BIOQUMICA BSICA

Dr. Pablo Gonzlez Cervantes

Bloque 105
Integrantes del equipo:
Jess Castaeda Snchez
Andrea Jazmn Gabriel Peralta
Brenda Luz Loyo Mata
Luis ngel Caso Muoz
Laura Aldana Prez
Candy Janette Nevarez
PRCTICA No. 1.
Identificacin De Carbohidratos
Fecha de entrega: 25 de septiembre del 2017
 Prctica No. 1: Identificacin De
Carbohidratos
Objetivos:
Comprender las principales propiedades de los grupos funcionales de los
carbohidratos, lo que permite diferenciarlos entre ellos y con otras familias de
molculas.
Comprender las propiedades de oxido-reduccin de los carbohidratos, que es la
base para los mtodos de identificacin de azcares en los distintos fluidos
biolgicos.

Fundamentos:
Azcares reductores y no reductores. Poder reductor. Osazonas.
El orden de las dos unidades monomricas, en el caso de que sean de tipos
distintos. En el enlace glucosdico interviene el carbono anomrico de un azcar,
pero en la mayor parte de los casos el otro est libre. En consecuencia, los dos
extremos de la molcula pueden diferenciarse en funcin de su reactividad qumica.
As, por ejemplo, el residuo de glucosa que se encuentra en la lactosa, que tiene un
carbono anomrico libre y, por tanto, un posible grupo aldehdo libre, podra
oxidarse por la solucin de Fehling; en cambio, el residuo de galactosa no tendra
esta posibilidad. Ello hace que la lactosa sea un azcar reductor, y el residuo de
glucosa se encuentra en su extremo reductor. El otro extremo se denomina extremo
no reductor. En la sacarosa, ninguno de los dos residuos tiene un grupo aldehdo
libre ya que ambos carbonos anomricos participan en el enlace glucosdico. En
consecuencia, la sacarosa es un azcar no reductor. (1)
Una ruta de biosntesis que oxida la glucosa: la ruta de las pentosas fosfato
FASE OXIDATIVA: GENERACIN DE PODER REDUCTOR EN FORMA DE
NADPH: Resulta til considerar la ruta de las pentosas fosfato como un mecanismo
que acta en dos fases: oxidativa y no oxidativa. Dos de las tres primeras reacciones
de esta ruta son oxidativas, y cada una de ellas comporta la reduccin de un NADP+
a NADPH. Como se muestra en la Figura 14.23, la primera reaccin, catalizada por
la glucosa-6-fosfato deshidrogenasa, oxida la glucosa-6-fosfato a 6-
fosfogluconolactona, la correspondiente lactona (un ster interno que une los
carbonos 1 y 5). La 6-fosfogluconolactona se hidroliza por una lactonasa especfica
a 6-fosfogluconato, que experimenta una descarboxilacin oxidativa, para dar CO2,
otro NADPH y ribulosa-5-fosfato (una pentosa fosfato). El resultado neto de la fase
oxidativa es la generacin de 2 moles de NADPH, la oxidacin de un carbono a CO2
y la sntesis de 1 mol de pentosa fosfato. (1)
CUANTIFICACIN DEL PODER REDUCTOR: POTENCIAL DE REDUCCIN
ESTNDAR: La qumica redox es comparable en muchos sentidos a la qumica
cido-base. En un equilibrio protnico, tenemos un cido y su base conjugada, que
corresponden a un donador de protones y a un aceptor de protones,
respectivamente. (1)

