Tejidos blandos y materiales

Journal of Biomaterials Applications

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Evaluacin de la tolerabilidad biolgica del ! The Author(s) 2015

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dispositivo mdico basado en almidn DOI: 10.1177/0885328215592257
jba.sagepub.com
4DryField PH in vitro e in vivo un modelo de
rata
Daniel Poehnert1, Mahmoud Abbas2, Lavinia Maegel2,
Franziska Sambale3, Antonina Lavrentieva3,
Hans-Heinrich Kreipe2, Jurgen Klempnauer1 and
Markus Winny1

Abstracto
Objetivo: Evaluar la citotoxicidad / biocompatibilidad in vitro, as como la tolerabilidad in vivo del nuevo polisacrido
4DryField PH, certificado para la prevencin de la hemostasia y la adherencia.
Mtodos: Prueba de citotoxicidad / viabilidad in vitro de acuerdo con la norma ISO EN 10 993 utilizando lneas de clulas
tumorales murinas y humanas incubadas con 4DryField PH (PlantTec Medical GmbH). Utilizando un modelo de rata el
impacto de 4DryField PH sobre la viabilidad de los animales y los efectos in vivo fueron evaluados macro y
micropatolgicamente.
Resultados: Las pruebas in vitro no revelaron ningn efecto citotxico de 4DryField PH ni aumento de la viabilidad a las
lneas celulares tumorales. La viabilidad in vivo de ratas no fue alterada por 4DryField PH. La prdida de peso corporal
en animales con lesin abdominal ms el tratamiento con 4DryField PH estaba en el rango de controles y menos que en
ratas lesionadas sin tratamiento. Al da 7 despus de la ciruga no se observ formacin de adherencias, ni restos
macroscpicos ni histolgicos ni signos de reaccin de cuerpos extraos estaban presentes en animales sin lesin. En
animales con lesin peritoneal y aplicacin de 4DryField PH, la observacin histopatolgica revel restos menores de
polisacrido en la profundidad de la cavidad de la herida incrustada en una capa subperitoneal engrosada; Sin embargo,
con un neoperitoneo intacto sugerido. Tambin se observ la presencia de clulas mononucleares que rodeaban a las
partculas de polisacridos en diversos estados de degradacin.
Conclusin: 4DryField PH no es citotxico y no mejora la viabilidad de las lneas de clulas tumorales. La dosis alta de
4DryField PH de 1,09 g / kg de peso corporal es bien tolerada y reduce la prdida de peso en animales con lesin
peritoneal. La biocompatibilidad de 4DryField PH puede ser calificada como excelente.

