0.2 mg) de heparina por ml de sangre.

CITRATO TRISDICO, C6H5O7Na3, acta impidiendo que el calcio se ionice, evitando

as la coagulacin. Se utiliza para realizar las pruebas de Hemostasia en una proporcin
sangre: anticoagulante 9:1; as como para la velocidad de eritrosedimentacin en una
proporcin sangre: anticoagulante 4:1. El citrato sdico se utiliza a una concentracin de
0.106 mol/l (31,3 g/L de C6H5O7Na3.2H2O).

ACD se emplea fundamentalmente en Bancos de Sangre para conservar las unidades de

sangre y estudios metablicos eritrocitarios por permitir una buena conservacin de los
hemates. Se utiliza en una proporcin de un volumen de ACD por cada cuatro volmenes
de sangre. La proporcin de la mezcla del anticoagulante es de: Acido Ctrico 0.9 g, Citrato
disdico 2 g, Dextrosa 2 g, H2O destilada 120 ml.

CUESTIONARIO

Cual es la concentracin de citrato de sodio que se utiliza como anticoagulante

12
Cual es la concentracin de EDTA que se utiliza como anticoagulante

Cual es la concentracin de heparina que se utiliza como anticoagulante

Mecanismo anticoagulante de la heparina

Que es el anticoagulante Wintrobe

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 PRACTICA 2
EXTENSIONES SANGUINEAS.
INTRODUCCION

Una extensin o frotis sanguneo consiste en recubrir parcialmente un porta con una gota
de sangre, de tal manera que las clulas de sta se dispongan formando una sola capa de
ellas.

Esto puede hacerse manual o automticamente. Lo ltimo se realiza con aparato (Spinner)
que centrifuga rpidamente el porta con la sangre depositada en su centro. Con este aparato
se obtienen unos frots que presentan una distribucin celular muy homognea.

PARTES DE UNA EXTENSIN:

Cabeza:

Es la zona inicial de la extensin

Es la regin ms gruesa

En ella se encuentra una mayor proporcin de linfocitos, y los hemates forman

aglomerados (Rouleaux)

Cuerpo:

Es la zona media del frots

Su espesor es el apropiado

En ella existe una adecuada proporcin entre los distintos tipos de leucocitos

Contiene la zona ideal de observacin, que corresponde a la porcin que limita con la
cola

Cola:

Es la zona final de la extensin

Suele tener un aspecto redondeado

Es la regin ms fina

En ella se encuentra una mayor proporcin de leucocitos grandes (granulocitos y

monocitos), y adems, los hemates estn deformados y presentan una tonalidad uniforme.

En su porcin Terminal suelen ser ms abundantes las plaquetas, sobre todo si son grandes.

Bordes:

Contienen una mayor proporcin de leucocitos grandes

14
Si estn deshinchados, en ellos las clulas son difciles de reconocer por estar deformadas
o destruidas.

CARACTERISTICAS DE UNA BUENA EXTENSION

La cabeza ha de estar cerca de uno de los extremos del porta

La cola debe estar cercana al otro extremo del porta, pero sin llegar a l

El borde de la cola tiene que estar finamente deshilachado.

Toda extensin ha de ser fina y homognea

Los bordes laterales de la extensin deben estar separados de los bordes del porta por 1
mm aproximadamente.

DEFECTOS DE LA EXTENSION

Excesiva longitud y escaso grosor o escasa longitud y excesivo grosor. Esto se debe a un
inadecuado tamao de la gota de sangre y/o a un error en la velocidad y/o en un fallo en el
ngulo de extensin de la misma.

Presencia de escalones o estras. Esto est ocasionado por una falta de uniformidad en el
deslizamiento de la gota.

Existencia de abundantes zonas redondeadas que carecen de sangre. Esto se produce por la
presencia de restos de grasa o de suciedad en el porta.

Extremo final excesivamente dentado.

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MATERIAL

Lanceta de aplicacin manual o automtica

Algodn

Capilar no heparinizado

Porta objetos limpios libres de grasa

Porta esmerilado

Guantes desechables

Plumn indeleble

TECNICA:

Con los dedos ndice y pulgar de una mano, sujetar un extremo del porta normal, a nivel de
sus bordes, y situarlo sobre una mesa.

Con un capilar cargado mediante capilaridad de sangre problema, depositar una pequea
gota de sta (5 uL) en la cara superior de ese porta, a no menos de 2 cm del extremo
opuesto al que agarra la mano.

16
Colocar un extremo del porta esmerilado un poco por delante de la gota de sangre y
formando un ngulo de 45 con el porta objetos.

Desplazar suavemente hacia atrs el porta extensor, hasta que alcance la gota de sangre.

Dejar que la gota se extienda, por capilaridad, a lo largo del extremo del porta extensor
que toca el porta soporte.

Antes que la sangre alcance los bordes de ese extremo, deslizar el porta extensor hacia
delante, con un movimiento firme y uniforme, y a una velocidad media.

Secar rpidamente la extensin, agitndola al aire, para que sus clulas no se distorsionen.

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 EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNSTICO:....................................................................................................................

.............................................................................................................................................

EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNOSTICO:....................................................................................................................

..............................................................................................................................................

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 CUESTIONARIO

Cual es la regin ms fina de una extensin sangunea

Que leucocitos se observan en una mayor proporcin en la cabeza de un frots sanguneo.

A que se debe la presencia de estras en una extensin sangunea

Que volumen ha de tener la gota de sangre utilizada para realizar un frotis sanguneo.

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20
 PRACTICA 3

RESISTENCIA OSMTICA DE ERITROCITOS

INTRODUCCION.
La vida celular depende de un continuo intercambio con el medio externo,
ya que la clula debe tomar de este los nutrientes y expulsar hacia l los
productos de su metabolismo.

El intercambio se establece a travs de la membrana celular, la cual se

comporta como una estructura semipermeable que permite el paso de
determinadas sustancias e impide el de otras.

La membrana est constituida por una bicapa de molculas lipdicas

anfipticas, orientadas de forma tal que sus grupos polares quedan expuestos
hacia las interfases interna y externa, mientras los grupos apolares se disponen
hacia el interior, alejados del agua. La bicapa lipdica se ve interrumpida en
determinados puntos por la presencia de molculas proteicas.

De acuerdo con la estructura molecular de las sustancias que atraviesan la

membrana, el paso se efecta a travs de la parte lipdica o de la proteica.

Las sustancias apolares se solubilizan en los lpidos de la membrana y la

atraviesan fcilmente; las sustancias polares pequeas atraviesan los polos
proteicos. En ambos casos la sustancia se mueve siguiendo su potencial qumico
y el mecanismo se conoce como permeabilidad simple. Las sustancias polares,
cuyo dimetro molecular sobrepasa el dimetro mximo de los poros, requieren
de un mecanismo especial de paso a travs de la membrana, en el cual estn
involucradas las protenas de membrana; este mecanismo se conoce como
transporte mediado o facilitado.

Uno de los aspectos fundamentales de la Fisiologa, es el mantenimiento

correcto de la composicin de los lquidos corporales con un adecuado balance
entre el LIC y LEC.

Ello amerita revisar antes, los conceptos de osmosis, presin osmtica y

osmolaridad.

OSMOSIS

Se define como osmosis el flujo de agua a travs de membrana

semipermeable desde un compartimiento en el que la concentracin es baja hacia
otro en el que dicha concentracin es mayor. Se define como membrana
semipermeable aquella que es permeable al agua e impermeable a los solutos. La
smosis se produce porque la presencia de solutos reduce el potencial qumico
del agua, que tiende entonces a fluir desde las zonas donde su potencial qumico
es mayor hacia las de menor potencial. Otros efectos causados por la disminucin
del potencial qumico del agua (debido a la presencia de solutos) incluyen una
menor presin de vapor, descenso del punto de congelacin y elevacin del punto
de ebullicin de la solucin, en comparacin con el agua pura. Dado que estas
21
propiedades, al igual que la presin osmtica, dependen de la concentracin
presente del soluto, ms que de sus caractersticas qumicas, reciben el nombre
de propiedades coligativas.

PRESIN OSMTICA

Una membrana semipermeable separa agua pura (B) de una solucin (A). El agua
fluye de B hacia A por smosis porque la presencia de soluto en el lado A reduce
el potencial qumico del agua en la solucin. Al empujar el pistn en la solucin
del lado A se incrementa el potencial qumico del agua de esta solucin, lo que
hace que disminuya la velocidad neta de smosis. Si la fuerza aplicada sobre el
pistn se incrementa gradualmente, acaba por alcanzarse una presin a la que el
flujo de agua se detiene. Si se aplica una presin aun mayor, el agua comienza a
fluir en sentido contrario, de A a B. La presin que, aplicada en el lado A, resulta
ser justamente suficiente para evitar el flujo de agua recibe el nombre de presin
osmtica de la solucin del lado A.

La presin osmtica de una solucin depende del nmero de partculas en

solucin, lo que significa que ha de tenerse en cuenta el grado de ionizacin del
soluto.

Las ecuaciones referentes a la presin osmtica y otras propiedades

coligativas fueron definidas por Van`t Hoff.. Una forma de la ley de Van`t Hoff.
Para el clculo de la presin osmtica es:

P.O. R.T .i.M

donde:

P.O. = Presin osmtica

R = 0.08206 L-Atm/mol k, la constante ideal de los gases

T = 310 k, la temperatura absoluta a 37 oC

i = Nmero de iones resultantes de la disociacin de una molcula de soluto

M = Concentracin molar de soluto (moles de soluto por litro de solucin)

Esta ecuacin no predice con exactitud las presiones osmticas de las

soluciones reales. De hecho, a las concentraciones que numerosas sustancias
presentan en el citoplasma y en el lquido extracelular, las desviaciones de las
condiciones ideales pueden ser considerables. Un modo de corregir las
discrepancias existentes entre las soluciones reales y las predicciones de la ley
de Van`t Of. Consiste en introducir un factor de correccin llamado coeficiente
osmtico. Con la inclusin del coeficiente osmtico la ecuacin de Van`t Hoff se
convierte en: P.O.= RTiM, donde el trmino ( iM puede considerarse como la
concentracin osmtica eficaz y, frecuentemente, se denomina concentracin
osmtica real, que se expresa en osmoles por litro.

CALCULO DE LA OSMOLARIDAD DEL PLASMA SANGUNEO

22
 La osmolaridad plasmtica se puede calcular mediante la siguiente frmula,
a partir de los solutos predominantes:

Osmolaridad = 2 Na+ + Glucosa /18 + BUN /2.8

(mosmoles/L) (meq/L) (mg/dl) (mg/dl)

Y a concentraciones normales tendremos:

Osmolaridad = 2 x 140 + 90/18 + 14/2.8 = 290 mosmoles/L, que es el valor de la

osmolaridad plasmtica total. Este valor puede corregido a una osmolaridad
efectiva de 285 mosmoles/L, debido a que los miliosmoles de urea son
osmticamente inefectivos.

Con este valor puede calcularse la presin osmtica del plasma mediante
la ecuacin de Van`t Hoff o utilizando el factor 19.334 que es la presin osmtica,
en mm de Hg, producida por 1 miliosmol a 37 oC.

TURGENCIA Y RETRACCIN OSMTICA DE LAS CLULAS

Las membranas plasmticas de la mayor parte de las clulas del organismo son
relativamente impermeables a muchos de los solutos del lquido intersticial, pero
muy permeables al agua. Por lo tanto, si la presin osmtica del lquido intersticial
aumenta (es decir, se vuelve hiperosmtico), el agua escapa de las clulas por
smosis, y la clula se encoge (se contrae). De este modo, los solutos
intracelulares se concentran progresivamente hasta que la presin osmtica
eficaz del citoplasma vuelve a igualar la del lquido intersticial (es decir, se
vuelven isosmticos). A la inversa, si la presin osmtica del lquido intersticial
disminuye (es decir, se vuelve hiposmtico), el agua pasa hacia el interior de la
clula, que sigue hinchndose hasta que las presiones intra y extracelular se
igualan.

Los eritrocitos se emplean frecuentemente para ilustrar las propiedades osmticas

de las clulas, porque son fciles de obtener y de estudiar. Dentro de un
determinado intervalo de concentraciones externas, los eritrocitos se comportan
como un osmmetro, puesto que su volumen se relaciona inversamente con la
concentracin de solutos en el espacio extracelular. A una concentracin de NaCl
0.154 M (0.308 Osmolar), el volumen de los eritrocitos es el mismo que en el
plasma, por lo que se dice que esta concentracin de NaCl es isotnica respecto
a estas clulas. Concentraciones superiores a 154 mM son hipertnicas (y hacen
que la clula se contraiga), mientras que las inferiores a 154 mM son hipotnicas
(y hacen que la clula se hinche). Cuando los eritrocitos se hinchan hasta 1.4
veces su tamao original, algunos de ellos lisan (estallan). A partir de este
volumen, las propiedades de la membrana celular se modifican abruptamente: la
hemoglobina escapa de la clula y la membrana se hace transitoriamente
permeable tambin a otras molculas de gran tamao.

Entre las sustancias intracelulares que originan en el interior del eritrocito una
presin osmtica que equilibra exactamente la presin osmtica del liquido
extracelular, se cuentan la hemoglobina, el K+, los fosfatos orgnicos (como el
ATP y el 2,3-difosfoglicerato), y los intermediarios glucolticos.
Independientemente de la naturaleza qumica de su contenido, el eritrocito se
comporta como si estuviera lleno de una solucin de molculas para las que la
23
membrana no es permeable con una concentracin osmtica eficaz de 286
miliosmolar (0.93 x 2 x 0.154 M = 0.286 M) y una presin osmtica de 7.2758 atm
o 5.530 mm de Hg.

MATERIAL.

Reactivos:

CLNa 0,17 M Sacarosa 0,3 M

Urea 0,3 M Glicerol 0,3 M
Cl Na 0.34 M
Cl Na 0.085 M
Urea 1.72 %
EQUIPO:

Centrfuga
Centrfuga de microhematocrito
Fotocolormetro
Bao Mara
Microscopio
MATERIAL BIOLGICO:

Sangre heparinizada

24
METODOLOGIA.

DETERMINACIN DE LA CURVA DE FRAGILIDAD EN ERITROCITOS:

T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11

ClNa 0.17 M 5.0 4.5 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 0.0

AGUA (ml) 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 4.5 5.0

SANGRE 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
(g)

- Centrifugar por 5 min. a 4,000 R.P.M.

- Medir la densidad ptica a 540 nm. (filtro verde).

RESULTADOS.

Construya en papel milimetrado la curva de fragilidad de los

eritrocitos, considerando los valores de densidad ptica (eje vertical) obtenidos
frente a la osmolaridad (eje horizontal). Pegar en la cuadricula.

25
 RESULTADOS

T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9 T10 T11

% HEMOLISIS

MMOLARIDAD (M)

OSMOLARIDAD (mOs/l)

PRESION OSMTICA (mm HG)

OBSERVACION

DIAGNOSTICO

26
 PRACTICA 4

HEMATOCRITO VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN

GLOBULAR
1.0 INTRODUCCIN.

ERITROPOYESIS NORMOBLASTICA

Pronormoblasto. Esta es la primera clula reconocible como perteneciente francamente

a la clula eritroide. Mide unos 12 a 20 m de dimetro y se distingue del mieloblasto
por su citoplasma muy azul, que suele ser solo una estrecha orilla en torno del ncleo
relativamente grande; muchas veces se tie en forma despareja y puede presentar un halo
perinuclear. El ncleo consiste en una red de riendas de cromatina distribuidas con
uniformidad, que le imparten un aspecto finamente reticular. Se tie de un color prpura
rojizo y contiene varios nuclolos ms oscuros.

Normoblasto inicial. Existe una gran semejanza entre esta clula, que mide 8 a 14 m de
dimetro, el citoplasma presenta una reaccin tintorial policromtica, es decir, tendencia
a tomar los colorantes bsicos y cidos, de modo que le imparte un tinte purpreo que se
torna ms acidfilo a medida que la clula madura porque empieza a aparecer
hemoglobina. El ncleo ocupa una parte relativamente ms pequea del total y
disminuye de tamao a medida que la clula envejece; ahora se tie intensamente y la
cromatina est dispuesta en grumos.

Normoblasto tardo. El citoplasma de esta clula, aunque es acidofilo, puede exhibir un

ligero tinte policromtico. El dimetro de esta clula vara entre 8 y 10 m. El ncleo es
pequeo y todava puede presentar una cromatina aglomerada muy gruesa que desaparece
a medida que el ncleo se achica, y eventualmente queda como una masa negra azulada
homognea sin estructura. Al madurar la clula el ncleo suele ser excntrico, en
ocasiones lobulillar y finalmente desaparece por extrusin, fragmentacin o disolucin.

Reticulocito. Este es un eritrocito joven que todava contiene un fino retculo basfilo que
se demuestra con tinciones supravitales como azul de cresilo brillante. Coloreadas con
cualquiera de los mtodos de Romanowsky, estas clulas exhiben una basofila plida
difusa. El contenido de reticulocitos de la sangre normal es 0.92 a 2%. Esta clula es
plana y disciforme y a medida que pierde su retculo basfilo se convierte en un glbulo
rojo maduro o eritrocito.

