UN NTIMICROBIAL UN Y SEORES do HEMOTERAPIA, Enero de 2002, p. 160-165 Vol. 46, No.

1
0066-4804 / 02 / $ 04.00 0 DOI: 10.1128 / AAC.46.1.160-165.2002
Copyright 2002, Sociedad Americana de Microbiologa. Todos los derechos reservados.

La interaccin de los azoles comunes con la glucoprotena P

Er-jia Wang, Karen Lew, Christopher N. Casciano, Robert P. Clement,
y William W. Johnson *
El metabolismo de frmacos y farmacocintica, Schering-Plough Research Institute, Lafayette, Nueva Jersey 07848

Recibido el 13 de junio de 2001 / devueltos para modi fi cacin 8 de agosto de 2001 / Accepted 1 de octubre de 2001

Tanto las clulas eucariotas y procariotas son resistentes a un gran nmero de antibiticos debido a las actividades de los transportadores de
exportacin. El transportador ms estudiado en el mamfero de unin a ATP superfamilia de transportadores de casete, P glicoprotena (P-gp), expulsa
muchos xenobiticos anffilos y lipfilos no relacionados estructuralmente. interacciones clnicas observadas y algunos estudios in vitro sugieren que los
antifngicos azlicos pueden interactuar con P-gp. Tal interaccin podra afectar tanto la disposicin y la exposicin a agentes teraputicos antifngicos
azlicos y explicar parcialmente las interacciones de drogas clnicos observados con algunos antifngicos. Utilizando un ensayo de clula entera en la que
se evalu la retencin de un sustrato marcador y cuantificada, se estudi la capacidad de los antifngicos azlicos ms ampliamente prescrito
administrados por va oral para inhibir la funcin de este transportador. En una lnea celular que presenta una cantidad sobreexpresado del humano P-gp
transportador, itraconazol y ketoconazol inhibe la funcin de P-gp con 50% concentraciones inhibitorias (IC 50 s) de 2 y 6 M, respectivamente. La
ciclosporina A era inhibidora con un IC 50 de 1,4 M en este sistema. Excepcionalmente, fluconazol no tuvo ningn efecto en este ensayo, un resultado
consistente con las interacciones clnicas conocidas. Se evaluaron tambin los efectos de estos antifngicos azlicos sobre el consumo de ATP por P-gp
(que representa la actividad de transporte), y el K metro valores fueron congruentes con los IC 50 s. Por lo tanto, la exposicin del tejido a los antifngicos azoles
puede ser modulada por P-gp humana, y las interacciones clnicas de antifngicos azlicos con otros frmacos puede ser debido, en parte, a la inhibicin
del transporte de P-gp.

