Enzimas

I. ENZIMAS

Son Protenas que catalizan la velocidad de las reacciones

qumicas que suceden en la clula.
Hacen posible que en condiciones fisiolgicas tengan lugar
reacciones que sin catalizador requeriran condiciones
extremas de presin y temperatura o tiempos muy largos.
Las sustancias cuya transformacin qumica es acelerada
por accin de una enzima se llaman sustratos.
 II. PROPIEDADES GENERALES
. a. Estructura globular.
Son generalmente protenas
globulares con tamaos que
van desde unos 60 hasta
mas de 2500 aminocidos.

b. Alto poder catalitico.

Catalizadores inorgnicos.
102-103 veces, y las
enzimas. 106-1020
Ejplo. Catalasa (hidratacin
del CO2) acelera 107 veces
 c.- Accin a condiciones ambientales
Produccin de NH3 por sntesis qumica.

Fijacion biolgica de nitrgeno.

Proceso enzimatico

Temperatura 25-40 oC (algunas hasta 75 oC)

pH neutro (5-9), la mayora 6.5 7.5
Presin atmosfrica normal
 d.- Especificidad.
Catalizan reacciones especficas. Ejplo. Accin de la enzima
maltasa.

Se debe a que la reaccin enzima-sustrato sucede en un lugar

especfico denominado centro activo.
En l se encuentran los residuos catalticos que participan en
la reaccin enzimtica.
Ej. Accin de la quimotripsina sobre el ester etlico de tirosina.
 Caractersticas del centro activo
Tienen una estructura tridimensional en forma de hueco,
donde debe encajar al sustrato.

Tipos de aminoacidos en la enzima:

Aminocidos estructurales.
Son los ms abundantes y dan la forma de la enzima.
En la lisozima de 129 aminocidos, 124 son estructurales.
Aminocidos de fijacin.
Son los que establecen enlaces dbiles con el sustrato y lo
fijan.
Se encuentran en el centro activo de la enzima
Aminocidos catalizadores.
Estan en el centro activo y son los que provocan la
reaccin. Generalmente son aminoacidos ionicos o polares.
De los 20 aminocidos
protenicos, slo los que
tienen cadenas laterales
polares y con carga, son
catalticos. Estos son:
serina, treonina y tirosina
(hidroxilo); cistena (tiol);
glutamina y asparagina
(amida); glutamato y
aspartato (carboxilato); lisina
(amina); arginina (guanido),
e histidina (imidazol).
III. MECANISMO DE ACCION DE ENZIMAS
Para que se produzca una reaccin, las molculas reactantes deben
chocar entre s, pero solo son efectivos los choques que tienen la
energa suficiente y la orientacin correcta para reaccionar (formar o
romper los enlaces) (estado de transicion).
Los catalizadores actan proporcionando un mecanismo (alternativo)
con menor energa de activacin. Por tanto, ms choques
moleculares tienen la energa necesaria para alcanzar el estado de
transicion.
Ejemplo, la descomposicin del agua oxigenada (H2O2) puede ocurrir
sin catalizador Ea= 18 Kcal/mol
con catalizador inorgnico (platino) Ea= 12 Kcal/mol
con una enzima especfico (catalasa) Ea= 6 Kcal/mol

Las enzimas disminuyen la

G o energa de activacin.
La energa libre de activacin
G, es la cantidad de energa
requerida para llevar 1 mol de
reactante al estado de
transicin.
a.- Disminucin de la energa de activacin.

La accin de la enzima es:

Atrae al sustrato al centro activo, por afinidad qumica, y asi
aumenta la concentracin efectiva de sustratos en el centro
activo (aumenta la probabilidad de choque)
Orienta al sustrato (reactante) en su centro activo con una
orientacin adecuada hacia los grupos catalticos del enzima,
de modo que se produzca la reaccin.

Las colisiones al azar de molculas reaccionantes en un medio

liquido son poco probables, y la orientacin de los grupos
reaccionantes, en la mayor parte de los casos no es la
adecuada, por lo que deben consumir mucha energa.
El centro activo del enzima, disminuye los requerimientos de
energa, pues fija a los sustratos mediante interacciones dbiles,
dndole una orientacin precisa y facilitando la reaccin.
 b.- Accin de los
grupos catalticos.
Los mecanismos son:
cido-base, y formacin
de complejos. En
ambos casos, los
grupos cataliticos del
centro activo provocan
la rotura o formacion de
enlaces en el sustrato,
y su consecuente
reaccion quimica.