De forma anloga, en una reaccin redox tenemos un donador y un aceptor de

electrones

FORMACIN DE OSAZONA: El Proceso de formacin de la osazona es una

oxidacin que destruye la estereoqumica en C2. La Configuracin absoluta en C 3
, C 4 , Y C 5 Debe ser la misma en los 3 monosacridos.
Las osazonas son una clase de derivados de carbohidrato encontrados en qumica
orgnica. Se forman cuando los azcares reaccionan con fenilhidrazina. Emil
Fischer desarroll y us la reaccin para identificar azcares cuya estereoqumica
difera por slo un carbono quiral. La reaccin involucra la formacin de un par de
funcionalidades fenilhidrazona, concomitante con la oxidacin del grupo
hidroximetileno adyacente al centro formilo. (3)
Material:
Tubos de ensaye
Gradilla
Pipetas
Vasos de precipitados
Glucosa al 5 %
Galactosa al 5 %
Sacarosa al 5 %
Maltosa al 5 %
Lactosa al 5 %
Almidn al 5 %
cido sulfrico concentrado (o HCl 0.1 N)
Hidrxido de sodio 1 M
Reactivo de Benedict
Reactivo de Fenilhidracina
Solucin de lugol
Estufa

Procedimiento, Anlisis y Fundamentos

Reaccin de Benedict:
1. Coloque 0.5 mL de cada una de las diferentes soluciones de carbohidratos en
diferentes tubos de ensaye.
2. Aada a cada uno de los tubos 2 mL del reactivo de Benedict.
3. Coloque los tubos en bao Mara con agua en ebullicin de 3 a 25 min.
4. Saque los tubos a medida que aparezca el color rojo ladrillo, y anote los tiempos
de esta aparicin para cada uno de los tubos.
Realizacin del proceso (Observaciones):
Benedict
En la lactosa, el color cambi a marrn en un tiempo de 11 min 11 seg, y se observ
que la sustancia se redujo a la mitad
En la Galactosa, el color cambi de azul a naranja en un tiempo de 12 min 25 seg.
En sacarosa lo tuvimos en calor un tiempo de 22 min 04 seg y lo retiramos, no
observamos cambio de color ni reduccin
El almidon lo tuvimos en calor un tiempo de 22 min 07 segundos y tampoco
observamos cambios ni de color ni de reduccin
 Reaccin de la inversin de sacarosa:
1. En un tubo de ensaye deposite 3 mL de la solucin de sacarosa.
2. Agregue 0.5 mL de cido sulfrico concentrado (o 1 mL de HCl 0.1 N)
3. Caliente en bao de agua en ebullicin por 15 min. Enfre al chorro de agua.
4. Tome 1 mL de la solucin anterior y alcalinice con 1 mL de NaOH 1 M (medir con
papel indicador).
5. Agregue 2 ml del reactivo de Benedict al contenido del tubo anterior.
6. Caliente en bao de agua en ebullicin por 2 min.
7. Anote si aparece un color rojo ladrillo.
Realizacin del proceso (Observaciones):
Al inicio de esta prctica depositamos 3ml de solucin de sacarosa en un
tubo de ensaye; con la solucin ya en el tubo agregamos 0.5ml de cido sulfrico
concentrado.
Al tener las dos soluciones (sacarosa y el cido sulfrico) en el tubo, lo
colocamos en un vaso de precipitado con agua y se puso por 15 min en bao de
agua en ebullicin.
Pasados los 15 min, se sac el tubo de ensaye y se enfri con chorro de
agua. Se tom un 1ml de esta solucin y se alcalinizo con 1ml de cido sulfrico.
Debido a la falta de alcalinidad de la muestra se repitieron los paso del 1 al