Aunque la membrana celular es un EF barrera fi ciente para molculas hidrfilas,
muchos compuestos anfiflicos difunden a travs de los dominios de la bicapa. Por lo
tanto, existen mecanismos activos para proteger las clulas de la intrusin de
molculas anfiflicas, algunos de los cuales pueden poseer cualidades biolgicas
potencialmente dainos. El ef activo reflujo de un amplio espectro de xenobiticos de
procariota, as como clulas eucariticas confiere resistencia a un gran nmero de
antibiticos y se conoce como resistencia a mltiples frmacos (MDR) (24). Activo
MDR se confiere en gran medida por los transportadores ATPbinding de cassette
(ABC), que pueden contribuir de forma significativa a la disposicin del frmaco y la
resistencia a la terapia, as como a la resistencia bacteriana y de mamfero adquirida.
Estos transportadores reconocen una amplia variedad de xenobiticos, incluyendo
frmacos. De las diversas formas de los transportadores ABC de mamferos,
P-glicoprotena (P-gp) ha recibido la mayor atencin, ya que desempea un papel
importante en la disposicin de muchos frmacos y es el ms ubicuo (9-12). El
producto del gen MDR1, P-gp, es una 170-kDa glicoprotena fosforilada. Otros
miembros de esta familia incluyen las protenas MDR (MRP1, MRP2, MRP3, etc.).
Estas protenas de transporte son bombas que eliminan xenobiticos desde el
interior de clulas de mamfero ATP impulsada. La expresin de P-gp en
tejidos-particularmente humanos normales dentro de las membranas celulares del
tracto gastrointestinal, hgado, barrera sangre-cerebro, glndulas suprarrenales y
riones-sugiere que la enzima juega un papel en la proteccin celular, as como en la
secrecin y / o disposicin (10). Si bien la funcin primaria de esta protena es
desconocida, su capacidad para conferir resistencia a una amplia variedad de
estructuralmente y compuestos qumicamente no relacionados
sigue siendo impresionante. De hecho, la lista de sustratos que este transportador
tolera o acepta ahora parece ser similar a la de citocromo P450 3A4 (CYP3A4), el
predominante oxigenasa del citocromo P450 intestinal y heptico, e incluso puede
llegar a reconocer ms sustratos. Como miembro de la superfamilia ABC de los
transportistas, P-gp posee dos sitios de unin de ATP y utiliza ATP (a travs de
hidrlisis) como la fuente de energa para el translocacin de sustratos. Los
sustratos entran desde la bicapa lipdica (27) y se pueden unir a dos (o ms) sitios
no idnticos (35). Adems, los efectos alostricos y tal vez sinrgicas se han
observado para ciertas combinaciones de sustrato y condiciones (36). Aunque las
interacciones de drogas mediadas por P-gp son difciles de distinguir de las
mediadas por CYP3A4, la coadministracin de antifngicos azlicos con otra
CYP3A4 y / o sustratos de P-gp se sabe que causa muchos efectos clnicos (32).
monoterapia con lovastatina tiene una riesgo 0,1% de causar toxicidad del msculo
esqueltico que aumenta dramticamente cuando lovastatina (un sustrato de P-gp)
(37) se combina con frmacos tales como la ciclosporina, itraconazol, ketoconazol
o eritromicina (14). Los estudios in vitro sugieren que el ketoconazol es un inhibidor
de P-gp en la base de la inversin de la resistencia y la retencin mejorada de
sustratos marcadores en una lnea celular resistente a mltiples frmacos (29). El
transporte de algunos compuestos de rin y las monocapas de clulas intestinales
se ha visto afectada por ketoconazol (17, 38), que compitieron con verapamil unin
a 2-Caco clulas con una concentracin inhibitoria del 50% (IC 50) de 13 M (5). Sin
embargo, el ketoconazol inhibe el transporte polarizado de la P-gp / CYP3A4 K02
sustrato en clulas MDR1-MDCK con una CI 50 de 119 M (40), y 100 M ketoconazol
solamente inhibi dbilmente rodamina 123 (Rho) transporte a travs de una
monocapa de clulas Caco-2 y el leon de rata evertido (39).

* Autor correspondiente. Direccin postal: buscar Schering-Plough Re- Instituto,

144 Ruta 94, PO Box 32, Lafayette, NJ 07848. Telfono: (973) 940-4336. Fax: (973)
940 a 4.211. E-mail: William.w El itraconazol se sugiere a ser un sustrato de P-gp debido a aumento de la
. johnson@spcorp.com. acumulacin cerebral en mdr1a / ratones de fi ciente en