Este efecto se ilustra con

un diagrama de perfil de
energa.
El gasto energtico en
estos procesos, es menor
a la energa de activacin
de la reaccin por catalizar.
MODELOS DE INTERACCIN (ESPECIFICIDAD)
Hay dos modelos propuestos sobre la forma en que el
sustrato se unira al centro activo del enzima: el modelo
llave-cerradura, y el modelo del ajuste inducido
a.- Modelo de llave y cerradura.
La estructura del sustrato y la del centro activo son
complementarias
Este modelo es vlido en muchos casos, pero no es
siempre correcto
b.- Modelo del ajuste inducido
El centro activo adopta la conformacin idnea slo en
presencia del sustrato.
La unin del sustrato al centro activo del enzima
desencadena un cambio conformacional que da lugar a
la formacin del producto.
 COFACTORES Y COENZIMAS
Algunas enzimas denominadas enzimas heteroprotenas, estn
formados por dos componentes, uno de naturaleza proteica llamado
apoenzima y otro no proteico, que puede ser inorgnico (cofactor), o
bien orgnico (coenzima)
El conjunto de los dos componentes, apoenzima y coenzima, forma
la enzima completa u holoenzima.
Solo algunas enzimas holoprotenas, estn constituidos solo por
secuencias de aminocidos, como la lisozima.
Algunos iones metlicos son cofactores. En el ser humano, los
cofactores mas frecuentes son: hierro, magnesio, manganeso,
cobalto, cobre, zinc y molibdeno. Todos ellos, son esenciales en
la dieta debido a su papel como cofactores.
Los iones metlicos en general proporcionan cargas positivas, y
los metales de transicin actan como cidos de Lewis (aceptores
de pares electrnicos).
 Coenzimas y vitaminas
Muchos coenzimas provienen de vitaminas, que, en
cantidades mnimas, son necesarias para el funcionamiento
de muchos organismos.
Su importancia biolgica se debe a que tales organismos
no las pueden sintetizar y deben adquirirlas del exterior.
La mayora de las vitaminas hidrosolubles, a excepcin de
la vitamina C, forman parte de alguno de los coenzimas
conocidos.

Por ejemplo la coenzima NAD, es

una molcula derivada de la
vitamina B5 (acido nicotnico), es
precursor de los cofactores NAD+ y
NADP+ y contribuye en la catlisis
de las reacciones de oxidoreduccion
intracelulares.
 La coenzima se encuentra en dos formas: NAD+ y NADH.
El NAD+ es un agente oxidante que acepta electrones e H+ de
otras molculas y se reduce a NADH, que puede ser utilizado
despues como donador de electrones.

La conversin del piruvato en lactato en microorganismos lcticos,

sucede gracias al NAD como transportador de electrones.
Del par de electrones que libera el sustrato, uno es transferido al
nitrgeno cargado positivamente del anillo nicotinamida del NAD+, y
un tomo de hidrgeno es transferido al carbono opuesto a este
nitrgeno.
La reaccin es reversible, cuando el NADH es re-oxidado a NAD+,
transfiriendo su electrn a otra molcula.
 IV. NOMENCLATURA
Hay varias formas de nombrar una enzima:
Nombres particulares
Nombre sistemtico
Cdigo de la comisin de enzimas

NOMBRES PARTICULARES.
Antiguamente, los enzimas reciban nombres
particulares, asignados por su descubridor.
Ejemplos: amilasa, pepsina, tripsina, glucoquinasa etc.

NOMBRE SISTEMATICO
Consta de 3 partes: El sustrato, el tipo de reaccin
realizada y la terminacin "asa. ejemplo: la glucoquinasa.
ATP: glucosa fosfo transferasa
Glc + ATP Glc-6P + ADP
Glucosa fosfato isomerasa.
 Codigo: Comisin de enzimas
La enzima es identificada por un cdigo numrico:
Encabezado por las letras EC (Enzyme Commission)
Seguidas de cuatro nmeros separados por puntos.
el primer nmero indica una de las seis clases de enzima,
el segundo se refiere a distintas subclases.
el tercero se refiere al grupo qumico especfico que
interviene en la reaccin.
El cuarto al orden de descubrimiento.

Ej.: la ATP: glucosa fosfotransferasa (glucoquinasa)

Glc + ATP Glc-6P + ADP
EC. 2..7..1..2.
2: Transferasa
7: fosfotransferasa
1: el aceptor es un grupo OH
2: es un OH de la D-glucosa
 Clase 1: OXIDORREDUCTASAS
Catalizan reacciones de oxidorreduccin, es decir, transferencia
de hidrgeno (H) o electrones (e-) de un sustrato a otro, segn la
reaccin general:
AH2 + B A + BH2
Ared + Box Aox + Bred
La oxidacin-reduccin en sistemas biolgicos implica
reacciones de transferencia de electrones acompaadas del
cambio compensatorio de la cantidad de hidrgeno y de oxgeno
en la molcula.
Ejemplo: las reacciones redox facilitadas por las
deshidrogenasas, como la deshidrogenasa alcohlica que
cataliza la oxidacin de etanol en acido acetico.
Las oxigenasas, las oxidasas y las peroxidasas, utilizan O2
como aceptor de electrones.
 Clase 2: TRANSFERASAS
Catalizan la transferencia de un grupo qumico (distinto del
hidrgeno) de un sustrato a otro, segn la reaccin:
A-B + C A + C-B
Los grupos transferidos son: aldehdos, acilos, glucosilos,
carbonilo, fosfatos (kinasas)
Ejemplo: glucoquinasa (ATP:glucosa fosfo transferasa), que
cataliza la reaccin:
glucosa + ATP ADP + glucosa-6-fosfato

