Practica No.

5 Protena 2
Deteccin Cualitativa de Aminocidos

Por un lado, forman parte de la estructura bsica de los tejidos (msculos, tendones, piel,
uas, etc.) y, por otro, desempean funciones metablicas y reguladoras (asimilacin de
nutrientes, transporte de oxgeno y de grasas en la sangre, inactivacin de materiales
txicos o peligrosos, etc.). Tambin son los elementos que definen la identidad de cada ser
vivo, ya que son la base de la estructura del cdigo gentico (ADN) y de los sistemas de
reconocimiento de organismos extraos en el sistema inmunitario.

Son macromolculas orgnicas, constituidas bsicamente por carbono (C), hidrgeno (H),
oxgeno (O) y nitrgeno (N); aunque pueden contener tambin azufre (S) y fsforo (P) y, en
menor proporcin, hierro (Fe), cobre (Cu), magnesio (Mg), yodo (I), etc.

Estos elementos qumicos se agrupan para formar unidades estructurales

llamados AMINOCIDOS, a los cuales podramos considerar como los "ladrillos de los
edificios moleculares proteicos". Los aminocidos son sustancias cristalinas, casi siempre
de sabor dulce. Los aminocidos se caracterizan por poseer un grupo carboxilo (-COOH) y
un grupo amino (-NH2). Los aminocidos son las unidades elementales constitutivas de las
molculas denominadas Protenas. Son pues, y en un muy elemental smil, los "ladrillos"
con los cuales el organismo reconstituye permanentemente sus protenas especficas
consumidas por la sola accin de vivir.

Se sabe que de los 20 aminocidos proteicos conocidos, 8 resultan indispensables (o

esenciales) para la vida humana y 2 resultan "semi-indispensables". Son estos 10
aminocidos los que requieren ser incorporados al organismo en su cotidiana alimentacin
y, con ms razn, en los momentos en que el organismo ms los necesita: en la disfuncin
o enfermedad. Los aminocidos esenciales ms problemticos son el triptfano, la lisina y
la metionina. Es tpica su carencia en poblaciones en las que los cereales o los tubrculos
constituyen la base de la alimentacin. El dficit de aminocidos esenciales afectan mucho
ms a los nios que a los adultos. Hay que destacar que, si falta uno solo de ellos
(aminocido esencial) no ser posible sintetizar ninguna de las protenas en la que sea
requerido dicho aminocido. Esto puede dar lugar a diferentes tipos de desnutricin, segn
cual sea el aminocido limitante.

Reaccin de Hopkins Cole: El anillo indlico presente en la cadena lateral de los alfa-
aminocidos libres o haciendo parte de pptidos y protenas se puede reconocer
mediante reaccin con el cido glioxlico a pH cido, puesto que forma complejos de
coloracin violeta o amarillo violeta, permitiendo as identificar al triptfano.

Esta reaccin es especfica para el aminocido Triptofano y las protenas que lo

contengan en su estructura.

Materiales

3 Tubos de ensayo
Albumina
Gelatina
Peptona

Reacctivos

Acido Acetico Glacial

Acido sulfrico concentrado

Procedimiento

1. Se colocaron tres tubos de ensayo perfectamente limpios y

2. Se le agrego al primer tubo 1 ml de albumina, 1 ml de gelatina al tubo #2 y 1 ml de
peptona al tubo 3
3. Se le agregan 2 ml de Acido Acetico clacial a cada tubo de ensayo y se ajita bien.
4. Se agrega a cada tubo de ensayo con mucho cuidado y resbalado por las paredes
del tuvo de ensayo, 2 ml de Acido sulfrico
concentrado.
5. Despus de dejar reposar los tubos de
ensayo se logran observar dos fases, el tubo con
un anillo violeta-rojizo en la interfase es una
reaccin positiva. Como se observa en la

siguiente imagen.

Resultados

Tubo 1 de izquierda a derecha. Este tubo contena peptona, el cual tuvo una
reaccin negativa a la reaccin de Hopkins-cole.
Tubo 2
Este tubo contena albumina, el cual como se observa no tuvo una reaccin positiva
al los reactivos.
Tubo 3
Este tubo contena gelatina, en el cual es fcilmente observable el anillo violeta-rojizo
que se forma en la interfase. Demostrando que el preparado de Gelatina contiene
Triptofano y la prueba muestra una reaccin positiva.

Al realizar la reaccin de la muestra de proteinas en medio cido sulfrico concentrado ,

frente al cido glioxilico (Reactivo de Hopkins-Cole) aparece color violeta en la interfase
solucin H2SO4, debido a la formacin de un colorante similar al ndigo.
Prueba de la ninhidrina: La ninhidrina reacciona especficamente con el grupo de a-
amino de los aminocidos, ya sean libres o bien unidos mediante enlaces peptdicos.

