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2017
MINISTRIO DA EDUCAO
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE
PR-REITORIA DE PS-GRADUAO E PESQUISA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM AGRICULTURA E BIODIVERSIDADE
Orientador
Prof. Dr. Arie Fitzgerald Blank
SO CRISTVO
SERGIPE BRASIL
2017
FICHA CATALOGRFICA ELABORADA PELA BIBLIOTECA CENTRAL
UNIVERSIDADE FEDERAL DE SERGIPE
CDU: 582.929.4
VANDERSON DOS SANTOS PINTO
Prof. Dr. Alisson Marcel Souza de Oliveira Prof. Dr. Marcelo da Costa Mendona
PPGAGRI/UFS UNIT
SO CRISTVO
SERGIPE BRASIL
Aos meus pais, namorada, ao
GPMACOe amigos
Dedico
AGRADECIMENTOS
Obrigado
BIOGRAFIA
Pgina
LISTA DE FIGURAS ..................................................................................................... i
LISTA DE TABELAS .................................................................................................... ii
RESUMO ........................................................................................................................ iii
ABSTRACT .................................................................................................................... iv
1.INTRODUO ............................................................................................................ 1
2.REVISO DE LITERATURA ..................................................................................... 2
2.1 Botnica, origem e usos ......................................................................................... 2
2.2 Aspectos morfolgicos de L. alba ......................................................................... 2
2.3 Diversidade qumica nos leos essenciais de plantas aromticas .......................... 6
2.4 Melhoramento gentico de espcies aromticas .................................................... 9
2.5 Atividade formicida de leo essencial ................................................................... 11
2.6 Carvona e sua atividade inseticida ......................................................................... 12
3.REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .......................................................................... 14
4. CAPTULO 1: A IDADE DA PLANTA AFETA O TEOR E COMPOSIO
QUMICA DOS LEOS ESSENCIAIS DE GENTIPOS DE Lippia alba .................. 21
RESUMO ..................................................................................................................... 21
4.1 Introduo .............................................................................................................. 22
4.2 Material e Metodos ................................................................................................ 23
4.2.1 Material vegetal e delineamento experimental ................................................... 23
4.2.2 Extrao e anlise do leo essencial ................................................................... 23
4.2.3 Anlise estatstica ............................................................................................... 24
4.3 Resultados .............................................................................................................. 24
4.4 Discusso ............................................................................................................... 26
4.5 Referncias............................................................................................................. 28
5. CAPTULO 2: A SELEO RECORRENTE RESULTA EM
ALTERAESMORFOAGRONOMICAS E AUMENTO DA ATIVIDADE
FORMICIDA EM Lippia alba ......................................................................................... 37
RESUMO ......................................................................................................................... 37
5.1 Introduo .............................................................................................................. 38
5.2 Material e Mtodos ................................................................................................ 39
5.2.1 Material vegetal .................................................................................................. 39
5.2.2 Obteno das prognies ...................................................................................... 39
5.2.3 Produo das mudas e sua multiplicao ............................................................ 39
5.2.4 Ensaio de competio ......................................................................................... 40
5.2.5 Variveis avaliadas ............................................................................................. 40
5.2.6 Atividade formicida ............................................................................................ 41
5.2.7 Anlise estatstica ............................................................................................... 42
5.3 Resultados .............................................................................................................. 42
5.4 Discusso ............................................................................................................... 43
5.5 Referncias Bibliogrficas ..................................................................................... 46
6. CONSIDERAES FINAIS ....................................................................................... 52
ANEXOS ......................................................................................................................... 54
i
LISTA DE FIGURAS
Figura Pgina
2.1 Estruturas vegetais da Lippia alba. A: Planta de Lippia alba. B: Fitotaxia
oposta de folhas. C: Folhacom borda serreada. D: Inflorescncia.................. 3
2.2 Tipos de inflorescncias de espcies do gnero Lippia. A: espiga cilndrica
deLippia augustifolia. B: espiga cilndrica de Lippia laxibracteata. C: espiga
capituliforme de Lippia lupulina. D: espiga capituliforme de Lippia alba. E e
F: representao de inflorescncias ................................................................ 4
2.3 Variao de cores em inflorescncia de Lippia alba. A: Flores antes da
fecundao. B: Flores aps fecundao .......................................................... 5
2.4 A. mellifera em inflorescncia de Lippiaalba ................................................. 6
2.5 Representao de estruturas moleculares responsveis pela cor da flor de
Lippiaalba ....................................................................................................... 6
2.6 Formiga quenqun (Acromyrmex sp.) ............................................................. 11
4.1 Agrupamento dos acessos de Lippia alba com um ano de idade (A) e 10 anos
(B) com base no mtodo de agrupamento de Ward ........................................ 34
4.2 Distribuio dos constituintes qumicos dos leos essenciais de Lippia alba
em relao aos dois componentes principais atravs da anlise de
componente principal (ACP) com um ano (A) e 10 anos de idade (B). ......... 35
4.3 Mdias com erros padro da mdia, dos constituintes qumicos dos leos
essenciais dos grupos I e II de Lippia alba com um ano e 10 anos de idade.. 36
5.1 Efeito da mortalidade de A. balzani para as concentraes 0.01 e 0.3 L L-1
para parentais e prognies do primeiro ciclo de seleo recorrente ............... 51
ii
LISTA DE TABELAS
Tabela Pgina
2.1 Atividade biolgica da carvona em pragas agrcolas ..................................... 13
4.1 Identificao e origem de 18acessosda coleo de Lippia albado Banco
Ativo de Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da Universidade
Federal de Sergipe, municpio de So Cristvo, Estado de Sergipe, Brasil . 32
4.2 Mdia dos constituintes qumicos de 18 acessos da coleo de Lippia alba
do Banco Ativo de Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da
Universidade Federal de Sergipe, com 1 e 10 anos de idade ......................... 33
4.3 Coeficientes de correlao para os constituintes qumicos dos leos
essenciais de acessos de Lippia alba com um e 10 ano de idade de planta.... 38
5.1 Resumo da anlise de varincia para variveis morfoagronmicas,
composio qumica e atividade formicida de gentipos do primeiro ciclo de
seleo recorrente de Lippia alba Federal de Sergipe, municpio de So
Cristvo, Estado de Sergipe, Brasil. ............................................................. 50
5.2 Valores mdios para altura de planta (AL), hbito de crescimento (HC), rea
foliar (AF), massa seca de folha e inflorescncia (MSF), concetrao de leo
essencial (OE), atividade formicida sobre Acromyrmex balzani e principais
compostos qumicos detectados na anlise qumica entre parentais e
prognies do programa de melhoramento de Lippia albada UFS, So
Cristvo, Sergipe, Brasil ............................................................................... 51
iii
RESUMO
PINTO, Vanderson dos Santos. Influncia da idade da planta na composio qumica do
leo essencial de Lippia alba e de um ciclo de seleo recorrente na atividade formicida.
So Cristvo: UFS, 2017. 54p. (Dissertao Mestrado em Agricultura e Biodiversidade).*
___________________
* Comit Orientador: Arie Fitzgerald Blank UFS (Orientador), Thiago Matos Andrade UFS (co-orientador).
iv
ABSTRACT
PINTO, Vanderson dos Santos. Influence of plant age on the chemical composition of the
essential oil of Lippia alba and of a recurrent selection cycle on formicidal activity. So
Cristvo: UFS, 2017. 54p. (Thesis - Master of Science in Agriculture and Biodiversity).*
Brazilian lemon balm (Lippiaalba (Mill.) N. E. Brown) is a medicinal and aromatic species
widely used to fight diseases. Its essential oil, rich in carvone, has insecticidal activity on
pests of agricultural interest. Cutting ants cause severe economic damage to forest and
horticultural species and hinder cultivation worldwide. Plant aging is one of the main factors
that alter the biological activity of essential oils. The objective of this work was to evaluate
the influence of plant age on the essential oil of L. alba accessionsand of a recurrent selection
cycle onformicidal activity. The experiments were carried out at the Experimental Farm -
Campus Rural UFS.The experiment consisted of a randomized blocks design with three
replications. For the first experiment, 18 L. albaaccessions were used at two plant ages: one-
year-old plants (February2006), and ten-year-old plants (February 2016). In the second
experiment, a recurrent selection cycle was carried out with three accessions of the
limonene/carvonechemotype. For the progeny competition experiment, three parent genotypes
and 11 progenies were taken to the field. In the first experiment, plant age influenced the
essential oil production and the chemical composition.The highest essential oil content
increase was observed for accessions LA-41 (0.69-2.48%) and LA-53 (0.76-2.84%). The
compounds with the greatest variation in the second harvest were p-cymene (0.00-5.12%),
limonene (0.00-11.08%), and elemol (0.00-10.54%), because of plant aging. In the second
experiment, the highest dry weight of aerial part was observed for parental LA-56 (57.54 g
plant-1). The essential oil content was higher in the progeny LA-57-10 (2.844%) and the
parental LA-57 (2.664%). Carvone concentration was higher for LA-57 (59.02%), with a
significant difference when compared with the evaluated progenies. Among the progenies, the
highest carvone concentration was observed for LA-56-04 (57.78%) and the lowest for LA-
57-01 (17.71%) and LA-57-02 (17.27%).One recurrent selection cycle resulted in increased
formicidal activity of some progenies. Higher mortility of Acromyrmex balsani was caused by
the essential oils of the progenies LA-56-04 and LA-70-03.