En el metabolismo por
gluclisis, esta enzima
fosforila a una molcula
de glucosa, a partir de
ATP, con lo cual se inicia
la degradacion de la
glucosa, para obtener
energa.
 Clase 3: HIDROLASAS
Catalizan las reacciones de hidrlisis, especialmente de los
enlaces como C-O, C-N y O-P por la adicin de agua
A-B + H2O AH + B-OH
Un ejemplo es la lactasa (B-D-galactosidasa), que cataliza la
reaccin:
lactosa + agua glucosa + galactosa
Transforman polmeros en monmeros. Actan sobre
enlaces: ster, glucosdico, peptdico, C-N, etc.
 Clase 4. LIASAS
(adicin o ruptura de dobles enlaces)
Catalizan la ruptura de enlaces C-C, C-O, C-N y otros
enlaces para formar un doble enlace o se aaden a un doble
enlace.
Requieren de la participacin de un solo sustrato para
efectuar una reaccin en un sentido y de dos para realizar la
reaccin contraria. Descarboxilasas, aldolasas, hidratasas,
deshidratasas, desaminasas y sintetasas. .
Descarboxilasas, son liasas carbono-carbono que agregan
o remueven carboxilos de diferentes compuestos orgnicos.

Ejemplo: La piruvato
carboxilasa, que cataliza la
decarboxilacin del cido
pirvico a acetaldehdo y
dixido de carbono
 Clase 5: ISOMERASAS
Catalizan la interconversin de ismeros:
A B
Segn el tipo de reordenamiento intramolecular, pueden ser:
Epimerasas si catalizan la inversin de tomos de carbono
asimtricos y mutasas si catalizan la transferencia intramolecular
de grupos funcionales.
Ejemplo: la enzima glucosa isomerasa, que cataliza las reaccin:
gliceraldehdo-fosfato dihidroxiacetona-fosfato