4 para obtener otra muestra; a la muestra 2 se le agregaron 30ml de cido sulfrico
en vez de uno y se sigue con el procedimiento normal. Se obtuvieron medidas
diferentes en las dos muestras con papel indicador
Se agregaron 2ml de reactivo de Benedict a las dos muestras y se calent
en bao de agua por 3 min. A los 3min se sacaron del vaso de precipitado y se
observ el cambio en una de las muestras a color rojo ladrillo, la muestra en la que
se observ el cambio fue la #2, la que contena 30ml de cido sulfrico
 Reaccin del Lugol:
1. En un tubo de ensaye coloque 2 mL de glucosa, en otro 2 mL de lactosa o
sacarosa al 5 %, y en un tercero colocar 2 mL de almidn.
2. Agregue a cada tubo 4 gotas de lugol.
3. Anote y observe los cambios de coloracin.
4. Caliente en agua en ebullicin por 3 min.
Realizacin del proceso (Observaciones):
En este proceso colocamos 2 ml de los carbohidratos que ya haban sido preparados
con anterioridad (glucosa, lactosa, almidn), de manera individual en tubos de
ensaye. Se les aadi 4 gotas de Lugol (disolucin de yodo y yoduro potsico) a
cada uno; como resultado a este el almidn dio un color azulino fuerte, con un tono
acercndose a negro; esto significa que la reaccin es positiva; mientras que en los
tubos que contenan glucosa y lactosa la coloracin fue menos intensa.
Posteriormente colocamos los tubos de ensaye en un recipiente que contena agua
en ebullicin durante 3 minutos, pudimos observar que el color azulino desapareci.
 Reaccin de la fenilhidrazina:
1. En cada uno de 3 tubos de ensaye coloque 2.5 mL de reactivo de fenilhidrazina.
2. A cada uno de los tubos anteriores aada 1.5 mL de solucin de glucosa, en otro
1.5 mL de lactosa, y en otro 1.5 mL de maltosa.
3. Caliente los tubos en agua en ebullicin por 45 min, agitando fuertemente cada 3
min durante los primeros 20 min. Saque los tubos y enfre al chorro de agua.
4. Observe la formacin de cristales y anote el tiempo. Observe al microscopio los
cristales formados que tienen caractersticas diferentes para cada uno de los
carbohidratos.
Realizacin del proceso (Observaciones):
En la reaccin de la fenilhidrazina, primero tomamos 3 tubos de ensayo y en cada
uno pusimos 2.5 mL de reactivo de fenilhidrazina y seguido de esto, agregamos 1.5
mL de solucin de glucosa al primer tubo de ensaye, 1.5 mL de lactosa al segundo
tubo de ensaye y finalmente 1.5 mL de maltosa al tercer tubo de ensaye. Despus
se calentaron los tres tubos de ensaye a calentar a bao mara con agua en
ebullicin, durante 45 minutos, durante este tiempo cada 3 segundo agitamos cada
tubo durante 1 minuto, nicamente los primeros 20 minutos, el resto del tiempo solo
estuvieron calentndose a bao mara. Terminando este paso los sacamos del vaso
precipitado y los enfriamos a chorro de agua como indica la prctica. Se cristaliz
una parte de las soluciones. Tomamos una muestra de cristales de cada uno de los
tubos de ensaye para ponerlos sobre un portaobjetos y encima de este poner un
cubreobjetos, esto con el fin de poder observarlos a travs del microscopio y
observar las caractersticas que diferencian a cada uno de estos tres carbohidratos