Eritrocito. Esta es una clula bicncava que exhibe una moderada variacin de tamao,
desde 6,7 hasta 7,7 m con un promedio de 7,2 m, y se deforma con facilidad por causa
de su flexibilidad; de ah las variaciones de forma que se observan en los frotas de sangre
coloreados. Despliega reaccin eosinfila al colorearlo con los mtodos de Romanowsky,
de modo que la tincin es ms intensa en la periferia y disminuye gradualmente hacia el
centro por causa de la biconcavidad de la clula. El rea central plida suele conocerse
 28

como rea de palidez central y ocupa menos de la tercera parte del dimetro del eritrocito
normal, pero esto puede variar de acuerdo con la tcnica tintorial. Se dice que las clulas
que tienen un contenido de hemoglobina normal son normocrmicas.

ERITROPOYESIS MEGALOBLSTICA

En la mdula sea normal no existen megaloblastos. Su ocurrencia se debe a una

perturbacin del crecimiento y maduracin celular causada por deficiencia de vitamina
B12 y/o cido flico. La maduracin de la serie megablstica es similar a la de la serie
normoblstica, pero existen diferencias morfolgicas en cada etapa. Gran cantidad de
veces la eritropoyesis mehaloblstica se acompaa de anormalidades en el desarrollo de
las series mieloide y megacarioctica. Tambin ocurre un moderado aumento en la
cantidad de hemohistioblastos y hemocitoblastos.

La clula inicial de esta serie, en transicin desde el hemocitoblasto es el

promegaloblasto, y la maduracin se cumple a travs del megaloblasto inicial,
intermedio y tardo hasta el macrocito. Las diferencias morfolgicas respecto de la serie
normoblstica afectan el tamao celular y el aspecto del ncleo.

El tamao de la clula es mayor y el citoplasma es ms abundante en comparacin

con los normoblastos en etapas de maduracin equivalentes:

1. Promegaloblastos 20 a 30 m

2. Megaloblasto inicial 18 a 25 m

28
 29

3. Megaloblasto intermedio 16 a 20 m

4. Megaloblasto tardo 12 a 15 m

5. Macrocito 9 a 12 m

El ncleo es ms grande en comparacin con el del normoblasto en todas las

etapas del desarrollo. La cromatina tiene una trama ms abierta, y est dispuesta en una
forma reticular fina, impartiendo al ncleo un aspecto punteado. Muchas veces esto es
muy bien pronunciado, en la etapa intermedia y todava puede observarse en el
megablasto. A medida que la clula madura, la aglomeracin de la cromatina es mucho
menos obvia que en los normoablastos de las etapas respectivas. La maduracin nuclear
se atrasa respecto de la hemoglobinizacin citoplasmtica, de modo que los
megaloblastos con citoplasma eosinfilo todava pueden contener ncleos con cromatina
finamente reticular. En las etapas tardas puede haber uno o ms cuerpos de Howell-Jolly.

Los promegaloblastos y los megaloblastos iniciales pueden representar el 50% de

la serie eritroide en la mdula sea de la anemia megaloblstica severa.

MATERIAL

Muestra de sangre: capilar o venosa.

Tubos capilares, los heparinizados para sangre capilar o sin anticoagulante, y los
no heparinizados para muestras con anticoagulante.

Plastilina.

Microcentrfuga.

Abaco de lectura.de microhematocrito

DETERMINACION DEL HEMATOCRITO.

El hematocrito (Hto) es la relacin existente entre el volumen de eritrocitos y el volumen
total de sangre, expresado como porcentaje. Est directamente relacionado con la
concentracin de hemoglobina, por lo que su determinacin constituye el procedimiento
ms simple para el diagnstico de anemia. As, un descenso del Hto es indicativo de
anemia, mientras que el aumento lo es de poliglobulia.

El mtodo de referencia para la determinacin del Hto es la centrifugacin de sangre total

en tubo capilar (micromtodo), es una tcnica sencilla, barata y accesible a laboratorios
de baja complejidad. Aunque tambin puede emplearse un tubo de Wintrobe
(macromtodo), este procedimiento no es tan recomendable debido a su mayor
inexactitud e imprecisin. Ambos mtodos se basan en medir el empaquetamiento de la
columna de eritrocitos cuando la sangre total con anticoagulante se somete a la accin de
una fuerza centrfuga. Por ello, entre sus factores de error est el plasma que queda

29
 30

atrapado entre los eritrocitos empaquetados y el posible efecto de leucocitos y plaquetas

en la lectura.

En la actualidad, todos los autoanalizadores hematolgicos suministran, dentro del

contexto del hemograma automatizado, un valor de Hto que resulta de un clculo
electrnico a partir del Volumen Corpuscular Medio (obtenido por conductividad o
campo oscuro) y la concentracin de eritrocitos. Obviamente este valor obtenido
electrnicamente difiere del obtenido por centrifugacin en que no considera el efecto del
plasma atrapado entre los eritrocitos ni el efecto de las restantes clulas sanguneas, por lo
que es siempre algo inferior (0,2-0,3 %).

Tanto el Hto. obtenido por microcentrifugacin o por mtodos automatizados, son un

buen parmetro del estado de la serie eritroide.
El Hto refleja la concentracin y no la masa total de glbulos rojos. Por ej., un paciente
en estado de shock acompaado de hemoconcentracin, el Hto. puede ser normal o alto,
an cuando la masa eritrocitaria total disminuye por la prdida de sangre. Por lo tanto no
es confiable como indicador de anemia poco despus de una hemorragia o una
transfusin.

TECNICA DEL MICROHEMATOCRITO.

FUNDAMENTO.- La determinacin del microhematocrito se fundamenta en el uso de

tubos capilares de 7 cm. de largo por 1 mm. de dimetro interior, los cuales pueden ser
heparinizados o no heparinizados, de acuerdo a la muestra que se vaya a utilizar. (sangre
con anticoagulante o sangre sin anticoagulante). Esta tcnica es rpida y consiste en
separar los eritrocitos del plasma por centrifugacin, obtenindose hemates
aglomerados, los cuales son medidos en micro escalas o con una regla milimetrada.(VER
ANEXO 1)

PROCEDIMIENTO:

30
 31

- Llenar el tubo capilar (heparinizada o no) con la muestra de sangre (capilar o

venosa) hasta las 3/4 partes de las extensin total del capilar, y el llenado se har
por capilaridad.

- Una vez lleno el capilar, sellar uno de los extremos del capilar con plastilina, esto
con la finalidad de que al momento de la centrifugacin no salga la sangre por
cualquiera de los extremos.

- Colocar el capilar en una microcentrfuga a una velocidad de 10,000 r.p.m. por 5

minutos, o a 5,000 r.p.m. por 10 minutos.

31
ABACO DE HEMATOCRITO
LECTURA

Se coloca el capilar centrifugado sobre la escala para microhematocrito que

acompaa a la microcentrfuga, haciendo que la base de la columna de eritrocitos (sobre
el lmite superior de la plastilina) coincida con la lnea inferior de la cartilla, y de manera
similar que el tope de la columna de plasma coincida con la lnea superior, es decir que el
fondo de la columna de eritrocitos y el tope superior de la columna de plasma coincida al
mismo tiempo con las lneas inferior y superior de la cartilla. La lectura entonces se
realiza tomando como valor de la lectura el tope superior de la columna de eritrocitos.

VALORES NORMALES:

Varones: 40 - 50 % ( en altura 45 - 53 % )

Mujeres: 38 - 45 % ( en altura 42 - 50 % )

INTERPRETACION

La prueba del Hematocrito constituye una prueba simple para el diagnstico de

anemia, es mucho ms til y de confianza que el recuento de eritrocitos.

En general el valor del Hematocrito baja en caso de hemodilucin (hidremia

fisiolgica del embarazo) En todos los casos o tipos de anemia y hemorragias, etc. y al
contrario la hemoconcentracin a consecuencia de shock da cifras normales o elevadas
aparentemente patolgicas.
CAUSAS DE ERROR

Las fugas de muestra al no quedar bien sellado los capilares producen una
disminucin en el valor, al perderse mayor proporcin de clulas que de plasma.
El uso de anticoagulantes lquidos provoca un error por dilucin de la muestra
En muestras capilares no descartar la primer gota, produce una mezcla con los
lquidos tisulares que provoca hemodilucin.
En muestras de sangre venosa, el lazo colocado durante un cierto tiempo produce
hemoconcentracin.
La lectura no inmediata de los capilares, provoca que el sedimento de hemates vaya
tomando forma de bisel si el capilar permanece en posicin horizontal.

VELOCIDAD DE SEDIMENTACION GLOBULAR.

El test de velocidad de sedimentacin globular (VSG) mide la sedimentacin de
eritrocitos en su plasma nativo.

VSG es un test no especfico que puede ser utilizado para detectar un amplio rango de
enfermedades y para monitorear el curso evolutivo de ciertas enfermedades crnicas
como los procesos inflamatorios crnicos (artritis reumatoidea, polimialgia reumtica y
tuberculosis) o la respuesta a la terapia, por ejemplo con citostticos (enfermedad de
Hodgkin, linfomas y mieloma mltiple). Sin embargo en ocasiones cuadros tan graves
 34

como neoplasias y la cirrosis pueden presentar una VSG normal. Constituye uno de los
tests ms utilizados como screening en el laboratorio clnico. Se trata de un mtodo
sencillo para realizar y que requiere equipamiento simple.

MECANISMO

El mecanismo por el cual se produce la eritrosedimentacin no est completamente

dilucidado, pero parece obedecer a interacciones electrostticas entre la superficie de los

GR y diversas protenas del plasma que favorecen (fibringeno y globulinas) o

disminuyen (albmina) la agregabilidad de estas clulas.

Desde el punto de vista fsico, este fenmeno depende de los siguientes factores:

a. Tamao de los G
b. Diferencia de densidad entre los eritrocitos y el plasma,
c. Viscosidad del plasma.
d. Temperatura.

Estos factores se hallan relacionados entre s a travs de la ley de Stokes si se considera al

GR como una esfera suspendida en un medio infinito (relacin entre la resistencia R que
encuentra una partcula esfrica de radio r al desplazarse en el seno de un fluido de
viscosidad a una velocidad v: R = 6vr

La sedimentacin ocurre en 3 etapas: 1) una etapa en que se produce la aglutinacin de

los GR con formacin de agregados en forma de "pilas de monedas", 2) un perodo
durante el cual los agregados de GR sedimentan a velocidad constante, y 3) una etapa
final donde la velocidad de sedimentacin se enlentece al mismo tiempo que los GR se
acumulan en el fondo del recipiente.

La etapa ms importante es la primera o de aglutinacin, ya que de ella depender la

velocidad de todo el proceso. As, cuanto ms pequeos sean los agregados, ms
lentamente se producir la sedimentacin y viceversa.

Dado que, como se mencion ms arriba, el test tambin est influenciado por la forma y
el tamao de los GR, ste resulta poco confiable como un ndice de enfermedad en la
anemia falciforme o cuando hay una marcada poiquilocitosis.

La velocidad de sedimentacin se incrementa por las altas concentraciones de fibringeno

y otras protenas de fase aguda e inmunoglobulinas. La albmina retarda la VSG. El
mecanismo por el cual el fibringeno y las globulinas facilitan la aglutinacin de GR no
se conoce fehacientemente aunque se cree que actan disminuyendo la fuerza de
repulsin que normalmente existe entre GR debido a su carga superficial o potencial zeta.
El potencial zeta es producido por una intensa carga negativa a nivel de la superficie de
los GR, lo que explica que estas clulas se mantengan separadas. La intensidad del
potencial zeta depende en gran medida de la composicin proteica del plasma y

34
 35

especialmente de la relacin entre las concentraciones de albmina, globulinas y

fibringeno. As, mientras la albmina tiende a aumentar el potencial zeta, las globulinas
y sobre todo el fibringeno tienden a disminuirlo. Ello obedece a que tanto el
fibringeno como las globulinas tienen un mayor peso molecular y una conformacin
menos esfrica que la albmina, lo que aumenta la constante dielctrica del plasma y
reduce el potencial zeta eritrocitario. La disminucin del potencial zeta de los GR tiene
como consecuencia una mayor tendencia de stos a agregarse y formar las llamadas
pilas de moneda. De acuerdo con este mecanismo, el valor normal de la VSG resulta
del equilibrio entre las principales protenas plasmticas.
METODO DE WESTERGREEN.

FUNDAMENTO.- Se basa en la utilizacin del tubo pipeta de Westergreen que es una

pipeta de vidrio de 2 mm. de dimetro interno, de 30 cm. de longitud que viene calibrada
de 0 a 200 mm., de arriba hacia abajo, para ello se utiliza sangre con anticoagulante.

MATERIALES:

- Pipeta de Westergreen.

- Gradilla para tubos de Westergreen.

- Plastilina.

- Sangre venosa con anticoagulante.

- Cronmetro.

- Sangre con citrato de sodio 3.8 % o EDTA.

PROCEDIMIENTO:

- Aspirar con la pipeta de Westergreen la muestra de sangre hasta la marca de cero.

(0).

- Cerrar el extremo inferior con plastilina y colocar en posicin vertical durante 1 y

2 horas respectivamente, tiempos en los que se realizarn las lecturas respectivas.

LECTURA

Pasada la primera hora, leer de inmediato la cantidad de mm.(mililitros) que a

descendido en el tubo de eritrocitos. Es decir medimos la columna de plasma por encima
del nivel de los eritrocitos sedimentados. Se realiza el mismo procedimiento a las dos
horas.

INTERPRETACION.

Las variaciones de los valores normales de velocidad de sedimentacin globular

indican mas que un trastorno funcional una lesin orgnica. La sedimentacin globular se
encuentra aumentada en el embarazo, menstruacin, reumatismo articular, neumona,
gripe, angina, infarto al miocardio, neoplasia y en la artritis reumatoide. En el periodo
agudo de la fiebre reumtica, en la tuberculosis pulmonar en donde adquiere valor

35
 36

pronstico, por estar relacionada con la velocidad de sedimentacin, que se frena o

acelera segn los periodos de actividad evolutiva.

La V.S.G. esta disminuida en la poliglobulia del recin nacido, en la poliglobulia

del adulto, en enfermedades del corazn con estasis circulatoria y en la tos ferina. En las
anemias aumenta la VSG debido a que un nmero pequeo de eritrocitos, englobado en
un gran volumen de plasma, sedimenta con mayor facilidad. Sin embargo en las
poliglobulias disminuye la VSG debido a que se incrementan las fuerzas de friccin
existentes entre los eritrocitos. En la macrocitosis asciende la VSG debido al mayor peso
y la menor rea superficial relativa de los eritrocitos. Por situaciones opuestas, en la
microcitosis desciende la VSG.

VALORES NORMALES:

Lmite superior
EDAD (aos) X + 2 DE
de la normalidad
Nios mayores y 0-15 5 + 10 15
jvenes
Hombres adultos 17-50 4+3 10
51-60 6+3 12
61-70 6+4 14
Mujeres adultas 17-50 6+3 12
51-60 9+5 19
61-70 10 + 5 20

FACTORES TCNICOS CAPACES DE MODIFICAR LA VSG

Causas de aumento

Desviacin de verticalidad de la pipeta

Incremento de la longitud y el dimetro de la pipeta
Elevacin de la temperatura ambiente
Dilucin de la sangre
Causas de disminucin:
Reduccin del dimetro de la pipeta
Utilizacin tarda de la sangre

36
 37

TABLA DE RESULTADOS

NOMBRE EDAD HT VSG DX

10

37
 38

CUESTIONARIO

1. A que denomina una poliglobulia relativa

2. Que un sndrome mieloproliferativo

3. Cuales son los criterios de diagnstico de policitemia vera

4. En que circunstancia desciende la velocidad de sedimento globular

5. En que circunstancia aumenta la velocidad de sedimento globular

38
 39

PRACTICA 5

RECUENTO DE ERITROCITOS Y RETICULOCITOS

RECUENTO DE ERITROCITOS

Viene a ser la determinacin del nmero de ERITROCITOS milmetro cbico o

por litro de sangre.

RECUENTO DE ERITROCITOS EN CAMARA DE NEUBAWER.

FUNDAMENTO.- Se fundamenta en el uso de la pipeta de Thoma para glbulos rojos, la

cual viene calibrada para diluir la muestra de sangre en dilucin de 1 en 200 o 1 en 20,
para ello se utiliza con mayor frecuencia como solucin diluyente la solucin Hayen que
tiene la propiedad de lisar a los leucocitos. Permitiendo una mayor visibilidad de los
eritrocitos.

39
 40

MATERIALES E INSTRUMENTOS.

- Solucin Hayen

- Pipetas de Thoma para glbulos rojos, con su respectiva sonda de absorcin.

- Cmara de Neubawer, con su respectivo cubre cmara.

- Microscopio.

- Rotor para pipetas.

- Contador manual.

PROCEDIMIENTO.

- Obtenga sangre por puncin digital hasta la marca de 0.5 en la pipeta para
dilucin de eritrocitos (cuenta roja, bulbo mayor, 101 en el extremo superior).

- Aspire el lquido para dilucin de eritrocitos (solucin Hayem) hasta la marca de

101. Se gira la punta sobre su eje longitudinal para asegurar una mezcla total entre
la sangre y el diluyente.

- Ahora descarte tres o cuatro primeras gotas de sangre diluida y con cuidado se
llena la cmara por capilaridad colocando la punta de la pipeta en uno de los
extremos del cubreobjetos.