160
V OL. 45, 2002 Antifngicos azoles como inhibidores de la glucoprotena P 161
P-gp (21). Itraconazol tambin puede revertir la resistencia a la daunorrubicina
sustrato P-gp (DNR) en una lnea celular de leucemia aguda de murino in vitro
(clulas resistentes a mltiples frmacos) (13), mientras que el bromuro de
metiltiazolilo difeniltetrazolio (MTT) los resultados del ensayo de citotoxicidad
sugieren una interaccin de itraconazol con MDR y / o protena de resistencia a
mltiples frmacos (MRP) -asociado resistencia debido a la reversin de resistencia
(18). El transporte de vinblastina, DNR, y la doxorrubicina se ve afectada por 100 M
itraconazol en clulas transfectadas con MDR1 cDNA (31). Adems, se ha
informado de interacciones clnicas tras la coadministracin de itraconazol con
vincristina (2), DNR (13, 33), quinidina (16), o digoxina (15), todas las cuales, se ha
afirmado, son sustratos de P-gp ( con los tres primeros siendo bien caracterizado).
concentraciones Lovastatina aumentaron ms de 20 veces cuando se administr
junto con itraconazol (22). La biodisponibilidad oral de simvastatina es tambin
significativamente aumentado por el tratamiento con itraconazol o ciclosporina (3,
19, 23, 25). En contraste con los efectos causados por el ketoconazol y el
itraconazol, fluconazol no inhibe el transporte de digoxina a travs de monocapas
de clulas de MDCK (38).
El objetivo del presente estudio fue cuantificar las interacciones de estos
antifngicos azlicos comnmente prescritos con el MDR1 ABC transporter P-gp. El
uso de dos mtodos diferentes de evaluacin, se muestra en el presente documento
la interaccin distinta por todos los antifngicos excepto fluconazol.
MATERIALES Y MTODOS
Productos qumicos. El itraconazol se obtuvo a partir de recursos compuestos
Schering-Plough. Ketoconazol, DNR, verapamil, colchicina, ciclosporina A, manitol, ditiotreitol, ATP
disdico, molibdato de amonio, cido ascrbico, sodio
meta- arsenito, aprotinina, leupeptina, EGTA, EDTA, HEPES, ouabana, fluoruro de
fenilmetilsulfonilo, y la base TRIZMA fueron adquiridos de Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO). El
fluconazol se adquiri de ICN Pharmaceuticals (Costa Mesa, Calif.). solucin salina equilibrada de
Hanks, mnimo alfa medio esencial, de Dulbecco modificado ed medio esencial mnimo,
penicilina-estreptomicina, suero bovino fetal, y la tripsina-EDTA se obtuvieron de Life Technologies,
Inc. (Rockville, Md.). ortovanadato de sodio se adquiri de Pfaltz & Bauer Inc. (Waterbury, Conn.).
Microplacas (96 pocillos; Fisher), tubos de plstico, y cultivo celular matraces (75 cm 2) fueron
adquiridos de Corning Inc. (Corning, NY). Todos los dems reactivos fueron de la ms alta calidad
disponible en el mercado.
Lneas celulares. La lnea celular CR1R12, proporcionado por Alan Senior (Universidad de
Rochester), se mantuvo en medio esencial mnimo alfa completo suplementado con 10% de suero
fetal bovino y penicilina-estreptomicina (50 U y 50 g / ml, respectivamente) en un 5% de CO 2 atmsfera
de aire -95% a 37 C. Se aadi colchicina (0,5 g / ml) al medio de cultivo. La lnea de clulas
NIH-3T3-G185, que contiene el producto del gen de MDR1 humano, fue licenciado de los Institutos
Nacionales de Salud (NIH) y se mantuvo en Dulbecco modificado ed medio esencial mnimo. Se
aadi colchicina (60 ng / ml) al medio de cultivo. Las clulas fueron cultivadas a 80 a 90% con fl
uidez y se trataron con tripsina-EDTA antes de subcultivo.
La citometra de flujo con un clasificador celular activado por fluorescencia. Las mediciones de
fluorescencia de las clulas individuales se realizaron con un FACScalibur fl uorescenceactivated clasificador de
clulas (Becton Dickinson, San Jose, Calif.) equipado con un lser de argn UV (filtros de paso de banda con una
longitud de onda de excitacin a 488 nm y de emisin de longitudes de onda a 530 y 570 nm con 30-nm filtros de
paso de banda Fi). El anlisis fue cerrada para incluir clulas viables individuales sobre la base de sus delanteros
y la luz dispersa lateral y se basa en la adquisicin de datos de 10.000 clulas. Log de fluorescencia se recogi y
se muestra como un histograma de un solo parmetro. Un ensayo funcional directa de la P-gp ef fl ux bomba en
CR1R12 clulas se realiz con el citmetro de flujo (34).
La prueba de viabilidad celular. La viabilidad celular se evalu mediante exclusin de 0,4% de azul de tripano,
as como tincin con yoduro de propidio. Se detectaron clulas muertas en el que el yoduro de propidio se uni a
dobles cadenas de ADN o ARN en ciertas regiones de los grficos de puntos de citometra, y los datos para estas
clulas no se incluyeron en los clculos fi nales.
Clculo de fluorescencia relativa. Las intensidades uorescencia DNR fl de clulas individuales se
registraron como histogramas. La media de fluorescencia de intensidad
Se utilizaron 10.000 clulas para la comparacin de diferentes condiciones. Vanadato y la ciclosporina A
fueron seleccionados como controles positivos y se utilizaron para normalizar las mediciones debido a que