Palabras claves
4DryField PH, polisacrido, agente hemosttico, agente de prevencin de la adherencia, biocompatibilidad, citotoxicidad,
modelo de rata
Introduccin
Si las medidas convencionales para la hemostasia como
la compresin, el cauterio y la sutura no son aplicables
o tienen xito, hay que tener en cuenta otras tcnicas
como el uso de hemostticos tpicos.1La mayora de
estos son celulsicos o derivados de componentes de
mamferos y / o humanos. Ejercen su efecto de diversas
maneras, como la mejora primaria de la hemostasia, la
estimulacin de la formacin de la fibrina o la provisin
de sustancias procoagulantes en vehculos como el
colgeno.1 El uso de partculas modificadas de almidn
para la hemostasia es una adicin relativamente reciente
a la hemosttica arsenal. Aplicadas como polvo a las
zonas de sangrado, las partculas de polisacridos
absorben agua de la sangre de la herida, lo que da como
resultado la concentracin de fibringeno plasmtico y
la aceleracin del proceso natural de coagulacin de la
sangre.2-4 En una situacin de di fi culo uso de
hemorragia, una mayor cantidad de agente hemosttico
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podra ser necesariamente, planteando la cuestin de la
biocompatibilidad de esos agentes. Las adherencias
pueden ser el resultado de una ciruga previa. La
profilaxis de las adherencias, incluyendo el uso de
agentes biodegradables, aumenta cada vez ms la
conciencia.7,8 Ciruga abdominal y plvica extensa,
incluidas las intervenciones quirrgicas Para
adherencias sintomticas puede dar lugar a grandes
defectos peritoneales que requieren grandes cantidades
de agentes de prevencin de la adherencia. De nuevo
surge la cuestin de la biocompatibilidad.
1
Department of General, Abdominal and Transplantation Surgery,
Hannover Medical School, Germany
2
Department of Pathology, Hannover Medical School, Germany
3
Institute of Technical Chemistry, Leibniz University Hannover, Germany
Corresponding author:
Daniel Poehnert, Department of General, Abdominal and Transplant
Surgery, Hannover Medical School, Carl-Neuberg-Strae 1, D-30625
Hannover, Germany.
Email: poehnert.daniel@mh-hannover.de
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El nuevo agente 4DryField PH (PlantTec Medical
GmbH, Bad Bevensen, Alemania) est certificado para
la hemostasia y la prevencin de la adherencia, ambas
acciones se basan en su excelente capacidad para
absorber agua. Un estudio que investiga el efecto
hemosttico de 4DryField PH revel que los cogulos
de sangre formados en presencia de 4DryField PH
tienen las mismas propiedades fsicas que los cogulos
genuinos, incluso si hay una modulacin de 50% por
un aumento relativo de los factores de coagulacin por
absorcin de agua. 3 Con respecto a la prevencin de la
adherencia se demostr que un gel formado a partir de
4DryField PH es altamente eficaz como una barrera
contra la formacin de adhesin. Este estudio investiga
la biocompatibilidad de 4DryField PH. Con ensayos in
vitro en clulas murinas y humanas, se analiza un
efecto citotxico potencial de 4DryField PH. Para las
pruebas in vivo se utiliza un modelo de rata
previamente descrito10,11. La biocompatibilidad se
evala con el puntaje de viabilidad, el curso del peso
corporal y las investigaciones macroscpicas e
histopatolgicas.
Materiales y mtodos
Pruebas de citotoxicidad in vitro
Para evaluar el impacto de 4DryField PH sobre el
crecimiento celular y la viabilidad, se realizaron dos
ensayos. El ensayo MTS es un procedimiento estndar
para estimar la viabilidad de cultivos de clulas de
mamferos. En el ensayo realizado se utiliz un kit de
Ensayo de Proliferacin Celular CellTiter 96 Aqueous
One (Promega, USA). Para el ensayo de viabilidad se
cultivaron clulas L929 de biosarcoma murino en
placas de 96 pocillos en medio de cultivo celular 1640
de Roswell Park Memorial (RPMI) con suero fetal de
ternera al 10%. La tasa metablica se normaliz a las
seales de fondo del medio de cultivo sin clulas
(blanco). Como control, se realizaron controles
negativos (medio de cultivo envejecido), no citotxicos
(material de referencia de acuerdo con ISO 10993-12)
y citotxicos (material de referencia de acuerdo con
ISO 10993-12). La puntuacin de viabilidad media del
control negativo se defini como 100% de viabilidad.
Se realizaron ocho repeticiones para cada muestra. En
el ensayo, se aplic 4DryField PH al medio de cultivo
como un extracto preparado como sigue:
De acuerdo con la norma ISO EN 10 993-12-2009, se
utiliz una relacin de material a la extraccin de 0,2 g
/ ml ms un volumen de absorcin adicional de 15 ml
por 1 g 4DryField pH. Por lo tanto, se utilizaron 1 g de
4DryField PH por 20 ml de medio de cultivo celular
RPMI 1640 con suero de ternero fetal al 10% (0,05
g/ml) y la solucin Se incub durante 24 h a 37C, 5%
de CO2 y 92% de humedad. Despus de este
procedimiento, la solucin saturada de PH 4DryField
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se centrifug y el sobrenadante resultante se denomin
"extracto al 100%". Las diluciones del extracto se
prepararon con medio RPMI y se incubaron durante 24
h a 37C. De acuerdo con la norma ISO EN 10 993-5,
debera considerarse la citotoxicidad cuando el valor de
viabilidad caiga por debajo del 70% del control
negativo. Los resultados de viabilidad obtenidos con
4DryField PH se refieren a controles negativos. Para
evaluar el impacto del polvo de 4DryField PH sobre la
viabilidad de clulas humanas usando un Ensayo de
proliferacin de clulas no radiactivas Standard Cell
Titer 96 (Promega, Alemania), se aplic 4DryField PH
como un polvo directamente sobre la superficie de las
clulas A549. Se realiz un ensayo MTT
estandardizado. Se cultivaron clulas A549 humanas en
placas de 24 pocillos o de 96 pocillos en
concentraciones de 40.000-15.000 clulas por placa en
medio de cultivo de clulas RPMI. Antes de la
aplicacin de 4DryField PH, se llev a cabo una fase de
adhesin y recuperacin de clulas de 24 - 72 h, seguida
de la evaluacin de la viabilidad celular despus de 24
h de exposicin a 4DryField PH. 4DryField PH se
aadi como un polvo directamente a las clulas
adherentes A549 en concentraciones que varan de
0,001-15 mg / ml de 4DryField PH por medio de
cultivo total. Cada concentracin se ensay como
triplicado. Las puntuaciones de viabilidad se refieren a
controles sin polvo de 4DryField PH en medio de
cultivo como 100% de viabilidad.
Ensayos in vivo para la tolerancia al 4DryField PH
Preparacin preoperatoria.
Para evaluar la tolerabilidad de 4DryField PH in vivo,
macho Lewis ratas se utilizaron en este estudio. Todos
los protocolos se llevaron a cabo de acuerdo con las
leyes de proteccin animal. Los experimentos con
animales se realizaron en Zentrales Tierlabor de
Hannover Medical School (MHH, Hannover,
Alemania), proporcionando el conocimiento (vivienda,
cuidado, etc.) para asegurar la calidad de vida de los
animales de laboratorio. Este estudio fue aprobado por
el Servicio de Proteccin al Consumidor y Seguridad
Alimentaria (LAVES) de Baja Sajonia. Las ratas tenan
acceso continuo al agua dulce y se alimentaron ad
libitum. El bienestar de los animales se evalu
mediante el monitoreo del peso corporal y los cambios
de comportamiento con el uso de una tabla de
observacin estndar (anotar la condicin corporal,
GV-SOLAS, Charite - Universitatsmedizin Berlin)
(Tabla 1).
 Poehnert et al. 3