Key words: Brazilian lemon balm, secondary metabolism, plant breeding, insecticidal
activity.
___________________
* Supervising Committee: Arie Fitzgerald Blank UFS (Advisor), Thiago Matos Andrade UFS (Co-advisor).
1
1. INTRODUO GERAL
A Lippia alba uma planta nativa brasileira, pertence a famlia Verbenaceae e que
pode ser encontrada em diversos estados e biomas. A espcie possui grande popularidade
devido seu uso na medicina popular para a cura de enfermidades como dores de barrigas e
insnia. Sua ao medicinal proporcionada pela produo de leos essenciais em resposta a
interao gentipo x ambiente, como forma de defesa a fatores biticos (patogenos) e
abiticos (estresses hdricos e trmicos) que comprometem a sobrevivncia da planta no
ecossistema (SANTOS e CARLESSO, 1998; VIANA e SOUZA, 2002).
A L. alba caracterizada por ser uma planta produtora de leo essencial, sua ampla
diversidade qumica foi comprovada atravs de estudos realizados por Blank et al. (2015),
avaliando gentipos do Banco de Germoplasma da Universidade Federal de Sergipe, que
observaram a presena de seis grupos qumicos: Grupo 1 (linalol, 1,8-cineol e xido de
cariofileno); Grupo 2 (linalol, geranial, neral, 1,8-cineol e xido de cariofileno); Grupo 3
(limoneno, carvona e sabineno); Grupo 4 (Carvona, limoneno, g-muurolene e mirceno);
Grupo 5 (neral, geranial e xido de cariofileno); Grupo 6 (geranial, neral, o-cimeno, limoneno
e xido de cariofileno), destacando-se como compostos mais abundantes o 1,8-cineol, linalol,
mirceno, limoneno, carvona, geranial e neral.
Os leos essenciais possuem ao bioativa sobre insetos pragas. As formigas
cortadeiras, principalmente os gneros Acromyrmex e Atta, provocam danos milionrios em
cultivos agrcolas e florestais. Esses gneros so responsveis pelo desfolhamento e uso no
cultivo do fungo Leucoagaricus gongylophorus, alimento das formigas. Como alternativa ao
controle qumico, o uso de plantas aromticas torna-se vivel por ser menos danoso ao
ecossistema e na gerao de renda para pequenos e mdios produtores rurais (SANCHES et
al., 2003; NEHRING et al., 2015).
O potencial bioativo da L. alba trouxe interesse de instituies de pesquisas em
estudar e caracterizar materiais genticos nativos para introduo em programas de
melhoramentosque visam o desenvolvimento de cultivares adaptadas a regies produtoras e
que possuam alto teor de compostos qumicos majoritrios com ao comprovada na literatura
como a carvona (PEIXOTO et al., 2015). No entanto, a exposio da planta a fatores
ambientais pode favorecer alteraes morfolgicas e fisiologicas na planta que alteram a
composio e composio do leo essencial na espcie.
O processo de envelhecimento vegetal um dos principais fatores que contribui com
as alteraes na composio qumica da planta. Segundo Pandel et al. (2012), a produo de
leo essencial em folhas oriundas de segmentos nodais mais desenvolvidos reduzem o
contedo de constituintes majoritrios como a carvona, neral, geranial e linalol. Esse efeito foi
comprovado em experimento realizado com a Lippia sidoides por Santos et al. (2015), que
observaram a reduo do composto timol em plantas com oito anos de idade.
O objetivo do trabalho foi avaliar a influncia da idade da planta nos leos essenciais
de gentipos de L. alba e de um ciclo de seleao recorrente na atividade formicida.
2
2. REVISO DE LITERATURA
climticas e nutricionais do solo. Sua copa apresenta dimetro variando entre 60-474 cm entre
ramificaes opostas (MARCHESE et al., 2010; CAMLO et al., 2011).
As folhas possuem filotaxia oposta, com formas elpticas ou lanceoladas, bordas
serreadas e ausncia de estipula na base do pecolo (Figura 2.1) (AGUIAR e COSTA, 1998;
DE ROMERO et al., 2010). De acordo com estudo de diversidade morfolgica com 48
gentipos de L. alba oriundos de Estados localizados nas cinco regies do Brasil [Centro-
Oeste (18), Nordeste (21), Norte (1), Sudeste (6) e Sul (2)], o comprimento da folha sofre
variao de 3,0-9,30 cm, com superioridade de mdia para gentipos das regies Centro-
Oeste e Nordeste. No entanto, a largura da folha que apresenta intervalo entre 1,91-5,70 cm
no mostrou influncia da origem para essa varivel, mas sim, o efeito da interao Gentipo
X Ambiente (CAMLO et al., 2011).
Figura 2.1. Estruturas vegetais da Lippia alba. A: Planta de Lippia alba. B: Fitotaxia oposta
de folhas. C: Folha com borda serreada. D: Inflorescncia.
maior a diferena de cor na mesma flor, maior o nmero de indivduos que iro frequent-la
(BRISCOE e CHITTKA, 2001; BARNIO et al. 2016).
A L. alba uma das espcies que apresenta maior longevidade floral e variabilidade
de cores na corola em relao a outras espcies do mesmo gnero (MUOZ et al., 2007).
Suas flores apresentam particularidade na saturao de cores, pois, as bordas das ptalas
apresentam colorao que varia de roxo a rosa, entretanto, a regio central prxima da antera
apresenta colorao amarelada com variao em sua tonalidade (Figura 2.3) (RZEDOWSKI
et al., 2002).
O estigma da flor permanece vivel por trs dias aps a fecundao, as flores alteram
sua colorao para tonalidades prximas do roxo na regio central das flores para indicar aos
polinizadores que a flor no est disponvel para receber o gro de plen. Apesar disso, a L.
alba apresenta florao contnua, sendo influenciada por fatores climticos e ecolgicos
(Figura 2.3) (VENNCIO, 2010).
A A
B
A polinizao das flores da L. alba realizada com maior frequncia por insetos como
Apis mellifera (Abelha africanizada), Paratetrapedia sp. (Abelhas silvestres) e Ceratina sp.
(Abelhas solitrias) (Figura 2.4). Apesar da ocorrncia de outras espcies de maneira
ocasional, o principal polinizador a A. mellifera que apresenta um amplo perodo e horrio
de forrageamento das flores (VENNCIO, 2010). Um estudo realizado pela universidade de
Helsnquia na Finlndia, que avaliou a interao das cores da flor com A. mellifera, mostrou
que a espcie possui uma ampla preferncia pela cor amarela na coleta de nctar e plen, alm
disso, cores prximas do azul causam repelncia na espcie, o que provavelmente explica a
mudana de cor nas flores da L. alba aps sua fecundao (GRUTER et al., 2011).
A formao das cores na flor resultado da interao existente entre o gentipo e o
ambiente, no entanto, a variao na intensidade dessa justificada pela dominncia de um
alelo sobre o outro no genoma da planta. Um ensaio com a espcie Phlox drummondii foi
realizado com objetivo de avaliar a influncia de genes na expresso das cores das flores. O
experimento contou com a realizao de hibridizaes em plantas com flores claras e escuras
da espcie e posterior avaliao das prognies. Com isso, observou-se que a expresso de
cores mais escuras na planta resultado de alelos dominantes, o que proporcionou um maior
nmero de prognies com essas caractersticas, no entanto, a baixa ocorrncia de plantas com
flores claras indica recessividade nos genes responsveis por sua expresso (KOPKINS e
RAUSHER, 2012).
6
Figura 2.5. Representao de estruturas moleculares responsveis pela cor da flor de Lippia
alba.
entanto, o uso de adubao orgnica base de esterco, aumenta o teor dos compostos em
colheita aos 120 dias aps o plantio. A adoo das duas prticas pode render uma
produtividade aproximada de 11 L ha-1 de leo essencial rico em carvona e limoneno para
usos comerciais e experimentais (SANTOS e INNECCO, 2004).
Barros et al. (2009) comprovaram a influncia da estao do ano no teor e rendimento
do leo essencial de L. alba.Os resultados demonstraram que a presena de chuva durante a
colheita reduz significativamente os teores do leo, com perda de aproximadamente 20% em
relao s pocas mais secas. Com isso, as maiores mdias de teores foram obtidas em
colheita realizada no vero (0,67%), com precipitao acumulada de aproximadamente 100
mm de chuva e temperatura mdia de 25,7C.
A variao climtica no ambiente ocasiona distino nas classes de compostos
presentes no leo essencial da espcie. Barros et al. (2009) observaram tambm que a colheita
realizada no ms de janeiro proporciona uma maior biossintese de compostos sesquiterpnicos
(C15) em relao aos monoterpnicos (C10), no entanto, mesmo com a reduo de
monoterpenos, a presena em climas mais frios e chuvosos aumenta significativamente.