estos compuestos pueden inhibir al mximo el ef activa P-gp mediada por reflujo de DNR y Rho,
respectivamente. Relativa fluorescencia se utiliz para la cuantificacin y la comparacin de los diferentes
compuestos. La fluorescencia relativa (porcentaje de inhibicin mxima o porcentaje de inhibicin de la norma
de referencia) representa una relacin obtenida a travs de la siguiente frmula: (media geomtrica de
fluorescencia de una muestra discreta / media geomtrica de fluorescencia en presencia de 5 mM de vanadato
o 50 M de ciclosporina A)
100.
Membrana de microsomas preparados. membranas celulares CR1R12 enriquecidos con la enzima de
transporte producto del gen MDR1 se utilizaron para la preparacin de microsomas de membrana. Las clulas
se lavaron con tampn completa de Hanks antes de ser resuspendido en 10 ml de tampn de lisis (50 mM
Tris-HCl, manitol 50 mM, EGTA 2 mM, ditiotreitol 2 mM [pH 7,0 a 25 C]) inhibidores de la proteasa que
contienen (1 mM fenilmetilsulfonilo fluoruro, 10 g de aprotinina por ml, 10 g de leupeptina por ml). Todos los
pasos posteriores se realizaron a 4 C. Se lisaron las clulas dos veces mediante cavitacin con nitrgeno
(Kontes Glass Co., Vineland, NJ) en 500 lb / in 2 durante 15 min. Los ncleos y mitocondrias se sedimentaron
por centrifugacin a 4000
gramo para 10
min. A continuacin, la fraccin de membrana microsomal se sediment por centrifugacin a 100.000
gramo durante 60 min. El sedimento se resuspendi en tampn de sacarosa 0,25 M
(Tris-HCl 10 mM, EDTA 1 mM [pH 7,5]) y se homogeneizaron con un homogeneizador PotterElvehjem. Las
alcuotas de los microsomas de membrana fueron rpidamente congelados y se almacenaron a 80 C hasta el
anlisis. El contenido de protena se determin mediante una adaptacin de microensayo del mtodo de Lowry
(37).
hidrlisis de ATP y la liberacin de fosfato. El consumo de ATP era fi cuantificada mediante la
determinacin de la cantidad de ortofosfato inorgnico, que forma un complejo de color con molibdato,
que se liber (4, 35). Hemos modificados con un ensayo de hidrlisis de ATP, basado en la
determinacin de la cantidad de fosfato liberado, utilizando preparaciones de microsomas membrana; el
ensayo se llev a cabo en una microplaca de 96 pocillos (35). Los microsomas se descongelaron en
hielo antes de la dilucin a 3,5 g de protena por pocillo en hielo fro tampn ATPasa (ATP de sodio 3 mM,
KCl 50 mM, MgSO mM 10 4, ditiotreitol 3 mM, 50 mM Tris-HCl [pH 7,0]) que contena EGTA 0,5 mM (para
inhibir Ca-ATPasa), ouabana 0,5 mM (para inhibir la Na- y K-ATPasas), y azida de sodio 3 mM (para
inhibir la ATPasa mitocondrial). El volumen de incubacin total incluyendo los diversos inhibidores era
100
l. La reaccin de incubacin se inici mediante la transferencia de la placa de hielo a 37 C; la placa se
incub durante 30 min, y despus la reaccin se termin mediante la adicin de 50 l de una solucin de
12% de dodecil sulfato de sodio a temperatura ambiente, seguido por la adicin de 50 l de una mezcla (en
volmenes iguales) de cido ascrbico fresco 18% en 1 NHCl y 3% ammoniummolybdate en 1 NHCl.
Despus de 4 min, 100 l de una solucin de citrato de sodio al 2% y 2% de sodio meta-
arsenito en cido actico al 2% se aadi a fi x la formacin de color. Despus de 30 min de
incubacin a temperatura ambiente, la fi jo y fosfato liberado se cuantific colorimtricamente con un
lector de microplacas (FL600; Bio-Tek, Winooski, Vt.) A 750 nm. En comparacin con una curva
estndar, la cantidad de fosfato liberado-y, por tanto, la cantidad de ATP consumido-fue cuantificada
fi. frmacos insolubles en agua se disolvieron en metanol o sulfxido de dimetilo; el metanol o dimetil
sulfxido concentracin mxima (2% [vol / vol]) se demostr no afectar a la actividad de ATPasa.
RESULTADOS
Como sustratos fluorescentes fl transportados por mamfero P-gp, DNR y Rho sirven
como marcadores para la funcin de transporte activo simplemente mediante la medicin de
la cantidad de fluorescencia retenida por clula (34). En este documento se muestra que
algunos antifngicos azlicos pueden inhibir eficazmente el transporte mediado por P-gp de
DNR o Rho. El IC 50 puede ser determinado a partir de una funcin simple, como se muestra
en la Fig. 1, que muestra la fluorescencia retenida para muestras de clulas viables medido
con un citmetro de flujo a diversas concentraciones del agente antifngico. La dependencia
de la concentracin de la inhibicin est representada una curva de respuesta sigmoidal (Fig
1;. Ver fig.
2), una consecuencia de cooperatividad (36), con la ecuacin de Hill para las
enzimas de interaccin alostricos siendo por tanto la funcin apropiada para fi tting
a los datos: v V mx S norte/( K S norte),
dnde v es la inhibicin observada, V mx es la inhibicin mxima, S norte es la
concentracin de sustrato, y K es la IC 50. El IC 50 de itraconazol para el transporte
DNR en la lnea celular NIH-3T3-G185 (que expresa el producto del gen de
MDR1 humano)
162 Wang et al. UN NTIMICROB. UN GENTS do HEMOTHER.