Tabla 1. Esquema de viabilidad que cubre los das 1-7 despus de la ciruga segn GV-SOLAS.

Grado Calidad Criterio

1 Agil, activo Tpico movimiento rpido, curiosidad, alimentacin y consumo de agua

2 Activo
3 Limitado
activo
4 Retrasado
5 Letargico
Movimiento tpico, rara vez persistente, alimentacin normal y consumo de agua
Reaccin al estmulo medioambiental, persistencia frecuente, alimentacin limitada y consumo
de agua (perdida de peso < 20%)
Somnolencia, retraso en el movimiento y la reaccin, alimentacin excesiva limitada y consumo de
agua (perdida de peso> 20%)
No hay actividad, no hay reaccin, no hay alimento ni agua

Procedimiento quirrgico. severa y su subsiguiente proceso de cicatrizacin. En

La anestesia general se logr mediante inyeccin
intraperitoneal de 80 mg / kg de peso corporal de
ketamina y 5 mg / kg de xilazina. El nivel requerido de
narcosis para la ciruga se alcanz si los reflejos flexor
no aparecieron. El abdomen fue afeitado y
desinfectado. Se realiz una laparotoma mediana de 3
cm para acceder a la cavidad abdominal. Despus del
tratamiento segn el grupo (ver Grupos de ensayo), se
cerr el abdomen usando una tcnica de cierre de dos
capas y una sutura consecutiva. Todos los animales
fueron sacrificados en el da 7 del ensayo por narcosis
de dixido de carbono seguido de dislocacin cervical.
La cavidad peritoneal se volvi a ingresar a travs de
una incisin remota a la anterior cicatriz de
laparotoma. Se explor a fondo la cavidad abdominal
y se evalu la curacin de las lesiones abdominales
provocadas. Material de muestra del ciego y la pared
abdominal para la evaluacin histolgica se tom de
acuerdo con un protocolo estndar.
Manejo postoperatorio.
Despus de la ciruga, los animales fueron
monitorizados hasta el despertar completo y se
mantuvieron calientes con una lmpara infrarroja. Con
respecto al dolor postoperatorio esperado en el
postoperatorio, los animales recibieron Novalminsulfon
(no recurrente subcutneamente despus de la ciruga
con 200 mg / kg de peso corporal y continuamente
mezclando 1 g en 500 mL de agua potable).
Grupos de prueba.
Antes de la intervencin quirrgica, las ratas se
separaron en cuatro grupos: 10 animales recibieron slo
la laparotoma y el cierre del abdomen (grupo 1). Estos
animales se utilizaron como controles para evaluar el
impacto del procedimiento quirrgico sobre el
comportamiento animal y el peso. Adicionalmente,
ocho ratas recibieron 300 mg de 4DryField PH en el
abdomen inferior derecho adems de la laparotoma
(grupo 2). El Grupo 2 se us para evaluar el impacto y
la seguridad de 4DryField PH administrado en el
abdomen intacto. Adems, se analiz el efecto de
4DryField PH en animales con una lesin abdominal
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ambos grupos de lesiones (grupos 3 y 4) se cre
abrasin del ciego y una herida en la pared abdominal
opuesta para simular el sangrado y formar reas de
trauma. Por lo tanto, el ciego fue tratado con un hisopo
de gasa para eliminar el peritoneo visceral y provocar
sangrado capilar en un rea de 1 2 cm. Adems, se
resec un parche de peritoneo parietal de
aproximadamente 1 2 cm con su capa muscular interna
subyacente, de la pared abdominal derecha, lateral a la
laparotoma de la lnea media. De los tratados, 15 ratas
sirvieron como control para evaluar ciclos regulares de
cicatrizacin de heridas y de peso corporal (grupo 3). Se
trataron 14 ratas de la misma manera, seguido de la
aplicacin de 300 mg de 4DryField PH (grupo 4).
4DryField PH polvo se dio en el rea de lesin (grupo
4) o ms bien en el cuadrante inferior derecho
abdominal (grupo 2). Todos los animales recibieron 1,5
ml de solucin salina al 0,9% en la cavidad peritoneal
al final de la ciruga. Si se aplic 4DryField PH, este
procedimiento se us para transformar el polvo de
almidn en un gel.
Parmetros de evaluacin.
La constitucin de los animales se someti a
observaciones de rutina diaria y se puntu segn GV-