Alguns compostos como o (E)-carveol, linalol, mirceno e oxido de cariofileno sofrem
redues nos teores na presena de chuva, entretanto, compostos como sabineno, limoneno,
1,8-cineol, (E)-cariofileno, germacreno D, germacreno B e germacreno-D-4-ol tm aumento
expressivo nos teores. Alm disso, compostos como a-pineno, cnfora, pinocarvona, borneol,
B-elemene, -humuleno, -muuruleno, cubebol e -cadinol passam a ser biossintetizados
como composto minoritrio com variaes de 0,9 a 0,2% no leo essencial.
A idade da planta mostra-se um dos principais fatores na alterao da composio
qumica em plantas do gnero Lippia.Um experimento realizado por Santos et al. (2015) foi
conduzido com objetivo de avaliar a influncia da idade da planta na composio qumica de
gentipos de Lippia sidoides com dois e oito anos de idade do banco de germoplasma da
espcie na Universidade Federal de Sergipe. O envelhecimento das plantas provocou a
reduo no teor do composto majoritrio timol e p-cimeno, como tambm, o aumento no teor
de compostos minoritrios nos gentipos avaliados.
Pandel et al. (2012) observaramque o envelhecimento vegetal tem influncia gentica
na biossintese do linalol, carvona e citral (neral/geranial) que so regulados pela expresso de
trs genes LaTPS12 (linanol) LaTPS23 (carvona) e LaTPS25 (citral). A expresso desses
genes ocasiona a sntese de enzimas responsveis pela produo de cerca de 120 aminocidos
na planta, entretanto, o envelhecimento foliar reduz os teores dos trs compostos no oitavo
segmento nodal com teores de 15% (citral), 21% (carvona) e 12% (linalol). A obteno de
leo em folhas do quarto segmento nodal demonstra aumento significativo no teor dos
compostos qumicos com mdias de 47% (citral), 66% (carvona) e 36% (linalol) superiores as
mdias em folhas mais velhas (PANDEL et al., 2012).
Cui et al. (2011) verificaram que plantas mais velhas expressam genes presentes nos
tricomas glandulares, apndices epidrmicos unicelulares ou multicelulares que so
responsveis pela sntese e secreo de metabolitos secundrios em resposta a estresses
biticos e abiticos, sendo importantes na produo e armazenamento de leo essencial na
planta.
De acordo com Liu et al. (2015), o desenvolvimento foliar altera radicalmente a
composio qumica nas glndulas excretoras, a exemplo da espcie Populus euphratica, que
apresenta uma maior atividade fotossinttica em folhas em desenvolvimento e maduras com
aumento significativo no nmero de compostos e resistncia a estresses como a seca e insetos
pragas.
9
Espinhos
Nickele et al. (2009), que estudou a densidade de formigueiros em reas de cultivo de pinus
recm-plantadas, concluiu que as formigas possuem uma grande capacidade de multiplicao
na rea agrcola, pois, essas apresentam mais de duas rainhas no ninho e aps o manejo
inadequado multiplicam-se atingindo densidade de at 16 formigueiros.ha-1 causando corte
de plntulas e poda de parte rea em mudas recm-plantadas.
A principal estratgia de controle para formigas cortadeiras envolve o uso de
inseticidas qumicos sintticos. Atualmente no sistema de agrotxicos fitossanitrios
(AGROFIT), sistema vinculado ao ministrio da agricultura, aproximadamente 27 produtos
sintticos esto registrados para controle de 28 espcies de formigas do gnero Acromyrmex,
entretanto, o uso indiscriminado desses produtos pode provocar danos ao meio ambiente e
resistncia do inseto praga por presso de seleo (SANCHES et al., 2003; AGROFIT, 2017).
Como alternativa ao controle qumico, o uso de plantas aromticas torna-se vivel por
ser menos danoso ao ecossistema e proporcionar a gerao de renda para pequenos e mdios
produtores rurais. Algumas espcies possuem atividade biolgica contra formigas cortadeiras,
dentre elas, o Sambacait (Hyptis pectinada) apresenta toxicidade para as espcies
Acromyrmex balzani e Atta sexdens rubropilosa com concentrao letal (CL50) que variam
entre 3,48 a 8,18 g.mg-1 do leo essencial (FEITOSA-ALCANTARA et al., 2017).
Oliveira et al. (2017) verificaramque o leo essencial da espcie Aristolochia tribata
possui atividade formicida sobre a espcie de formiga cortadeira A. balzani e Atta sexdex nas
vias de exposio fumigao e contato. Os principais compostos relacionados ao
inseticida foram o p-cimeno (LC50 5,75 L L-1), limoneno (2,40 L L-1) e linalol (2,18 L L-1)
que so majoritrios na planta.
Jung et al. (2013) observaram que concentraes de 1,25, 2,5 e 5% do leo essencial
de pitanguera (Eugenia uniflora) possuem potencial para uso no controle alternativo da
formiga cortadeira Atta laevigata.
novamente sua biossntese aumentada para 54,91% s 14h.Esses resultados demonstram que a
presena do composto majoritrio aumenta ou diminui de acordo com a temperatura diria.
Apesar da variao no teor, o composto tem apresentado atividade biolgica em
pragas agrcolas de importncia econmica (Tabela 1). Atualmente, plantas como Anethum
graveolens, Mentha spicata, L. alba e Origanum vulgare possuem potencial para
desenvolvimento de pesticidas naturais para controle de caros, fitopatgenos e insetos
fitfagos que trazem prejuzo para agricultura em regies tropicais (KEDIA et al., 2014;
PEIXOTO et al., 2015).
Outra importante aplicao da carvona na agricultura est relacionada inibio de
brotaes de batata durante o armazenamento. De acordo com experimento realizado por
Hartmans et al. (1995),a carvona proporciona inibio de brotaes a longos perodos de
armazenamentos, aliados a baixas temperaturas, com efeito superiores a produtos comerciais
testados como padro. Alm disso, a presena da carvona reduziu a incidncia de fungos
como Fusarium sp. e Rhizoctonia sp. que degradam e reduzem a qualidade do produto antes
de chegar a mesa do consumidor.
3. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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21
4. CAPTULO 1
A IDADE DA PLANTA AFETA O TEOR E COMPOSIO QUMICA DOS LEOS
ESSENCIAIS DE ACESSOS DE Lippia alba.
RESUMO
A Lippia alba (Mill.) N. E. Br uma planta aromtica com origem no continente americano e
com ampla distribuio no mundo. O potencial farmacolgico e pesticida est associado
produo de leo essencial que possui diversos compostos qumicos que em sinergismo
proporciona atividade superior a produtos sintticos comerciais, no entanto, o envelhecimento
vegetal altera a dinmica fotossinttica e pode alterarqualitativamente sua produo. Com
isso, o objetivo do trabalho foi avaliar a influncia da idade da planta na constituio qumica
de acessos de L. alba. O experimento foi conduzido na fazenda experimental Campus Rural
da UFS. As colheitas foram realizadas em fevereiro de 2006 e fevereiro de 2016. Para a
extrao leo essencial, as plantas foram cortadas a 20cm do solo e desfolhadas
posteriormente. As folhas e inflorescncias passaram por secagem a 40C por cinco dias em
estufa de circulao de ar forado. O leo essencial foi obtido por hidrodestilao e
posteriormente analisado em cromatografia gasosa (CG/EM-DIC). Os resultados
demonstraram um aumento significativo no nmero de compostos na segunda colheita da
planta para os acessos LA-02 (0,00-11,08%), LA-44 (0,00-10,54%), LA-29 (0,00-7,65%) os
compostos mirceno, p-cimeno, -terpineno e elemol que passaram ser biossintetizado na
planta. No foi detectada diferena entre os acessos dentro de cada idade para a concentrao
de leo, no entanto, verificou-se maiores variaes entre as idades para os acessos LA-10
(0,97-2,25%), LA-37 (0,83-2,38%), LA-53 (0,76-2,84%) e LA-41 (0,69-2,48%), que
aumentaram o teor com o envelhecimento vegetal.
4.1. Introduo
A espcie Lippia alba (Mill.) N. E. Br. (Verbenaceae) uma planta aromtica com
porte subarbustivo originria da Amrica e com ampla distribuio em continentes como:
Amrica, sia, frica e Europa (Aguino et al., 2010; Salimena e Mlgura, 2015). O Brasil
um dos principais centros de diversidade gentica da espcie e apresenta grande variabilidade
em todo territrio nacional (Gomes et al., 2011).
A L. alba comumente conhecido como erva-cidreira-brasileira em diversos pases e
tornou-se popular pela aoantiespasmdica, analgsica, ansioltica, calmante e sedativana
medicina. O uso medicinal est associado biossntese de leo essencial nos tricomas foliares
e favoreceu o uso da espcie como matria-prima na indstria farmacolgica e cosmtica
(Jannuzi et al., 2011; Baldissera et al., 2016).
