Estudio de algunos factores que afectan el establecimiento de un mtodo espectrofotomtrico

Objetivos

Observar el comportamiento de absorbencia que presenta algn analito variando

condiciondiciones en las que se encuentra a y as

Introduccin

Resultados

Resultados para la seleccin de tubos

Tabla No. 1. Seleccin de tubos comunes para usarlos como celdas

%T a 400
Tubo No. nm. Tubo No. %T 400 nm
1 100 1 Blanco
2 94.2 2 23.9
3 94 3 23.7
4 94.4 4 23.9
5 94.5 5 23.2
6 94.5 6 23.1
7 94.4 7 23.9
8 94 8 23.5
9 95.1 9 23.6
10 94.5 10 23.5
11 94.4 11 23.7
12 94.3 12 23.9
13 94.7 13 23.8
14 94.5 14 23.6
15 94.5 15 23.8

Curva de calibracin

Para llenar los datos de la tabla nmero dos con respecto a los g/mL de 3+ se determino que:

En un sol 1M haban 55.8 g de 3+

Por tanto si la solucin empleada era de una concentracin de 0.00025 M

55.8
( ) (0.00025 ) = 0.01395
1
A su vez esos 0.01395 g al ser molares se encuentran en un volumen de 1000 mL y se tomaron en
la alcuota 0.05 ml, de manera que:

0.01395
( ) (0.05 ) = 6.975107
1000

Donde finalmente esta cantidad se encontraba disuelta en un volumen final de 10 mL por tanto se
dividi entre diez y para obtener la concentracin que se pedia en g/mL se multiplic por los
factores de conversin de g a g.

(6.975107 )
= 6.975108
10
1000 1000
(6.975108 )( )( ) = 0.06975 0.07
1 1

Tabla No. 2. Curva de calibracin de 3+ por el mtodo de NHSCN

Abs. Ajustada
Tubo No. 3+ ( ) Absorbancia por regresin

lineal.
1 0 0 0.013
2 0.07 0.014 0.023
3 0.175 0.035 0.038
4 0.348 0.058 0.0627
5 0.697 0.104 0.1126
6 1.046 0.179 0.1625
7 2.441 0.378 0.362
8 3.836 0.604 0.5615
9 5.231 0.703 0.761
10 6.626 0.952 0.9605
11 8.021 1.200 1.16
12 9.416 1.376 1.3594
13 10.811 1.520 1.5589

Ahora bien a partir de los datos de la absorbancia obtenida experimentalmente, se construy una
curva de calibracin para la obtencin de la forma de recta que describiera este comportamiento.
 2
y = 0.1427x + 0.013
1.5 R = 0.99

Absorbancia
1

0.5

0
0 2 4 6 8 10 12
Concentracin Fe (g/mL)

Grfica No. 1. Curva de calibracin de la concentracin de in frrico.

La forma de la ecuacin grficamente significa:

= 0.013 + 0.143(. )

En base a el comportamiento descrito por la ecuacin anterior, se procedi a la obtencin de la

absorbancia ajustada por regresin lineal (tabla no. 2.) empleando las concentraciones que
debiesen haber sido las adicionadas de manera que:

Ejemplo en tubo No. 4

= 0.013 + 0.143(. )

= 0.013 + 0.143(0.348) = 0.0627

Empleando las 2 absorbancias obtenidas se prosigui a calcular la absorbancia que produce la

concentracin minima detectable mediante el uso de la ecuacin

= + 3

Donde YB=a de nuestra ecuacin de la grafica obtenida anteriormente y SB la desviacin de laresta

de los blancos obtenidos.

Tabla No. 4 Valores para obtencin de absorbancia que produce la concentracin mnima
detectable

Abs. Abs.
Tubo No. Prctica Ajustada P-A (P-A)^2
(P) (A)
1 0 0.013 -0.013 0.000169
2 0.014 0.023 -0.009 0.000081
3 0.035 0.038 -0.003 9E-06
 4 0.058 0.0627 -0.0047 0.00002209
5 0.104 0.1126 -0.0086 7.396E-05
6 0.179 0.1625 0.0165 0.00027225
7 0.378 0.362 0.016 0.000256
8 0.604 0.5615 0.0425 0.00180625
9 0.703 0.761 -0.058 0.003364
10 0.952 0.9605 -0.0085 7.225E-05
11 1.2 1.16 0.04 0.0016
12 1.376 1.3594 0.0166 0.00027556
13 1.52 1.5589 -0.0389 0.00151321
= 0.00951457
Para calcular la desviacin estndar se tiene que

( )2
=
1

Entonces

( )2
=
1

0.00951457
= = 0.02815
13 1

Ahora como ya se conoce la desviacin estndar se procede a calcular la absorbancia que produce
la concentracin minima detectable

= + 3

= (0.013) + 3(0.02815) = 0.9745

Empleando esta absorbancia mnima se calcula la concentracin mnima con ayuda de la forma de
la ecuacin que arroj nuestra curva de calibracin.