SOLAS (Tabla 1). El peso corporal se determin en el
da 0 del ensayo (antes del procedimiento quirrgico) y
al menos el da 7 del ensayo. Despus de la autopsia en
el da 7 postoperatorio, la cavidad abdominal en
general, as como las reas del ciego y los flancos
abdominales en particular, Se evalu
macroscpicamente y se busc restos de polisacridos.
Histologa.
Se recogieron especmenes para exmenes histolgicos
de todos los animales para evaluar si el 4DryField PH
tena un impacto sobre el tejido no alterado y la
cicatrizacin de heridas e investigar las caractersticas
de degradacin del 4DryField PH. Las muestras se
escindieron en bloque y se fijaron en solucin de
formaldehdo al 4%. Despus del procesamiento, los
especmenes fueron incrustados en bloques de parafina.
Las secciones en serie se tieron con hematoxilina y
eosina o azul Alcian y kit de tincin PAS (Sigma-
Aldrich, St. Louis, EE.UU.), respectivamente, y se
visualizaron mediante microscopa ptica. Los restos de
polisacrido 4DryField PH se detectaron mediante
tincin PAS (color azul / morado de polisacridos).
Tanto el observador macroscpico como el
histopatolgico fueron cegados al estudio.
Anlisis estadstico.
Los anlisis estadsticos de los cursos de peso corporal
se realizaron utilizando el software GraphPad PRISM
para un ANOVA multi-comparativo de dos vas
corregido para la comparacin mltiple con la prueba
post-hoc de los pavos. Los niveles de significacin se
establecieron como p <0,05.
Resultados
Ensayos de citotoxicidad in vitro
Se realizaron dos diferentes ensayos de citotoxicidad in
vitro para revelar el impacto del 4DryField PH sobre la
viabilidad celular. En las clulas L929 el extracto de
100% de 4DryField PH dio como resultado una
puntuacin de viabilidad media de 86,5 a 4,8% en el
ensayo MTS usado. Las diluciones de extracto de 50%,
25% y 12,5% revelaron puntuaciones de viabilidad de
103,7 \ pm 5,4%, 100 6,9% y 99,1 6,7%,
respectivamente. Estos resultados no indicaron
citotoxicidad del extracto de 4DryField PH (Tabla 2).
Tabla 2. Mediana, media y desviacin estndar de la viabilidad de
la lnea L929 de clulas tumorales de murina despus de la
incubacin durante 24 h con extracto de PHDRIField PH-RPMI en
diferentes concentraciones.
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Se aplicaron cantidades variables de polvo de 4DryField
PH directamente sobre la superficie de clulas A549
adherentes para analizar la viabilidad celular de clulas
humanas en contacto directo con polvo de 4DryField
PH. La Figura 1 muestra el ensayo de diferentes
cantidades de polvo de 4DryField PH en medio de
cultivo y su subsiguiente in fl uencia sobre la viabilidad
celular referido a un control sin 4DryField
PH.4DryField PH se aplicaron cantidades de pH de
0,001 a 15 mg / mL de 4DryField PH, 111% y 72% con
una viabilidad celular media de 87,8 15,5%.
Por lo tanto, la prueba in vitro de 4DryField PH cuando
se administra a lneas celulares tumorales en forma de
extracto o en polvo no mostr efectos citotxicos ni
beneficiosos sobre la viabilidad celular tumoral.
In vivo 4DryField PH tolerabilidad
En el primer da despus de la ciruga, todas las ratas se
clasificaron con una puntuacin de viabilidad GV-
SOLAS de 1 y / o 2 (Tabla 1). A lo largo del estudio
restante, todos los animales se clasificaron con una
puntuacin de viabilidad de 1 (Tabla 3), lo que significa
que ni el procedimiento quirrgico ni la aplicacin de
4DryField PH influyeron de forma sostenible en la
viabilidad de los animales. La ciruga se realiz sin
complicaciones y, debido a un curso postoperatorio
simple, ningn animal tuvo que ser sacrificado o muerto
durante el curso de las investigaciones. La Tabla 4
resume el agrupamiento de animales y el peso corporal
preoperatorio. Todas las ratas de los grupos 2 y 4
recibieron la misma cantidad de 4DryField PH (300
mg). El peso corporal preoperatorio de estos animales
estaba en un rango de 276-431 g. Por lo tanto, la