A diversidade qumica encontrada na espcie ocasionada pela interao de fatores
genticos e ambientais, que conferem maior ou menor proporo de substncias presentes no
leo essencial. Atualmente seis grupos qumicos so descritos para a L. alba considerando os
principais compostos: Grupo 1 (linalol, 1,8-cineol e xido de cariofileno); Grupo 2 (linalol,
geranial, neral, 1,8-cineol e xido de cariofileno); Grupo 3 (limoneno, carvona e sabineno);
Grupo 4 (Carvona, limoneno, g-muurolene e mirceno); Grupo 5 (neral, geranial e xido de
cariofileno) e Grupo 6 (geranial, neral, o-cimeno, limoneno e xido de cariofileno) (Blank et
al., 2015)
Apesar da existncia de grupos qumicos em plantas aromticas, sua composio
qumica pode sofrer variao no teor de compostos presentes no leo essencial em resposta a
diversos fatores. Dentre os eles a poca de colheita, sazonalidade e idade planta apresentam-se
como fatores significativos na biossntese de metabolitos em plantas aromticas, pela
exposio da planta a variaes climticas e alteraes morfofisiolgicas da planta (Cui et al.,
2011; Pandelo et al, 2012).
Santos et al. (2015) avaliando a composio qumica de plantas de Lippia sidoides
Cham. com dois e oito anos de idade, observaram que o envelhecimento e fatores genticos
influenciaram na proporo dos constituintes do leo essencial. Essas alteraes no contedo
qumico podem afetar diretamente a atividade biolgica e prejudicar a aplicao da espcie na
produo de pesticidas naturais e fitoterpicos a nvel industrial.
A biossintese de compostos qumicos regulada pela ao de enzimas responsveis
por catalizar as reaes entre unidades isoprnicas e monoterpenicas derivadas da rota
metablica na planta. As enzimas possuem faixa de temperatura ideal para sua atividade,
entretanto, a exposio da planta a condies climticas por longos perodos pode afetar a
atividade enzimtica e a produo de monoterpenos nos tricomas glandulares (Barros et al.,
2009; Ramak et al., 2014).
Tian et al. (2017) observaram que a produo de leo essencial na planta
influenciada por fatores geneticos e que a expresso de genes especficos na planta
responsvel pela sintese de enzimas que agemnos tricomas glandulares, sendo responsveis
pela produo de leo essencial. Na L. alba, a produo de compostos qumicos
intermediada pela expresso de trs genes especficos: LaTPS1, LaTPS2 e LaTPS3 que
controlam a biossntese de compostos majoritrios na planta, no entanto, no se tem
conhecimento, atualmente, sobre a influncia da idade na composio qumica e no contedo
do leo essencial aps o envelhecimento (Barros et al., 2009; Pandel et al., 2012).
O objetivo desse estudo avaliar a influncia da idade da planta no teor e composio
qumica do leo essencialde acessos da coleo de L. alba do Banco Ativo de Germoplasma
de Plantas Medicinais e Aromticas da Universidade Federal de Sergipe.
23
maioresaumentos no linalol com base na idade da planta. A maior variao foi observada para
o acesso LA-24 para os compostos neral (0,00-9,43%) e geranial (0,00-8,08%).
Para os compostos secundrios mirceno, p-cimeno, limoneno, 1,8-cineol, elemol e
xido de cariofileno houve diferena significativa dentro e entre as idades de plantas (Tabela
4.2). Em plantas com um ano de idade, o maior contedo foi registrado para os seguintes
acessos: mirceno no LA-29 (10,40%); p-cimeno para os acessos LA-29 (7,21%), LA-41
(3,96%), LA-40 (2,29%), LA-09 (1,32%), LA-53 (1,11%) e LA69 (1,40%); limoneno para o
LA-39 (29,75%), LA-36 (15,85%), LA-24 (11,66); 1,8-cineol no LA-09 (11,24%); o elemol
no foi detecdado em plantas com um ano de idade; xido de cariofileno no LA-37 (8,60%).
Nas plantas com dez anos de idade, foi verificado variao significativca nos acessos: LA-29
(0,63%) para o mirceno; LA-02 (5,14%), LA-36 (5,97%), LA-37 (4,22%), LA-69 (3,38%) e
LA-41 (3,70%) para o limoneno; LA-09 (7,98%) para o 1,8-cineol; LA-02 (11,08%) para o
elemol e LA-44 (10,54%) para o composto xido de cariofileno.
Entre as idades de um e dez anos, detectou aumento sigificativo dos compostos p-
cimeno, limoneno, 1,8-cineol, elemol e xido de cariofileno para acessos com dez anos de
idade. O composto mirceno foi maior em plantas com um ano de idade. Os maiores aumentos
foram observados para os acessos: LA-37 (0,00-4,40%) e LA-41 (0,00-4,06%) no p-cimeno;
LA-02 (0,00-5,14%), LA-61 (0,00-4,02%) e LA-69 (0,00-3,28%) para o limoneno; LA-22
(0,00-6,60%) e LA-24(0,0-4,18%) no 1,8-cineol; LA-02 (0,00-11,08%), LA-36 (0,00-8,28%)
e LA-10 (0,00-2,31%) para elemol e LA-44 (0,00-10,54%) e LA-29 (0,00-7,65%) para o
composto xido de cariofileno (Tabela 4.2).
A anlise de grupamento dos constituintes qumicos para as duas idades de plantas de
acessos de L. alba mostrou que o envelhecimento vegetal, aliado a fatores genticos da planta,
proporcionou um aumento na variabilidade de constituintes qumicos no leo essencial. A
primeira colheita realizada em fevereiro/2006 resultou na biossntese de treze compostos
qumicos e a formao de dois grupos, dos quais, os compostos majoritrios foram
responsveis pela caracterizao do agrupamento. No entanto, foi observado um aumento no
nmero de compostos no leo essencial de plantas colheitas em fevereiro/2016 para os
acessos avaliados e reduo significativa no teor dos compostos majoritrios encontrados em
plantas com um ano de idade e aumento no nmero de compostos minoritrios (Figura 4.1).
O grupo I de acessos de L. alba com foi representado pelos acessos LA-02, LA-36,
LA-10, LA-30, LA-39, LA-40, LA-37, LA-41, LA-61, LA-69, LA-29, LA-44, LA-42, LA-53
e LA-68 e o grupo II foi representado pelos acessos LA-09, LA-22 e LA-24 (Figura 4.1).
Ambas as idades de plantas apresentaram dois grupamentos qumicos sem alterao dos
acessos na idade de 10 anos.
Os constituintes qumicos encontrados para o grupo I (mirceno, p-cimeno, limoneno,
linalol, neral, geranial e xido de cariofileno) e grupo II (limoneno, 1,8-cineol e linalol) foram
observados em ambas as idades das plantas, no entanto, os compostos -terpineno e elemol
(grupo I) e neral, geranial e xido de cariofileno (grupo II) que anteriormente no foram
detectados no leo essencial em plantas com um ano de idade, contriburam para a formao
dos grupos em plantas com 10 anos de idade (Figura 4.3).
De acordo com a anlise de componente principal para os acessos com um ano de
idade, o componente principal primrio representou 27,14% da varincia total e foi
relacionado positivamente com os compostos linalol (r=0,97 e negativamente com neral (r= -
0,94) e geranial (r=-0,97). O componente principal secundrio representou 21,91% da
varincia total e foi relacionado positivamente com mirceno (r=0,91) e sabineno (r=0,86)
(Figura 4.2).
Em acessos com dez anos de idade, o componente principal primrio representou
32,80% da varincia total e relacionou positivamente com neral (r=0,97) e geranial (r=0,96) e
negativamente com o 1,8-cineol (r=-0,97) e linalol (r=-0,98). J o componente principal
secundrio representou 18,83% da varincia total e foi relacionado positivamente com p-
26
4.4.Discusso
linalol (0,43% e 0,89%) inferior ao encontrado para o neral (29,62% e 31,58%) e geranial
(37,00% e 45,78%), no entanto, para o grupo II de ambas as colheitas, a presena do linalol
(81,46% e 77,78%) expresso em maior quantidade no leo essencial reduz significativamente
o teor do neral (3,14%) e geranial (2,69%).Resultado semelhante foi observado por Tomazoni
et al. (2017) caracterizando o leo essencial deEucalyptus globuluse Cinnamomum
camphoraque verificou reduo do teor de linalol (0,96 e 89,9%, respectivamente) na
presena de neral (16,20 e 0,00%).
Fahnrich et al. (2012) sugerem que os genes responsveis pela biossntese de
compostos como mirceno, limoneno, sabineno e -terpineno so os mesmos, pois, ambos
derivam da converso metablica do ction a-terpenyl atravs de enzimas sintases que
aumentam significativamente da concetrao do composto -terpineno quando expressos na
planta, reduzindo as mdias dos compostos limoneno e mirceno em plantas mais velhas.