La fructosa tiene capacidad edulcorante 30% mayor que la

sacarosa, 2.5 veces mayor que la glucosa y es 2 veces ms
soluble que la glucosa
 Clase 6: LIGASAS
Catalizan la unin de dos sustratos con hidrlisis
simultnea de un nucletido trifosfato (ATP, GTP, etc.):
A + B + XTP A-B + XDP + Pi
Ligasas y sintetasas.
Ejemplo: ADN-ligasa, que une los nucletidos a la cadena del ADN,
con consumo de ATP. Forma enlaces covalentes entre el extremo 5
de una cadena polinucleotdica y el extremo 3 de otra cadena
polinucleotdica.
 Clases y subclases E. C. para enzimas
1. XIDORREDUCTASAS
(Reacciones de oxidacin-reduccin)
1. Actan sobre CH-OH
2. Actan sobre C=O
3. Actan sobre CH=CH
4. Actan sobre CH-NH2
5. Actan sobre CH-NH
6. Actan sobre NADH o NADPH
7. Actan sobre otros compuestos nitrogenados
8. Actan sobre un grupo sulfuro
9. Actan sobre un grupo hemo
10. Actan sobre difenoles
11. Actan sobre perxido de hidrgeno
12. Actan sobre hidrgeno
13. Actan sobre donadores sencillos con incorporacin de 0, (oxigenasas)
14. Actan sobre donadores complejos con incorporacin de 02
15. Actan sobre radicales superxido
16. Oxidan iones metlicos
17. Actan sobre CH2
18. Actan sobre ferredoxina reducida
19. Actan sobre flavodoxina reducida Otras xidorreductasas
2.TRANSFERASAS
(Transferencia de grupos 3.HIDROLASAS
funcionales) (Reacciones de hidrlisis)
1. Grupos con un carbono 1. steres
2. Grupos aldehdo o cetona 2. Enlaces glucosdicos
3. Grupos acilo 3. Enlaces ter
4. Grupos glicoxilo 4. Enlaces peptdicos
5. Grupos alquilo o arilo 5. Otros enlaces C-N (diferentes
6. Grupos nitrogenados del peptdico)
7. Grupos que contienen fsforo 6. Anhdridos de cido
8. Grupos que contienen azufre 7. Enlaces C-C
8. Enlaces haluro
9. Enlaces P-N
10. Enlaces S-N
11. Enlaces C-P
 Ligasas:
EC 6.1, Forma uniones oxgeno-carbono.
4. LIASAS EC 6.1.1 Forman aminoacil-ARNt y
(Adicin a dobles compuestos relacionados.
enlaces) EC 6.1.2 Forman cido-alcohol (sintasas
1.Liasas C-C ster).
2.Liasas C-O EC 6.2, Forman uniones carbono-azufre.
3.Liasas C-N EC 6.2.1 Ligasas cido-tiol.
4.Liasas C-S EC 6.3, Forman uniones carbono-
5.Liasas C-haluro nitrgeno.
6.Liasas P-O EC 6.3.1 cido-amoniaco (sintasas amida).
7.Liasas C-P EC 6.3.2 Ligasas cido-aminocidos
(pptido sintasas).
5. ISOMERASAS EC 6.3.3 Ciclo-ligasas.
1.Racemosas y epimerasas EC 6.3.4 Otras ligasas carbono-nitrgeno.
2.Isomerasas cis-trans EC 6.3.5 Carbono-nitrgeno ligasas con
3.Oxidorreductasas glutamina como amido-N-donador.
intramoleculares EC 6.4, Forman uniones carbono-carbono.
4.Transferasas EC 6.5, Forman steres fosfricos.
intramoleculares EC 6.6, Forman unin nitrgeno-metal.
5.Liasas intramoleculares EC 6.6.1 Forman complejos de
coordinacin
Clases de Enzimas:
No. Clase Tipo de reaccin que Ejemplo
catalizan
Deshidrogenasas
1 Oxidorreduct De xido reduccin Peroxidasa
asas (transferencia de e-) Oxidasas
Oxigenasas
Reductasas
2 Transferasas Transferencia de grupos Kinasas
Transaminasas
3 Hidrolasas Hidrlisis, con transferencia de Pirofosfatasa
grupos funcionales del agua Tripsina
Aldolasa
4 Liasas Lisis de un substrato, (Sintasas)
generando un doble enlace, o Descarboxilasa
Adicin de un substrato a un pirvica
doble enlace de un 2o.
Substrato. (Sintasa)
5 Isomerasas Transferencia de grupos en el Mutasas
interior de las molculas para dar Epimerasas
formas ismeras Racemasas
6 Ligasas Formacin de enlaces C-C, C-S,
C-O y C-N. Mediante reacciones Sintetasas
de condensacin, acopladas a la
ruptura del ATP
 V. BASES DE CINETICA ENZIMATICA
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas.
La velocidad de una reaccin se define como el cambio de
la concentracin de un reactante o producto por unidad de
tiempo. La velocidad inicial Vo de la reaccin S ~ P, donde S
son molculas de sustrato y P de producto,
respectivamente, es:

FACTORES QUE AFECTAN LA VELOCIDAD

1.Concentracin de Enzima. En presencia de exceso de
sustrato, la actividad es proporcional a la concentracin
enzimtica
2.Concentracin de sustrato
3.pH
4.Temperatura
5.Presencia de actuadores o reguladores.
2. Concentracin de sustrato
Las reacciones enzimticas se saturan con el sustrato
(son autosaturantes)
La maxima velocidad de reaccion no depende solo de una
mayor concentracion de sustrato, sino principalmente de
que todos los centros activos esten actuando
 3. Efecto del pH
La actividad enzimtica pasa por un mximo (pH ptimo).
El pH ptimo de las enzimas vara ampliamente. Para la
pepsina, del estmago es de 1,5, para la arginasa es de 9,7.

La mayora de enzimas tienen un ptimo alrededor del pH

fisiolgico de, ~7.0
Explicacin: El sitio activo de la enzima contiene
frecuentemente grupos ionizables que deben en la forma
inica pueden unirse los sustratos o catalizar la reaccin.
Si varia grandemente la concentracin de iones H+, la enzima
se desnaturaliza.
 4. Temperatura
En la accin de la
temperatura hay dos efectos:
1.Aceleracin de la reaccin
segn la ecuacin de
Arrhenius. (dentro del
margen de actividad)
k = A exp (-Ea/RT)
Para casi todas las enzimas,
un incremento de 10C
duplica la velocidad de
reaccin.
2. Desnaturalizacin trmica
de la protena.
Para muchas enzimas la
regin de inactivacin
trmica est muy prxima de
la temperatura ptima.
 CINTICA DE REACCIONES CON UN SLO
SUBSTRATO
Leonor Michaelis y Maud Menten en 1913, propusieron un
modelo de dos etapas para relacionar la velocidad de reaccin
con la concentracin de substrato. Considerando la formacin de
un complejo ES intermedio.