cantidad de 4DryField PH administrada vari de 0,7 a
1,09 g de 4DryField PH / kg de peso corporal.
Poehnert et al.
La prdida media de peso corporal de todas las ratas fue de
4,6 3,8% una semana despus de la ciruga (Tabla 5). La
prdida de peso fue ms pronunciada en animales con
abrasin cecal y defecto en la pared abdominal, pero sin
tratamiento con 4DryField PH (grupo 3, prdida media de
peso 23 g, 7,2%) (Figura 2). Por el contrario, en el grupo 1
la prdida media de peso fue de 10 g (2,9%), 14 g (3,4%) en
el grupo 2 y 14 g (3,7%) en el grupo 4. Es interesante
observar que los animales con lesiones quirrgicas y el
tratamiento con 4DryField PH 4) revel un curso de peso
corporal similar a los grupos 1 y 2 sin lesiones (Figura 2].
El anlisis estadstico mostr una diferencia significativa entre los
animales del grupo 1 y el grupo 3 con el incremento de la prdida
de peso en el grupo 3 (p 0,04).
Adems, el grupo 3 mostr una prdida de peso
significativamente mejorada en comparacin con los
animales del grupo 4 (p $ $ 0,04).
Al definir las cohortes dependientes del peso corporal
(Tabla 6) se aplicaron valores medios de 0,72-1,06 g de
4DryField PH / kg de peso corporal. La cantidad de
4DryField PH administrada pareca no tener efecto adverso
en el curso de viabilidad y peso corporal, incluso cuando se
aplic en una concentracin de 1,09 g / kg. Adems,
4DryField PH mostr un efecto beneficioso sobre el curso
del peso corporal en animales con lesin quirrgica severa
(grupo 4).
La inspeccin macroscpica de la cavidad abdominal de
animales con laparotoma nica (grupo 1) pareca discreta.
En particular, los animales tratados con 4DryField PH
(grupo 2) no mostraron rasgos distintivos, p. Restos de
polisacridos, signos de deshidratacin o reacciones de
cuerpo extrao. Las ratas con abrasin cecal y un defecto de
la pared abdominal (grupo 3) mostraron adhesiones masivas
como resultado del tejido peritoneal lesionado.
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5
Por el contrario, los animales con tratamiento 4DryField PH
adicional del grupo 4 tenan una cavidad abdominal normal
y aparentemente no presentaban adherencias, revelando un
efecto antiadherente de 4DryField PH en reas peritoneales
lesionadas. Aqu las zonas de lesin quirrgica haban
recuperado una superficie brillante, apareciendo como
mesothelium saludable. En el rea del defecto de la pared
abdominal, algunas zonas parecan blanquecinas (llamada
Winny e ff ect, nombre de su descubridor).
La evaluacin histopatolgica del impacto de
PH4DryField sobre la estructura del tejido se visualiza en
un animal representativo del grupo 2 en la Figura 3 (c) y (d).
La impresin general del ciego y la estructura y estructura
de los tejidos de la pared abdominal pareca normal en
comparacin con los animales del grupo 1 (Figura 3 (a) y
(b)). Adems de pocas acumulaciones de clulas
mononucleares en algunas regiones de capas de tejido se
aglutinaron con secciones de tejido fibroso y, por lo tanto,
no mostr ninguna capa de tejido normal o funcionalidad
(Figura 3 (e) y (f)]. 4DryField Los animales tratados con PH
del grupo 4 revelaron una estratificacin tisular normal (a
pesar del defecto muscular quirrgico) con pared abdominal
separada e intestino. Las reas de lesin anteriores
mostraron un engrosamiento de las capas submesoteliales
(Figura 3 (g) y (h)) como un indicador de los procesos de
cicatrizacin activos. Curiosamente, el peritoneo visceral y
parietal pareca reconstituirse.
En una mayor magnificacin de las reas de lesin de la
pared abdominal cicatrizada del grupo 4, se pudieron
encontrar unas pocas partculas aisladas de polisacrido en
niveles variables de degradacin (Figura 4). La Figura 4 (a)
y (b) muestra una nica partcula remanente, rodeada e
invadida por clulas mononucleares. Despus de la
absorcin completa de partculas de PH de 4DryField, se
observ un tejido de granulacin normal (Figura 4 (c)).
 6 Journal of Biomaterials Applications 0(0)