A biossintese do xido de cariofileno em plantas com 10 anos pode estar relacionado
expresso gnica do gene QHS1 nos tricomas glandulares de gentipos de L. alba. Esse gene
encontrado em plantas da espcie Artemisia annua e responsvel pela produo da enzima
-cariofileno sintase que catalisa a converso de molculas de geranyl difosfato, responsvel
pela biossintese de geranial na planta, em xido de cariofileno nas plantas do grupo II com 10
anos de idade (YANG et al., 2016).
A relao existente entre os compostos majoritrios pode indicar o maior ou menor
teor de alguns compostos no leo essencial. A correlao entre os compostos neral e geranial
(citral) com o composto linalol tem 95% de probabilidade de chances que a presena do
linalol reduza os teores dos compostos biossntetizados. A baixa produo do neral/geranial
no grupo II pode estarrelacionada atividade enzimtica no mesmo stio de ao para ambas
as molculas terpnicas, o que explica a reduo de sua produo nos grupos qumicos II e III
(Volz et al., 2009; Portilla-Zuiga et al., 2016).
A biossintese desses compostos inicia-se com uma reao de condensao de duas
molculas de acetil-CoA (C2) tendo como produto o acetoacetil-CoA (C4). O acetoacetil-CoA
reage com uma terceira molcula de acetil-CoA por condensao obtendo o -hidroxi--
metilglutaril-CoA (HMG-CoA) com cinco carbonos (C5), essa molcula reduzida por reao
com trs molculas de NADPH e produz o cido mevalnico (C5). Esse intermedirio
fosforilado pela adio de trs molculas de ATP formando o isopentenyl difosfato
(isopentenyl PP) (C5), conhecidos comurmente como unidade de isoprenos. O isopentenyl PP
reage com uma molcula de cinco carbonos o dimetilalil difosfato (dimetilalil PP)
biossintetizado na rota MEP (Dewick, 2008).
A formao de molculas monoterpnicas (C10) ocorre com a condensao das
molculas isoprnicas (C5) em uma molcula de geranyl difosfato (geranyl PP) (C10) que
fosforilada em linalyl PP e posteriormente sofre ciclizao enzimtica em neryl PP. As
molculas geranyl PP (geranial, citronelal e geraniol), linalyl PP (b-mirceno e linalol) e neryl
PP (neral e nerol) so as responsveis pela formao dos demais compostos monoterpnicos e
sesquiterpnicos que formaro o leo essencial de plantas de L. alba. A maior produo de
linalol pode estar reduzindo a quantidade de molculas de geranyl PP e neryl PP disponveis
para a sntese de geranial e neral;esse fenmeno reduz o teor desses compostos e derivados
qumicos, no entanto, o acesso LA-24 apresentou, aps envelhecimento, biossntese de neral
(0,00-9,43%) e geranial (0,00-8,08%) como majoritrios, o que pode estarrelacionado
reduo do linalol (80,12-68,77%) entre as idades.Esse fenmeno indica que a reduo dos
compostos majoritrios na planta favorece o surgimento de novos constituintes que possuem
fortes correlaes entre si (Dewick, 2008; Ramak et al., 2014).
Apesar dos fatores climticos contriburem significativamente para a mudana na
composio qumica em plantas de L. alba,o envelhecimento vegetal pode ser um dos
principais fatores na mudana na concetrao do leo essencial entre as duas idades, em que,
o envelhecimento da planta proporcionou valores maiores entre as idades das plantas no
presente trabalho. Segundo ensaio realizado por Pandel et al. (2012) observaram uma
28
Agradecimentos
Os autores agradecem ao CNPq, FAPITEC/SE, CAPES e FINEP pelo suporte financeiro dado
para realizao deste trabaho.
4.5.Referncias
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31
Tabela 4.1
Identificao e origem de 18 acessos da coleo de Lippia albado Banco Ativo de
Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da Universidade Federal de Sergipe,
municpio de So Cristvo, Estado de Sergipe, Brasil.
Acesso Municpio, Estado, Pas Procedncia Cdigo no herbario
LA-02 Araguana, Tocantins, Brasil UNB 14785
LA-09 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 14786
LA-10 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13495
LA-22 Lavras, Minas Gerais, Brasil UNB 13476
LA-24 Luzinia, Gois, Brasil UNB 13477
LA-29 Planaltina de Gois, Gois, Brasil UNB 13485
LA-30 Posse, Gois, Brasil UNB 13454
LA-36 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13472
LA-37 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13455
LA-39 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13497
LA-40 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13456
LA-41 Curitiba, Paran, Brasil UNB 13484
LA-42 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 13444
LA-44 Braslia, Distrito Federal, Brasil UNB 14788
LA-53 Telha, Sergipe, Brasil UFS 13446
LA-61 Rio Real, Bahia, Brasil UFS 13479
LA-68 Santana do So Francisco, Sergipe, Brasil UFS 14789
LA-69 Gararu, Sergipe, Brasil UFS 13467
32
Tabela 4.2
Mdia dos constituintes qumicosde 18 acessos da coleo de Lippia alba do Banco Ativo de Germoplasma de Plantas Medicinais e Aromticas da
Universidade Federal de Sergipe, com 1 e 10 anos de idade.
Composto -pineno sabineno 6-metil-5-hepten-2-ona mirceno p-cimeno limoneno 1,8-cineol (E)--ocimeno -terpineno
IR 932 969 981 988 1020 1024 1026 1032 1054
Acesssos 1 ano
LA-02 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 10,79 dA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-09 0,00 bA 1,32 aA 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bA 0,00 bA 11,24 aA 0,42 bA 0,00 aA
LA-10 0,00 bB 0,00 bB 0,00 dA 0,98 gA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-22 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 bB 0,00 cA 0,00 aA
LA-24 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bA 11,66 aA 0,00 bB 0,00 cA 0,00 aA
LA-29 10,40 aA 7,21 aA 0,00 dA 25,79 bA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 bB 0,00 cB 0,00 aA
LA-30 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 0,00 bB 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-36 0,00 bA 0,94 aA 0,75 cA 0,46 hA 7,31 aA 15,85 aA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-37 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 1,01 gA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-39 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hA 8,29 aA 29,75 aA 0,00 bA 4,12 aA 0,00 aB
LA-40 0,00 bB 2,29 aA 0,96 bA 9,45 eA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-41 0,00 bB 3,96 aA 8,24 aA 30,31 aA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-42 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 8,68 fA 0,00 bB 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-44 0,00 bB 0,00 bB 0,00 dA 8,75 fA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 aB
LA-53 0,00 bA 1,11 aA 0,00 dA 0,00 hA 9,17 aA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-61 0,00 bB 0,00 bB 0,00 dA 13,80 cA 0,00 bB 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-68 0,00 bA 0,00 bB 0,00 dA 0,00 hB 16,37 aA 0,00 bA 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
LA-69 0,00 bB 1,40 aA 0,00 dA 0,00 hB 20,77 aA 0,00 bB 0,00 bA 0,00 cB 0,00 aB
10 anos
LA-02 0,00 fA 0,26 aA 0,00 bA 0,00 cB 1,70 aA 5,14 aA 0,00 eA 0,00 iA 1,31 aA
LA-09 0,00 fA 1,26 aA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 bA 0,00 bA 7,98 aB 0,36 fB 0,00 bA
LA-10 0,36 bA 0,46 aA 0,00 bA 1,65 bA 0,81 aA 2,18 aA 0,00 eA 0,00 iA 0,41 aA
LA-22 0,00 fA 0,35 aA 0,00 bA 0,00 cA 0,00 bA 0,00 bA 6,60 bA 0,00 iA 0,00 bA
LA-24 0,00 fA 0,54 aA 0,00 bA 0,63 cA 0,00 bA 0,00 bB 4,18 cA 0,00 iA 0,00 bA
LA-29 0,63 aB 0,20 aB 0,00 bA 1,66 bB 0,00 bA 0,00 bA 0,22 dA 0,14 hA 0,00 bA
LA-30 0,00 fA 0,50 aA 0,00 bA 0,11 cA 2,48 aA 0,10 aA 0,00 eA 0,51 dA 0,82 aA
LA-36 0,00 fA 0,37 aB 0,00 bB 0,12 cA 1,79 aB 5,97 aB 0,00 eA 0,00 iA 1,45 aA
LA-37 0,21 dA 0,67 aA 0,00 bB 0,25 cB 4,40 aA 4,22 aA 0,00 eA 0,93 aA 3,23 aA
LA-39 0,00 fA 0,42 aA 0,00 bB 0,11 cA 3,33 aB 0,40 aB 0,00 eA 0,83 bB 1,04 aA
LA-40 0,27 cA 1,24 aB 0,21 aB 0,30 cB 4,11 aA 0,45 aA 0,00 eA 0,88 aA 1,46 aA
LA-41 0,19 dA 0,62 aB 0,00 bB 0,28 cB 4,06 aA 3,70 aA 0,00 eA 0,61 cA 3,19 aA
LA-42 0,00 fA 0,42 aA 0,00 bA 2,89 aB 0,90 aA 0,00 bA 0,00 eA 0,56 cA 0,14 aA
LA-44 0,12 eA 0,30 aA 0,00 bA 0,20 cB 0,00 bA 0,00 bA 0,00 eA 0,00 iA 0,00 bA
LA-53 0,00 fA 0,42 aB 0,00 bA 3,26 aA 1,73 aB 0,00 bA 0,00 eA 0,48 dA 0,47 aA
LA-61 0,13 eA 0,48 aA 0,00 bA 0,16 cB 1,93 aA 4,02 aA 0,00 eA 0,29 gA 0,90 aA
LA-68 0,00 fA 0,35 aA 0,00 bA 2,63 aA 1,53 aB 0,00 bA 0,00 eA 0,41 eA 0,35 aA
LA-69 0,20 dA 0,43 aB 0,00 bA 0,23 cA 3,48 aB 3,28 aA 0,00 eA 0,44 eA 1,30 aA
CV-a (%) 1,70 19,68 2,09 2,25 12,17 4,45 6,46 6,20 11,10
CV-b (%) 2,88 12,09 2,09 10,65 9,02 2,68 9,36 9,77 6,17
Mdias seguidas da mesma letra minscula entre os acessos e maiscula entre as idades das plantas, no diferem pelo teste de skott-knott (p < 0,05). IR: ndice de reteno
33
Tabela 4.2
Continuao...