Fotos del microscopio de los 3 compuestos:

Fundamentos Teoricos
a) fundamento del reactivo de Benedict.
Los azcares que pueden oxidarse por agentes oxidantes dbiles como el reactivo de
Benedict se denominan azcares reductores
Reaccin de la glucosa con el reactivo de Benedict: El reactivo de Beneclict. sulfato de
cobre (JI) en una disolucin de carbonato sdico y citrato sdico, se reduce por el
monosacrido glucosa. La glucosa se oxida para formar la sal del cido glunico. La
reaccin forma tambin un precipitado pardo-rojizo de CU20 y otros productos de oxidacin.

Las molculas de hidratos de carbono que slo contienen grupos acetal no dan reaccin
positiva con el reactivo de Benedict. (La formacin de acetal bloquea el anillo, de forma
que no puede experimentar una oxidacin o mutarrotacin.) Slo los hemiacetales actan
como agentes reductores. (4)
b) fundamento de la inversin e hidrlisis de la sacarosa.
La hidrlisis de la sacarosa da una mezcla de glucosa y fructosa denominada azcar
invertido porque la fructosa es fuertemente levorrotatoria y cambia (invierte) la accin
dextrorrotatoria ms dbil de la sacarosa. (2)
La sacarosa no es un agente reductor, no forma osazonas Esto es porque el enlace
involucra el primer carbono de la glucosa y el segundo carbono de la fructosa, y no queda
grupos reductores disponibles. Cuando la sacarosa es hidrolizada, los productos tienen una
accin reductora.
La hidrlisis de la sacarosa (rotacin ptica de +66.5) produce una molcula de glucosa
(+52.5) y una molcula de fructosa (-92). Por lo tanto, los productos cambian la dextro-
rotacin a levo-rotacin. La mezcla molar de la glucosa y fructosa as formada se llama
azcar invertido. La enzima que produce la hidrlisis en la sacarosa se llama sacarasa o
invertasa.
En presencia de (HCl) y en caliente, la sacarosa se hidroliza, es decir, incorpora una
molcula de agua y se descompone en los monosacridos que la forman, glucosa y
fructosa, que as son reductores.
Si existe la presencia de un precipitado color rojo la prueba es positiva caso contrario
tambin existe la posibilidad aparecer una coloracin verde lo que indica una hidrlisis
parcial de la sacarosa, considerando una prueba negativa. (9)
c) fundamento de la reaccin de Lugol.
La obtencin del reactivo de Lugol nos sirve como ejemplo de solubilidad de una sustancia
en agua segn su enlace qumico. La molcula de yodo, I2, est formada dos tomos de
yodo unidos con enlace covalente y, como consecuencia de su carcter apolar, el yodo es
prcticamente insoluble en agua, como ya indicaba Gay Lussac.
El reactivo de Lugol obtenido en el apartado anterior se puede utilizar para reconocer la
presencia de almidn, porque esta sustancia adsorbe el yodo produciendo una coloracin
azul intensa, coloracin que desaparece al calentar, porque se rompe la estructura que se
ha producido, pero vuelve a aparecer al enfriar.
Nos permite reconocer la presencia de almidn en alimentos como el pan, las papas, pero
tambin en otros como en diversos tipos de jamn de York y queso, porque se les aade
papa cocida para aumentar el peso. Tambin es frecuente encontrar almidn en el papel
porque se utiliza para darle consistencia. (5)
d) fundamento de la reaccin con la fenilhidrazina.
Los azcares reductores reaccionan con la fenilhidrazina (3 equivalentes) produciendo
fenilhidrazonas, derivados slidos cristalinos con punto de fusin bien definidos. Los
subproductos son anilina y amonaco (6)
Es un lquido incoloro que al contacto con el aire se torna de color marrn, o sustancia
cristalina incolora cuando se encuentra en estado muy puro.
Soluble en alcohol etlico y ter etlico, escasamente soluble en agua y aceite. Este producto
se obtiene mediante reduccin del cloruro de diazobenceno con cloruro de estao.(7)
Los aldehidos y las cetonas reaccionan con fenilhidrazina (as como con sustancias
que contienen el grupo amino), producindose una condensacin , y eliminacin de agua:

Estas reacciones se utilizan para caracterizar a los aldehidos y cetonas , ya que

los productos de reaccin (fenilhidrazonas) son, en la mayora de los casos, slidos
fciles de purificar.
Reacciones de diferenciacin entre aldehidos y cetonas: Los principales reacciones para
este fin se basan en la fcil oxidacin de los aldehidos para dar cidos carboxlicos,
en contraste con las cetonas simples que no reaccionan. (8)