La ecuacin ignora la reversibilidad del paso en el que el

complejo ES se convierte en enzima y producto. Esta
simplificacin es posible si se mide la velocidad de reaccin
cuando la [P] es an muy baja (velocidad inicial). Se asume que
la k_ es despreciable en comparacin con la k, Y que la
velocidad de formacin de ES es igual a la velocidad de su
degradacin durante la mayor parte del curso de la reaccin.
 Velocidad de reaccion VS concentracion
La ecuacin de Michaelis-
Menten describe como vara
la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas de
acuerdo a la concentracin de
sustrato:

1. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando

todos los centros activos estn ocupados con sustrato
(nunca alcanzada en la realidad)
2, Km (constante de Michaelis-Menten para cada enzima) =
concentracin de S a la que la V es 1/2 Vmax.
 Caractersticas de Km:
Es una medida de la afinidad del enzima por el S.
Cuanto menor es Km, mayor es la afinidad del enzima por el S.
Una Km pequea, refleja una gran afinidad por el sustrato, ya
que bajas concentraciones de sustrato son suficientes para saturar
al 50% de la enzima es decir, para alcanzar Vmax.
Una Km grande, refleja una baja afinidad de la enzima por su
sustrato, ya que son necesarias grandes concentraciones de
sustrato para saturar el 50% de la enzima.
 Km de algunas enzimas

ENZIMA SUSTRATO Km (mM)

Catalasa H2O2 25.0

Hexoquinasa ATP 0.4
D-Glucosa 0.05
D-Fructosa 1.5
Anhidrasa carbnica HCO3- 9.0
Quimotripsina Gliciltirosinilglicina 108.0
N-Benzoiltirosinamida 2.5
-Galactosidasa D-Lactosa 4.0
Treonina deshidrogenasa L-Treonina 5.0
 Vmax
Vmax es la velocidad mxima
terica de la reaccin. Se alcanza
cuando todos los centros activos
estn ocupados.
Para alcanzar la velocidad
mxima se requiere que [S] >> [E]
y que TODAS las molculas de
enzima estn unidas al sustrato.
Vmax se alcanza asintticamente
a medida que la concentracin de
sustrato aumenta
 CALCULO DE PARMETROS DE LA
ECUACIN
Los valores de la Km y de Vmx, se determinan midiendo
las velocidades iniciales de reaccin a varias
concentraciones de sustrato.
Los valores aproximados de la Km y de la Vmx pueden
obtenerse construyendo la hiprbola de Michaelis y
Menten.
Un mtodo ms exacto de estos valores se obtiene con
una transformacin algebraica de los datos a travs de una
linearizacion.
 Linearizacin de Lineweaver-Burk .

Artificio matemtico que

permite deducir grficamente
los valores de km y Vmax.
El artificio consiste en
convertir a la ecuacin M-M
en la ecuacin de una recta,
de forma Y = A + BX, donde:
Y = 1/v,
A = 1/Vm,
B = km/Vm, y
X = 1/[S]
 Ploteo de Eadie-Hostee
El ploteo se realiza vi contra vi/[S], con
ese fin se multiplica ambos miembros de
la inversa de la ecuacin M-M por
vi.Vmax obtenindose:
Vmax (vi) = Km.Vmax(vi) + Vmax(vi)[S]
vi Vmax[S] Vmax [S]

Vmax = Km.vi + vi
[S]
Ordenando:
vi = Vmax - Km.vi
[S]
Esta es una ecuacin de lnea recta de
la forma Y = a bX.
Pendiente= Km,
Ordenada en el origen= Vmax.
 Ploteo de Hanes- Wolf

[S] = Km. + [S] . 1 .

Vi Vmax Vmax

[S]
V 1
a x
Vm

Km
V max

[S]

0
 Ploteo Eisentahl-Cornish
Vmax = vi + vi.Km
[S]

V max

[S]
Km
 Limitaciones de Cintica Michaeliana
Para utilizar la ecuacin de Michaelis-Menten deben
asumirse:
1. La concentracin de sustrato [S] es mucho mayor que la
concentracin de enzima [E], de manera que la proporcin
de ES, es relativamente pequea.
2. [ES] no cambia en el tiempo (la velocidad de reaccion se
mantiene constante). La reaccin esta en equilibrio.
3. Deben usarse velocidades iniciales (vo). Es decir que
la velocidad de la reaccin debe determinarse tan pronto
como el sustrato y la enzima se mezclan. En dicho tiempo,
la concentracin de productos es despreciable, y por lo
tanto, la reaccin inversa de productos a sustratos puede
ser ignorada