= 0.013 + 0.143(. )

0.9745 = 0.013 + 0.143()

0.9745 0.013
= (. ) = 6.72
0.143

Ahora para calcular el LDD se tiene que

 3
=

3(0.02815)
= = 0.5905
0.143

Mtodo de Ringbom para determinar el %Ep

El %T y la absortanciaen la tabala No. 3. Se realizo de la siguiente manera:

La Absorbancia pueda estar exprresada por la siguente frmula

= 2 log(%)

Por tanto se despej el %T

= 2 log(%)

2 = log(%)

102 = %

Ejemplo de clculo para %T para el tubo No. 5

102 = %

1020.1126 = % = 77.16 %

Finalmente la Absortancia se obtiene de la resta de

= 100 %

Ejemplo para clculo de Absortancia para el Tubo No. 9

= 100 %

= 100 17.34 = 82.66

Usando los datos de la tabla anterior

Tabla No. 3. Datos para aplicar el mtodo de Ringbom en la determinacin de 3+ por el mtodo
del SCN
 Abs. 480
Tubo No. 3+ ( ) Log [ 3+] nm %T Absortancia

ajustada
1 0 -8 0.013 97.05 2.95
2 0.07 -1.1549 0.023 94.84 5.16
3 0.175 -0.7570 0.038 91.62 8.38
4 0.348 -0.4584 0.0627 86.56 13.44
5 0.697 -0.1568 0.1126 77.16 22.84
6 1.046 0.0195 0.1625 68.79 31.21
7 2.441 0.3876 0.362 43.45 56.55
8 3.836 0.5839 0.5615 27.45 72.55
9 5.231 0.7186 0.761 17.34 82.66
10 6.626 0.8213 0.9605 10.95 89.05
11 8.021 0.9042 1.16 6.92 93.08
12 9.416 0.9739 1.3594 4.37 95.63
13 10.811 1.0339 1.5589 2.76 97.24

Con ayuda de los datos de la Tabla No. 3. Se procedi a graficar lo siguiente:

120

100

80
Absortancia

60

40

20

0
-1.50 -1.00 -0.50 0.00 0.50 1.00 1.50
Log[Fe]

Grafica No. 2 Grafica de Ringbom para la determinacin de el % Ep.

En la grfica anterior se observa una lnea de tendencia la cual describe el intervalo de

experimento donde hay un comportamiento lineal. Para conocer la pendiente de dicha tendencia
se aplico la frmula de la pendiente(m) que dice que:

(2 1)
=
(2 1)
Y se usaron los datos donde se observo este comportamiento lineal (tubos 7 y 8)

(72.55 56.55)
= = 81.5
(0.5839 0.3876)

Con todos los datos previamente calculados se calcul el %Ep

El cual estaba dado por la ecuacin de:

2.303
% = 100

Y tendramos que el %Ep obtenido fue de:

2.303
% = 100 = 2.82 %
81.5

Efecto de tiempo en la estabilidad del color

Tabla No. 4 Estabilidad del color respecto al tiempo

Tiempo Abs. 480

(min) nm.
0 0.532
30 0.467
60 0.442
90 0.422
120 0.395

0.6

0.55
Absorbancia

0.5

0.45

0.4

0.35
0 20 40 60 80 100 120 140
Tiempo (min)

Grafica No. 3. Estabilidad del color respecto al tiempo

Efecto de la concentracin del cromgeno

Para los clculos de la concentracin se realizo un procedimiento parecido al de la tabla No.3.

Tabla No. 5. Efecto de la concentracin de SCN en la determinacin de Fe

SCN Fe Abs 480

Tubo No. SCN/Fe
(g/mL) (g/mL) nm.
1 Blanco
2 87 4.185 20.7885305 0.156
3 232 4.185 55.4360812 0.234
4 870 4.185 207.885305 0.362
5 2900 4.185 692.951016 0.528
6 5800 4.185 1385.90203 0.613
7 8700 4.185 2078.85305 0.66
8 11600 4.185 2771.80406 0.703
9 14500 4.185 3464.75508 0.724

0.8
0.7
0.6
Absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
[SCN]/[Fe]

Grfica No. 4. Efecto de Concentracin de SCN

Efecto del pH en el desarrollo de color de la reacciom entre el Fe y el SCN

Tabla No. 6. Efecto de pH

 Abs 480
Tubo No. pH nm.
1 Blanco
2 1 0.818
3 1 0.893
4 2 0.893
5 7 0.022
6 8 0.021

1
0.9
0.8
0.7
Absorbancia

0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10
pH

Grafica No. 5. Efecto de pH sobre la absorbancia

Efecto de algunos aniones sobre la absorbancia absoluta

Tabla No. 7. Efecto de algunos aniones en la reaccin Fe-SCN

480 nm
Anin Abs. Inicial Abs Final
Fluoruro 0.865 0.423
Oxalato 0.872 0.175
Tartrato 0.853 0.838
Fosfato 0.855 0.801
 1
0.9
0.8
0.7
0.6
0.5 Abs. Inicial

0.4 Abs Final

0.3
0.2
0.1
0
Fluoruro Oxalato Tartrato Fosfato

Grafica No. 6. Comparativa de absorbancias obtenidas antes y despus de adicionar los aniones.