14 * *
12

10
weight loss (g)

Figura 2. Prdida relativa de peso corporal y desviacin estndar de animales con laparotoma nica sin (grupo 1, control) y con tratamiento
4DryField PH (grupo 2, 4DryField PH) y prdida de peso de animales con abrasin cecal y defecto en la pared abdominal (grupo 3, control
Lesin) y con tratamiento con 4DryField PH (grupo 4, lesin de PH de 4DryField).

Tabla 6. Influencia de 300 mg de 4DryField PH administrada por va intraperitoneal sobre la viabilidad animal y la prdida de peso en
diferentes cohortes de peso.
Cohorte de peso n Peso medio (g) d0 Perdida de peso (%) d0d7 4DF / BWa

250300 4 284.5 9.5 2.9 1.8 1.06 0.04

301350 3 330.6 13.7 2.8 0.5 0.91 0.04
351400 4 392.8 6 4 1.7 0.76 0.01
401450 11 415.8 7.4 3.9 1.5 0.72 0.02
a
Cantidad media de 4DryField PH (4DF) en gramos por kilogramo de peso corporal (BW).

Discusin
Actualmente se encuentran disponibles varios agentes
hemostticos tpicos que ejercen su efecto en la mejora de la
hemostasia primaria, estimulando la formacin de la fibrina
o inhibiendo la fibrinolisis.1 La celulosa oxidada o la
celulosa regenerada oxidada se han utilizado como
hemostticos durante dcadas y todava estn
sustancialmente presentes en el mercado. Como agentes a
base de plantas, son bastante biocompatibles, presentando un
bajo riesgo de reacciones alrgicas o transferencia de
enfermedades causadas por protenas extraas y / o
patgenos nacidos de sangre. Sin embargo, tienen un tiempo
de degradacin de aproximadamente 3-4 semanas.1 Si se
dejan en el cuerpo en cantidades significativas, pueden ser el
foco de eventos adversos severos, incluyendo la formacin
de adhesin.1,12-16 Su aparicin como granulomata
conduce a la sugerencia Que el tiempo de degradacin podra
incluso ser mayor que las semanas.17
Desde 1970, se han utilizado productos derivados de
mamferos principalmente a base de albmina, colgeno o
gelatina de animales domsticos bovinos, porcinos o de otros
animales domsticos1,18,19.
Estos agentes a menudo se combinan con agentes humanos
como trombina, fibringeno u otros factores de coagulacin.
A pesar de la mejora de las tecnologas de deteccin, la
transferencia de enfermedades todava no puede descartarse
completamente.1
Los productos a base de mamferos pueden ser la base de la
reaccin alrgica y inmunolgica20 y la inflamacin
granulomatosa transitoria de intensidad variable.17,21 Los
tiempos de degradacin de 3-4 semanas y ms para los
hemostticos basados en colgeno y gelatina implican que el
metabolismo de los pacientes se enfrenta a protenas extraas
durante un perodo sustancial de tiempo.