Existen enzimas que no siguen la cintica Michaeliana

como las enzimas alostericas
 Actividad enzimtica
La actividad enzimatica: expresa la cantidad de sustrato
convertido por unidad de tiempo, teniendo en cuenta el
volumen y las condiciones ambientales.
La actividad enzimtica se mide en unidades internacionales
(IU), que es la cantidad de enzima que produce 1 mol de
producto por minuto.
En el SIU es el katal (kat), que es la cantidad de enzima que
transforma 1 mol de sustrato por segundo.
1 kat = 1 mol sustrato convertido x s-1 = 6x107 UI
1 UI = 1 mol sustrato convertido x min-1 = 16,67 nkat

Actividad especfica. Es la actividad de una enzima

por miligramo (mg) de protena, y da una idea de la pureza de
la enzima.
se suele expresar en: mol x min-1 x mg-1.
REGULACION DE LA ACTIVIDAD ENZIMATICA

INHIBIDOR: molcula o ion que al unirse a la enzima

produce una disminucin en la velocidad de la reaccin
catalizada.
Los inhibidores y los activadores, se usan en la
formulacin de: medicamentos, antibiticos, insecticidas,
herbicidas. Etc.
 VI. INHIBIDORES
Son molculas que al unirse a la enzima produce una
disminucin en la velocidad de la reaccin catalizada.
Los inhibidores se usan en la formulacin de: medicamentos,
antibiticos, insecticidas, herbicidas. Etc.
IRREVERSIBLES. Si la REVERSIBLES.
inhibicin es permanente La unin del inhibidor y
Se unen por medio de enlaces la enzima es reversible.
covalentes, que modifica la Al quitar el inhibidor del
enzima. medio, se recupera la
Ejemplo. Las toxinas actividad.
bacterianas, neurotoxinas, DDT,
cianuro, cido acetilsaliclico y Se unen a la enzima por
gases nerviosos. el mismo tipo de
Mercurio, plomo, y compuestos interacciones que se
arsenicales. producen entre las
In cianuro, CN-: Se fija con enzimas y los sustratos.
gran afinidad al Fe del complejo
citocromo oxidasa.
 a.-Inhibidores reversibles
Hay 3 tipos: Competitivos, No Competitivos y Acompetitivos.
Inhibidores competitivos
Tienen gran parecido estructural con el sustrato natural.
Compiten con el sustrato por ocupar el sitio activo de la enzima.
Una caracterstica de este inhibidor, es que se revierte
aumentando la concentracin de sustrato.

ejemplo 1. Aplicacin farmacolgica de las sulfamidas o sulfas.

 Efecto antibitico de sulfas
Las bacterias sensibles requieren
del (para amino benzoico) PABA
para producir cido dihidroflico,
un paso en la produccin de
purinas y la sntesis de cidos
nucleicos.
Las sulfamidas son anlogos
estructurales del PABA, inhibiendo
competitivamente a la enzima
dihidropteroato sintasa, y bloquea
la sntesis del cido flico
 Ejemplo 2. Efecto reversible metanol/etanol
El alcohol metlico, se produce durante la fermentacion alcohlica
del zumo de frutas con alto contenido de pectina, generando una
mezcla de etanol y metanol.
El metanol tiene efectos txicos postingesta, por formacion
metabolica de formaldehdo y cido frmico, que son txicos y
ocasionan cefaleas, y hasta convulsiones, coma y muerte.
La enzima alcohol deshidrogenasa, metaboliza al metanol y al
etanol, pero es 22 veces ms afn por el etanol que por el metanol,
razn por la cual se utiliza el etanol como antdoto de esta
intoxicacin, y se evita la formacin de los metabolitos txicos del
metanol. (fuente: Llins Chica, Vladimir)
 Cinetica competitiva
En la Inhibicin competitiva el sustrato (S) y el I compiten por la
enzima libre, pudiendo unirse uno o el otro, pero no ambos
simultneamente.
La unin de E a I conduce a la formacin de un complejo no
productivo.
La ecuacin cintica disminuye Km.
 b. Inhibicin No Competitiva
El inhibidor se une a un lugar diferente del centro activo, y
provoca la distorsin del centro activo, alterando la
conformacin de la enzima, lo que impide la formacin del
producto.
Los inhibidores no competitivos tienen escaso o nulo
parecido con el sustrato, pudiendo unirse solo con la enzima
o con el complejo ES, interfiriendo con la accin de ambos.
Ejemplo: El Yodoacetato es un agente alquilante que acta
como inhibidor de la enzima deshidrogenasa gliceraldehdo-
3-fosfato, de la via glicolitica. Se une a SH de cistena del
enzima y modifica el centro activo, dando un derivado
(carboximetilado) con un grupo SH. Es txico para los
mamferos, por que inhibe el metabolismo de la glucosa que
genera energa.
 Cintica No competitiva
Dado que una fraccin de molculas de la enzima es inactiva, no se
alcanza Vmax (Vmax disminuye), pero Km permanece constante.
V = Vmax. S . .1. Km se mantiene
Kmax+S (1+I/Ki)

Los inhibidores no competitivos son a menudo intermediarios

metablicos y regulan la progresin de las vas metablicas.
 c.- Inhibicin acompetitiva
Es un t5ipo de inhbicion no competitiva.
El inhibidor se une solo al complejo ES para dar siempre un
complejo inactivo EIS, estabilizndolo e impidiendo la
formacin de P.
Esta forma de inhibicin es poco frecuente en las
reacciones monosustrato, pero es frecuente en las
reacciones con dos sustratos.
En este caso: Km y Vmax disminuyen.
Su representacin en la forma linearizada toma la forma:
Diferenciacin de tipos de inhibiciones reversibles.