Parmetros ptimos para el mtodo del sulfocionuro de amonio para determinar fierro frrico

Tabla No. 8. Condiciones otimas para la dterminacin de Fe con NHSCN

Parmetro Valor ptimo

pH
Tiempo
Concentracin de SCN
Limites de concentracin con %Ep mnimo
Aniones que interfieren
Limite de deteccion del mtodo

Discusion

En cuento a los primeros resultados de la eleccin de tubos comunes para su uso como celdas es
importante tomar en cuenta que las celdas o cubetas idealmente estas debiesen ser
completamente transparentes a todas las longitudes de onda debido a que la absorbancia de la
muestra esta cirteamnete influenciada por el de el paso ptico a travez de la superficie de la
celda , en otras palabras, la radiacin incidida no debiese ser alterada por la superficie de el
materia el cual este siendo atravesado, en su defecto como todo esta alejado de la idealidad, al
buscar superficies pticas equivalentes se espera que si existiese difraccin producida en los tubos
seleccionado,s esta sea la misma en todos, por eso se buscaron los mismo tipos de tubos con las
mismas dimensiones (mismos dimetros). En los tubos seleccionados se encontr que no existi
una variacin importante en la transmitacia que presentaba cada tubo seleccionado, los valores
encontrados de absorbancia para cada tubo se encontraban alrededor del 94 %T por tanto al
existir esat poca variacin se acepto que los tubos seleccionados posean superficies pticas
equivalente y adems de eso las mismas dimensiones o muy parecidas dimensiones de dimetro
interno.

En la curva de calibracin se desarrollo el procedimiento para determinar que tan sensible era el
mtodo y se obtuvo que la cantidad mnima detectada es de 0.59 microgramos de Fe por mililitro,
no obstante, que el instrumento detecte esta cantidad de analito significa que pueda ser
cuantificada con veracidad en el resultado.Para poder saber la concentracion mas baja del analito
que puede determinarse con presicion y exactitud aceptables se realizaron los mtodos
matematicos y se obtuvo que esta cantidad minima corresponde a 6.72 microgramos, Este
resultado se encuntra localizado en lso puntos inermedis de la curva de calibracin de manera que
se acepta que se esta siguiendo le ley de Beer en esta reaccin pues en los puntos intermedios
tendre menor error.

DE acuerdo a los resultados obtenidos parael %Ep se obtuvo que fue de 2.82% el cual un
porcentaje aceptado pues lo mximo axeptado es el 5%, pero este porcentaje quiere decir que

En el efecto de el tiempo en la estabilidad de color se realizaron medidas de absorbancia cada 30

minutos, entonctres cada lectura que existi una tendencia a la disminucin de la absorbancia
regstrada, ta comportamiento nos indica que no hay una buena establidad de el color por la
reaccin formad, este comportamiento puede atrubirse a la reversibilidad de la reaccin por una
inestabiliadd completa en la molecula. Por tanto se determino que seria predferible leer la
coloracin durante los primeros minutos debido a que fue donde se obtuvo una mayor
absorbancia.

En lso resultaods obtenidos por la variacin de la concentracion primeramente se observo un

comportamiento lineal que despus la pendiente de dicho comportamiento se fue reduciendo, el
por que de esto se explica en que la ley de Beer es ideal para poder describir la absrocion de
soluciones las cules no tengan un alto contenido de uestra, debido a que la absrocion que
presentan estos analitos se ven afectadas por la distrubucion de las moleculas de manera que si
hay muchas molecuas interactuando, la interaccion interferira en la capacidad de absrobcionde
cada molecula disminuyndola y esto a su vez se refleja en una desviacin a la ley de Beer.Cabe
mencionar que este efecto no solo se refere a grandes concentraciones de el analito si no tambin
incluye que existan altas concentraciones de alguna otra especie.

Con respecto el efecto de pH observado en el experimento se

https://books.google.com.mx/books?id=yVYn7_MoaAIC&printsec=frontcover&dq=superficies+opt
icas+equivalentes+espectrofotometro&hl=es&sa=X&ved=0CC0Q6AEwAGoVChMIha75p-
7XyAIVREomCh04bwpx#v=onepage&q&f=false
https://books.google.com.mx/books?id=rQ8VC8_pMyQC&pg=PA250&dq=superficies+opticas+equ
ivalentes&hl=es&sa=X&ved=0CCMQ6AEwAGoVChMIp_a_8vDXyAIVy-
AmCh1Akgw7#v=onepage&q=superficies%20opticas%20equivalentes&f=false

http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/2001184/lecciones/Cap10/01_01_01.htm

http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Documento_de_Apoyo:_Precision_en_espectrofoto
metria_2598.pdf

http://biblioteca.usac.edu.gt/tesis/08/08_0979_Q.pdf

http://www.saber.ula.ve/bitstream/123456789/23867/1/articulo2.pdf

http://repositorio.utp.edu.co/dspace/bitstream/11059/2080/1/628162S211.pdf

http://www.bvsde.paho.org/bvsacd/scan/030351/030351-04.pdf