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 Poehnert et al. 7

Figura 3. Representaciones histolgicas histolgicas de color azul Alcian representativas de biopsias cecales y de pared abdominal
siete das despus de la aplicacin de 4DryField PH en abdomen de rata de un animal representativo del grupo 1 (a, b), grupo 2 (c, d),
grupo 3 (e, f ) O el grupo 4 (g, h), respectivamente. Las imgenes (a) y (b) muestran la pared abdominal normal (A: peritoneo, B:
capas musculares intactas) y la anatoma cecal (C: mucosa cecal). (C y d) La pared abdominal y el ciego despus de la laparotoma y
la aplicacin de 4DryField PH mostraron el peritoneo A normal, las capas musculares B y la mucosa cecal C. Despus de la aplicacin
de 4DryField, la pared abdominal y el ciego mostraron una acumulacin de clulas mononucleares en el espacio subperitoneal ), De lo
contrario no se observaron rasgos patolgicos. (E, f) demuestran una adhesin de alto nivel despus de la creacin de un defecto de
pared abdominal (A: clulas mononucleares como signo de inflamacin debido a procesos de cicatrizacin, B: defecto en las capas
musculares de la pared abdominal, C: mucosa cecal). (G) La pared abdominal despus de crear un defecto en la pared abdominal (un
defecto en la capa muscular) y el tratamiento con 4DryField PH parecan tener un neoperitoneo intacto (flecha) con tejido granuloso
subperitoneal ligeramente agrandado. (H) La pared cecal despus de la abrasin peritoneal y el tratamiento con 4DryField PH mostr
mucosa cecal normal y submucosa C. El neoperitoneo intacto (flecha) tena un tejido fibroso subperitoneal agrandado con una clula
mononuclear infiltrante B.

La propiedad de los agentes basados en la celulosa y los la viabilidad no se elev en diluciones de contacto directo y
mamferos para inducir la formacin del granuloma se ha / o extracto que indica que las lneas celulares derivadas de
demostrado en un estudio experimental comparativo.17 Si tumor procedentes de sarcoma y adenocarcinoma no se
los hemostticos incluyen componentes como el benefician de la presencia de 4DryField PH. Por este
glutaraldehdo, el tiempo de degradacin puede ser 4DryField PH como polvo o gel se puede considerar en la
prolongado masivamente; En la ciruga de la columna se ha ciruga de tumor.
informado que este tipo de hemostasia persiste durante 2 La aplicacin de 4DryField PH a la cavidad peritoneal de
aos. ratas revel que el polisacrido en polvo no indujo eventos
Los agentes hemostticos actuales basados en polisacridos adversos, incluyendo la formacin de adhesin. Dado que
actan por su capacidad para absorber agua conduciendo a no se pudieron encontrar restos de 4DryField PH micro y
un enriquecimiento relativo de factores de coagulacin. macroscpicamente en ratas con abdomen intacto, se puede
Tienen un corto tiempo de retencin en el cuerpo1,17 y, por suponer que el gel 4DryField PH se dispersa en el peritoneo
lo tanto, presentan un bajo riesgo de provocar una reaccin intacto; Alguna acumulacin de clulas mononucleares
granulomatosa.17 indica subperitonealmente que pueden producirse procesos
Un abordaje no farmacolgico para prevenir las de degeneracin.
adherencias es el uso de barreras temporales o permanentes
para separar el tejido lesionado de los rganos circundantes
durante el tiempo crtico para la formacin de adhesin
durante la cicatrizacin peritoneal.5 Dado que la
regeneracin posquirrgica del peritoneo ocurre Dentro de
los das 23, es deseable una degradacin o excrecin
oportuna de dispositivos para disminuir el riesgo de una
respuesta inmunolgica o reaccin corporal externa.
4DryField PH es un nuevo dispositivo que se certifica
tanto para la hemostasia como para la prevencin de la
adherencia.3,9,10 En caso de hemorragia de uso intenso o
de defectos peritoneales extensos, se pueden obtener
cantidades mayores de 4DryField PH (que exceden una
unidad quirrgica a 5 g de polvo) Y se plantea la cuestin
de la biocompatibilidad.
Las pruebas de citotoxicidad de 4DryField PH indican
que incluso en el extracto puro slo hay una ligera
disminucin de la viabilidad celular lejos del nivel de
citotoxicidad (definido como un nivel basal del 70%) de
acuerdo con las administraciones reguladoras europeas y
estadounidenses. Por otra parte y lo que es ms importante,
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 8 Journal of Biomaterials Applications 0(0)