- Cuente las clulas que se encuentren en los cuadrados marcados A, B, C, D, E

(vase diagrama - Anexo).

- Para calcular el nmero total de eritrocitos se aplica:

40
 41

-
ERITROCITOS (5)
R.E
DILUCION * ALTURA * AREA

ERITROCITOS (5)
R.E
1 / 200 *1 / 10 *1 / 5

ERITROCITOS (5)
R.E
1 / 10000

41
 42

VALORES NORMALES:

Neonatos de trmino, sangre del cordn 4,0-5,6 x 106/ul

Nios de 1 ao 4,5 x 106/ul

Nios de 10 aos 4,7 x 106/ul

Hombres 4,5-6,5 x 106/ul

Mujeres 4.0 -5,6 x 106/ul

INTERPRETACION:

El aumento del recuento eritrocitario se denomina policitemia. La policitemia puede ser

secundaria (eritrocitosis) o primaria (eritremia, policitemia vera). La policitemia
secundaria se debe a varios factores que no cambian la masa hemtica, por ejemplo
deshidratacin o anoxia. Una forma fisiolgica de eritrocitos se presenta en el recin
nacido. La policitemia vera es poco frecuente, la pancitosis idioptica da lugar a un
progresivo aumento de la masa de hemates.

La disminucin provoca anemia. La anemia tambin puede ser primaria o secundaria. La

secundaria se presenta despus de una dilucin de la sangre por un aumento del volumen
del plasma, como es el caso en las embarazadas, mientras que la anemia primaria se debe
a una disminucin de la masa de hemates.

RETICULOCITOS
Los reticulocitos, eritrocitos inmaduros, existen en la sangre en una proporcin de cinco a
diez por mil hemates. Su tamao es el de los dems hemates y se caracteriza por
contener una pequea cantidad de ARN (ribosomas) formando un retculo
granulofilamentoso observable al ser teido con colorantes llamados vitales como son el
azul brillante de cresilo o el azul de metileno nuevo. La cantidad de ARN es tanto menor
cuanto ms madura es la clula.

El recuento de reticulocitos es la tcnica ms simple actualmente disponible para valorar

la actividad eritropoytica de la mdula sea. Cuando una anemia se acompaa de un
elevado nmero de reticulocitos circulantes (reticulocitosis) se considera regenerativa,
mientras que cuando el nmero es normal o disminuido se denomina arregenerativa.

En condiciones normales, los reticulocitos permanecen en la mdula durante 2-3 das y

terminan su maduracin en 24 horas, aproximadamente, una vez ya en la sangre
perifrica.

El recuento de reticulocitos debe realizarse a partir de sangre total con anticoagulante

(EDTA)y a ser posible, dentro de las 24 primeras horas de la extraccin cuando la sangre
se conserva a temperatura ambiente. Si se mantiene a 4 C, el recuento puede realizarse
hasta 48 horas despus de la extraccin. El recuento puede efectuarse por dos
procedimientos:

1. Tincin vital y microscopio ptico.

42
 43

2. Citometra de flujo.

El mtodo manual adolece de muy escasa fiabilidad (coeficientes de variacin >20%), lo

que limita su empleo para valorar la capacidad de respuesta medular frente a teraputicas
agresivas, pero sobretodo a los errores de ndole subjetiva debidos al diferente criterio
que cada observador tiene de lo que es un reticulocito.

MTODO DE LA TINCIN VITAL (MTODO DE REFERENCIA)

Este mtodo usa como colorante el azul de metileno nuevo: 1 g cada 100 ml de solucin
citratada (1 vol de citrato de sodio 30 g/L y 4 vol de ClNa 9 g/L).

Mediante una pipeta Pasteur se aaden a un tubo de hemlisis tres gotas de solucin
colorante y tres gotas de sangre total bien homogeneizada. En caso de valores muy bajos
de hematocrito debe colocarse doble cantidad de sangre total que de solucin colorante.

La suspensin sangre/colorante se agita suavemente y se deja a temperatura ambiente

durante cinco minutos. Transcurrido este tiempo, se toma una pequea gota de la
suspensin y se extiende sobre un portaobjetos., una vez seca se puede observar al
microscopio con objetivo de inmersin (x1000).

Es necesario realizar el recuento sobre un mnimo de 1000 eritrocitos. El recuento se

efecta contando en donde los eritrocitos estn distribuidos homogneamente. Se cuentan
tantos campos como sean necesarios para alcanzar la cifra de eritrocitos requerida, siendo
100-125 el nmero ptimo de hemates por campo de los cuales distinguimos cuales son
reticulocitos para luego expresar el resultado como porcentaje, siendo el cien porciento el
nmero total de hemates contado. Este valor ser valido si se trata de una concentracin
normal de eritrocitos en sangre total. Por ello, cuando disminuye el nmero de eritrocitos
como suele suceder en la anemia, el valor porcentual debe corregirse segn el
hematocrito empleando la siguiente frmula:

Hto del
Reticulocitos corregidos (%) = reticulocitos observados
paciente
(%) x
Hto normal

(El hematocrito normal es el que le corresponde segn edad y sexo).

En caso de anemia intensa, el nmero de reticulocitos circulantes suele ser superior al que
corresponde al grado de regeneracin eritroblstica. Ello obedece a que la anemia se
acompaa siempre de un estmulo eritropoytico compensador, que facilita una salida
precoz de reticulocitos desde la mdula a la sangre perifrica, y un acortamiento de su
perodo de maduracin intramedular, lo que supone un aumento del perodo de
maduracin perifrica. Este fenmeno se caracteriza por la aparicin en el examen
morfolgico de la extensin de sangre de eritrocitos grandes (macrocitos) y tonalidad
azulada (policromasia)

Existe una relacin inversa, aproximadamente lineal, entre el hematocrito y el perodo de

maduracin perifrica de los reticulocitos. De esta forma puede calcularse otra magnitud

43
 44

de inters clnico denominada ndice de produccin reticulocitaria (IPR) aplicando la

frmula siguiente:

Reticulocitos del paciente x Hto del paciente

IPR =
Perodo de maduracin en das x Hto normal

Un IPR >3 indica aumento de actividad eritropoytica medular (anemia regenerativa),

mientras que un IPR <2 indica escasa actividad eritropoytica (anemia arregenerativa)

Relacin entre la respuesta reticulocitaria y el grado de anemia

Hematocrito 0,45 0,40 0,35 0,30 0,25 0,20 0,15

Niveles de Hemoglobina (g/L) 150 133 117 110 83 66 50
Recuento de reticulocitos (%) 1 2 5 10 15 20 30
Recuento de reticulocitos 1 1,8 4 7 8,3 9 10
corregido (%)
Tiempo de maduracin estimado 1 da 2 da 3
das
ndice de reticulocitos 1 2 5 5 7,5 10 10

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 45

EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNSTICO:.................................................................................................................

................................................................................................................................................

EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNOSTICO:.................................................................................................................

................................................................................................................................................

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 46

TABLA DE RESULTADOS

NOMBRE EDAD R.E. RETICULOCITOS DX

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CUESTIONARIO

1. A partir de que precursor comprometido se origina el proeritroblasto

2. Como es la cromatina del eritroblasto ortocromatico

3. Donde se destruyen los eritrocitos anmalos

4. Cuales son los factores que pueden disminuir el hematocrito

5. Cuales son los valores normales de reticulocitos en sangre perifrica

6. Cuando aumenta la concentracin del anticoagulante en una muestra de sangre

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 48

PRACTICA 6

HEMOGLOBINA SATURACIN DE OXIGENO

DETERMINACIN DE HEMOGLOBINA

FUNDAMENTO:

La hemoglobina presente en la muestra, en presencia de ferricianuro, se oxida a

Hemiglobina (Hi, llamada tambin metahemoglobina ) que a su vez, se combina con
iones cianuro a pH 7,2 convirtindose en Cianuro de Hemiglobina ( HiCN o
cianmetahemoglobina ).

Todos los hemocromgenos, a excepcin de la sulfohemoglobina, reaccionan

completamente en tres minutos y la lectura se efecta en un espectrofotmetro a 540 nm.
Posteriormente se calculan los resultados.

Hemoglobina + Ferricianuro potsico metahemoglobina

Metahemoglobina + Cianuro potsico cianmetahemoglobina

PROCEDIMIENTO

Homogenizar el reactivo antes de usarlo.

Llevar el espectrofotmetro a cero con el reactivo en blanco.

Marcar dos tubos S (estandard) y D (desconocido) y colocar 5 ml de reactivo

Hemoglowiener en cada tubo.

Con una micropipeta limpia agregar 20 ul del estandard Hemoglowiener al tubo S y luego
agregar 20 ul de la muestra al tubo D Mezclar y luego de tres minutos leer en el
espectrofotmetro a 540 nm, primero el tubo S y luego el tubo D.

Para calcular los, resultados se utiliza la siguiente frmula:

Hemoglobina ( g/l)= D x factor.

Factor = Standard (g/l)/ Absorbancia de estndar

Donde Standard ( g/l) es el contenido de hemoglobina correspondiente al lote de

Hemoglowiener estndar en uso ( 14,9 g/l )

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 49

VALORES NORMALES

Neonatos de trmino, sangre del cordn 13,6-19,6 g/dl

Nios de 1 ao 11,2 g/dl

Nios de 10 aos 12,9 g/dl

Hombres 13,5-18,0 g/dl

Mujeres 11,5-16,4 g/dl

INTERPRETACIN:

El cuadro ms comnmente relacionado con la disminucin de hemoglobina srica es la

anemia. Esta patologa por definicin, implica una reduccin por debajo de lo normal en
el nmero de glbulos rojos, en la cantidad de hemoglobina y en el volumen globular. La
prdida de hemoglobina y consecuente disminucin de la capacidad de transporte de
oxgeno en la sangre son los rasgos caractersticos del cuadro clnico y constituyen las
bases las patolgicas para la mayora de los sntomas y signos que se presentan (disnea,
taquicardia, debilidad)

En la mayora de los casos la anemia ocurre como signo o complicacin de otra

enfermedad a veces no relacionada directamente con trastornos en el sistema sanguneo
como alteraciones hepticas o renales, infecciones, etc. Por lo tanto el hallazgo de niveles
disminuidos de hemoglobina srica debe conducir a una cuidadosa bsqueda de la
patologa causal.

Existen situaciones en la que, por el contrario, la concentracin de hemoglobina se

encuentra anormalmente elevada debido a una superproduccin de glbulos rojos. Este
trastorno puede ser primario, como en el caso de la policitemia vera o secundario a
ciertos tumores renales u ovricos, heptomas, hidronefrosis.

La nica condicin natural y fisiolgica que afecta los niveles de hemoglobina es la

altitud, puesto que frente que a bajas presiones de oxgeno atmosfrico se produce una
compensacin mediante el incremento en el nmero de glbulos rojos, y por ende, en la
concentracin de hemoglobina circulante.
CAUSAS DE ERROR EN LA DETERMINACIN DE LA CONCENTRACIN

DE HEMOGLOBINA

La determinacin de hemoglobina est sometida a posibles errores que deben ser tenidos
en cuenta. Algunos de ellos obedecen a caractersticas peculiares del espcimen como la
presencia de hiperlipemia o leucocitosis intensa (50 x 109/l). No obstante, la mayora de
las veces los errores se deben a defectos tcnicos en la manipulacin y el anlisis del
espcimen.

Errores en la obtencin del espcimen de sangre:

1. Errores de extraccin
2. Empleo de anticoagulantes no recomendados

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 50

3. Coagulacin parcial de la sangre

Errores de la dilucin:

1. Empleo de pipetas automticas descalibradas u otras pipetas sucias o

hmedas
2. No eliminacin del exceso de sangre adherida a las paredes externas del capilar antes
de introducirlo en el reactivo
3. Dilucin incompleta de la sangre en el reactivo

Errores de la transformacin de la hemoglobina en HiCN:

1. Empleo de reactivo de Drabkin mal preparado o vencido

2. Lectura antes del tiempo necesario para la completa transformacin de la Hb en HiCN

Errores de la determinacin:

1. Empleo de instrumentos no calibrados

2. Cubetas sucias o deterioradas
3. Soluciones turbias de HiCN

Errores en la conservacin del reactivo:

1. Congelacin del reactivo, lo que produce transformacin de K3 Fe(CN) 6 en K4

Fe(CN) 6 y una oxidacin parcial de la Hb.
2. Conservacin del reactivo en botellas de polietileno: se pierden grupos CN con
formacin exclusiva de metahemoglobina, en vez de HiCN, con lo que los valores de
concentracin de Hb obtenidos son inferiores a los reales.

OXIMETRIA

La oximetra de pulso o pulsioximetra es la medicin, no invasiva, del oxgeno

transportado por la hemoglobina en el interior de los vasos sanguneos.
El color de la sangre vara dependiendo de lo saturada de oxgeno que se encuentre,
debido a las propiedades pticas del grupo hemo de la molcula de hemoglobina. Cuando
la molcula de hemoglobina libera oxgeno pierde su color rosado, adquiriendo un tono
ms azulado y deja pasar menos la luz roja.
As pues el pulsioxmetro determina la saturacin de oxgeno midiendo
espectrofotomtricamente el "grado" de azules de la sangre arterial y expresa esta
"azuls" en trminos de saturacin. Dado que la absorcin de luz de los tejidos y de la
sangre venosa son constantes, cualquier cambio en la absorcin de la luz entre un tiempo
dado y uno posterior se deben exclusivamente a la sangre arterial. Los pulsioxmetros
miden pues la relacin, en un intervalo de tiempo, entre las diferencias de absorcin de
las luces rojas e infrarroja. Esta relacin se vincula directamente con la saturacin de
oxihemoglobina.

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 51

TCNICA DE REALIZACIN
Se precisa de un aparato de pulsioximetra, con un sensor en forma de pinza. En la pinza
tiene un productor de luz que se refleja en la piel del pulpejo del dedo, este sensor mide la
cantidad de luz absorbida por la oxihemoglobina circulante en el paciente.
Se debe masajear el pulpejo del dedo del paciente, luego se coloca la pinza con el sensor
y se espera a recibir la informacin en una pantalla del aparato en la que aparecer la
siguiente informacin:
ndice de saturacin de oxgeno
Frecuencia cardiaca
Curva del pulso
LIMITACIONES DE LA PULSIOXIMETRA
Alteraciones de la hemoglobina (MetHb o COHb).
Colorantes y pigmentos en la zona de lectura (uas pintadas).
Fuentes de luz externa.
Hipoperfusin perifrica.
Anemia.
Aumento del pulso venoso.
No detecta hiperxia.
No detecta hipoventilacin.
INDICACIONES
En general son tiles en los cuidados de pacientes en los que se prevea una alteracin en
la oxigenacin o para valorar determinadas teraputicas:
Distress respiratorio en el asma.
Cianosis.
Valoracin de tolerancia al ejercicio.
Evaluacin o control de oxigenoterapia.
UTILIZACIN
En primer lugar deber obtenerse informacin sobre la utilizacin correcta de cada
modelo, y si es preciso saber adecuar las necesidades que tengamos al modelo correcto,
ya que en el mercado hay muchos modelos distintos con un amplio abanico de
posibilidades de trabajo a travs de diferentes programas.
Eliminar pinturas de uas en el caso de utilizar sensores de dedal.
Se explicar al paciente en que consiste la medicin, insistiendo en la necesidad de mover
el mnimo el dedo y no desplazar el sensor.
Realizar la medicin lejos de una fuente de luz importante, focos, etc.
En caso de realiza mediciones continuas durante mucho tiempo cambiar, al menos cada 8
horas, de localizacin, para evitar lesiones de la piel.
Los sensores de clip no deben comprimir en exceso, ya que podra alterar la medicin.

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 52

VALORES NORMALES
La saturacin de Oxgeno debe de ser mayor del 95%.
Valores aumentados de la saturacin de oxgeno:
Hiperventilacin
Ansiedad
Valores disminuidos de la saturacin de oxgeno:
Enfermedades pulmonares crnicas.
Descompensacin o crisis de asma.
Enfermedades cardiacas.

CONTENIDO DE OXIGENO (Q02)

QO2= 1.34(Sa02 x Hb) + (PaO2 x 0.0031)

NORMAL: 18 A 21 ml/100 ml de sangre

RESULTADOS

COEFICIENTE DE UTILIZACIN (CU)

Contenido Arterial O2 Contenido venoso O2

CU = x 100

Contenido Arterial O2

NORMAL: 25 % en reposo

75 a 85 % en ejercicio

RESULTADOS

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HOJA DE RESULTADOS

NOMBRE HB SAT % CONTENIDO CU DX

10

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CUESTIONARIO

1. De cuantos aminocidos constan, las cadenas de globina de la hemoglobina

2. En que cromosoma se codifica la sntesis de las cadenas globnicas alfa

3. Como se llama la hemoglobina que esta cargada de CO2

4. Cual es la accin del 2-3 DPG en la molcula de hemoglobina

5. Esquematice la sntesis de la hemoglobina

6. Esquematice el catabolismo de la hemoglobina

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 56

PRACTICA 7

INDICES ERITROCITARIOS
INTRODUCCION

Los ndices eritrocitarios tambin se denominan como ndices hematimtricos o ndices

corpusculares

Son una serie de parmetros que expresan diferentes caractersticas de los hemates.

