Curso de Engenharia Qumica

4Ano - 2 Semestre - 2017

Disciplina: Engenharia Bioqumica

Prof.: Dr. Ossamu Hojo

Tarefa 04

Resoluo de exerccios e aplicao

de conceitos

(25/09/2017)

Thiago Augusto Carneiro de Souza - 131140221

William Hiroyuki Endo - 141140399

Araraquara, 01 de Outubro de 2017

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Microrganismo e meio de cultura

Exerccio 1
Sabendo que um microrganismo quimioautotrfico, e produz um metablito primrio
de grande interesse comercial, qual seria o meio de cultura que voc proporia para a
produo desse metablito?
Soluo: Quimioauttrofos ou organismos quimioautotrficos utilizam a energia resultante da
quebra de ligaes qumicas de compostos inorgnicos para sintetizar substncias orgnicas,
usando o dixido de carbono como fonte de carbono. Sabendo-se isto, o meio de cultura ideal
para estes microorganismos deveria conter basicamente fontes de carbono, hidrognio,
oxignio, e nitrognio (CHON). Alm disso o meio deve ser controlado com as condies
adequadas de temperatura e pH para favorecer o crescimento dos microrganismos.

Exerccio 2
Sabendo que um microrganismo heterotrfico e anaerbio e que ele produz um
metablito secundrio associado presena de 1% de tiamina no meio, qual seria o
meio que voc proporia para essa fermentao e as condies de operao? Desenhe um
fluxograma para ilustrar o problema.
Soluo: Um organismo heterotrfico e anaerbio se assemelha muito s primeiras formas de
vida existentes no planeta, as quais sobreviviam, basicamente, absorvendo molculas ricas em
energia, que continham normalmente metano (CH4), gua (H2O), dixido de carbono (CO2), e
cianeto de hidrognio (HCN). Assim, a partir destes compostos possvel fornecer um meio
propcio para que a fermentao ocorra. Outra fonte interessante de energia so acares, ou
carboidratos, os quais fornecem tambm os elementos bsicos para estes seres. Um detalhe
importante garantir a ausncia de oxignio, uma vez que o organismo anaerobio.
importante garantir tambm temperatura e pH adequados para o meio.
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Exerccio 3
Um metablito primrio produzido por fermentao por um bolor. Qual seria o tipo de
reator que voc usaria e porqu? Quais condies de operao mnimas necessrias que
voc proporia? Onde esto as maiores limitaes do processo?

Soluo: como os bolores so fungos, preferem ambientes de umidade mais baixa do que
aquela que favorece as bactrias. Alm disso, seu metabolismo essencialmente aerbio.
Portanto, o reator utilizado deve garantir a presena de oxignio e tambm manter uma
umidade controlada, que no ultrapasse um limite timo de operao. O substrato utilizado
tambm deve ter baixa atividade de gua, a fim de favorecer o crescimento do fungo.
importante manter temperaturas especficas, controlar o pH e o oxignio dissolvido. A
limitao do processo encontra-se aps a realizao dos balanos de massa, que iro
caracterizar a taxa de crescimento celular e a taxa de consumo de substrato, e fornecer as
relaes que governam os tempos de residncia e a concentrao de microrganismos.

Processos qumicos, fermentativos e enzimticos

Exerccio 1
Um produto qumico pode ser produzido por via fermentativa e por via qumica. De
forma genrica, quais seriam as vantagens e desvantagens de se produzir por um
processo ou por outro?

Soluo: O mtodo fermentativo, por ser realizado por microrganismos, precisa ser
rigorosamento controlado em relao s caractersticas do meio (temperatura, pH,
concentrao de microrganismos) e geralmente tem condies mais brandas. Entretanto o
mtodo costuma ser bem mais seletivo, com um rendimento razovel e no precisa ocorrer em
abientes aerobios. J o mtodo qumico pode ser submetido a condies mais intensas, mais
fcil de ser controlado e costuma ter alto rendimento. Entretanto no so to seletivos e
costumam gerar subprodutos ou produtos paralelos.
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Exerccio 2
Um frmaco pode ser produzido diretamente por fermentao ou por modificao de
um produto qumico usando uma enzima. Quais seriam as vantagens e desvantagens de
um processo sobre o outro?