HIGO. 2. retencin intracelular de DNR (A) o Rho (B) en las clulas G185 frente a la
HIGO. 1. retencin intracelular de DNR (A) o Rho (B) en las clulas G185 frente a la
competencia concentracin ketoconazol. La fluorescencia in- tensidad se expresa como
competencia concentracin itraconazol. Inten- sidad de fluorescencia se expresa como
fluorescencia relativa. El nmero medio de clulas por ensayo fue de 10.000. La funcin para
fluorescencia relativa. El nmero medio de clulas por ensayo fue de 10.000. La funcin para la
la lnea a travs de los datos es la ecuacin de Hill: v V mx S norte/( K
lnea a travs de los datos es la ecuacin de Hill: v
S norte). El IC parmetros 50 y
V mx S norte/( K S norte). El IC parmetros 50 y Hill
Colina coeficiente (n; con desviaciones estndar) se muestran en los grficos respectivos.
coeficiente (n; con desviacin estndar) se muestran en los respectivos grficos. yo max, un
yo max, un porcentaje de la inactivacin completa que OC- curred con vanadato; CSA,
porcentaje de la inactivacin completa que se produjo con vanadato; CSA, ciclosporina A.
ciclosporina A.

de esta lnea celular y por lo tanto no se espera que sea un inhibidor

estaba 1.7 M, y el itraconazol podran alcanzar aproximadamente el 16% de la inhibicin significativo de la funcin de P-gp (Fig. 3).
mxima conseguida con el patrn de referencia (vanadato). Una medida de la inhibicin la hidrlisis de ATP. Como ATP se consume a una velocidad supuesta de aproximadamente

30% de la mxima una o dos molculas por eventos de transporte, la hidrlisis

(Referencia) la inhibicin se puede lograr para muchos sustratos conocidos P-gp e

inhibidores de (34). La ciclosporina A inhibe este proceso con una CI 50 de 1.4 M. Por
ejemplo, la inhibicin del transporte de DNR observada para el control positivo Tabla 1. Parmetros de la inhibicin del transporte mediado por P-gp-de
DNR o Rho en la lnea celular resistente a mltiples frmacos o roedor
verapamil inhibidor de P-gp utilizado comnmente representado 40% de la inhibicin
lnea celular transfectada con MDR1 humana
completa observada para vanadato en el mismo experimento. Como se muestra en la
Fig. 1B, el itraconazol no tuvo ningn efecto significativo en el transporte de Rho (otro antifngico Marcador IC 50 ( METRO) un yo max (%) a, b n (Hill coeficiente) un