Los tradicionales se calculan a partir de los valores obtenidos, previamente, del nuecero
de hemates (en millones por mm3 ), del hematocrito (en %) y de la concentracin de
hemoglobina en la sangre (en g/dl).

Los autoanalizadotes hematolgicos son capaces de proporcionar los ndices tradicionales

y adems suministran otros nuevos.

INDICES CORPUSCULARES

-VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO(VCM)

Permite calcular el volumen promedio de los hemates. Se aplica la siguiente frmula:

HEMATOCRITO
VCM ( fl) = X 10
RBC (en millones por ul)
Es el ms utilizado, es el criterio sobre el que se basa la moderna clasificacin
morfolgica de las anemias. As, de acuerdo con el valor del VCM una anemia puede
clasificarse en tres grandes grupos: Normoctica (VCM:82 -98 fl )Macroctica (VCM
mayor que 98 fl ) y microctica (VCM menor que 82 fl).

Valores normales : entre 85 - 95 fl

.- HEMOGLOBINA CORPUSCULAR MEDIA (HCM)

Permite determinar la cantidad de hemoglobina contenida en cada hemate. Se calcula

mediante la siguiente frmula:
HEMOGLOBINA EN G%
`` HCM (pg) = X 10
RBC.(en millones por ul)

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 57

Guarda estrecha relacin con el volumen corpuscular medio. En consecuencia, las

anemias microcticas se acompaan siempre de una disminucin de la HCM, lo que
corresponde al criterio morfolgico de hipocroma, y las anemias macrocticas de un
aumento de la HCM.

VALORES NORMALES: entre : 30 -34 pg

.- CONCENTRACION CORPUSCULAR MEDIA DE HEMOGLOBINA (CCMH)

Expresa la concentracin porcentual de hemoglobina en cada hemate.

HEMOGLOBINA EN G %
CCMH (G/L) = X 100
HEMATOCRITO EN %.

Es siempre el resultado de un clculo matemtico realizado a partir del VCM y de la

HCM, por lo que sus variaciones suelen ser muy pequeas, incluso en presencia de una
acusada hipocroma. Por ello a excepcin de ciertas enfermedades que presentan
aumentos caractersticos de la CCHM (esferocitosis hereditaria y xerocitosis congnita),
la utilidad prctica de este parmetro resulta muy escasa.

VALORES NORMALES: entre 32 - 34 %.

INDICE DE DISTRIBUCION DE LOS HEMATIES (IDH)

Tambin se denomina anchura de la distribucin eritrocitaria o ADE . Es el coeficiente de

variacin de los glbulos rojos. El CV es un parmetro estadstico que expresa el grado
de dispersin existente entre los valores obtenidos, entre los volmenes de los hemates
evaluados.

Se calcula a partir de la desviacin estandar (DS) y del promedio (X) de los valores
obtenidos.

Para su clculo en porcentaje, se emplea la siguiente formula:

DS- GR
IDH= X 100
VCM

Valor normal debe ser igual o inferior al 15%

Indica la variacin existente entre los tamaos de los hemates. Cuando sta es muy
grande, el IDH es superior al 15 % y se dice que hay una anisocitosis.

Hay anisocitosis en los periodos iniciales del tratamiento de las ferropenias y tambin
puede haberla en las fases inmediatas a la administracin de transfusiones.

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 58

ANCHURA DE LA DISTRIBUCION DE LA HEMOGLOBINA (ADH)

Es la desviacin estndar de las concentraciones de hemoglobina de los hemates.

La desviacin estndar es otro parmetro estadstico que tambin estima el grado de

dispersin de los valores obtenidos (en este caso, las concentraciones de Hb de los
hemates evaluados).

Para su clculo se emplea la siguiente frmula:

(X-X)2
SD=
n-1

X= cada uno de los valores obtenidos

X`= media de los valores obtenidos (HCM)

N= numero de valores obtenidos

Su valor normal esta comprendido entre 2.2 y 3.2 g/DL

La disminucin del ADH indica la presencia de hemates hipocrmicos; el aumento del

ADH expresa la existencia de hemates hipercrmicos

La separacin del ADH de sus valores normales es, por tanto, un signo de anisocromia.

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RESULTADOS

NOMBRE VCM HCM CHCM IDH ADH DX

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CUESTIONARIO

1. Con los siguientes datos, calcule VCM, HCM, CHCM.

2. Con los datos de volumen corpuscular de tres hemates, calcule su IDH. X1= 93
Fl, X2= 92 fL, X3= 90fL

3. Que indica un valor menor de 80 fL de VCM

4. Que se necesita para calcular la CHCM

5. Que ndice eritrocitario detecta la existencia de anisocitosis.

6. Con los siguientes datos de HCM de 8 hemates, calcule su ADH. 20 g/dl, 21 g/dl,
21 g/dl, 20 g/dl, 12 g/dl, 12 g/dl, 11 g/dl, 13 g/dl.

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 61

CASO CLNICO
Mujer de 71 aos de edad que se presenta en el servicio de urgencias a causa de
hematuria iniciada recientemente. La paciente aparece aptica e indiferente. Es
transportada en silla de ruedas a causa de una debilidad progresiva que comenz seis
meses atrs, y hace tres que es incapaz de caminar. En el examen fsico se aprecia:
Presin arterial 100/70 mm Hg, pulso 86 ppm. Lengua carnosa y no se aprecian papilas.
El examen neurolgico revel paraplejia en miembros inferiores y abolicin de los
reflejos rotuliano y aquleo, estando conservada la sensibilidad. Analtica (entre
parntesis los valores normales para mujeres):

Hb:10.9 g/dL (12-16)

Hematocrito: 32% (37-48)
VCM: 86.5 (80-100) HCM: 31.6 pg (27-32)
CHCM: 36.6g/dl (32-37)
Plaquetas: 50.000/mm3 (130.000-400.000)
Leucocitos: 11600/mm3 (4300-10.800)
Neutrfilos segmentados 90%Neutrfilos cayados 2%En el frotis de sangre perifrica no
se aprecian esquistocitos.
Tiempo de protrombina y tiempo parcial de tromboplastina normales. LDH: 246 U/mL
Bilirrubina total: 0.7 mg/dl (0.3-1.0) Creatinina: 0.4 mg/dL (inferior a 1.5)
Basndose en los datos anteriores:

Cual de estos diagnsticos es el ms probable?

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 62

PRACTICA 8

RECUENTO DE LEUCOCITOS HEMOGRAMA DE

SCHILLING
INTRODUCCION
Los leucocitos pueden clasificarse atendiendo a distintas caractersticas:
Segn su origen, los leucocitos se clasifican en:
- Leucocitos mieloides.
- Linfocitos.
Segn la presencia o la ausencia en su citoplasma de granulaciones visibles con el
microscopio ptico, se clasifican en:
- Granulocitos.
- Agranuloctos.
Segn la forma de su ncleo, se clasifican en:
- Polimorfonucleares.
- Mononucleares.
Segn su funcin, se clasifican en:
- Fagocitos.
- Inmunocitos.
LEUCOPOYESIS

SERIE MIELOIDE (GRANULOCITICA)

Los leucocitos granulares maduras son clulas cuyos grnulos citoplsmaticos les
confieren reaccin neutrofila, eosinfila o basfila con los colorantes de Romanowsky.
Por sus ncleos (polimrficos). Cuando se utiliza sin calificaciones, el trmino
polimorfo significa leucocito neutrfilo maduro.

El mieloblasto es la primera clula reconocible de la serie granuloctica y a partir

de l se desarrollan el promielocito y, mediante progresin, el mielocito, el
metamielocito, las formas no segmentadas (en cayado) y, por ltimo, los leucocitos
granulares, maduros (segmentados). Los grnulos especficos que determinan la ndole de
la clula madura (neutrfilo, eosinfilo o basfilo) empiezan a aparecer en la etapa de
promielocito y estn diferenciados por completo en el mielocito. Las divisiones mitticas
ocurren hasta la etapa de mielocito, de modo que el metamielocito es incapaz de entrar en
mitosis.

Serie neutrofila (polimorfonuclear)

La maduracin de este tipo celular se caracteriza por el desarrollo de unos

grnulos citoplasmticos especficos y por un cambio de la reaccin de color del
citoplasma de basfila a eosinfila en cuya etapa los grnulos adoptan una mezcla de
ambos elementos tintoriales. A medida que el ncleo madura, se torna lobulado. Adems
se desarrollan la motilidad y la fagocitosis.

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 63

Mieloblasto. El tamao de esta clula varia entre 15 y 20 m. El citoplasma puede

ser agranular o exhibir unos pocos grnulos azurfilos segn la etapa del desarrollo. Es
moderadamente azul intenso en una reaccin de color que puede ser despareja, que a
menudo es ms clara en la regin total de la clula. La cromatina nuclear esta dispuesta
en finas riendas que se colorean de intenso rojo prpura y tiene un aspecto reticular
uniforme. Puede haber hasta seis, nuclolos, peor lo usual son dos a cinco; estos
nuclolos son de tamao mediano y suelen estar muy bien definidos, con un borde de
cromatina bien marcado.

Promielocito. Esta clula, que tiene 22 a 25 m de dimetro, semeja el mieloblasto, salvo

que el citoplasma contiene grnulos (azurfilos) que se tien de azul a prpura rojizo. La
cromatina nuclear es un tanto ms gruesa que en el mieloblasto y, si bien todava hay
nuclolos, no estn tan bien definidos.

Mielocito. Las diferencias entre esta clula y el promielocito radican en que los grnulos
citoplasmticos han adoptado ahora su carcter neutrfilo y no se disciernen nuclolos.
La clula mide 18 a 20 m de dimetro aunque en una etapa muy inicial puede medir
hasta 25 m. En esta etapa ms inicial el citoplasma es celeste y la relacin
nucleocitoplasmtica es mayor. El citoplasma adquiere poco a poco un tinte rosado y en
la forma madura es predominantemente rosa o rosa por completo. El ncleo es redondo u
oval y la cromatina nuclear consiste en unas gruesas riendas ms tangibles que en el
promielocito.

Metamielocito. En esta etapa del desarrollo el citoplasma es rosado y contiene unos finos
grnulos neutrfilos que semejan los del mielocito. El ncleo es ms pequeo y un tanto
indentado (reniforme), puede haber considerable variacin en el tamao de esta clula,
desde 14 hasta 20 m.

Leucocito neutrfilo juvenil (no segmentado). Por lo general, ms pequea que el

metamielocito, esta clula posee un ncleo en U intensamente tingible cuya cromatina es
gruesa y aglomerada. Muchas veces se la describe como formas en cayado

Leucocito neutrfilo maduro (segmentado). El dimetro de esta clula es 12 a 14 m y

su citoplasma rosa contiene numerosos grnulos neutrfilos finos distribuidos con
uniformidad. Su ncleo es lobulada y la cantidad de lbulos, que pueden superponerse,
vara entre dos y cinco, tambin exhiben variaciones de tamao y forma y estn
conectados entre si por unas finas riendas de cromatina, pero la cromatina nuclear est
dispuesta en aglomeraciones ms grandes. Algunos neutrofilos de las mujeres tienen un
apndice nuclear con una cabeza bien definida que tiene la forma de un palillo de tambor
unido a un lbulo nuclear por una fina rienda de cromatina. Estos apndices no ocurren
en los neutrfilos de los varones.

Serie eosinfila (polimorfonuclear)

Esta serie celular pasa por las mismas etapas que la serie neutrfila polimorfonuclear.
Aparte de los grnulos citoplasmticos eosinfilos grandes, que suelen tener un color
anaranjado rojizo y que se evidencian en la etapa mieloctica, estas clulas presentan las
mismas caractersticas estructurales que sus equivalentes neutrfilos.

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 64

El leucocito eosinfilo maduro promedia unos 16 m de dimetro. Su ncleo suele ser

bilobulado y los grandes grnulos citoplasmticos no suelen superponerse. Estas clulas
son muy frgiles y a menudo se daan al preparar los frotis de sangre, dejando el ncleo
rodeado por grnulos libres.

Serie basfila (polimorfonuclear)

En esta serie las clulas se caracterizan por la presencia de unos grandes grnulos
redondos e intensamente basfilos. Aparte de esto, este tipo celular pasa por las mismas
etapas que las series neutrfila y eosinfila.

El dimetro del leucocito basfilo maduro es 14 a 16 m; su citoplasma se tie de rosa y

contienen numerosos grnulos grandes que cubren el ncleo y oscurecen los detalles,
pero no rellenan el citoplasma como los grnulos del leucocito eosinfilo. El ncleo de la
clula madura suele ser bilobulado.

Mastocito (clula cebada, basfilo textural).

Estas clulas, que se desarrollan a partir del histioblasto, no ocurren en la sangre

perifrica humana, pero si en la mdula sea, donde pueden ser numerosas en los casos
de anemia aplsica, prdida crnica de sangre, anafilaxia y tumores del tejido linfoide que
toman la mdula sea. Este tipo de clula libre difiere del basfilo se disuelven en gran
medida en alcohol metlico. Los grnulos son mucho ms numerosos, ms gruesos y
tienen una intensa basofilia, despliegan una reaccin tintorial metacromtica con el azul
de toluidina. El ncleo de esta clula suele ser redondo y no bilobulado como el del
Leucocito basfilo. Es una clula grande que suele medir 20 a 25 m de dimetro y
puede ser elongada.

SERIE LINFOCTICA

Los linfocitos se desarrollan principalmente en los tejidos linfoides del cuerpo, como
ganglios linfticos, folculos linfoides del bazo y tracto gastrointestinal, amigdalas y otros
sitios. En toda la mdula sea existe una cantidad de pequeos folculos linfoides
primarios.

Linfoblasto: la clula primitiva de esta serie es el linfoblasto y a partir del cual se

desarrollan los linfocitos grandes y pequeos. Esta clula, que semeja un mieloblasto en
cuanto a su estructura general, mide unos 15 a 20 m de dimetro. Posee un citoplasma
no granular que se tie de azul oscuro en la periferia y ms claro en el centro. El ncleo
es grande, pues suele ocupar las cuatro quintas partes del rea celular y la cromatina est
dispuesta en forma reticular y tiende a ser punteada. Por lo general slo contiene uno o
dos nuclolos.

Prolinfocito:; esta clula es ms pequea que su precursora y por lo general presenta una
ancha banda de citoplasma azul, la cromatina nuclear tiende a aglomerarse y no se detecta
un nuclolo definido. Como la transicin de linfoblasto a linfocito es breve, el trmino
prolinfocito no reviste mucha significacin.

Linfocito grande. La variacin del tamao de esta clula suele estar entre 12 y 16 m de
dimetro. Su citoplasma es bastante abundante y adquiere un color celeste; adems

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 65

pueden existir unos opacos grnulos citoplasmaticos azurfilos pequeos y muy bien
definidos. El ncleo densamente es redondo o puede estar un poco indentado y la
cromatina tiende a estar aglomerada.

Linfocito pequeo: Esta clula mide 9 a 12 m de dimetro y, salvo por la

diferencia de tamao y el citoplasma escaso, que suele ser poco ms que una estrecha
orilla en torno del ncleo grande, es idntica al linfocito grande.

SERIE MONOCITICA

Este tipo celular se forma principalmente en el bazo y los tejidos y en una medida mucho
menor en la mdula sea.

Monoblasto. Esta clula es variable, por lo general de unos 20 m de dimetro. Su

citoplasma, que se colorea de azul grisceo, puede contener unos finos grnulos
azurofilos. EL ncleo es grande y por lo general contorneado, de modo que tienen un
aspecto plegado; la cromatina suele ser laxa, semejando una red y no se ven nuclolos
definidos.

Monocito. El dimetro de esta clula grande suele ser de 15 a 18 m con un citoplasma

que se colorea de azul grisceo y al que muchas veces se la atribuye un aspecto en vidrio
esmerilado. En el citoplasma pueden reconocerse unos finos grnulos azurfilos y
vacuolas. El ncleo suele ser redondo o reniforme y puede ser lobulado, con dos o ms
lbulos; la cromatina est dispuesta en riendas a modo de madejas.

SERIE PLASMOCTICA

Se presume que la clula plasmtica es un derivado de la stem cell (hemohistoblasto) aun

que tambin se mencionaron como precursores otros tipos celulares.

Plasmoblasto: la clula primitiva de esta serie muy semejante al linfoblasto en cuanto a

tamao, forma y reaccin tintorial, mide como trmino medio 18 m. No se observan
granulaciones citoplasmticas y es difcil resolver los nuclolos aunque pueden existir
hasta seis.

Proplasmocito. Exhibe una gran variacin de tamao, de 15 a 25 m, y su citoplasma

tiene un intenso color azul, es agranular y suele presentar un halo perinuclear plido. El
ncleo por lo general es excntrico pero puede estar en el centro del citoplasma. La
cromatina nuclear consistir en una malla, laxa, pueden discernirse varios nuclolos, que
por lo comn son ms obvios que en el plasmoblasto.