Soluo: As enzimas so vantajosas pois as reaes so realizadas em condies brandas de

temperatura e pH, altamente especficas, reduzindo reaes paralelas e gerao de resduos.
Por outro lado, so reaes bastante especficas, que demanda maior tecnologia e custos mais
elevados. J a fermentao tem baixo custo, facilidade de scale-up, s necessita dos
microrganismos adequados e o meio de cultura nas condies de melhor operao.

Exerccio 3
Uma enzima produzida por um microrganismo intracelularmente por outro
microrganismo extracelularmente. Sabe-se que uma enzima para ser excretada tem que
se maior (maior peso molecular) que uma enzima que no excretada. Quais seriam as
vantagens de usar uma enzima em relao outra?

Soluo: As enzimas produzidas intracelularmente costumam ser menores e para serem

obtidas necessrio se abrir a clula. Alm da necessidade de se matar o microrganismo, h
ainda a dificuldade de fazer a separao entre as enzimas de interesse das outras substncias e
do chamado debris celular que contm, por exemplo, resduos mitocondriais. J as enzimas
produzidas extracelularmente podem ser obtidas diretamente do meio de cultura, sem
necessidade de se matar a clula produtora. Alm disso, por serem maiores h maior
facilidade no seu isolamento. Por estarem em um meio diferenciado, possuem boa
estabilidade frente variaes fsico-qumicas.
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Esterilizao

Exerccio 1
Qual procedimento voc usaria para desinfetar ou esterilizar um meio de cultura aquoso
que tem um produto termo lbil que em temperatura ambiente slido?

Soluo: se o material termo lbil, ento no possvel utilizar calor seco e o calor mido,
uma vez que ambos envolvem temperaturas relativamente elevadas. A radiao ultravioleta
um tanto letal, porm exibe baixa penetrabilidade, no atravessando vidros, filmes sujos e
outro materiais. Assim, a radiao UV extremamente eficiente na eliminao de
microrganismos presentes em superfcies. Compostos qumicos tambm so interessantes,
como por exemplo, o xido de etileno, que atua pela interao com protenas, com alta
capacidade de penetrao e muito utilizado para esterilizao de material descartvel.

Exerccio 2
Porque devemos usar calor seco para esterilizar material slido e calor mido para
esterilizar material lquido?

Soluo: Na esterilizao utilizando calor dois fatores so de extrema importncia, tempo de

exposio e temperatura. A utilizao do calor seco envolve a morte dos microrganismos por
oxidao e desidratao das clulas. Em geral, slidos so mais resistentes variaes de
temperatura e podem se oxidar na presena de vapor, portanto, utiliza-se calor seco em sua
esterilizao, pois este possui menor poder penetrante e necessita de temperaturas mais
elevadas. J o calor mido, com a presena de gua, tem sua atuao facilitada, exigindo um
menor tempo de exposio. Alm de ser de fcil utilizao e custo acessvel. Ocorre
geralmente no interior de autoclaves, onde o vcuo formado e tem-se a interao entre
lquido e vapor. Bastante utilizado em solues acaradas.
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Exerccio 3
D pelo menos trs justificativas para o uso do calor como forma de esterilizao em
aulas?

Soluo: O calor considerado o agente fsico mais prtico e eficiente para a esterilizao.
Seu custo bastante acessvel e a manipulao no pede muita especializao. Alm disso, o
processo bem mais seguro que alguns outros utilizados. Os equipamentos mais utilizados
so estufas e autoclaves.

Exerccio 4
Por qual razo o lcool 70% mais eficiente que o lcool 98% para desinfeco?

Soluo: O lcool 70% possui concentrao tima para o efeito bactericida, porque a
desnaturao das protenas do microrganismo faz-se mais eficientemente na presena da gua,
pois esta facilita a entrada do lcool para dentro da bactria e tambm retarda a volatilizao
do lcool, permitindo maior tempo de contato. Nessa concentrao ocorre a destruio de
bactrias vegetativas, porm esporos bacterianos podem ser resistentes. Fungos e vrus
tambm podem ser destrudos por este lcool. Quando se utiliza o lcool 98% para
desinfeco, ocorre uma coagulao extremamente rpida, no havendo penetrao no interior
da clula e, portanto, no matando o micrbio. Essa atuao ineficaz ocorre devida rpida
volatilizao do lcool nessa concentrao. Aps uma srie de experimentaes identificou-se
que a mxima eficincia obtida para o lcool em diluio 70%.