Composto (%) linalol neral geranial (E)-cariofileno germacreno D elemol xido de cariofileno OE (%)
IR 1095 1235 1264 1417 1484 1548 1582
Acesssos 1 ano
LA-02 0,00 dB 31,92 dA 40,11 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aB 0,00 fA 1,12 aB
LA-09 80,33 aA 0,00 kA 0,00 bA 0,90 aB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 2,54 aA
LA-10 0,00 dB 34,46 bA 48,16 aA 0,96 aB 0,00 aB 0,00 aB 2,43 cA 0,97 aB
LA-22 83,94 aA 0,00 kA 0,00 bA 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aA 0,00 fB 2,46 aB
LA-24 80,12 aA 0,00 kB 0,00 bB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 1,62 aB
LA-29 0,00 dB 27,34 hB 23,12 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 1,53 aB
LA-30 0,00 dB 30,36 eB 30,82 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aB 0,00 fB 1,18 aB
LA-36 1,07 cA 28,37 fB 39,68 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aB 0,00 fA 2,47 aA
LA-37 0,00 dB 30,39 eA 47,84 aA 1,36 aB 0,00 aA 0,00 aA 8,60 aA 0,83 aB
LA-39 0,00 dB 22,23 jB 27,83 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aB 0,00 fB 1,87 aB
LA-40 5,46 bA 25,53 iB 37,13 aB 3,48 aA 0,00 aB 0,00 aB 5,38 bA 0,60 aA
LA-41 0,00 dB 25,22 iB 28,83 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aA 0,00 fB 0,69 aB
LA-42 0,00 dB 26,02 iB 29,88 aB 1,48 aA 0,00 aB 0,00 aB 1,75 dB 1,41 aB
LA-44 0,00 dB 38,62 aA 45,42 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aB 0,00 fB 0,70 aB
LA-53 0,00 dB 33,37 cA 43,33 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aB 1,09 eB 0,76 aB
LA-61 0,00 dB 31,35 dA 37,94 aB 0,00 bB 0,00 aB 0,00 aA 0,00 fB 0,72 aA
LA-68 0,00 dB 28,26 fB 33,59 aB 0,00 bB 0,00 aA 0,00 aA 0,00 fB 1,23 aB
LA-69 0,00 dB 30,81 eA 41,38 aB 0,40 aB 0,00 aA 0,00 aA 2,65 cA 1,18 aB
10 anos
LA-02 0,72 dA 27,90 gB 45,52 aA 0,20 aA 0,00 iA 11,08 aA 0,00 gA 2,16 aA
LA-09 78,57 bA 0,00 iA 0,00 bA 2,35 aA 0,00 iA 0,00 dA 1,01 fA 2,38 aA
LA-10 1,30 dA 34,30 bA 45,57 aB 1,99 aA 1,71aA 2,31 cA 2,42 eA 2,25 aB
LA-22 86,00 aA 0,00 iA 0,00 bA 1,48 aA 0,97 cA 0,00 dA 1,08 fA 3,39 aA
LA-24 68,77 cB 9,43 hA 8,08 bA 2,28 aA 0,00 iA 0,00 dA 1,54 fA 2,04 aA
LA-29 0,72 dA 33,48 cA 47,36 aA 3,99 aA 0,00 iA 0,00 dA 7,65 bA 2,51 aA
LA-30 0,80 dA 31,32 eA 45,03 aA 2,19 aA 0,39 fA 0,17 dA 2,39 eA 2,59 aA
LA-36 0,90 dA 29,81 fA 45,54 aA 0,23 aA 1,24 bA 8,28 bA 0,00 gA 2,20 aB
LA-37 0,42 dA 30,59 fA 42,13 aB 4,70 aA 0,00 iA 0,00 dA 3,89 dB 2,38 aA
LA-39 0,79 dA 30,30 fA 44,32 aA 1,79 aA 0,40 fA 0,24 dA 2,08 eA 2,53 aA
LA-40 1,08 dA 29,94 fA 40,42 aA 1,88 aB 0,42 fA 0,21 dA 2,06 eB 0,82 aA
LA-41 0,39 dA 29,91 fA 43,47 aA 5,62 aA 0,50 dA 0,00 dA 3,55 dA 2,48 aA
LA-42 1,99 dA 32,61 dA 51,81 aA 0,95 aB 0,33 gA 0,62 dA 2,14 eA 1,90 aA
LA-44 0,50 dA 33,67 cB 46,60 aA 4,03 aA 0,00 iA 0,27 dA 10,54 aA 2,81 aA
LA-53 1,58 dA 32,62 dA 50,28 aA 1,26 aA 0,46 eA 0,74 dA 2,30 eA 2,84 aA
LA-61 0,34 dA 31,59 eA 43,47 aA 6,49 aA 0,31 gA 0,00 dA 5,25 cA 0,61 aA
LA-68 1,56 dA 35,31 aA 50,59 aA 1,11 aA 0,00 iA 0,00 dA 1,36 fA 1,64 aA
LA-69 0,31 dA 30,96 eA 44,67 aA 4,83 aA 0,21 hA 0,00 v 5,77 cA 1,82 aA
CV-a (%) 9,40 1,04 3,45 6,91 4,90 4,62 7,23 12,51
CV-b (%) 9,84 1,75 2,45 3,69 9,28 5,36 15,55 7,33
Mdias seguidas da mesma letra minscula entre os acessos e maiscula entre as idades das plantas, no diferem pelo teste de skott-knott (p < 0,05). IR: ndice de reteno
34
Tabela 4.3
Coeficientes de correlao para os constituintes qumicos dos leos essenciais de acessos de Lippia alba com plantas de um e 10 anos de idade.
Compostos (%) sabineno 6-metil-5-hepten-2-ona mirceno p-cimeno limoneno 1,8-cineol (E)--ocimeno -terpineno linalol neral geranial (E)-cariofileno germacrenoo D elemol xido de cariofileno
1 ano
-pineno 0,82 -0,07 0,53 -0,13 -0,13 -0,06 -0,06 -0,11 0,06 -0,12 -0,13 -0,13
sabineno 0,41 0,73 -0,08 -0,17 0,04 -0,13 -0,14 0,03 -0,11 0,04 -0,07
6-metil-5-hepten-2-ona 0,65 -0,14 -0,07 -0,07 -0,08 -0,13 0,02 -0,01 -0,05 -0,09
mirceno -0,37 -0,27 -0,16 -0,18 -0,30 0,22 0,06 -0,03 -0,15
p-cimeno 0,19 -0,13 0,18 -0,25 0,21 0,24 -0,22 -0,04
limoneno -0,10 0,82 0,04 -0,19 -0,14 -0,22 -0,22
1,8-cineol 0,04 0,53 -0,51 -0,49 0,12 -0,13
(E)--ocimeno -0,06 -0,10 -0,10 -0,12 -0,14
linalol -0,95 -0,90 -0,06 -0,22
neral 0,95 0,01 0,22
geranial 0,15 0,42
(E)-cariofileno 0,72
10 anos
a-pineno -0,03 0,22 0,07 0,05 0,03 -0,29 0,02 0,10 -0,32 0,34 0,26 0,47 0,07 -0,21 0,55
sabineno 0,59 -0,22 0,32 -0,08 0,40 0,50 0,23 0,31 -0,39 -0,41 0,02 -0,05 -0,24 -0,38
6-metil-5-hepten-2-ona -0,12 0,37 -0,14 -0,11 0,40 0,14 -0,11 0,07 0,03 -0,10 0,02 -0,09 -0,09
mirceno -0,24 -0,39 -0,26 0,04 -0,35 -0,24 0,37 0,39 -0,30 0,03 -0,17 -0,04
p-cimeno 0,44 -0,52 0,79 0,86 -0,53 0,43 0,42 0,29 -0,03 -0,04 -0,08
limoneno -0,34 -0,08 0,67 -0,36 0,25 0,28 0,20 0,23 0,64 -0,13
1,8-cineol -0,28 -0,40 0,98 -0,98 -0,97 -0,14 -0,05 -0,19 -0,30
(E)--ocimeno 0,55 -0,33 0,27 0,27 0,20 -0,26 -0,43 -0,05
-terpineno -0,42 0,30 0,30 0,38 0,01 0,14 -0,06
linalol -0,98 -0,98 -0,16 -0,02 -0,19 -0,32
neral 0,99 0,16 0,03 0,11 0,37
geranial 0,07 0,03 0,19 0,31
(E)-cariofileno -0,27 -0,51 0,70
germacrenoo D 0,23 -0,31
elemol -0,42
35
Figura 4.1. Agrupamento dos acessos de Lippia alba com um ano de idade (A) e 10 anos (B)
com base no mtodo de agrupamento de Ward.