marcador fluorescente fl). Este resultado se debe probablemente a los sitios de unin DNR itraconazol 1.7 0.2 diecisis 0.3 1.9 0.4
distintos sobre P-gp que a menudo han sido descritos (35, 36). Debido a que estas itraconazol Rho nordeste do nordeste N/A

lneas de clulas sobreexpresan las respectivas enzimas transportadoras, la IC 50 sera Ketoconazol DNR 5,6 0.4 40 1 1.6 0.2
ketoconazol Rho 49 3.4 51 2 2.9 0.5
de esperar a ser mayor en estas evaluaciones que en condiciones in vivo, donde un
DNR fluconazol nordeste nordeste N/A
nmero mucho menor de copias de la enzima estara contenida por clula. fluconazol Rho nordeste nordeste N/A
Ketoconazol efectos similares a los de itraconazol (ketoconazol IC exhibi 50, 6 M),
un Los datos son soluciones de regresin no lineal a la funcin de Hill seguido por el error estndar.
como se muestra en la Fig. 2 y se resumen en la Tabla 1. El fluconazol, sin embargo,
no pareca tener efecto sobre el ef activo reflujo de DNR o Rho segundo yo max, porcentaje de la inactivacin completa que se produjo con vanadato. Verapamilo inhibe el
transporte DNR 40% en comparacin con la inactivacin por vanadato.

do NE, sin efecto sobre la funcin.

re ND, no disponible.
V OL. 45, 2002 Antifngicos azoles como inhibidores de la glucoprotena P 163

HIGO. 3. retencin intracelular de DNR (A) o Rho (B) en las clulas G185 frente competir
concentracin fluconazol. Inten- sidad de fluorescencia se expresa como fluorescencia
relativa. El nmero medio de clulas por ensayo fue de 10.000.

de ATP representa la actividad de transporte o la funcin de transporte (1, 6, 28,

30, 35). Itraconazol caus un aumento concentrationdependent en la tasa de
hidrlisis de ATP con respecto a la tasa de referencia, lo que indica que como un
sustrato para P-gp que causa comparativamente rpida hidrlisis (Fig. 4A). los K metro
estaba
0.8 M, y el V mx fue aproximadamente dos veces por encima de la lnea de base

V max, como se indica en la Tabla 2. La presencia de itraconazol con la fraccin de

membrana de la lnea celular parental (CHO) no dio lugar a cambios significativos en
la hidrlisis de ATP, sirviendo as como un control negativo. Del mismo modo,
ketoconazol exhibi una
K metro de 8 M y una V mx de alrededor de cinco veces la lnea de base V mx
(Fig. 4B y la Tabla 2). El fluconazol pareca ser un sustrato de medio de e fi ciencia para
el transportador de P-gp, ya que haba un cambio en la tasa de rotacin, y los datos
sugiri una K metro de 3 M (con grandes lmites confianza debido a error) y una V mx de
aproximadamente dos veces por encima de la lnea de base V max ( Tabla 2). Los
resultados del ensayo de actividad de hidrlisis de ATP eran consonante con los de los
ensayos de inhibicin de la funcin de transporte (descrito anteriormente), con la
posible excepcin de los resultados para fluconazol fl. HIGO. 4. mediado por P-gp velocidades de hidrlisis de ATP en la presencia de
itraconazol (A), ketoconazol (B), y fluconazol (C). Los datos fueron fi cio a una hiprbola.
Para itraconazol, V mx era igual a 69 1,5 nmol / min / mg de protena de membrana, con K metro igual
a 0,8 0.2 METRO.
Para ketoconazol, V mx era igual a la protena de membrana / min / mg 53 7 nmol, con K metro igual
DISCUSIN a 8,6 3 M. Para fluconazol, V mx era igual a 61 protena de membrana / min / mg 2,3 nmol, con K metro
igual a 2,5 1
antifngicos azlicos son ampliamente prescritos para la quimioprofilaxis (20). METRO. V 0, velocidad inicial.