APLICACIONES:
Muchos medicamentos son inhibidores enzimticos.
 b.- Inhibidores irreversibles: Venenos
Los insecticidas mas usados son organofosforados y carbamatos.
Los organofosforados son steres de fosfato con O sustituido por S, u
otros radicales.
Con enlace P-C fosfonato,
Con enlace P-N fosforamido,
Con enlace P-S fosfotiolato.

gases nerviosos. (sarn, tabn, etc.)

Todos son inhibidores
de la enzima
acetilcolinesterasa
 Organofosforados.
Los impulsos nerviosos son activados por la acetilcolina, que
genera un circuito elctrico de transmisin de seal entre una
sensacin (nervio sensitivo) y un movimiento muscular (motor)
(Fernandez et al, 2010)

La acetilcolinesterasa es una
enzima que hidroliza la
acetilcolina, interrumpiendo el
impulso nervioso.
Acetilcolina --- colina + acetato
Los organofosforados tienen un grupo ester fosfato, que forma un
enlace estable con los restos de serina (grupos OH) en el centro
activo de la enzima.
Al inhibir la enzima acetilcolinesterasa en las terminaciones
nerviosas, se acumula acetilcolina, en las uniones neuroefectoras,
lo que altera el funcionamiento del impulso nervioso.

Accin del fluorofosfato de di isopropilo DIPF

El DIPF inhibe tambin a otras enzimas sernicas, como
quimotripsina, tripsina, fosfoglucomutasa, etc.
 Antdotos. Atropina, Oximas, PAM
Son sustancias que tienen
mayor afinidad por el veneno
que con la serina.
Ejemplo: PAM (piridn-2-
aldoxim-metayoduro).Tiene un
ion amonio cuaternario que se
une al lugar aninico del centro
activo de la E inhibida.
El grupo hidroxilamina del PAM
ataca al fosforilo, formando un
complejo y liberando la E.
En intoxicacin con
Carbamatos, est
contraindicado utilizar oximas
como antdoto. En cambio se
usa atropina.
 VII. REACCIONES CON MS DE UN
SUSTRATO
Algunas enzimas catalizan reacciones con dos o mas
sustratos que se influyen mutuamente.
A + B--- C + D
En la mayora de estas reacciones hay transferencia de
un grupo funcional especfico desde un sustrato hacia el
otro (p. ej., grupos fosfato o metilo), o bien se realizan
reacciones de oxidacin-reduccin en que los sustratos
son coenzimas redox (p. ej., NAD+/NADH o FAD/FADH2
Entre ellas estn las transferasas que transfieren un grupo
especifico desde un sustrato a otro.
(ATP:glucosa fosfo transferasa), que cataliza la reaccin:
glucosa + ATP ------ ADP + glucosa-6-fosfato

Mecanismos para explicar este tipo de reacciones. La

mayora pueden clasificarse en dos tipos:
a)Por formacin de complejo ternario;
b) Reacciones ping-pong
a.- Reacciones mediante formacin de un complejo
ternario.
El complejo ternario puede formarse de manera aleatoria, o
en un orden determinado.

Mecanismo aleatorio. Los substratos A y B forman un

complejo con la enzima. Cualquiera de ambos puede
combinarse con para formar el complejo ternario EAB,
que conduce a los productos X e Y y a regenerar la
enzima:
Mecanismo ordenado. Un substrato (A) se une inicialmente con la
enzima formando el complejo EA. El segundo substrato slo se une al
complejo EA para conducir al complejo ternario EAB:

b.- Reacciones sin formacin de un complejo ternario. Ping-pong.

Se forma un complejo de la enzima con un sustrato (EA), que libera
el producto X, quedando como EA' (Ejplo, un acil-enzima), el
segundo sustrato se une al complejo (ejemplo, transfirindose el
grupo acilo). EC 2.3
 VIII. ENZIMAS ALOSTERICAS
Son enzimas generalmente multimericas con sitios de unin a
sustratos (centro activo) y efectores (sitio alostrico).
La actividad cataltica puede modularse (aumentar o disminuir)
mediante unin de molculas efectoras, en sus sitios alostricos,
lo que induce cambios de conformacin que pueden incrementar
o reducir su velocidad de unin al sustrato.
Presentan una cintica sigmoidal, indicativa de efectos
cooperativos en la unin del sustrato. (No Michaeliana)
 Enzimas alostericas
Los efectores pueden ser activadores o inhibidores.