Processos biotecnolgicos

Exerccio 1
Um metablito primrio feito por um bacilo aerbio heterotrfico. Esse produto pode
ser obtido por meio de extrao por solvente do meio de cultura. As matrias primas so
facilmente encontradas no mercado e so soro de leite, como fonte de carbono e ureia
como fonte de nitrognio. Descobriu-se que a adio de sulfato de amnio tambm
melhora a produo. Elabore um fluxograma genrico que possibilite fazer os balanos
de massa e de energia. Escolha a forma de operao do processo. Qual(is) etapa(s)
importante(s) no foram mencionada(s), porm devem estar presentes no fluxograma?
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Soluo:

Relaes do dia a dia

Exerccio 1
Proponha um mtodo de conservao e esterilizao do leite materno para alimentar a
crianas que dependam de leite materno de banco de leites. O mtodo deve ser ensinado
para as mes que tem leite em excesso e passvel de ser realizado em qualquer domiclio.

Soluo: As bombinhas ou ordenhadeiras normalmente j vm com alguns recipientes

especiais para o congelamento ou armazenamento do leite. Mas possvel tambm armazenar
em mamadeiras comuns esterilizadas, desde que elas tenham uma tampa que vede bem. Ou
ento em qualquer recipiente de vidro com tampa de plstico, tambm esterilizado. A melhor
maneira de esterilizar o potinho ou mamadeira fervendo por cerca de 15 minutos, ou usando
esterilizadores de micro-ondas pelo tempo determinado na embalagem do esterilizador. Esse
mtodo j foi testado e, apear de no ser uma esterilizao industrial ou profissional, eficaz
para o armazenamento do leite em casa. O recipiente deve secar naturalmente, de boca para
baixo em cima de uma toalha, ou ento dentro de um pote maior, fechado. S depois que o
recipiente tiver esfriado que se pode colocar o leite materno dentro dele. No interior da
geladeira, segundo padres, o leite pode ser mantido por at 12 horas e, no congelador, por at
15 dias em temperatura inferior a -10C.
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Exerccio 2
Voc vai fazer uma festa e sabe que os seu convidados a adoram maionese que voc faz.
Porm, diferentemente das outras vezes, a quantidade ser grande, isto para 100
pessoas. Como voc vai produzir e garantir que a maionese no vai se estragar ou ser
contaminada at a festa e garantir que na retirada de pores ela tambm no se
contamine?

Soluo: A maionese, de modo geral, feita com ovos e leo. Para garantir sua melhor
conservao recomendado que fique mantida na geladeira o mximo possvel, sendo retirada
apenas na hora de servir. Aps servida, importante que tambm hajam obstculos fsicos que
impeam sua contaminao. Para isso pode-se utilizar uma tampa que evite que o alimento
fique exposto ao ambiente. Recomenda-se tambm que seja reservada uma colher apenas para
pegar o alimento, evitando que as pessoas utilizem seus prprios talheres. Obstculos
qumicos como a acidez e a salinidade tambm podem ajudar na conservao, mas devem ser
controladas para que a maionese agrade o paladar.

Exerccio 3
Uma empresa de alimentos lcteos ( iogurtes, queijos, leite longa vida, requeijo, etc.) te
contratou para auxiliar no laboratrio de controle de qualidade, onde so analisados os
produtos acabados e a matria prima. Os laboratrios existentes so de anlise Qumica
e anlise Microbiologia e a sua tarefa de hoje ser acompanhar e realizar as anlises
microbiolgicas de avaliao de contaminao do produto acabado. Proponha uma
metodologia para isso. Que tipo de metodologias so esperadas?

Soluo: A presena de microrganismos em alimentos pode mudar suas caractersticas fsicas

e qumicas. Assim, possvel se analisar sua presena por meio de testes de qualidade em
relao ao pH, colorao, cheiro e outras caractersticas que podem ser comparadas com a de
um produto no contaminado. Caso seja identificada a presena de um microrganismo deve-se
verificar se este patognico ou no, e, a partir da, se pensar no tipo e na rapidez das
medidas necessrias a serem tomadas.
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Exerccio 4
Voc est fazendo estgio em uma indstria de frmacos que tem a preocupao de
produzir os seu produtos de acordo com as normas da ANVISA, isto seguindo a BPL
(GLP) e a BPF (GMP). A produo de hoje est voltada para pomadas. Que cuidados
voc tem que ter para que essas pomadas no sejam contaminados na produo e no
envase?