Plasmocito. El tamao de esta clula madura suele variar entre 14 y 20 m y posee un

citoplasma no granular que se tie de azul intenso y puede contener una o mas vacuolas
incluso en el estado normal. El ncleo es excntrico y pequeo en relacin con el tamao
del citoplasma y generalmente se discierne un halo perinuclear claro. En los cortes
incluidos en parafina de un material bien preservado, la cromatina suele estar congregada
hacia el margen del ncleo en la llamada distribucin en rueda de carro. Esta imagen no
se observa en los frotis de mdula o sangre. Las clulas plasmticas con dos o ms
ncleos son comunes en la mdula, en los estados inflamatorios crnicos y en el mieloma
plasmocitico. Es probable que esto se deba a la divisin mittica del ncleo sin la

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 66

respectiva divisin del citoplasma la estructura cromatnica suele ser ms densa en estos
ncleos mltiples.

RECUENTO DE LEUCOCITOS.

Viene a ser la determinacin del nmero de leucocitos por milmetro cbico o por
litro de sangre.

RECUENTO DE LEUCOCITOS EN CAMARA DE NEUBAWER.

FUNDAMENTO.- Se fundamenta en el uso de la pipeta de Thoma para glbulos blancos,

la cual viene calibrada para diluir la muestra de sangre en dilucin de 1 en 20 o 1 en 10,
para ello se utiliza con mayor frecuencia como solucin diluyente la solucin Turk que
tiene la propiedad de lisar a los eritrocitos. Permitiendo una mayor visibilidad de los
leucocitos (Tiendo sus ncleos).

MATERIALES E INSTRUMENTOS.

- Solucin Turk (cido actico al 3%, luego m s de 3 gotas de azul de metileno o

violeta de genciana)

- Pipetas de toma para glbulos blancos, con su respectiva sonda de absorcin.

- Cmara de Neubawer, con su respectivo cubre cmara.

- Microscopio.

- Rotor para pipetas.

- Contador manual.

PROCEDIMIENTO.

- Aspiramos la sangre hasta la marca de 0.5 o 1 segn la dilucin (1:20 o 1:10).

Limpiamos la punta de la pipeta y las paredes externas de la misma para eliminar
el exceso de sangre.

- Completar con el diluyente (solucin Turk) hasta la marca de 11.

- Colocar la pipeta en posicin horizontal en el rotor por 2 o 3 minutos (hasta que el

contenido este homogeneizado y se hayan lisado los eritrocitos).

- Cargar la cmara de Neubawer previamente preparada, desechando antes 3 o 4

gotas del tallo de la pipeta.

- Dejar en reposo de 3 a 5 minutos, para que los leucocitos se depositen en el

retculo de la cmara.

- Efectuar el recuento de leucocitos con objetivo de 10X.

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 67

RESULTADOS

. Los resultados se dan contando el nmero de leucocitos en las 4 cuadrculas

grandes y extremas de la cmara y multiplicando la suma total por 50 (dilucin 1:20).

NOTA: Si el recuento est bien hecho, las variaciones entre el nmero de leucocitos en
dos cuadrados no son mayores de 8.

La multiplicacin del nmero de leucocitos contados por 50 se explica con el

clculo siguiente:

G.B contados en los 4 cuadrados grandes.

N G.B/mm =

Area contada x h x dilucin de sangre.

G.B contados

N G.B/mm = = G.B contados x 50.

4 x 1/10 x 1/20

Donde: h = altura de la cmara.

VALORES NORMALES:

Adultos: 5,000 - 10,000 / ul

Nios : 6,000 - 15,000 / ul

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 68

Recin nacidos: 10,000 - 20,000 /ul

INTERPRETACION:

La disminucin de las cifras normales de leucocitos se denomina LEUCOPENIA,

y se presenta en algunas enfermedades infecciosas, como ocurre en la angina
granulocitopenia idioptica, tambin algunos casos de anemia perniciosa, clorosis, fiebres
tifoideas y en la brucelosis, mala nutricin, etc.

El aumento se denomina LEUCOCITOSIS, que se debe a la quimiotaxis y al

estmulo de los rganos hematopoyticos, generalmente se da el aumento en procesos
infecciosos agudos.

Tambin se sabe que la vaso dilatacin provoca leucocitocis y la vasoconstriccin

leucopenia.

FORMULA DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS:

El recuento o frmula de leucocitos consiste en diferenciar y valorar las

proporciones relativas (por 100) de los diferentes tipos de leucocitos que se observan en
un frotis de sangre perifrica coloreada.

Esta diferenciacin se da en base a:

A).- POLIMORFONUCLEARES:- Abastonados.

- Segmentados.

- Eosinfilos.

- Basfilos.

B).- MONONUCLEARES: - Monocitos.

- Linfocitos.

FORMULA DIFERENCIAL EN LAMINA (Frots sanguneo).

FUNDAMENTO.- Se fundamenta en la coloracin de un frots sanguneo con colorante

de Wright, en el cual, se realizar la diferenciacin o recuento microscpico de los
diferentes tipos de leucocitos, expresando los valores obtenidos en porcentajes.

MATERIAL EQUIPO E INSTRUMENTOS.

- Frotis sanguneo coloreado.
- Aceite de inmersin.
- Microscopio.
- Contador de clulas.
PROCEDIMIENTO.

- Para el recuento diferencial utilizamos el objetivo de inmersin (100X).

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 69

- Colocamos 1 gota de aceite de inmersin en el lmite de las 2/3 partes del frotis de
la lmina (cercana a la cola del frotis).

- Enfocar la imagen al microscopio y buscar una zona en la que los elementos

formes de la sangre se puedan diferenciar, es decir, en donde no estn
aglomerados o unos sobre otros.

- Ya ubicada la zona llevar el extremo de la lmina al objetivo del microscopio y

hacer un recorrido vertical de este extremo de la lmina al otro, contando los
diferentes tipos de leucocitos que se observan, hasta llegar a contar los 100
elementos.

- Luego procedemos a informar el nmero de estos en porcentajes.

RESULTADOS.- Contados los 100 elementos procedemos a expresar el nmero de

elementos contados en porcentajes.

VALORES NORMALES:

Relativo Absoluto por

7000 leucocitos

Adultos: Neutrfilos 40-75% 2800-5250

Linfocitos 20-45% 1400-3150

Monocitos 2-10% 140-700

Eosinfilos 1-6% 70-420

Basfilos < 1% 0-70

INTERPRETACION.

- NEUTROFILIA: El aumento de neutrfilos indica proceso infeccioso con leucocitosis.

La cual puede ser provocada por cocos, o en todo caso infecciones provocadas por
estafilococos, etc. O diversos bacilos (tales como bacilo Diphteriae, etc.) Se encuentra en
apendicitis, endocarditis, reumatismo poliarticular agudo, etc. y en general en las
infecciones agudas.

- EOSINOFILIA: El aumento de eosinfilos es causa de su intervencin en procesos

alrgicos experimentales y clnicos, tales como asma bronquial, rinitis, etc. Tambin se
producen por alergias en la piel como urticaria, eczemas, dermatitis, coreasis, dermatitis
exfoliativa, herpes zoster. En enfermedades producidas por parsitos como taenias,
cisticercosis, ascaris, ancilostoma, oxiuros, etc. Puede tambin presentarse eosinofilia
fisiolgica en la menstruacin, en el embarazo, o despus de los ejercicios musculares
violentos.

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 70

- BASOFILIA: El aumento de clulas basfilas es moderado y relativo en la cirrosis

heptica. En las anemias hemolticas, en la clorosis, en la enfermedad de Hodgkin y es
importante en las leucemias mieloides y en la policitemia.

- NEUTROPENIA: Se presenta Neutropenia (disminucin de neutrfilos), la que a veces

es acompaada de leucopenia (disminucin de leucocitos) en fiebre ondulante,
sarampin, anemia aplsica, anemia hemoltica congnita, hemoglobinuria paroxstica
nocturna, trastornos esplnicos, paludismo, septicemias muy txicas, leucemias,
agranulocitosis, etc.

- MONOCITOSIS: Se presenta en la tuberculosis crnica, la brucelosis, endocarditis

bacteriana sub aguda, infecciones por ricketsias, paludismo y en la convalecencia de las
infecciones que producen leucocitosis.

Tambin se presenta en la mononucleosis infecciosa, carcinomas, tuberculosis de

forma septicmica, leucemia monoctica e intoxicaciones por tetracloruro de carbono, y
en las reticulosis.

- LINFOCITOSIS: Es el aumento relativo o absoluto de la cifra total de linfocitos. Se

presenta en las infecciones agudas o crnicas: Tos ferina, mononucleosis infecciosa,
fiebre tifoidea, gripe y formas crnicas del paludismo, procesos tuberculosos, sifilticos,
etc.: Hemopatias, leucemia linftica aguda o crnica, anemia perniciosa y aplsica,
prpura hemorrgica, intoxicaciones; en enfermedades metablicas; diabetes. Tambin se
suele observar en algunas infecciones vricas. El aumento de linfocitos guarda
relacin definida con la resistencia a las infecciones.

La concentracin de elementos formes en la sangre circulante pueden variar en los

distintos periodos de la enfermedad: fase neutroflica o de lucha, fase monoctica o de
defensa y fase linfocitaria o de curacin.

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 71

EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNSTICO:.................................................................................................................

................................................................................................................................................

EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNOSTICO:.................................................................................................................

................................................................................................................................................

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HOJA DE RESULTADOS

NOMBRE R.L. ABAST SEGM EOS BAS LIN MON DX

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CUESTIONARIO

1. Con que objetivo se observan los leucocitos cuando se determina una formula
leucocitaria

2. Como es el recorrido que se describe en la observacin leucocitaria

3. Si de 100 leucocitos observados, 20 son linfocitos y el RLT es de 7000 leucocitos

/ul de sangre, Cual es el numero de linfocitos que hay en 1 mm3 de sangre?

4. Como es el ncleo de los monocitos

5. Como se llaman los monolitos que se encuentran en tejidos, cerebro, hgado,

huesos, articulaciones.

6. Cual es la cantidad normal de linfocitos en sangre periferica

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 74

PRACTICA 9

INDICES LEUCOCITARIOS
INTRODUCCION

La aplicacin practica de criterios de correlacin entre componentes del hemograma y los

cuadros de sepsis solo han sido determinados en recin nacidos. Se han propuesto
diversos pruebas basadas en la cifra absoluta de abastonados y en las relaciones entre
estos y el recuento leucocitario, el recuento de neutrfilos o el de segmentados. En los
recin nacidos los signos clnicos de enfermedad pueden ser escasos o mnimos, la
velocidad de evolucin puede ser acelerada, por lo que los cambios en el numero y
aspecto de los neutrfilos con frecuencia son tiles para el diagnostico de infecciones
bacterianas en este grupo etario.

En las infecciones bacterianas de neonatos puede haber neutrofilia, neutropenia o puede

mantenerse dentro de los limites normales.

Dentro de los ndices mas estudiados se encuentran la relacin neutrfilos

inmaduros/neutrfilos totales que se define como normal si es menor a 0.16 al nacer;0.12
a las 72 horas de vida;0.2 durante todo el resto del primer mes de vida. El uso de estos
valores tiene una sensibilidad entre 58-90%, segn diferentes trabajos evaluados en un
metaanalisis en pacientes con sepsis neonatal confirmada. Esta relacin, llamada ndice
I/T constituye un criterio diagnostico de sepsis muy utilizado por los neonatlogos y de
mayor importancia que el recuento leucocitario diferencial expresado en porcentajes. El
ndice I/T no se utiliza en la poblacin adulta como criterio de sepsis, por que en el recin
nacido existen evidencias de reservas medulares relativamente limitadas en comparacin
con las del adulto y por esta razn tal vez no ocurra neutrofilia. La neutrofilia es un signo
bastante inespecfico y puede producirse en afecciones diferentes a la sepsis, en cambio el
hallazgo de neutropenia es muy significativo y puede ser el primer signo de infeccin
bacteriana.

En adultos, la utilizacin de ndices leucocitarios (relacin Abastonados/Linfocitos,

relacin Linfocitos/Neutrfilos maduros-segmentados-,relacin Neutrfilos
totales/Linfocitos)a partir del hemograma han sido estudiados en procesos infecciosos
agudos quirrgicos. La explicacin de la utilizacin de estos ndices podra explicarse
con los siguientes conceptos: Las clulas sanguneas de la serie blanca implicadas en la
respuesta frente al proceso infeccioso: son los neutrfilos (dentro de estos los
abastonados o tambin llamados inmaduros),los linfocitos y los monocitos. El porcentaje
de neutrfilos y linfocitos en el hemograma permiten una interpretacin de la respuesta
inmunolgica del paciente frente al proceso infeccioso. El porcentaje de monocitos en el
hemograma, en cambio, no refleja la verdadera respuesta de los monocitos frente a la
infeccin. Por lo tanto, es mas importante en la lectura del hemograma en lo que respecta
a formula diferencial el porcentaje de neutrfilos y linfocitos. Los neutrfilos representan
a la infantera inmunolgica y los linfocitos a la inteligencia frente al agente infeccioso
agresor en las diferentes etapas o estadios de gravedad en el proceso.

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 75

En una etapa temprana de la infeccin, el numero total de leucocitos se mantiene dentro

de los valores establecidos como normales, los abastonados (inmaduros) aumentan y los
segmentados (maduros) permanecen normales o ligeramente bajos. Cuando la infeccin
se agrava (esto incluye a las diferentes etapas de gravedad del proceso infeccioso), el
recuento leucocitario aumenta a expensas de los neutrfilos (abastonados y
segmentados).Se ha comentado que en un proceso infeccioso agudo grave hay tendencia
a la linfocitopenia, pero tal vez esa tendencia esta presente desde un inicio y va
intensificndose a medida que se agrava el proceso infeccioso.

Si a medida que se agrava un proceso infeccioso los abastonados aumentan, los

neutrfilos aumentan y los linfocitos disminuyen, la relacin matemtica
Abastonados/Linfocitos (ndice A/L, tambin llamado ndice N) aumentara, la relacin
matemtica Linfocitos/Segmentados(ndice L/S, llamado ndice R) disminuira , y la
relacin matemtica Neutrfilos totales/Linfocitos (ndice N/L, llamado ndice G)
aumentara a medida que se agrava la infeccin

Al investigar el comportamiento del recuento leucocitario total y recuento leucocitario

diferencial por medio de hemogramas postoperatorios en pacientes que fueron
apendicectomizados por sospecha de apendicitis aguda ,se obtuvo valores cuantitativos
calculados estadsticamente significativos los cuales son llamados ndices de Estado
Clnico Estable surgidos del anlisis de estados bsales en pacientes que cursaron con
proceso apendicular agudo; quedando documentado basndose en significancia
estadstica elevada, en los siguientes valores:

INDICE N

ndice de Estado Clnico Estable, de la relacin Abastonados/Linfocitos (ndice A/L o

llamado ndice N) con un valor estimado entre mayor o igual a 0.010 y menor o igual a
0.100

INDICE R

ndice de Estado Clnico Estable de la relacin Linfocitos/Segmentados (ndice L/S o

llamado ndice R) con un valor estimado entre mayor o igual a 1 y menor o igual a 0.300

Siendo cualquier valor cuantitativo hallado fuera dentro de los rangos adoptados como
estables, considerados como valores de inestabilidad llamados ndices de Estado Clnico
Inestable o Infeccioso.

INDICE G

ndice de Estado Clnico Inestable de la relacin Neutrfilos totales/Linfocitos (ndice

N/L o llamado ndice G) con un valor mnimo estimado para apendicitis aguda en mayor
o igual a 3.883

NDICE DE SCHILLING

Los ndices leucocitarios son unos parmetros que sirven para evaluar el grado de
madurez de los leucocitos, y en concreto de los neutrfilos que se encuentran en la sangre
perifrica. En la elaboracin de estos ndices no se tienen en cuenta las formas juveniles y
maduras de los eosinfilos y de los basfilos, debido a su mucha menor presencia en la

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sangre perifrica, en comparacin con los neutrfilos.

Hay 2 formas de llevar a cabo esta valoracin: la de Schilling y la de Arneth.

RECUENTO DE SCHILLING

Fundamento

El recuento de Schilling consiste en cuantificar el nmero de formas juveniles y el de

formas maduras de los neutrfilos que estn presentes en la sangre perifrica, y relacionar
ambos valores.

CLASIFICACIN DE LOS NEUTRFILOS SEGN SCHILLING

Schilling dividi a los neutrfilos en dos grandes grupos:

Formas juveniles:

- Mielocitos.

- Metamielocitos.

- Neutrfilos en banda o en cayado.

Formas maduras:

- Neutrfilos segmentados.

Si al observar dos clulas en un frotis se duda a la hora de clasificarlas, entre una forma
menos madura y otra ms madura siempre se ha de incluir la clula en la categora ms
madura.

Estas clulas representan normalmente dentro de la sangre perifrica, los siguientes

porcentajes:

Mielocitos: 0%.

Metamielocitos: 0-1%.

Neutrfilos en banda o en cayado: 3-5%,

Neutrfilos segmentados: 40-75%.

Clculo del ndice de Schilling

El ndice de desviacin nuclear de Schilling se calcula con la siguiente frmula;

% de formas juveniles

NDICE DE SCHILLING =------------------------------------

% de segmentados

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VALORACIN DEL NDICE DE SCHILLING

En la sangre perifrica existe una forma juvenil por unas 16 formas maduras de los
neutrfilos. Cuando aumenta el porcentaje de formas juveniles de los neutrfilos en la
sangre perifrica, se dice que hay una desviacin a la izquierda, y cuando asciende el
porcentaje de segmentados, se dice que hay una desviacin a la derecha.