Control por inhibicion.

Mediante interaccin de los sustratos y productos de cada
reaccin con la enzima
hexoquinasa
Glucosa + ATP ----------> Glucosa-6-fosfato + ADP

El propio producto de la reaccin puede inhibir

competitivamente a la enzima
Un ejemplo es el control de la glicolisis en la enzima
fosfofructokinasa por la concentracin del ATP
 Ejemplos de cinetica.
1. En una reaccin enzimtica que transcurre con una
concentracin de enzimas de 0,015g/l, se obtienen lo siguiente:
[S] (g/l) 20 15 10 7.0 5.0 4.0 3.0 2.5
v(g/l-min)1.14 1.01 0.87 0.72 0.59 0.5 0.44 0.35
Deduzca el modelo que representa la cintica del proceso.
Representando
grficamente se tiene:
 Deduccin de los, coeficientes de la ecuacin de
Monod.

S v (g/l-min) 1/S 1/v

20 1.14 0.05 0.877
15 1.01 0.066 0.990
10 0.87 0.10 1.149
6.5 0.70 0.15 1.428
5.0 0.59 0.20 1.695
4.0 0.50 0.25 2.000
3.3 0.44 0.30 2.273
2.5 0.35 0.40 2.857
 Grafica Linewaber-Burk

Interaccin.=
1/v
1/vmax=0.614
vmax = 1.628 g/l-
3.0000
min.
Pendiente:
y = 5.3879x + 0.6147
2.5000 R = 0.9914

Km/vmax. = 5.387
Km = 8.776 g/l
2.0000

1.5000 El modelo ser.

V =
1.0000
Vmax.S/(Km+S)
0.5000 V =
0.0000
1.628S/(8.776+S)
0.000 0.050 0.100 0.150 0.200 0.250 0.300 0.350 0.400 0.450

Comprobar por
Eadi-Hostie
 Lienalizacion de Eadie-Hostfee

V = Vmax Km.V/S

v/S
0.160

0.140

0.120

0.100

0.080

0.060
y = -0.1148x + 0.1861
0.040 R = 0.9758

0.020

0.000
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
 Ejercicio 2
Se investig el efecto de un inhibidor I sobre la velocidad de una
reaccin catalizada enzimticamente sobre un solo sustrato,
obtenindose los siguientes resultados
Concentracin de sustrato Concentracin del inhibidor
(mmol L -1) (mmol L -1)
0 0.5 1.0
Velocidad de reaccin (mol L -1 min-1)

0.05 0.33 0.20 0.14

0.10 0.50 0.33 0.25
0.20 0.67 0.50 0.40
0.40 0.80 0.67 0.57
0.50 0.83 0.71 0.63

A) De que manera acta el inhibidor? B) Obtngase los valores

para Vmx, y Km.
 SOLUCIN A) La manera ms sencilla de deducir cmo
acta un inhibidor es graficar 1/n0 en funcin de 1/[S]0 para
cada concentracin del inhibidor.

Grfica de Lineweaver-Burk del efecto de un inhibidor

A partir de la grfica se puede observar que la pendiente de
las curvas se modifica con los cambios en la concentracin
del inhibidor pero no la interseccin en el eje 1/n0 (1/Vmax).
Por ello los datos anteriores indican que el inhibidor I est
actuando como un inhibidor competitivo.

B) De la interseccin en el eje 1/v0 se puede estimar Vmax=

1(mmol L -1 min-1) y de la interseccin con el eje 1/[S]0 los
valores de Km=0,1 (mmol L -1) sin ihnhibidor, Km=0,2(mmol L
-1) con 0.5(mmol L -1) de inhibidor y K =0,3 (mmol L -1) con
m
1(mmol L-1)
 REFERENCIAS
Muoz Clares Rosario A., Daz Snchez ngel G., Montiel
Carmina. Como convertir a un inhibidor competitivo en
incompetitivo: el caso de las betanas aldehdo
deshidrogenasas. Mensaje bioqumico, Vol. XXXIII. ISSN-
0188-137X. 2009. UNAM. Mxico D. F., Mxico.
Fernndez Daniel G., Mancipe Liliana C. y Fernndez
Diana C. Intoxicacin por organofosforados. Universidad
Pedaggica y Tecnolgica de Colombia UPTC. Revista de
la facultad de medicina. Pp 64-92. Volumen 18. No. 1 -
Enero - Junio de 2010.
Villavicencio Nez Marino. Bioqumica. Edicin
CONCYTEC. Lima, 1993.
Stryer Lubert. Bioqumica. Editorial REVERTE S.A. 1990.