Nuestros resultados demuestran la inhibicin de la humana

164 Wang et al.
TABLA 2. Parmetros cinticos de la hidrlisis de ATP en presencia de
antifngicos azoles
antifngico K m ( METRO) V max ( nmol / min / mg)
itraconazol 0.8 0.2 69 2
ketoconazol 8.6 3 53 7
fluconazol 2.5 1 61 2
P-gp funcin de transporte por algunos antifngicos azlicos. La inhibicin observada
fue dependiente de la concentracin, con IC 50 s de 2 M para el itraconazol y 5 M para
ketoconazol cuando se utiliz DNR como sustrato marcador. La ciclosporina A era
inhibidora con un IC 50 de 1,4 M en este sistema. Estos experimentos usaron la lnea de
clulas NIH-3T3-G185, que expresa ms grande que las cantidades normales de la
enzima transportador de P-gp humana. Debido a que estas lneas de clulas
sobreexpresan la enzima transportador, el IC 50 sera de esperar en estas evaluaciones
a ser mayores que las que se encuentran en condiciones in vivo, donde un nmero
mucho menor de copias de la enzima estara contenida por clula. ATP cintica de
hidrlisis mostraron que el itraconazol interacta con P-gp con una concentracin de
saturacin media-mxima de 1 M. Desde itraconazol, ketoconazol, fluconazol y fl son
conocidos para unirse a CYP3A4 (aunque fluconazol se une slo dbilmente) y desde
las Definiciones sustrato de tanto para CYP3A4 y P-gp son (diversas estructuras
lipfilos similares con pesos moleculares de 300 a 1000) y, por lo tanto, comparte la
mayora de los sustratos, no es sorprendente que estos antifngicos azlicos tambin
se uniran al sitio de unin de sustrato de P-gp. De hecho, las estructuras tipifican la
unidad de tipo II de los tres grupos donantes de electrones con una separacin espacial
de 4,6 0,6 sugerido por Seelig (26) como uno de dos patrones generales para el
reconocimiento del sustrato por P-gp (construido a partir de un estudio de la relacin
estructura-actividad de los sustratos conocidos de P-gp).
Las observaciones clnicas parecen indicar que los antifngicos azlicos
interactan con el transportador de P-gp. Las concentraciones de lovastatina, un
sustrato de P-gp y el inhibidor (37), en plasma aumentaron ms de 20 veces
cuando se administr junto con itraconazol (22). Adems, la biodisponibilidad oral
de simvastatina fue tambin significativamente aumentado por el tratamiento con
itraconazol o ciclosporina A (3, 19, 23, 25). Desde itraconazol y ciclosporina A
son ambos inhibidores de P-gp y CYP3A4, es difcil de discernir la avenida
dominante de la interaccin.
En contraste con el itraconazol y el ketoconazol, fluconazol no parecen inhibir el
transporte activo de la DNR sustratos marcadores y Rho por P-gp. El fluconazol
puede ser un sustrato para el transporte activo por P-gp, con difusin pasiva muy
lento travs de la membrana, impidiendo as la reentrada y la interaccin con el sitio
de unin de sustrato (7, 8). De hecho, la molcula de uconazol fl es
significativamente ms corto, ms pequeo, y ms hidrfilos que los otros dos
antifngicos considerados en este documento. Dos de los antifngicos azlicos
ensayados en el presente estudio (itraconazol y ketoconazol) son otros ejemplos de
inhibidores o sustratos tanto de P-gp y CYP3A4 eficaces. Por lo tanto, la resistencia
al tratamiento antifngico puede ser conferida por tanto de estas enzimas. Puesto
que P-gp tiene un efecto significativo sobre la absorcin y disposicin de los
frmacos administrados por va oral, su papel podra ser tan significativo como el de
CYP3A4. Muchos, si no todos, de las interacciones clnicas conocidas con
antifngicos azlicos son con compuestos que son sustratos de P-gp, que por lo
tanto pueden estar
UN NTIMICROB. UN GENTS do HEMOTHER.
significativo en trminos de las interacciones clnicas observadas. Como varios de
estos antifngicos azlicos inhibir eficazmente la funcin de P-gp, interacciones
clnicas pueden esperarse con otros sustratos de P-gp de alto af infinito.
EXPRESIONES DE GRATITUD
Estamos muy agradecidos a Adriane L. Stewart por su ayuda editorial y Eleanor Johnson
para comentarios.
Referencias
1. Ambudkar, SV, CO Cardarelli, E. Pashinsky, y WD Stein. 1997. Relacin entre el nmero de
recambio para el transporte vinblastina y para vinblastina estimulada por la hidrlisis de ATP
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