Figura 4. Histologa del sitio mesotelial de la pared abdominal al da 7 despus de la creacin de un defecto de pared abdominal
multicapa y aplicacin de 4DryField PH en un animal representativo del grupo 4 (azul Alcian y tincin PAS). La pared peritoneal ya
estaba curada con un neoperitoneo continuo. (A) Vista general con Msculo esqueltico de la pared abdominal, B superficie interior de la
pared abdominal con neoperitoneo intacto y una capa submesotelial agrandada; C, D y E muestran diferentes etapas de degradacin de
las partculas de polisacridos. (B) Ampliacin ms alta de la partcula C de polisacrido residual, que est rodeada por clulas
mononucleares. (C) Ampliacin ms alta de grupos de clulas mononucleares que se resuelven despus de la degradacin de las
partculas de polisacrido E.

Curiosamente, los animales con lesin abdominal por Las pruebas de citotoxicidad in vitro indican que
abrasin cecal combinados con un defecto de la pared 4DryField PH no es citotxico y que por otro lado humano
abdominal de varias capas y tratamiento con 4DryField PH
tuvieron un curso de peso corporal comparable a los de la presencia de 4DryField PH. Los estudios in vivo en
animales con slo laparotoma. Por el contrario, las ratas ratas con abdomen intacto muestran que dosis de hasta 1,09
con lesin abdominal y sin tratamiento con 4DryField PH g / kg de peso corporal de 4DryField PH son bien toleradas
revelaron una significativa prdida de peso corporal, lo que
sugiere que el gel 4DryField PH administrado en el rea y se degradan principalmente en cuestin de das.
lesionada podra mejorar la recuperacin. 4DryField PH no tiene un impacto negativo en el bienestar
Los pocos restos de 4DryField PH en el rea del defecto general de los animales ni en el tejido peritoneal normal.
de la pared peritoneal anterior son el resultado de un efecto Los animales con lesin abdominal obtienen un beneficio
combinado: 4DryField PH se administr all en una herida
profunda y atrapado adicionalmente por el ciego fijo de de la aplicacin de 4DryField PH mostrando una formacin
sutura, resultando en un enriquecimiento local. En general, de adherencia reducida y un curso favorable de peso
la cantidad de 4DryField PH hallado 7 das despus de la corporal. La biocompatibilidad de 4DryField PH puede ser
ciruga puede ser juzgada menor con slo unas pocas
partculas individuales dejadas rodeadas por clulas excelente.
mononucleares. Esto indica que 4DryField PH se degrada
en das incluso si grandes cantidades estn presentes
localmente. En general, los datos muestran que 4DryField
PH en cantidades de 0,7-1,09 g / kg de peso corporal es bien
tolerado y contribuye a una curacin peritoneal favorable.

Conclusin

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 Poehnert et al. 9
8. Kamel RM. Prevention of postoperative
Expresiones de gratitud peritoneal adhe- sions. Eur J Obstet Gynecol
Reprod Biol 2010; 150:
Los autores agradecen a Anneke Loos y Eveline Sowa- 111118.
Sohle, Laboratorio de Biocompatibilidad, BioMedimplant, 9. Korell M. Combined hemostasis and
Escuela de Medicina de Hanover por la asistencia tcnica y adhesion prevention
su revisin crtica de este trabajo. with the novel agent 4DryField PH
Initial observa- tions. Surg Sci 2014; 5: 533
Declaracin de intereses en conflicto 539.
Ninguno declarado. 10. Pohnert D, Abbas M, Kreipe HH, et al.
Marked reduc- tion of peritoneal adhesion
Fondos formation in rat model of cecal abrasion
Esta investigacin no recibi ninguna subvencin by a novel anti-adhesive agent,
4DryField PH. In: Jahne J (ed.) 131st
especfica de ningn organismo de financiacin de los
sectores pblico, comercial o no lucrativo. Congress of the
German society for surgery, Berlin, Germany,
2014, pp.
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