INDICE DE ARNETH

Fundamento

El recuento de Arneth consiste en contar el nmero de lobulaciones que tiene una

cantidad determinada de neutrfilos y, seguidamente, calcular el nmero de lbulos que
hay por cada neutrfilo.

Clasificacin de los neutrfilos segn Arneth

Arneth agrup los neutrfilos atendiendo al nmero de lobulaciones de su ncleo, en 5

tipos:

Tipo I: neutrfilos con un ncleo no segmentado, es decir, sin lobulaciones.

Tipo II: neutrfilos con un ncleo dividido una vez, es decir, con 2 lbulos.

Tipo III: neutrfilos con un ncleo dividido 2 veces, es decir, con 3 lbulos.

Tipo IV: neutrfilos con un ncleo dividido 3 veces, es decir, con 4 lbulos.

Tipo V: neutrfilos con un ncleo dividido 4 veces, es decir, con 5 lbulos.

CLCULO DEL NDICE DE LOBULARIDAD

Conociendo el nmero de neutrfilos de cada tipo de Arneth que hay en la sangre

perifrica, se puede calcular el nmero de lbulos que tiene una determinada cantidad de
neutrfilos, y por tanto, es posible saber el nmero de lbulos por neutrfilo.

Los modernos autoanalizadores hematolgicos proporcionan esta cifra, que es conocida

como ndice de lobularidad (I L).

VALORACIN

El IL normal est comprendido entre 1,9 y 3.

Si el IL es menor que 1,9, se dice que hay una desviacin a la izquierda, y si es mayor
que 3, se dice que hay una desviacin a la derecha.

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RESULTADOS

NOMBRE N R G I.SC. I.ARN I. LOB. DX

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CUESTIONARIO

1. Cuantos tipos de neutrofilos hay segn Arneth

2. Que tipo de desviacin hay si el IL es igual a 2.5

3. En que enfermedades es tpica la desviacin a la izquierda con neutrofilia

4. Que proporcin de metamielocitos suele haber en la sangre perifrica

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PRACTICA 10
TIEMPO DE COAGULACIN Y SANGRIA

INTRODUCCION

SERIE MEGACARIOCTICA Y FORMACIN DE PLAQUETAS

Megacarioblasto. La clula primitiva de esta serie tiene un dimetro de 25 a 30 m su

citoplasma, que se tie intensamente de azul, suele consistir slo en una orilla irregular en
torno del ncleo grande, que suele ser oval o reniforme. La cromatina nuclear est mal
definida y contiene varios nuclolos muy azules que suelen ser indefinidos. En la mdula
sea normal esta clula representa menos del 1% de toda la estirpe megacarioctica y, por
ende, es difcil, encontrarla. Pueden observarse megacarioblastos con dos, tres o cuatro
ncleos por causa de la divisin mittica del ncleo sin la respectiva divisin del
citoplasma; esto es perfectamente normal.

Promegacarioito. (Megacariocito basfilo). Esta clula es mucho ms grande que el

megacarioblasto; su citoplasma puede tener un aspecto finamente granular y tiene una
reaccin tintorial basfila con los mtodos de Romanowsky. El ncleo es grande y
generalmente indentado y su cromatina consiste en unas riendas gruesas y entrelazadas
muy tingibles sobre un fondo coloreado con mayor claridad.

Megacariocito (megacariocito granular). Esta es la clula ms grande de la mdula sea y

puede medir hasta 100 m de dimetro. El citoplasma es voluminoso y contiene muchos
grnulos azurfilos que se delimitan bien sobre un fondo de color plido. El margen de
esta clula es irregular y en las etapas avanzadas de la maduracin (megacariocito en
brotacin) exhibe diferenciacin de plaquetas granulares en estructuras a modo de
seudopodios. El ncleo de esta clula es pequeo en comparacin con el volumen del
citoplasma; suele ser multilobulado o indentado, con una cromatina dispuesta en riendas
gruesas intensamente teidas.

Plaquetas: Estos son pequeos fragmentos de citoplasma que se ha desprendido de la

periferia del megacariocito. Suelen medir 2 a 3 m de dimetro; pero varan entre 1 y 4
m

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FACTORES DE COAGULACIN
NOMBRE N. ALTERNATIVO SINTESIS

I FIBRINGENO HGADO

II PROTROMBINA HGADO K

III F. TISULAR TROMBOPLASTIN ENDOTELIALES

A TISULAR. MACRFAGOS

IV CA2+

V PROACELERINA F. LABIL, HGADO

TROMBGENO
VI NO EXISTE

VII PROCONVERTINA F. ESTABLE HGADO K

VIII F. ANTIHEMOFLICO A FAH A HGADO-
ENDOTELIOS

IX FACTOR AH-B F. PLASMATICO HGADO K

F. CHRISTMAS
X F. STUART PROWER TROMBOQUINASA HGADO K
XI FACTOR AH-C ANTECEDENTE HIGADO
TROMBOPLASTINA
PLASMATICA
XII F. HAGEMAN F. DE CONTACTO HIGADO
XIII F. ESTABILIZADOR F. DE LAKI-LORAND HGADO
DE LA FIBRINA
PRECALICREINA F. FLETCHER HIGADO

HMWK F. FITZGERALD HIGADO

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TIEMPO DE COAGULACION:

Viene a ser el tiempo que se requiere para la formacin de la red de fibrina

(cogulo) que tiene la caracterstica de ser insoluble.

METODO DE BURKER PARA LA DETERMINACION DE TIEMPO DE

COAGULACION.

FUNDAMENTO.- tiempo que requiere una muestra de sangre total para formar un
cogulo.

MATERIALES:

- Lmina porta objetos.

- Lanceta estril.

- Torunda de algodn con alcohol.

- Cronmetro.

PROCEDIMIENTO:

- Limpiar la yema del dedo (desinfectar).

- Realizar la puncin con una lanceta estril, desechando luego las dos primeras
gotas de sangre.

- Recoger la tercera gota de sangre del dedo en una lmina porta objetos limpio y
seco, adems desengrasada, poniendo en marcha el cronmetro.

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- Luego dejar en reposo 3 minutos, para luego hacer el control de la formacin de

fibrina cada 30 segundos.

- Pasado 3 minutos con 30 segundos tocar la gota de sangre con la lanceta, hasta
observar, que, en el momento en que se levante la lanceta esta arrastre en la punta
un filamento llamado fibrina, este control se realiza cada 30 segundos.

- Observar el tiempo en que se a observado la formacin del cogulo de fibrina.

VALORES NORMALES:

De 3 a 5 minutos.

INTERPRETACION: Esta es una prueba muy frecuente antes de toda intervencin

quirrgica.

La disminucin del tiempo de coagulacin tiene relativa importancia, salvo

posible trombosis. Se observa reduccin de este tiempo despus de hemorragias,
esplenoctoma, cardiopata descompensada y anestesia general.

En cuanto al aumento del tiempo de coagulacin es muy importante y este puede

prolongarse cuando hay carencia de alguno de los factores de coagulacin
(tromboplastina, protrombina o fibringeno). Un tiempo prolongado tiene significacin
clnica en la hemofilia ictericia por obstruccin, anemias, leucemias, neumona etc. y en
menor grado en las diatesis hemorrgicas o hemofilia del recin nacido, por otro lado
tambin se prolonga por la ingestin de anticoagulantes y tetraciclinas.

TIEMPO DE SANGRIA:

METODO DE DUKE PARA DETERMINAR TIEMPO DE SANGRIA.

FUNDAMENTO: Es el tiempo que demora el sangrado de una herida estandarizada.

Mide la habilidad de los pequeos vasos para responder a una leccin, lo que depende de
la integridad de la pared vascular, de su capacidad constrictora, del nmero y calidad de
las plaquetas que formarn el tapn hemosttico.

MATERIALES E INSTRUMENTOS.

- Muestra de sangre capilar.

- Lanceta de Franke u otro descartable.

- Papel filtro.

- Torunda de algodn con alcohol.

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PROCEDIMIENTO:

- Desinfectar el lbulo de la oreja.

- Realizar la puncin con la lanceta de no ms de 3 a 4 mm. y poner en marcha el

cronmetro.

- Cada 30 segundos absorber la sangre con el papel filtro, sin que este llegue al
lbulo de la oreja.

- Si no sangre detener la marcha del cronmetro.

RESULTADOS: Se da en base al tiempo en el que dej de sangrar la herida.

VALORES NORMALES:

De 1 a 3 minutos.

INTERPRETACION:

El tiempo de sangra puede estar prolongado por ingestin de medicamentos

(aspirina) anomalas plaquetarias, trombopenia (idioptica, aplasia y leucemias),
trombopatas (tromboastemias, distrofia) trombocitemias (esencial y secundaria),
anomalas plasmticas del factor VIII, factor I, factores V, X y II y angiopatia aislada.

FP 3 FOSFOLIPIDO
- - - - - - - -

Carboxilacin Ca++ Ca++

A. glutmico -carboxiglutmico
COO - - OOC COO - - OCC COO - - OCC COO -

CO2 O2

X X Xa IXa
VITAMINA K

HIGADO PLASMA COMPLEJO

COAGULACION

FACTORES VITAMINA K DEPENDIENTES

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 86

PRUEBA DE RUMPEL LEEDE

Material a estudiar: observacin de la piel luego de la colocacin de un lazo
interrumpiendo la circulacin venosa.
Descripcin de la prueba: se mantiene elevada la presin en un miembro por un perodo
de 5 minutos, con un lazo o un manguito inflable. Luego se realiza el recuento de las
petequias (pequeas manchas hemorrgicas en un crculo de 5 cm de dimetro).

Tiempo insuflado con manguito de Riva Rossi al paciente: 5 a 10 minutos.

Finalidad: determinar la fragilidad de las paredes capilares, estimar la tendencia a la

hemorragia. Ayuda a reconocer la trombocitopenia.

RESULTADOS:

Valores normales: ninguna petequia o hasta diez petequias en un rea de 5 cm. Escala
para informar el nmero de petequias:

0 a 10 = 1+
10 a 20 = 2+
20 a 50 = 3+
50 o ms petequias = 4+

Valores aumentados: pueden indicar coagulacin intravascular difusa, disminucin del

fibringeno, disminucin de la protrombina, deficiencia de factor VII, trombocitopenia,
tromboastenia, enfermedad de Von Willebrand, deficiencia de vitamina K. Y puede estar
asociado a afecciones no relacionadas con los trastornos de la coagulacin como:
escarlatina, hipertensin, diabetes, gripe, sarampin, escorbuto.

Confiabilidad de los resultados: buena.

Medicamentos que pueden alterar los resultados: Corticoesteroides.

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TABLA DE RESULTADOS
NOMBRE T. COAGULACION T. SANGRIA DX

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 88

CUESTIONARIO

1. Cuales son los factores dependientes de vitamina K

2. Mecanismo de accin de la warfarina

3. Que entiende por prpura trombocitopnica

4. Defina hematoma, petequia, equimosis

5. Esquematice la fibrinolisis

6. Que entiende por CID (Coagulacin Intravascular Diseminada)

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 89

PRACTICA 11
TIEMPO DE PROTROMBINA RECUENTO DE
PLAQUETAS

FIBRINOGENO
La concentracin de fibringeno es un reflejo de la capacidad y de la actividad de
coagulacin en el organismo. Concentraciones reducidas de fibringeno pueden dificultar
la capacidad del organismo para formar un cogulo estable. Las concentraciones bajas
que se mantienen de manera crnica pueden relacionarse con una produccin disminuida
debida a una enfermedad hereditaria como la afibrinogenemia (falta de produccin), o a
una enfermedad adquirida como enfermedad heptica o malnutricin (que lleva a una
hipofibrinogenemia). Las concentraciones bajas que se instauran de manera aguda suelen
relacionarse con consumo aumentado de fibringeno, como puede observarse en una
coagulacin intravascular diseminada (CID) y en algunos cnceres. En estos casos se
consumen cantidades notables de factores de coagulacin, conduciendo primero a una
inadecuada formacin del cogulo y posteriormente a medida que la concentracin va
disminuyendo a un sangrado excesivo. A veces, tambin puede observarse una
concentracin disminuida de fibringeno despus de transfusiones de sangre de elevado
volumen (puesto que la sangre almacenada pierde fibringeno). Las fibrinolisinas,
protenas que normalmente disuelven cogulos, pueden tambin contribuir a la
disminucin de la concentracin de fibringeno atacndolo y rompiendo la fibrina de
manera acelerada.

Concentraciones normales de fibringeno suelen reflejar una coagulacin normal, pero

pueden tambin observarse en personas con cantidades suficientes de fibringeno, aunque
con un fibringeno que no funciona correctamente. Esto suele deberse a un trastorno
hereditario raro que afecta al gen que produce el fibringeno y que lleva a la produccin
de una protena del fibringeno anmala. Si los hallazgos clnicos sugieren un problema
relacionado con el fibringeno, entonces deberan efectuarse otras pruebas especficas
para evaluar ms profundamente la funcin del fibringeno.

El fibringeno es un reactante de fase aguda, y ello significa que su concentracin puede

aumentar de manera marcada en cualquier situacin que cause una inflamacin o lesin
tisular. Concentraciones elevadas de fibringeno no son especficas: no informan al
mdico sobre la causa o la localizacin del problema. Los mdicos no suelen comprobar
en estas situaciones que las concentraciones de fibringeno son elevadas, puesto que ya
suponen que lo estarn. Normalmente estas elevaciones son transitorias, normalizndose
despus de que se haya resuelto el problema subyacente.

Se pueden observar valores elevados en:

89
 90

Infecciones agudas
Cncer de mama, de rin o de estmago
Enfermedad cardiaca coronaria
CID crnica (el fibringeno puede monitorizarse en este caso)
Trastornos inflamatorios (como artritis reumatoide y glomerulonefritis)
Infarto de miocardio
Accidente vascular cerebral (apopleja)
Traumatismos
Mientras la concentracin de fibringeno se mantenga elevada, puede aumentar ligera o
moderadamente el riesgo de una persona de desarrollar un cogulo sanguneo y, a lo largo
del tiempo, podra contribuir a un aumento del riesgo de desarrollar enfermedad
cardiovascular. Esta es la razn por la cual algunos mdicos solicitan ocasionalmente la
determinacin de fibringeno junto a otros marcadores de riesgo cardiaco.

METODO

- En un tubo de Wintrobe graduado llenar plasma citratada al 3.8 %

- Incubar a 56oC por 15 minutos

- Centrifugar por 3500 RPM por 5 minutos

- Leer las lneas en el tubo con la siguiente Tabla

mm FIBRINOGENO (mg/dl)

0.1 120

0.2 180

0.3 240

0.4 300

0.5 370

0.6 430

0.7 500

0.8 560

0.9 625

VALORES DE REFERENCIA

180 a 430 mg/dl

90
 91

TIEMPO DE PROTROMBINA.

Con esta prueba se mide la actividad protrombnica esencial en la determinacin

de la coagulacin plasmtica. Cuando hay un exceso de tromboplastina y de iones calcio,
el tiempo de coagulacin de un plasma descalcificado es funcin de su actividad
protrombnica.

METODO DE QUICK:

FUNDAMENTO.- Es el tiempo de coagulacin de una mezcla constituida por

tromboplastina, plasma y citrato (anticoagulante).

MATERIALES:

- Tubos marcados para el tiempo de protrombina.

- Tromboplastina como reactivo.

- Centrfuga.

- Bao Mara termorregulable

- Pipetas micropipetas.

- Cronmetro.

PROCEDIMIENTO:

- Obtener sangre con las respectivas condiciones aspticas en un tubo marcado que
contenga dos gotas de anticoagulante (0.5 ml de citrato trisdico) generalmente se
emplean 9 volmenes de sangre para un volumen de anticoagulante.

- Centrifugar la muestra a 3,000 r.p.m. por espacio de 5 minutos para separar el

plasma.

- El bao Mara a 37_C. incubar 200 microlitros (0.2 ml) del reactivo
tromboplastina por 15 minutos, esto para lograr el equilibrio a temperatura
necesaria.

- Paralelamente incubar a 37_C, 0.1 ml de plasma citratado por 3 minutos, es decir

a los 12 minutos de incubar la tromboplastina.

- Transcurrido este tiempo agregar la tromboplastina sobre el plasma, todo esto a

37_C, del bao Mara, al mismo tiempo poner en marcha el cronmetro y
homogeneizar bien agitando suavemente.

LECTURA:

91
 92

Se realiza agitando suavemente el preparado de un lado a otro, hasta observar la

formacin de un cogulo, momento en el cual se detiene el cronmetro y se anota el
tiempo de formacin del cogulo.

VALORES NORMALES.

De 10 a 15 segundos.

INTERPRETACION.

La protrombina o factor II se transforma en trombina en presencia del calcio,

tambin es activada ligeramente por una concentracin elevada de citrato. Es producida
por el hgado bajo la influencia de vitamina K.

