Cabrera Rendn Citlalli Odaliz y Plata Ortiz Mario Alberto

Grupo: 4QM2 Seccin:4

Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas
Laboratorio de Bioqumica General
Prctica: Curva tipo de azucares reductores

Objetivos
Se realiz una curva tipo para medir los micromoles de azcar reductor con base a su absorbancia,
para as medir la actividad de la enzima invertasa en experiencias posteriores para evaluar la cintica
enzimtica.
Presentacin de resultados
Como resultado de la experiencia se obtuvo la siguiente tabla con las absorbancias de cada problema
y su cantidad de cada uno de los reactivos importantes en la reaccin (FIg.1) y en seguida se
representa como se obtuvieron los mol/2ml de azcar reductor de uno de los tubos.
Reactivos Blanco Problema
Blanco 1 2 3 4 5
Glucosa 0.005 M (mL)
0 0.1 0.2 0.4 0.8 1
Fructosa 0.005M (mL)
Sacarosa 0.2 M (mL) 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Absorbencia 0 0.056 0.139 0.288 0.805 0.898
Azucar reductor (M/2mL) 0 1 2 4 8 10

Observacin

Fig. 1. Tabla de resultados experimentales, representando el contenido de cada tubo, su absorbancia y su

concentracin en M/2mL.

Clculos realizados:
Conversin a M/2mL de tubo 4.
Glucosa + Fructosa = 0.005 + 0.005 = 0.01 mol/L
0.01 moles 100mL
0.8mL = 8x10-6 mol.
1 mol 1000000 mol
8x10-6 mol = 8 mol

Representando grficamente la curva tipo de la absorbancia (nm) contra concentracin de azcar

reductor en mol/2mL queda la siguiente recta, con la ecuacin y=a+bx y una r2 de 0.98 (Fig.2).
 Absorbancia contra mol/2ml
1
y = 0.9138x
0.9 R = 0.9805

0.8

0.7
Absorbancia (nm)

0.6

0.5
Absorbancia contra mol/2ml
0.4 Linear (Absorbancia contra mol/2ml)

0.3

0.2

0.1

0
0 0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2
mol/2mL

Fig. 2. Grfica tipo de la concentracin de azucares reductores en mol/2mL respecto a su absorbancia.

Reaccin qumica llevada a cabo en la prctica:

Fig. 3. Reaccin para identificar la formacin de azucares reductores.

Discusin
De acuerdo a los resultados se pudo obtener la curva tipo de azucares reductores que se muestra en
la fig. , en la cual se observa la relacin entra la concentracin del azcar reductor con respecto a la
absorbancia, basndose en la existencia de una relacin en principio lineal entre dichas relaciones
(absorbancia y concentracin) pues los valores de absorbancia fueron aumentando conforme
aumentaron las concentraciones en micromoles de los carbohidratos, que aunque en la grfica no se
observa la formacin de una recta como tal podemos deducir que si se trata de una, puesto que el
valor de r que se obtuvo en los clculos realizados en la regresin lineal es cercano a 1, esto
indicndonos que se trata de una recta. As tambin pudimos observar la reaccin en medio alcalino
que se llev acabo entre los azucares reductores (glucosa y la fructosa) y el 3,5 DNS (cido
dinitrosaliclico) que es de color amarillo originalmente, el cual se reduce en presencia del grupo
reductor de la glucosa, formando el cido 3-amino-5-nitrosaliclico provocando un vire de color rojo,
mientras que el grupo aldehdo reductor se oxida, para formar un grupo carboxlico. Dicho DNS se
encentraba en exceso frente a los grupos reductores de tal forma que mayores concentraciones de
azcares reductores provocan una mayor coloracin de la muestra. Estas diferencias de coloracin se
pudieron determinar por espectrofotometra visible, a la longitud de onda de mxima absorbancia de
540 nm.
Esto pudo comprobarse en el tubo de ensayo donde estaban los dos azucares reductores, la glucosa
y la fructosa, que si bien, este carbohidrato por s solo no es un azcar reductor, tiene un equilibrio
llamado ceto- enol, que es por definicin un equilibrio entre dos ismeros que se defendan en la
posicin de un grupo funcional, donde el ismero ceto es el mayoritario con respecto al enol (NOTA:
todos los carbonilos son capaces de tener esta tautomera, pero como la concentracin del enol es tan
baja no lo nombran); no obstante, mediante una catlisis bsica uno desplaza el equilibrio a la forma
enol. Con respecto a la D-fructosa, cuando se encuentra frente a una base, se forma un tautomero
ceto, que cuando se reordena puede formar al ismero estructural de la fructosa, que es la D-glucosa.
 Fig. 4. Reaccin
La reaccin por la cual se lleva a cabo la coloracin roja en el tubo con 3,5- DNS y el azcar reductor
como lo es la glucosa y la fructosa en condiciones bsicas, es la siguiente, donde el 3,5-DNS cambia
un grupo nitro por un grupo amino, siendo as que por cada molcula de azcar reductor solamente
reaccionaba una molcula de 3,5-DNS, desarrollando color que se puede observar en la longitud de
onda de la luz visible.

Conclusiones:
La curva tipo de azucares reductores es un mtodo empleado para medir la concentracin de una
sustancia en una muestra por comparacin con una serie de elementos de concentracin
conocida.se basa en la existencia de una relacin en principio lineal entre un carcter medible
"absorbancia y la variable a determinar "concentracin.

El mtodo de DNS nos permite obtener valores de las concentraciones totales de azucares
reductores en una muestra problema determinada, esto mediante la comparacin de una reaccin
testigo y su dicho nivel de absorbancia presentado.

La velocidad de una reaccin catalizada por un encima depende de:

-La concentracin de molculas de sustrato

-La temperatura
-La presencia de inhibidores
-El pH del medio que afecta que afecta a la conformacin de la molcula enzimtica.

Bibliografa:

Nelson D.L. & M. Cox. 2000. Principios de bioqumica 3ra edicin. Editorial omega. 113-242
paginas consultadas.
Bibian L. & R.M. Rojas.2014. manual de mtodos generales para determinacin de carbohidratos
UPTC. 7-10 paginas consultadas.