Soluo: Neste caso importante que sejam seguidas as medidas de validao de limpeza.
preciso se garantir a limpeza do resduo de produtos anteriores na linha de processo e nos
equipamentos utilizados. Alm disso deve-se assegurar a devida higienizao da indstria em
si e dos operadores e funcionrios.

Exerccio 5
Soja usada para a produo de suplementos alimentares com altos teores de protena.
Nesse suplementos tem que ser garantida a inexistncia de contaminao microbiana. Ao
mesmo tempo, deve de se ter o cuidado de na formulao no colocar componentes que
deixem os suplementos higroscpicos, porm o produto tem que ser bastante solvel.
Como voc produziria esses suplementos a partir da soja em gros?
Como voc cuidaria para se garantir a inexistncia de microrganismos no produto final?

Soluo: Primeiramente a casca da soja precisa ser removida e ento o gro pode ser modo.
Posteriormente a gua quente utilizada como solvente para a extrao da parte solvel da
soja. O farelo de soja residual utilizado para a produo de rao animal, enquanto a parte
lquida pode ser utilizada na indstria de suplementos. Nesta etapa crucial que os produtos
sejam esterilizados para garantir a inexistncia de microoganismos no final do processo. A
fase lquida de leite de soja passa ento por um spray dryer, tornando-se um slido em p.
Desta forma o produto fica mais fcil de ser transportado, comercializado e conservado.
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Exerccio 6
Os princpios mtodos de desinfeco e esterilizao podem ser empregados em vrios
momentos de nossa vida. Quais mtodos voc empregaria e por que para tratar:
a) Material cirrgico - bisturis e utenslios da cirurgia, sondas, luvas de borracha e
mscaras.
b) Material de manicures e pedicures - lixas e tesouras.
c) Tubos e encanamentos das instalaes industriais.

Proponha um processo para cada item.

Soluo:

a) Material cirrgico:

Esterilizao fsica:
i) Vapor saturado sob presso: utilizam-se autoclaves. uma das mais populares
formas de tornar estril um material cirrgico nas redes hospitalares.
ii) Calor seco: utiliza-se uma estufa de ar aquecido.
iii) Radiao ionizante: utiliza baixas temperaturas e recomendado para materiais
termossensveis, evitando danos por conta das altas temperaturas. A radiao
promove a alterao da composio molecular de clulas. Elas ganham ou
perdem cargas eltricas e tem seu DNA modificado pelo processo.
Esterilizao qumica: pode-se utilizar diferentes compostos como glutaradedo,
formaldedo, xido de etileno, perxido de hidrognio, cido peractico, plasma de
perxido de hidrognio e outros. Tais compostos agem como bactericida e fungicida e
suas aplicaes dependem dos tipos de materiais.

b) Material de manicure e pedicures:

Existem vrios tipos de aparelhos e meios utilizados na esterilizao de equipamentos,

mas os mais indicados so os autoclaves. O autoclave esteriliza os equipamentos por meio do
vapor (como se fosse uma panela de presso). A verificao da esterilizao dada por:
garantia de que os utenslios esto no saquinho de esterilizao devidamente lacrado a
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marcao lateral de esterilizao. Esta marca (parecida com uma tarja ou seta na cor cinza
esverdeado) aparece automaticamente no saquinho quando exposto altas temperaturas. Em
geral, os autoclaves esterilizam a uma temperatura de 134 C em 12 minutos e podem ser do
tipo horizontal ou vertical. Os do tipo horizontal possuem paredes duplas, separadas por um
espao onde o vapor circula para manter o calor na cmara interna durante a esterilizao. Os
do tipo vertical no so adequadas, pois dificultam a circulao do vapor, a drenagem do ar e
a penetrao do vapor, por causa da distribuio dos pacotes a serem esterilizados, que ficam
sobrepostos. Durante a esterilizao importante verificar constantemente os indicadores de
temperatura e presso. Aps a esterilizao: a porta do aparelho deve ser aberta lentamente e
deve permanecer entreaberta de 5 a 10 min.

c) Tubos e encanamentos industriais:

Pode-se, primeiramente, utilizar gua tratada e detergente para a lavagem e enxgue. Em
seguida, pode-se utilizar gua aquecida para auxiliar na remoo de alguns microrganismos
menos resistentes. Para a sanitizao, utiliza-se o cido peractico. Por fim, pode-se
neutralizar as superfcies com hidrxido de sdio e, posteriormente, fazer uma nova
sanitizao com oznio e enxgue com gua tratada.