La ninhidrina a pH entre 4 y 8 es un oxidante muy fuerte y siempre reacciona con los

grupos de a-amino libreando amonio, el cual se condensa con la ninhidrina reducida y
con otra molcula de ninhidrina formando un compuesto coloreado que vara de azul a
violeta prpura.

Todas aquellas sustancias que presentan al menos un grupo amino y uno carboxilo libre,
reaccionan con la ninhidrina. Tiene como objetivo identificar y cuantificar aminocidos
libres, en general reaccionan con la ninhidrina cuando son calentados con un exceso de
la misma. Todos los aminocidos que poseen un grupo amino y un grupo carboxilo libres
reaccionan dando como producto un color Azul o Purpura, los aminocidos Prolina e
Hidroxiprolina que no poseen un grupo amino sino un IMINO (-NH-), dan un color Rojo
que pasa rpidamente a amarillo.

Materiales

2 Tubos de ensayo
Glicina
Gelatina

Reactivos

Ninhidrina
 Procedimiento

1. Se coloco en tubos de ensayo las siguientes substancias; Tubo 1, 1 ml de Glicina,

Tubo 2, 1 ml de Gelatina
2. Se agrega a cada tubo 5ml del reactivo de ninhidrina

3. Se calentaron los tubos de ensayo en agua en ebullicin por un minuto y se dejaron

enfriar las pruebas.
 Resultados

Como resultado se obtuvo un cambio de color a azul del tubo que contena la glicina,
esto nos revelo la presencia de aminocidos.
Para el tubo con Gelatina, la reaccin fue negativa.

Identificacin de Aminocidos Azufrados: Esta es una prueba para identificar

aminocidos azufrados y las protenas que los contienen, se reconocen por la
formacin de una coloracin Negra o Gris.

Materiales
o 3 Tubos de ensayo
o Albumina
o Peptona
o Gelatina
Reactivos

o Hidoxido de sodio al 40%

o Acetato de Plomo
 Procedimiento

1. Se coloco en cada tubo de ensayo lo siguiente: tubo 1, 1 ml de Albumina, Tubo 2,

1 ml de Gelatina, tubo 3, 1 ml de Peptona.

2. Se agrega a cada tubo un ml de Hidrxido de sodio al 40%

3. Se le agrego a cada tubo de ensayo 1 ml de Acetato de Plomo

4. Se calientan los tubos a la bao mara agitando continuamente.

 Resultados

Para la reaccin de identificacin de aminocidos azufrados los resultados fueron los

siguientes. En el tubo 1, con albumina fue el nico en reaccionar como se ve en la
imagen siguiente su color es casi negro.

Para el tubo 2, con Gelatina, no hubo reaccin alguna, pues el tubo se ve

transparente.

Para el tubo 3, con Peptona, la reaccin fue negativa pues no hubo ningn cambio
de color en la solucin.

Reaccin de Sakaguchi: Es una prueba para identificar el aminocido Arginina y

las protenas que lo contengan, ya que casi todas las protenas poseen ese
aminocido; El desarrollo de un color Rojo indica una reaccin positiva, y se debe a
la presencia del grupo Guadanina, que caracteria la guanidina.

Los reactivos utilizados para esta practica son los siguientes:

o Hidrxido de sodio al 40%

o Alfa naftol
o Hipoclorito de Sodio
 Conclusiones

Las protenas estn enlazadas con enlaces peptdicos, disulfuros puentes de

hidrgeno de la cadena carbonada.

Las fuentes dietticas de protenas incluyen carne, huevos, soya, granos,

leguminosas y productos lcteos tales como queso o yogurt. Las fuentes animales
de protenas poseen los 20 aminocidos. Las fuentes vegetales son deficientes en
aminocidos y se dice que sus protenas son incompletas. Por ejemplo, la mayora
de las leguminosas tpicamente carecen de cuatro aminocidos incluyendo el
aminocido esencial metionina, mientras los granos carecen de dos, tres o cuatro
aminocidos incluyendo el aminocido esencial lisina.

Las protenas constituyen una de las molculas ms importantes en el organismo ya

que cumplen muchas funciones

Al realizar las diferentes pruebas con la albmina se pudo comprobar

experimentalmente efectivamente que se trata de una protena.

La reaccin con la ninhidrina produce colores que sirven como base para la
cuantificacin de todos los aminocidos primarios.

E-Grafia

http://blogs.unlp.edu.ar/quimicaorganica/category/proteinas/
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organica/guia
_9_aminoacidos.pdf
https://es.scribd.com/doc/27312502/INFORME-LABORATORIO-
RECONOCIMIENTO-DE-AMINOACIDOS-EN-ALIMENTOS
http://bioquimicatm2.blogspot.com/2015/02/aminoacidos-y-proteinas_3.html