La insuficiencia primaria o idioptica es rara. Suele ser adquirida y se debe a

enfermedades que impiden la absorcin de vitamina k en el intestino, o su utilizacin por
el hgado. Se encuentra vitamina k en los vegetales, pero la mayor parte de la vitamina
absorbida y utilizada es producida por las bacterias intestinales. La supresin de flora
bacteriana del intestino (antibiticos) durante un periodo prolongado puede llevar a una
insuficiencia relativa, pues la vitamina no se almacena en el organismo. La vitamina K es
liposoluble y su absorcin intestinal es paralela a la de las grasas por lo tanto los
trastornos de absorcin de estas pueden producir insuficiencia de vitamina k y por lo
tanto de protrombina. Las enfermedades graves del hgado como hepatitis infecciosa y
cirrosis avanzada hacen disminuir las cifras plasmticas de protrombina, por que la clula
heptica enferma ya no puede utilizar vitamina para producir cantidades suficientes de
protrombina.

Los anticoagulantes como dicumarol, en dosis teraputicas normales, hacen

descender moderadamente las cifras plasmticas de protrombina, pero las dosis excesivas
pueden ocasionar una hipoprotrombinemia grave. En los recin nacidos las cifras de
protrombina son inferiores a las normales, pero aumentan gradualmente con la edad.

RECUENTO DE PLAQUETAS:
Las plaquetas desempean un papel de primera lnea en la hemostasia. La exploracin de
las funciones plaquetarias comprende antes que todo el recuento de los elementos en
sangre perifrica. Las plaquetas son fragmentos de citoplasma de megacariocitos, que
circulan como pequeos discos en la sangre perifrica. En promedio, tienen un dimetro
entre 1 a 4 m, su citoplasma se tie azul claro a prpura y es muy granular. No tienen
ncleo y su concentracin normal en sangre perifrica es entre 150.000 y 450.000/l. Su
duracin en circulacin es de 8 a 11 das Plaqueta, tambin denominada trombocito,
fragmento citoplasmtico de un megacariocito (la clula de mayor tamao presente en la
mdula sea), que se encuentra en la sangre perifrica, donde interviene en el proceso de
coagulacin de la sangre. Si se produce un dao a un vaso sanguneo, las plaquetas
circulantes inmediatamente quedan atrapadas en el sitio de la lesin, formndose un
tapn, primer paso en el control del dao vascular. Este mecanismo es suplementado por
el sistema de coagulacin sangunea, el cual es el ms importante medio de defensa
contra las hemorragias.

FUNDAMENTO

92
 93

La solucin hipotnica produce el lisado de los hemates, conservando la morfologa de

las plaquetas morfologa y permitiendo su recuento en cmara.

EXPLICACIN

La finalidad de esta prueba es contar la cantidad de plaquetas por milmetro cbico, de

esta forma al mismo tiempo evaluar la eficiencia de la produccin de estas clulas por la
mdula sea. Dicho recuento tambin nos permite vigilar el efecto de distintas terapias
con quimioterpicos o radioterapia. Ayuda en el diagnstico de enfermedades con
trombocitopenia y trombocitosis. Resultados determinados por recuento de las clulas en
el microscopio, o por recuento automtico con equipamiento especializado.

TCNICA

La muestra utilizada en esta prueba debe ser sangre anticoagulada con EDTA o heparina
obtenida por los procedimientos convencionales.

Cargar con la muestra una pipeta para recuento de leucocitos, enrasando en la marca 0,5 y
luego cargar lquido diluyente (Oxalato de amonio al 1%) hasta la marca 11.
Mezclar adecuadamente y dejar en reposo 15 minutos, tiempo necesario para que la
hemlisis sea completa.
Homogenizar la dilucin y cargar la cmara de Neubauer.
Dejar sedimentar las plaquetas durante 15 minutos, manteniendo la Cmara en ambiente
hmedo (por ejemplo una caja de Petri conteniendo un trozo de algodn o papel de filtro
hmedo).
Contar las plaquetas de 80 cuadraditos pequeos del retculo central (16x5).

RECUENTO:

PLAQUETAS (5)
R.E
DILUCION * ALTURA * AREA

PLAQUETAS (5)
R.E
1 / 20 *1 / 10 *1 / 5

PLAQUETAS (5)
R.E
1 / 1000
SIGNIFICADO CLNICO

Trombocitopenias: se definen como la disminucin del nmero de plaquetas por debajo

de 100.000 / mm3. Se pueden presentar accidentes hemorrgicos cuando el nmero de
plaquetas llega a 50.000 o menos. Las causas de trombocitopenias son numerosas y
pueden clasificarse en dos grupos: por trastornos de la produccin y las llamadas
perifricas por consumo o destruccin de las plaquetas.

Trombocitopenias por trastornos en la produccin

93
 94

Insuficiencia medular: Se asocia a una anemia y a una leucopenia, aplasia medular

idiomtica y enfermedad de Fanconi (en el nio, congnita), aplasia medular secundaria a
txicos, radiaciones o cncer, leucemias agudas o crnicas, otras hemopatas malignas
(mielomas, sarcomatosis): la trombocitopenia se debe a la invasin medular o
consecutiva a un tratamiento con antimicticos.
Trombocitopenias centrales aisladas: Son muy raras y en la mayora de los casos
primitivos. Es el caso de la megacariocitopenia cclica con trombocitopenia aguda; de la
anomala de May-Hegglin con plaquetas gigantes y anomalas de los polimorfonucleares;
de las trombocitopenias familiares y en fin del dficit en trombocitopoyetina.
Trombocitopenias perifricas
Se caracterizan por una mdula sea normal, con nmero de megacariocitos normal o
aumentado. Algunas secundarias y otras idiomticas: trombocitopenias por
hiperesplenismo, del lupus eritematoso diseminado, de las infecciones bacterianas,
consecutivas a infecciones virales, inmunoalrgicas, debidas a algunas drogas y post-
transfusionales.
Plaquetosis: una elevacin del nmero de plaquetas que es una situacin rara
Una elevacin moderada y transitoria secundaria a hemorragias agudas muy abundantes o
estados de hiperhemolisis sobreagudos, secundarias a cncer o a enfermedades
inflamatorias o post esplenectoma.
Elevacin superior a 1.000.000 por mm3 en trombocitemia esencial, trombocitemia y
eritremia, trombocitemia y leucemia mieloide crnica, y trombocitemia y mieloesclerosis.

INTERFERENCIAS

Algunos medicamentos pueden alterar los resultados del recuento de plaquetas, tales
como: indometacina heparina acetazolamida acetohexamida antidepresivos tricclicos
hidroxicloroquina carbamazepina acido etacrnico antimonio maleato de bromferinamina
metildopa penicilina oxifenbutazona penicilamida cloramfenicol diazxido sales de oro
fursemida isoniacida fentona sulfonamidas sulfato de quinidina pirimetamina quinina
salicilatos estreptomicina diurticos tiacdicos. Otros factores que pueden alterar los
resultados: menstruacin, ejercicio fsico intenso, altitud extrema y temperaturas muy
bajas. Los errores en el nmero de las plaquetas son mltiples y propios de cada una de
las tcnicas de recuento. Se pueden citar:
Las falsas trombopenias por agregacin de las plaquetas en presencia de EDTA Es el
error ms frecuente. Todo resultado de recuento bajo de plaquetas tiene que ser
verificado, como medida preliminar; el examen de una extensin de la sangre muestra la
presencia de numerosos agregados plaquetarios responsables, de una parte, de la
infravaloracin del recuento y, de otra parte, de una sobrestimacin del volumen
plaquetario medio. Para proceder al recuento correcto de las plaquetas, hay que hacer lo
en una muestra citratada o con ACD, teniendo en cuenta la dilucin. En algunos casos,
muy raros, la aglutinacin persiste con el citrato. Entonces, hay que contar las plaquetas
con una tcnica manual partiendo de una sangre diluida.
Algunos otros errores por defecto
en presencia de aglutininas fras dependientes del EDTA;
en presencia de una cantidad importante de protenas;
despus de contacto con superficies que activan las plaquetas;
por la presencia de plaquetas gigantes tales como las que pueden verse en el sndrome
de Bernard y Soulier. Estas plaquetas no pueden ser medidas por los contadores; tienen
que ser investigadas en el frotis;

94
 95

el satelitismo de las plaquetas sobre los polinucleares neutrfilos o ms raramente sobre

los monocitos, observable esencialmente en las muestras recogidas sobre EDTA.

VALORES NORMALES

En el hombre y la mujer adulta el recuento de plaquetas es considerado normal entre

150.000 y 450.000 plaquetas / mm3.En el nio se encuentran valores cercanos a los del
adulto
EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNSTICO:.................................................................................................................

................................................................................................................................................

EVALUACION MICROSCOPICA:........................................................................

DIAGNOSTICO:.................................................................................................................

................................................................................................................................................

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 96

TABLA DE RESULTADOS

NOMBRE T. PROTROMBINA R. PLAQUETAS DX

10

96
 97

CUESTIONARIO

1. Cual es le recuento normal de plaquetas en hombre y mujer

2. A que temperatura se puede guardar las plaquetas. Porque?

3. Esquematice la trombopoyesis

4. Que diferencia existe entre protrombina directa e indirecta

97
 98

PRACTICA 12

TIPIFICACION DE SANGRE.
INTRODUCCIN

Viene a ser una prueba de tipificacin de la sangre de un individuo que determinar

el grupo sanguneo al que pertenece segn la clasificacin del sistema ABO y la
determinacin del factor sanguneo segn el sistema Rhesus.

DETERMINACIN DE GRUPO SANGUNEO ABO Y RH:

SISTEMA ABO:
Los determinantes antignicos o epitopes de este sistema se expresan en la superficie de
los eritrocitos como oligosacridos complejos, que se diferencian por su residuo
terminal.
Tal como se observa en el siguiente esquema, una enzima fucosiltransferasa producida
por un gen H, cataliza la unin de un residuo de fucosa (FUC) a una galactosa (GAL) del
oligosacrido precursor (el Ag O produciendo el antgeno H:

--NAG-GAL-NAG

FUC
---NAG-GAL --NAG-GAL AG A
AG O
FUC
AG H --NAG-GAL-GAL

FUC
AG B

Los individuos que poseen el gen A unen N-acetilglucasamina (NAG) al antgeno H

produciendo el anfgeno A. En cambio los individuos que poseen el gen B unen otro
residuo de galactosa (GAL) al antgeno H, produciendo el antgeno B. Los individuos que
poseen ambos genes sintetizaran ambos antgenos A y B.

98
 99

DISTRIBUCION PER
POSITIVO NEGATIVO

O 70.0 1.4

A 18.4 0.5

B 7.8 0.28

AB 1.6 0.02

TOTAL 97.8 2.20

SISTEMA RH

El sistema Rh es tambin de gran importancia, puesto que es la causa mayor de la

Enfermedad Hemoltica del Recin Nacido. Los antgenos Rhesus son protena lpido-
dependientes que estn escasamente distribuidas sobre la superficie celular de los
eritrocitos, y son generadas por 3 genes relacionados, de los cuales el locus Rh D es el
ms notable debido a su inmunogenicidad. Los fenotipos resultantes son dos, el Rh D+ y
el Rh- .

FUNDAMENTO.- La identificacin del grupo sanguneo (sistema ABO) se realiza

haciendo reaccionar los eritrocitos desconocidos frente a sueros conocidos conteniendo
anticuerpos contra eritrocitos A, B, y AB por separado , produciendo aglutinacin en caso
de ser positiva la reaccin.

La identificacin del factor sanguneo (sistema Rhesus), se determina segn la

presencia del antgeno D en la superficie eritrocitaria, la prueba se realiza poniendo en
contacto los eritrocitos desconocidos con un suero conocido que contiene anticuerpos
anti-D, que producen un fenmeno de aglutinacin en caso de haber presencia de
antgeno D, denominndose a estos Rh positivos.

A anti B B anti A O anti A y B AB

A
- + + -
B
+ - + -
O
- - - -
AB
+ + + -
O DONANTE UNIVERSAL
AB RECEPTOR UNIVERSAL

MATERIALES E INSTRUMENTOS:

- Lmina excavada.

99
 100

- Sueros con anticuerpos conocidos: anti A, anti B, anti AB, y anti D (anti Rh).

- Muestra de sangre total con anticoagulante o sangre capilar si la prueba se realiza

de inmediato.

PROCEDIMIENTO.

1. Rotular la lmina excavada con el nmero respectivo de dicha muestra.

2. Colocar una gota de sangre con anticoagulante o sangre capilar recin extrada en
4 excavaciones de la lmina.

3. Agregar a cada circulo excavado los respectivos reactivos: suero anti A, anti B,
anti AB, anti Rh respectivamente.

4. Inmediatamente proceder a mezclar con una palillo de dientes .

5. Luego se homogeniza con movimientos de rotacin y se hace la lectura

correspondientes.

RESULTADOS:

Para ello se hace la observacin microscpica de aglutinacin positiva o negativa.

PARA GRUPO SANGUINEO:

- Si no se produce aglutinacin con ninguno de los sueros reactivos, pertenece al grupo O.

- Si aglutina con sueros anti A y anti AB, pertenece al grupo "A".

- Si aglutina con sueros anti B y anti AB, pertenece al grupo "B".

- Si aglutina con sueros anti A, anti B, y anti AB, pertenece al grupo "AB".

PARA FACTOR SANGUINEO:

- Aglutinacin positiva indica factor Rh positivo.

- Aglutinacin negativa indica factor Rh negativo.

INTERPRETACION: Debido a que los individuos poseen en su superficie eritrocitaria

ciertos antgenos o factores aglutingenos que constituyen un carcter hereditario y
particular, se lleg a determinar 4 grupos sanguneos dentro del sistema ABO, teniendo
en cuenta la presencia o ausencia del antgeno A y el antgeno B en el eritrocito, donde:

- Grupo "A": contiene en el plasma anticuerpos anti B y en sus eritrocitos antgeno A.

100
 101

- Grupo "B": poseen anticuerpos anti "A" (plasma) y antgenos B (eritrocitos).

- Grupo "AB": poseen antgenos A y B y carecen de anticuerpos.

- Grupo "C": posee en anticuerpos anti A y anti B y carecen de antgenos en su superficie

eritrocitaria. Por lo tanto estos antgenos reaccionan al entrar en contacto con ciertos
anticuerpos especficos a ellos, revelndose la reaccin mediante procesos de
aglutinacin o lisis, es decir que al hacer reaccionar los glbulos rojos del desconocido
frente a sueros conocidos (anti A, anti B y anti AB, por separado), se produce
aglutinacin, en caso de ser positiva la reaccin, o no aglutinacin en caso de pertenecer
al grupo "O".

Cosa similar sucede con el factor Rh, que permite la agrupacin en 2 grupos: Rh
positivo y Rh negativo, en donde esto se determina por la presencia o ausencia del
antgeno D, los que lo posean se denominan Rh positivos y los que carezcan de l son los
Rh negativos, por lo tanto al poner en contacto los eritrocitos de un individuo con el suero
anti D se ver de acuerdo a la presencia del antgeno si la reaccin es positiva o negativa,
siendo positiva, si el antgeno D se encuentra presente y negativo si el antgeno D no este
presente.

TABLA DE RESULTADOS

NOMBRE GRUPO TIPO

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 102

CUESTIONARIO
1. A que grupos sanguneos Ud puede donar sangre. Porque?

2. Que tipo de Ig presentan los grupos sanguneos ABO y Rh

3. Que anticuerpos y anfgenos tiene el Bombay

4. Cual es la distribucin de fenotipos sanguneos en Per

5. Que entiende por kernicterus

6. Mencione otros sistemas de clasificacin

102
 103

PRACTICA 13

PRUEBAS CRUZADAS.

INTRODUCCION

Son pruebas que se realizan en la seccin de Banco de Sangre y que es uno de los
requisitos para poder donar sangre, con el fin de detectar cualquier tipo de
incompatibilidad sangunea entre la sangre de un individuo receptor con la de un posible
donante y se conocen dos tipos:

- Prueba cruzada mayor.

- Prueba cruzada menor.

PRUEBA CRUZADA MAYOR:

FUNDAMENTO.- Son pruebas que consisten en hacer reaccionar los eritrocitos del
posible donante (de preferencia eritrocitos lavados) con suero del individuo receptor, con
el fin de detectar cualquier incompatibilidad y asegurar que el suero del receptor no
contenga anticuerpos libres capaces de reaccionar con los eritrocitos del posible donante.

MATERIALES E INSTRUMENTOS:
- Tubos de ensayo.
- Lminas excavadas.
- Pipetas Pasteur.
- Eritrocitos del donante y suero del receptor.
- Suero fisiolgico.
- Baguetas.
- Centrfuga.
- Rotor.
PROCEDIMIENTO:
- Preparar una suspensin al 5 % de eritrocitos del donante con suero fisiolgico.
- Colocar una gota de dicha solucin en la lmina excavada.
- Agregar una gota del suero del receptor.
- Mezclar bien con una bagueta.
- Homogeneizar bien por espacio de 1 2 minutos, y luego realizar la lectura
respectiva.
RESULTADOS:

Este se da de acuerdo a la presencia o ausencia de la aglutinacin, siendo,

compatible en caso de no presentar aglutinacin. Es incompatible en caso de presentar
aglutinacin.