36
Figura 4.2. Distribuio dos constituintes qumicos dos leos essenciais de Lippia alba
em relao aos dois componentes principais atravs da anlise de componente principal
(ACP) com um ano (A) e 10 anos de idade (B).
37
Figura 4.3. Mdias com erros padro da mdia, dos constituintes qumicos dos leos
essenciais dos grupos I e II de Lippia alba com um ano e 10 anos de idade.
38
5. CAPTULO 2
A SELEO RECORRENTE RESULTA EM ALTERAES
MORFOAGRONMICAS E AUMENTO DA ATIVIDADE FORMICIDA EM Lippia
alba
RESUMO
5.1. Introduo
A Lippia alba (Mill.) N. E. Br. uma espcie aromtica pertencente famlia botnica
Verbenaceae e com origem na Amrica do Sul. A planta possui ampla plasticidade fenotpica
adaptando-se a diferentes climas e regies no mundo como Europa e sia (Biasi e Costa,
2003; Montanari et al., 2004). O Brasil possui grande diversidade da espcie e considerado
um dos principais centros de diversidade no planeta, podendo esta espcie ser encontrada em
todo territrio nacional e com maior frequncia de ocorrncia nas regies centro-oeste,
nordeste e sudeste do pas (Gomes et al., 2011).
A espcie uma planta perene, com porte subarbustivo, muito ramificado e com aspecto
esbranquiado no caule. As folhas possuem filotaxia oposta com formas elpticas ou
lanceoladas e bordas serradas (De Romero et al., 2010). Suas flores so hermafroditas, com
alta frequncia de alogamia, dispostas em inflorescncia do tipo capituliforme. Suas sementes
possuem dormncia tegumentar que necessitam de processos de escarificao mecnico ou
qumico para favorecer sua germinao (Muoz et al., 2007, Pimenta et al., 2007).
Sua popularidade no Brasil foi motivada pela utilizao das folhas como chs, extratos e
macerado com aes calmantes, antiespasmdica, analgsica, sedativa e ansioltica. Essas
atividades foram importantes para incluso da espcie nas indstrias farmacuticas e
cosmticas. A ao fitoterpica proporcionada pela produo de metabolitos secundrios
como os leos essenciais na planta (Jannuzi et al., 2011, Sette-de-Souza et al., 2014).
Os leos essenciais so substncias terpnicas composta por diversos compostos
qumicos biossintetizadas em resposta interao gentipo x ambiente (Barros et al., 2009). A
L. alba possui diversos constituintes qumicos j descritos na literatura. Segundo Blank et al.
(2015) a espcie descrita quimicamente pela formao de seis grupos qumicos em razo
dos compostos majoritrios (carvona, linalol, neral/geranial e 1,8-cineol) que aparecem em
maiores teores no leo essencial.
Dentre os compostos majoritrios encontrados na L. alba, a carvona destaca-se pelo uso
na indstria alimentcia e agrcola como flavorizante e inibidor de brotaes no
armazenamento de batata (Solanum tuberosum), no entanto, seu potencial biolgico a torna
uma alternativa ao uso de pesticidas sintticos na agricultura e pecuria (Hartmans et al.,
1995; Niculau et al. 2013; Nunes et al., 2013).
O desenvolvimento de pesquisas tem comprovado o alto potencial do composto no
controle fitossanitrio de pragas agrcolas. Peixoto et al. (2015) comprovou a toxicidade do
leo essencial rico em carvona em pragas de armazenamento como Sitophilus zeamais e
Tribolium castaneaum que trazem grandes prejuzos ao armazenamento de gros como Arroz,
Feijo, Milho, Soja e Trigo. Uma das principais pragas em cultivos agrcolas so as formigas
cortadeiras.Esses insetos trazem prejuzos em todo o mundo devido a alta densidade
populacional e a fcil disseminao na rea agrcola. Os principais gneros considerados
pragas no Brasil e no mundo so a Acromyrmex e Atta. A Acromymex considerada de difcil
controle e causadora de danos severos ao cultivo agrcola por serem ninhos pequenos e com
grande densidade por rea. As desfolhas causadas pelas formigas operrias reduzem
drasticamente o processo fotossinttico da planta e diminui a produtividade na colheita
(Feitosa-Alcantara et al., 2017).
O uso de plantas aromticas no controle de pragas agrcolas apresenta vantagens em
relao aos produtos sintticos, comercialmente utilizado em cultivos agrcolas
convencionais. A complexidade qumica encontrada no leo essencial auxilia a quebra de
resistncia das pragas a substncias encontradas nesses produtos e reduz a presso de seleo
que provoca gradativamente o surgimento de indivduos tolerantes nas reas produtoras. Esse
efeito traz benefcio ecolgico ao meio ambiente, pela reduo no uso de substncias
causadoras de doenas em humanos e a organismos nos agroecossistemas (Chae et al.,
2014;Feitosa-Alcantara et al., 2017)
40
5.2.2.Obteno de prognies
Para o cruzamento dos gentipos LA-56, LA-57 e LA-70 foi utlizado o mtodo de
melhoramento por seleo recorrente entre meios-irmos.Foram coletadassete estacasdas
plantas-matrizes de cada parentaloriundos do Banco de Germoplasma da UFS e produzidas
mudas com substrato contendo terra preta + esterco curtido na proporo 3:1. As plantas
foram distribudas em espaamento 1,0 x 1,0 m na rea de cruzamento e cada gentipo
possuam quatro plantas de gentipos diferentes aos seus lados para aumentar a probabilidade
de polinizao cruzada.
As infrutescncias foram coletadas secas e com colorao marrom, acondicionadas em
sacos de papele identificadas com o cdigo da planta-me e o nmero correspondente a
prognie (LA-56-01, LA-56-03, LA-56-04, LA-57-01, LA-57-02, LA-57-03, LA-57-07, LA-
57-09, LA-57-10, LA-70-01 e LA-70-03). As sementes foram extradas com macerao
manual das infrutescncias em bandejas de plstico e posteriormente peneiradas em peneira
de malha fina. Para separao das impurezas foi usado um soprador de semente at completa
remoo de sementes secas e restos de infrutescncias.
A avaliao das variveis morfolgicas ocorreu aos 120 dias aps o transplantio das
mudas para o campo. Para a avaliao, as plantas estavam em plena florao. Foram avaliadas
as variveis:
-Altura de planta: As plantas foram medidas da regio do colo at o maior ramo de cada
planta com auxilio de uma fita mtrica. Os resultados foram expressos em centmetros (cm);
-rea Foliar: foram coletadas 10 folhas da quarta e quinta regio nodal e foimedida a rea da
folha em um medidor de rea foliar LI-COR modelo LI-3100c (cm2);
-Habito de crescimento: O habito de crescimento foi medido usando uma escala de notas de
1 a 5 [1: Plantas eretas; nenhum galho toca no solo; 2: Plantas com 25% dos galhos tocando o
solo; 3: Plantas com 50% dos galhos tocando o solo; 4: Plantas com 75% dos galhos tocando
o solo; 5: Plantas com 100% dos galhos tocando o solo] (Camlo et al., 2011)
A avaliao das variveis agronmicas ocorreu aos 180 dias aps o plantio, em
dezembro de 2016. As plantas foram cortadas a 30 cm do solo e posteriormente foi realizada a
desfolha do material separando as folhas e inflorescncias do caule. Aps a colheita foram
analisadas as seguintes variveis:
-Massa seca de folhas e inflorescncias: As folhas e inflorescncias foram secas em estufa
de circulao de ar forado por 40C1 por cinco dias e pesado em balana para obteno da
massa seca de folhas. O resultado foi expresso em gramas (g planta-1).
-Concentrao de leo essencial: Para o processo de extrao do leo essencial, as folhas e
inflorescncias secas foram pesadas em balana e 50g foram transferidos para bales com
volume de 3000 mL e foi acrescido 2000 mL de gua destilada. O leo essencial foi extrado
por hidrodestilao em aparelho tipo Clevenger modificado por aproximadamente 120 min
aps o incio da ebulio, para completa extrao do leo essencial.Para calcular o teor (%)
obtido de cada amostra, utilizou-se a seguinte equao:
= ( ) 100
Onde, v= volume de leo essencial extrado da amostra; m= massa seca de folhas da amostra.