Conclusiones:
En esta prctica sobre los carbohidratos, realizamos varios experimentos, como el
del reactivo de Benedicto, la inversin de la sacarosa, el reactivo de Lugol y la
reaccin de la fenilhidrazina, primero describiendo los fundamentos tericos para la
prctica, los azcares reductores y no reductores, de manera resumida estos
conceptos se refieren a si el carbono quiral de un carbohidrato queda libre o no, esto
hace que se le de el nombre de reductor o no reductor, Al concepto de poder
reductor se le atribuye por la transformacin del NADP+ en la biosntesis que oxidar
la glucosa (la ruta de las pentosas fosfato) para convertirse en NADPH y tambin
en el potencial de reduccin que conocemos en la qumica como redox. Y por ltimo
de los fundamentos las osazonas que son una clase derivados de los carbohidratos
que se forma cuando los azcares reaccionan con la fenilhidrazina.
Avanzando los reactivos realizados en la prctica el primero fue la reaccin de
Benedict, que consista que con las cuatro diferentes soluciones de carbohidratos
que realizamos juntarlo con 2 ml de reactivo de Benedict (cada una) mientras a bao
Mara de 13 a 25 minutos esperbamos que estos cambiaran su color a un rojo
ladrillo, Aqu logramos apreciar como estos ocurriendo en diferentes lapsos de
tiempo para cada reactivo teniendo como el ms rpido a la lactosa y el ms lento
a la almidn que a pesar de esto slo dos de cuatro si cambiaron y se redujeron. Y
su fundamento se basa en que los azcares que se oxidan son los azcares
reductores ya que estas contienen agentes oxidantes dbiles a diferencia de las
azcares reductores. La inversin de la sacarosa en este reaccin usamos sacarosa
con concentrado de cido sulfrico, Y lo pusimos a un bao caliente durante 15
minutos para posteriormente en Frialsa chorro de agua, en esta tuvimos un pequeo
problema ya que no sabamos la concentracin del cido sulfrico entonces al
momento de alcalinizar la sustancia a pesar de que le ponamos ms hidrxido de
sodio el reactivo no dejaba el pH cido, y sin en cambio logramos apreciar el cambio
de color a rojo ladrillo. En el fundamento nos habla de que la sacarosa Al dar el color
rojo es que la prueba dio positivo y si se logr la hidrlisis, sin en cambio tambin
se puede dar un color verdoso que esto es que la prueba es negativa y la hidrlisis
slo se logr parcialmente. En tercer lugar tenemos la reaccin de LugolEn este con
tres diferentes carbohidratos agregamos cuatro gotas del activo del lugar y
observamos el cambio de coloracin despus de ponerlos en tres minutos en agua
en punto de ebullicin . En los fundamentos nos habla de que la reaccin del lugar
sirve para obtener la solubilidad de una sustancia en agua, el color cambia al
calentarse pero este vuelve al enfriarse. Reaccin de la fenilhidrazina en esta
colocamos en tubos de ensayo el reactivo de esta sustancia y en los mismos tres
diferentes carbohidratos los calentamos durante 45 minutos, de las cuales los
primeros 20 minutos, cada tres minutos agitbamos, al pasar el tiempo lo hace
enfriamos a chorro de agua, para luego de esto proceder a remover una gota para
colocarla en un portaobjetos y cubrirla con un cobro objetos para poder ver los
cristales que se hicieron, en el microscopio. En el fundamento nos habla de que los.
Las cristales se realizaron porque los puntos de fusin estaban bien definidos, Y
que estos sirven para caracterizar a los aldehidos y la cetonas ya que la mayora de
los casos estas son fciles de purificar. En la prctica aprendimos varias cosas
sobre los carbohidratos, y al revisar el trabajo terico se nos despejaron las dudas
sobre el porqu de lo ocurrido.

Fuentes de informacin:
1. Mathews, C.K.; Van Holde, K.E.; Ahern, K.G. Bioqumica (3a. ed.). Pearson-
Addison Wesley, Mxico (2009).
2. Murray, R.K.; Bender, D.A.; Botham, K.M. Bioqumica ilustrada (HARPER).
McGraw-Hill, Mxico (2013).
3. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CARBOHIDRATOS-PARTE-
2_28893.pdf
4. McKnee, T; McKnee, J.R. Bioqumica La Base Molecular De La Vida (3. Ed.).
McGraw-Hill/Interamericana, Espaa (2005).
5. Martin-Sanchez, M; Martin-Sanchez, M.T; Pinto, G. Reactivo de Lugol: Historia
de su descubrimiento y aplicaciones didcticas. Educ. qum [online], Mxico
(2013).
6. http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/CARBOHIDRATOS_21119.pdf
7. http://www.empresalud.com.ar/revista/nota/f-fenilhidracina-que-es/
8. http://www.fcnym.unlp.edu.ar/catedras/quimicaorg/practicas/07_Guia_y_TP07_
Aldehidos_y_Cetonas.pdf
9. https://sites.google.com/site/laboratoriosbioquimica/bioquimica-
i/carbohidratos/hidrolisis-de-la-sacarosa