INTERPRETACION:

103
 104

La presencia de hemlisis o aglutinacin en la prueba indica la incompatibilidad

sangunea, por lo tanto al individuo receptor no se le debe administrar esta sangre para
evitar problemas mayores. Y por otro lado la no aglutinacin o hemlisis indica que dicha
prueba cruzada con la muestra de sangre, es compatible, por lo cual dicha sangre puede
ser administrada al paciente que lo requiera.

NOTA: En el ltimo de los casos es recomendable que se realice prueba cruzada menor,
con la finalidad de comprobar la ausencia de isoanticuerpos en el plasma de dicho
individuo todo se realiza siempre y cuando la prueba no sea de suma emergencia.

En caso que se tratase de un examen de suma emergencia entonces se realiza el

examen de la prueba cruzada de emergencia el cual tiene los mismos pasos que la prueba
cruzada mayor, el cual consiste en hacer reaccionar al suero del receptor con la sangre
total del individuo donante. Y de este modo saliendo compatible o mejor dicho se de el
caso de que el examen realizado de como resultado compatible, pues se procede a hacer
una hoja de cargo, donde el mdico que requiere de esta unidad se haga responsable de
cualquier problema que pudiera suceder.

TEST DE COMBS O PRUEBA ANTIGLOBULINA.

Prueba que sirve para determinar la presencia de anticuerpos incompletos, los

cuales pueden encontrarse revistiendo la superficie eritrocitaria o bien puedan estar
suspendidos en el plasma.

TEST DE COOMBS DIRECTO E INDIRECTO:

Cuando los glbulos han sido absorbidos o fijados en su superficie anticuerpos,

pero la Aglutinacin solo se produce en presencia del Suero Antiglobulina humana.
Dicha prueba tiene una alta especificidad, debido a que los anticuerpos (globulinas) que
cubren el eritrocito, nicamente corresponden a la sustancia (Antgeno) del grupo
sanguneo respectivo. El suero de Coombs (suero antiglobulina humana de conejo),
aglutina directamente a los eritrocitos cuando estn revestidos, pero no cuando los
anticuerpos estn en suspensin.

Es as que de esta diferencia surgen 2 tipos de pruebas de Coombs: la directa y la

indirecta.

TEST DE COOMBS DIRECTA: Dicha prueba tiene como finalidad determinar o

detectar anticuerpos incompletos fijados en los eritrocitos del paciente, para ello se
utilizan hematies lavados del paciente puestos en contacto con el suero de Coombs.

TEST DE COOMBS INDIRECTA : PRUEBA EN TUBO.

- Preparar una suspensin al 2 % de solucin salina de glbulos "O" Rh (t)

seleccionados, obtener el suero del paciente libre de hemlisis y contaminacin.

- Si a la mezcla anterior le aadimos 3 gotas de albmina bovina al 22 % puede

fortificar dicha reaccin.

104
 105

- Y dicha reaccin consta de 2 fases, fase de bloqueo y fase de aglutinacin.

FASE DE BLOQUEO: Es la base de sensibilizacin o adherencia de las aglutininas a

los hematies.

- Colocar 2 gotas de suspensin globular en el tubo de ensayo.

- Aadir 2 gotas de suero a analizar.

- Incubar en bao Mara a 37_C por 40 a 60 minutos.

- Retiramos de bao Mara y agregamos suero fisiolgico (para el lavado) a 1,000

r.p.m. por espacio de 2 minutos _ a 3,400 r.p.m. por 40 segundos.

- Agitar luego el tubo suavemente y observar si hay aglutinacin.

- Luego procedemos a llenar el tubo de nuevo con suero fisiolgico y centrifugar

nuevamente.

- Este lavado de eritrocitos por lo menos se realiza 3 veces, para luego decantar la
mayor cantidad posible del suero fisiolgico.

FASE DE AGLUTINACION. Sobre el sedimento globular (2 gotas) agregamos 2 gotas

de suero de Coombs (una gota por cada gota de suspensin globular usada), mezclar bien
centrifugar a 1,000 r.p.m. por un minuto o a 3,400 r.p.m. por 20 segundos, luego agitar
suavemente para re suspender los eritrocitos y realizar la lectura, investigando
aglutinacin macroscpica.

RESULTADOS:

Aglutinacin positiva: Indica la presencia de anticuerpos bloqueantes en el

eritrocito o en forma libre, segn sea el caso.

Aglutinacin negativa: Indica ausencia de anticuerpos bloqueantes en la superficie

eritrocitaria en el suero o plasma, segn sea el caso.

INTERPRETACION:

PRUEBA DE COOMBS DIRECTA: Su principal utilidad es para comprobar si los

eritrocitos estn recubiertos por isoanticuerpos, especialmente para el diagnstico de
anemias hemolticas, adquiridas por auto anticuerpos, para descubrir accidentes post-
transfusionales, as para comprobar las combinaciones Rh-anticuerpos en los eritrocitos
del recin nacido (eritroblastosis fetal).

PRUEBA DE COOMBS INDIRECTA: Generalmente se utiliza cuando el factor Rh

pudo poner de manifiesto anticuerpos en el suero de la madre, antes del parto
(INMUNIZACION MATERNO FETAL).

105
 106

Tiene mucho valor para seguir el curso de sensibilizantes post-transfusionales,

frente al factor Rh u otros grupos sanguneos y resulta positivo en algunas anemias
hemolticas adquiridas.

ANLISIS DE RESULTADOS

106
 107

CUESTIONARIO

1. Si durante la prueba cruzada mayor se observa aglutinacin en la etapa

proteica y trmica estamos frente a

2. En que consiste la prueba cruzada mayor:

3. Que es la variante DU

4. Cual la utilidad de la prueba de Coombs indirecta

107
 108

PRACTICA 14

BANCO DE SANGRE
INTRODUCCION

La seleccin del respectivo donante se da mediante la realizacin de un test de

preguntas, luego se determina las condiciones fsicas para luego ser considerado como
donador y recin despus de estas pruebas se procede a realizar la extraccin de sangre
para luego conservarla y almacenarla hasta el momento en que esta vaya a ser
transfundida.

PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCION DE SANGRE:

Previa la extraccin de la unidad sangunea, se realiza la seleccin del donante y

luego la extraccin propiamente dicha.

SELECCION DEL DONANTE:

Se realiza como medida de precaucin, para evitar que el donante pueda

debilitarse ms cuando ste, este dbil de salud, o por el contrario vaya a transmitir
sustancias extraas, (antgenos) los cuales sean capaces de provocar alteraciones u otras
enfermedades a dicho individuo (receptor), y as de esta manera se puede producir
reacciones post transfusionales.

Para ello como primera medida, el posible donante deber tener ms de 18 aos y
menor a 55 aos y adems deber gozar de buena salud. Antes de que un individuo sea
aceptado como donante, este tendr que pasar satisfactoriamente una serie de exmenes,
lo cual determinar si est en condiciones de donar la respectiva unidad de sangre, la cual
es la cantidad de 500 cc.

Entre la pruebas que se deberan realizar, estn las pruebas de Elisa,

determinacin de antgeno Australiano, prueba de V.D.R.L. Pero debido a que en el
hospital no se cuenta con los reactivos necesarios nos limitamos a realizar como medida
de precaucin, un cuestionario de preguntas al posible donante, explicndole la
importancia que existe en cada respuesta que da, es decir mencionndole que sus
respuestas deben ser verdaderas y que las deber decir sin ningn temor y cuyas
respuestas sern de orden confidencial.

EVALUACION DEL DONANTE:

- Edad: Deber tener ms de 18 aos y menos de 55 aos, en caso de ser menor de

edad deber haber consentimiento de los padres por escrito.

108
 109

- Procedencia o centro de trabajo: esto debido a que puede tener o haber tenido
enfermedades que les dan a ciertos grupos de individuos de acuerdo al tipo de
trabajo que realicen, as por ejemplo Zoonosis en los mdicos veterinarios,
personal que trabaja en un camal, o enfermedades por intoxicacin en los
mineros, tambin para ver si viven en zonas endmicas de malaria, leishmaniasis,
hepatitis, etc. en donde pueden haber adquirido la enfermedad, en este caso no
podr ser donante, durante 6 meses.

- La mujer gestante no puede donar hasta 6 meses despus del parto. De igual
forma si estuviera menstruando, de preferencia se realiza la extraccin sangunea,
al finalizar su ciclo menstrual.

- Si tubo enfermedades venreas como sfilis o gonorrea y cual fue su tratamiento.

En caso de haberse curado podr donar pasado los 6 meses. Pero no podr donar
si a sido tratado con sulfas externas.

- Si don sangre con anterioridad, el nmero de donaciones, y cuando fue la ltima.

Y dicha donacin se realizar 6 meses despus de la ltima donacin, puesto que
una persona sana puede realizar una donacin de dos veces por ao, cada 6 meses.

- Si tuvo alguna extraccin dental en la ltima semana.

- Si estuvo tomando bebidas alcohlicas la noche anterior, y de haberlo hecho

tendr que esperar hasta el da siguiente.

- Si recibi algn tipo de vacuna en el ltimo mes.

- Si est resfriado o si estuvo en los ltimos das y qu medicacin est tomando, y

en caso de haber tomado aspirinas no podr donar hasta pasado las 48 horas.

OTRAS PRUEBAS:

Pasado satisfactoriamente el cuestionario anterior se procede a determinar las

condiciones fsicas de salud del posible donante.

Para ser aceptado como donante se toma en cuenta lo siguiente:

- Peso corporal: debe ser ms de 50 kilos, dependiendo de la talla.

- Pulso: debe tener entre 50 y 100 pulsaciones por minuto.

- Hematocrito: se aceptarn como donante, aquellos que tengan ms de 45 % de

Hematocrito en caso de varones y ms de 42 % en caso de mujeres.

- Grupo y factor sanguneo del donante: se realizar la Tipificacin del grupo y

factor sanguneo del donante.

- Pruebas negativas de HIV, hepatitis, sfilis etc.

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OBTENCION DE LA SANGRE: METODO DE LA BOLSA RECOLECTORA:

FUNDAMENTO.- La obtencin de la sangre se realiza en bolsas recolectoras de plstico

que contienen anticoagulantes, que tambin son conservadores ( CPD, ACD, CPD-
Adenina 1).

Estas bolsas son un sistema completamente cerrado que no permite la entrada de aire ni la
salida de sangre, adems que no hay la necesidad de abrir la bolsa para obtener la
muestra.

Estas bolsas recolectoras vienen con un accesorio de recoleccin que viene a ser
un tubo o c nula larga que termina en una aguja # 18, adecuada para la extraccin.

En general las bolsas ms utilizadas en el hospital, son las que tienen 500 cc, y que viene
a constituir una unidad de sangre, de la cual por lo general 75 ml es de anticoagulante
para 425 ml de sangre. Tambin existen bolsas de menor capacidad, pero no son
utilizadas en el hospital, ya que los pedidos solo se realizan en unidades de sangre que
equivalen a 500 cc.

EXTRACCION

- Teniendo todo el material y listo para la extraccin de sangre, colocamos al

paciente o donante sobre la camilla en posicin de cbito dorsal.

- Indicndole que durante el tiempo de la extraccin no cruce las piernas una sobre
otra, ni mucho menos que levante la cabeza, pues podra provocar una
descompensacin o desequilibrio que le pueda llevar a tener mareos o desmayos.

- Cubrimos luego al paciente con una pequea frazada si hubiera para que el cuerpo
del paciente se encuentre a temperatura adecuada.

- Procedemos a ligarle el brazo elegido y mientras tanto le indicamos que abra y

cierre con fuerza la mano, para que las venas regurgiten.

- Elegimos la vena ms prominente y procedemos a desinfectar la zona con un

pedazo de algodn debidamente empapado en alcohol yodado, indicando siempre
que mantenga el puo serrado hasta proceder con la puncin.

- Al mismo tiempo cerciorarse si el anticoagulante del equipo de sangre llega hasta

la aguja por lo menos, es decir que hay que preparar la bolsa debidamente para
evitar que la sangre se pueda coagular y de esta manera no se pueda obtener la
sangre o cantidad debida, por el contrario el volumen ser menor

- Y habiendo tomando en cuenta todas estas recomendaciones, procedemos a

introducir la aguja, siempre con el bisel hacia arriba en forma paralela a la vena,
introducimos aproximadamente 1.5 cm. del bisel y nos aseguramos que la sangre
fluya hacia la bolsa, luego aseguramos con esparadrapo la posicin de la cabeza
de la aguja al brazo del donante de igual manera colocamos otro esparadrapo en la
cnula de la aguja y otra ms al tubo recolector de la aguja (unos 10 a 15 cm. de la
aguja) formando una curvatura ascendente y luego descendente que ayude o
colabore para que la fluidez sea ms efectiva. Asimismo indicamos nuevamente al

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paciente que vuelva a abrir suavemente la mano y cierre con un poco de fuerza.
Para que ayude a acelerar la salida de sangre (por la presin que ejerce) y al
mismo tiempo se homogeneiza el contenido de la bolsa evitando se coagule cada
5 minutos aproximadamente, para que la sangre se mezcle con el anticoagulante,
mediante movimientos de rotacin en forma de 8.

- Una vez obtenido el volumen de sangre deseado se indica al paciente que extienda
la palma de la mano, asegurando la bolsa de sangre con un amarre doble con el
cordn o manguerita que compone la bolsa.

- Procedemos a retirar los esparadrapos colocados, colocando un pedazo de algodn

con alcohol sobre la zona de puncin, presionando ligeramente y retiramos la
aguja, introducindola en su casquete respectivo.

- Luego indicamos que el paciente doble su brazo sobre su pecho y que mantenga
esa posicin durante 15 minutos. Y le preguntamos si siente alguna molestia.

- Mientras tanto se realiza dos amarrados o nudos en los tubos o tubo recolector de
la bolsa, que vayan a unos 10 o 15 cm. una de la otra.

- Rotulamos la bolsa, colocando en ella la numeracin que corresponde, la fecha de

extraccin, el grupo y factor al que pertenece.

- Se procede a homogeneizar la bolsa de sangre unos 15 minutos (en rotor

automtico) para que todo el contenido de la bolsa se homogenice.

- Mientras tanto se van realizando las pruebas serolgicas V.D.R.L. Desechando

las que salgan positivas, y las que salgan negativas se almacena hasta su oportuno
uso (transfusin sangunea) previo registro en el libro de ingresos de sangre.

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CUESTIONARIO
1. Donar sangre es seguro?

2. Donar sangre produce aumento de peso?

3. Donar sangre produce anemia?

4. Cunta sangre donar?

5. Qu se obtiene con la sangre que donan?

6. Con qu frecuencia puedo donar sangre?

7. Que entiende por afresis?

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BIBLIOGRAFIA

1. AIQUEL, F. 1986. Manual de anlisis clnicos Ed. Mdica Panamericana. Buenos

Aires.

2. BALCELLS G. 1987.La Clnica y el Laboratorio.11a edicin, Editorial Marin

S.A.

3. BAUER, E. 1995. Metodos de Laboratorio. Ed. El Ateneo Buenos Aires

4. BEVILACQUA, F. BENSONOUSSAN, E; JANSEN DA SILVA, J. 1995.

Fisiopatologa Clnica
5. CASAS, A, SALVE M. AMICH, S. PRIETO, S.(1998). Hematologia:
Laboratrio Clnico. Ed. McGraw Hill Interamericana.
6. DAVIDSOHN, I. J.1992 Diagnstico Clnico por el Laboratorio.6a edicin,
Salvat Editores S.A., Barcelona.
7. GARCIA, B RUBIO, F. CARRASCO M. (1997) Hematologa I y II Grficas
ROGAR. Madrid.
8. GUERCI, A.1985 Laboratorio Mtodos de Anlisis Clnicos y su interpretacin,
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9. LIGHT, C., Manual Merck de Diagnstico y Teraputica, 5a edicin, Merck

Sharp Dohme. Research.

10. LYNCH, M.J.1979.Mtodos de Laboratorio. Ed. Interamericana Mxico

11. McDONALD, G.A.; PAUL, J.1995. Atlas de hematologa. Editorial Mdica.

Panamericana

12. ORGANIZACION PANAMERICANA DE LA SALUD. 1983. Manual de

Tcnicas Bsicas para un Laboratorio, publicacin cientfica N 439 Carbajal S.A.
Impreso en Colombia.

13. VELSQUEZ, J. GALLARDO, D. 1996. Fisiologa de la Sangre y del sistema

immunolgico. Ed. UNMSM. Lima

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REVISTAS

1. ACTA HAEMATOLOGICA
2. AMERICAN JOURNAL OF HEMATOLOGY
3. ANNALS OF HEMATOLOGY
4. BIOLOGY OF BLOOD AND MARROW TRANSPLANTATION
5. BLOOD
6. BLOOD CELLS, MOLECULES AND DISEASES
7. BLOOD COAGULATION & FIBRINOLYSIS
8. BLOOD REVIEWS
9. CRITICAL REVIEWS IN ONCOLOGY/HEMATOLOGY
10. EXPERIMENTAL HEMATOLOGY
11. HEMATOLOGIA
12. HEMATOLOGY
13. JOURNAL OF THROMBOSIS & HAEMOSTASIS
14. REVISTA IBEROAMERICANA DE TROMBOSIS Y HEMOSTASIA
15. TRANSFUSION
16. TRANSFUSION MEDICINE & HEMOTHERAPY

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