Para anlise qumica, 151mg do leo essencial foram pesados em balana de preciso
TECNAL BG 400 em frascos do tipo Vials e diludos com 1 mL de acetato de etila em trs
repeties. As triplicatas foram encaminhadas para o departamento de qumica da UFS para
injeo em cromatografia gasosa.
As anlises foram realizadas utilizando um CG/EM/DIC (GCMSQP2010 Ultra,
Shimadzu Corporation, Kyoto, Japo) equipado com um amostrador com injeo automtica
AOC-20i (Shimadzu). As separaes foram realizadas em uma coluna capilar de slica
fundida Rtx-5MS Restek (5%-difenil-95%-dimetilpolisiloxano) 30 m x 0,25 mm de
dimetro interno, 0,25 m de espessura de filme, em um fluxo constante de Hlio 5.0 com
42
taxa de 1,0 mL min-1. A temperatura de injeo foi de 280 C, 1,0 L (10 mg mL-1) de
amostra foi injetado, com uma razo de split de 1:30. A programao de temperatura do forno
iniciou-se a partir de 50 C (isoterma durante 1,5 min), com um aumento de 4 C min-1, at
200 C, em seguida, a 10 C min-1 at 300 C, permanecendo por 5 min. Para o CG/EM as
molculas foram ionizadas por ionizao por eltrons com energia de 70 eV. Os fragmentos
analisados por um sistema quadrupolar programado para filtrar fragmentos/ons com m/z na
ordem de 40 a 500 Da e detectados por um multiplicador de eltrons. O processamento de
dados foi realizado com software CGMS Postrun Analysis (Labsolutions- Shimadzu).O
processo de ionizao para o CG/DIC foi realizado pela chama proveniente dos gases
hidrognio 5.0 (30 mL min-1) e ar sinttico (300 mL min-1). As espcies coletadas e a corrente
eltrica gerada foram amplificadas e processadas. O processamento de dados foi realizado
utilizando o software CG Postrun Analysis (Labsolutions- Shimadzu).
A identificao dos componentes foi realizada com base na comparao do ndice de
reteno (Vandendool e Kratz, 1963) para uma srie homloga de n-alcanos obtidas por co-
injeo de amostras de petrleo com uma mistura de hidrocarbonetos lineares, bem como
atravs da comparao com os bancos de dados e NIST21 e NIST107 da biblioteca CG / EM
e espectros de massa publicados (Adams, 2007).
5.3. Resultados
5.4. Discusso
A seleo de plantas com maior mdia de altura e rea foliar possibilta o aumento de
matria seca de folhas importantes para a extrao do leo essencial, alm disso, plantas com
hbito de crescimento eretos facilitam a introduo de colheitas mecanizadas no cultivo
agrcola em campo. A superioridade de prognies para caractersticas morfolgicas segundo
Rodrigues et al. (2013) decorrente da alta variabilidade encontrada na gerao S1 em plantas
alogamas que favorece a seleo de indivduos em programas de melhoramento de espcies
vegetais.
Zhao et al. (2016) observaram resultados semelhantes ao presente trabalho na seleo
recorrente da espcie Brassica napucom baixa heterose observada para caractersticas
agronmicas.
45
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Tabela 5.2.Valores mdios para altura de planta (AL), hbito de crescimento (HC), rea foliar (AF), massa seca de folha e inflorescncias (MSF),
concentrao de leo essencial (OE), mortalidade corrigida (%)sobre Acromyrmex balzanicom 0,3 L.L-1 de leo essencial, e o teor dosprincipais
compostos qumicos nos leos essenciais das progniese dos parentais de Lippia albaavaliados.
Mdia de MC Constituintes qumicos (%)
Gentipos AL (cm) HC AF (cm2) MSF (g planta-1) OE (%) 0,3 L.L-1 mirceno limoneno carvona muurulone
LA-56-01 80,57 b 1,67 b 2,18 k 16,97 d 0,933 d 28,6 b 0,98 j 26,49 f 54,22 d 3,65 c
LA-56-03 139,63 a 3,33 a 5,64 f 50,42 b 2,222 b 31,0 a 9,04 b 10,63 k 54,28 d 2,52 f
LA-56-04 105,80 b 1,00 b 3,34 i 19,96 d 0,822 e 38,1 a 0,43 l 23,41 g 57,78 b 3,25 e
LA-57-01 123,22 a 3,33 a 3,11 j 45,18 b 1,489 c 9,50 c 0,91 j 17,54 j 17,71 h 4,733 a
LA-57-02 107,00 b 2,33 a 3,73 h 27,9 c 1,378 c 28,6 a 5,31 e 34,21 a 17,27 h 1,74 j
LA-57-03 150,30 a 3,00 a 6,09 e 48,15 b 1,533 c 0,00 c 3,90 f 27,6 e 48,65 f 1,01 k
LA-57-07 79,95 b 1,00 b 7,73 b 18,95 d 1,089 d 21,4 b 2,52 h 20,28 i 55,71 c 2,40 g
LA-57-09 121,97 a 1,67 b 3,76 h 30,04 c 0,666 e 4,80 c 12,95 a 0,83 l 0,00 i 0,34 m
LA-57-10 88,33 b 1,67 b 7,3 c 26,48 c 2,844 a 26,2 a 5,80 d 30,23 b 25,71 g 2,04 i
LA-70-01 135,27 a 3,00 a 6,5 d 28,72 c 2,200 b 28,6 a 2,54 h 20,25 i 54,49 d 3,51 d
LA-70-03 100,30 b 2,67 a 12,94 a 28,73 c 2,444 b 38,1 a 2,79 g 29,87 b 51,73 e 0,65 l
LA-56 164,13 a 3,33 a 4,09 g 57,45 a 2,466 b 21,4 b 1,69 i 28,92 d 58,00 b 2,19 h
LA-57 117,22 a 2,33 a 2,92 j 42,57 b 2,644 a 19,0 b 0,68 k 29,37 c 59,02 a 1,77 j
LA-70 136,18 a 2,67 a 3,43 i 31,87 c 2,733 a 19,0 b 6,40 c 22,78 h 57,71 b 3,98 b
CV (%) 24,03 39,11 2,38 15,61 8,93 28,31 2,16 1,08 0,64 0,20
Mdias seguidas da mesma letra na coluna no diferenciam pelo teste de Scott-Knott (p 0.05)
51
50
0,01 uL/L
0,3 uL/L
40
Mortalidade (%)
30
20
10
0
M 01 06 M 01 03 04 M 01 02 03 07 09 10 M 01 03
le
tro
on
Acessos de L. alba
Figura 5.1. Efeito da mortalidade de A. balzani para as concentraes 0.01 e 0.3 L L-1 para
parentais e prognies do primeiro ciclo de seleo recorrente de de Lippia alba (mdiaEPM).
52
6 CONSIDERAES FINAIS
ANEXOS
54
Tabela 1A. Resumo da anlise de varinciado experimento avaliando a influncia da idade (um e 10 anos) de 18 acessos de Lippia alba no teor e
composio qumica de leo essencial.
QM
(E)- germacreno xido de
FV GL -pineno Sabineno 6-methyl-5-hepten-2-one mirceno p-cimeno 1,8-cineol (E)--ocimeno -terpineno linalol neral geranial cariofileno D elemol cariofileno OE (%)
Blocos 1 0,00 0,00 0,00 0,00 0,01 0,00 0,00 0,00 2,00 0,01 3,37 0,00 0,00 0,00 0,41 0,16
Gentipo 17 6,66* 3,72ns 3,80* 86,78* 48,21* 22,33* 1,28* 0,99* 3682,17* 521,82* 996,12 4,01* 0,23* 9,76* 13,52* 1,19ns
Erro 1 1 0,00 0,02 0,00 0,00 0,10 0,00 0,00 0,00 1,69 0,07 1,43 0,01 0,00 0,00 0,02 0,32
Ano 1 3,84* 4,78* 5,27* 507,32* 48,94* 3,32* 0,19* 14,31* 0,98ns 86,59* 1085,39 83,44* 2,66* 31,71* 56,44* 13,29*
Gentipo x Ano 17 92,05* 3,59* 3,75* 87,59* 38,11* 68,28* 0,82* 0,99* 9,89* 16,71* 72,36 4,55* 0,23* 9,76* 12,69* 0,54*
Erro 2 34 0,00 0,00 0,00 0,13 0,05 0,21 0,00 0,00 1,85 0,2 0,72 0,00 0,00 0,00 0,11 0,01
CV1 (%) 1,70 19,68 2,09 2,25 12,17 6,46 6,20 11,10 9,40 1,04 3,45 6,91 4,90 4,62 7,23 32,51
CV2 (%) 2,88 12,09 2,09 10,65 9,02 9,36 9,77 6,17 9,84 1,75 2,45 3,69 9,28 5,36 15,55 7,33
*Significativo a 5% pelo teste F
ns No significativo a 5% pelo teste F