Purificação de Proteínas: Cromatografia

2017627 Purificaodeprotena
pesquisa
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Purificaodeprotena
CarolineRitchie(ritchie103dotcarolineatgmaildotcom)
UniversidadedoEstadodeIowa,EstadosUnidos
Tradutor
AntonielleVieiraMonclaro(antonielleatgmaildotcom)
UniversidadedeBraslia,Brasil
DOI //dx.doi.org/10.13070/mm.pt.2.134
Encontro modificadapelaltimavez:20160918versooriginal:20121117
Citeas MTODOSMATERpt20122:134
Resumo
Uma reviso a fundo sobre colunas de cromatografia utilizadas para purificao de
protenas.
InglsAbstract
Uma reviso em profundidade de cromatografia de coluna para a purificao
deprotenasepesquisaresultarde305publicaesformais.
Em muitas aplicaes experimentais, so requeridas protenas purificadas, incluindo em estudos

estruturaiseensaiosbioqumicosinvitro. As protenas podem ser obtidas a partir de tecidos, mas
comumente elas so super expressas em organismos modelos como bactrias, leveduras ou
cultivosdeclulasdemamferos.Apurificaodeumaprotenaenvolveoisolamentodelaapartir
da fonte, e baseado em suas diferentes caractersticas fsicas. O objetivo de um esquema de
purificao reter a maior quantidade de protenas funcionais com o menor nmero de
contaminantes.Oesquemadapurificaodaprotenadeveserotimizado,paraqueoprocessoseja
completadoemummenornmerodepassospossveis.
Esse artigo revisa os quatros principais tipos

de cromatografias e as colunas comumente
usadas para a purificao, e discute as
vantagens, desvantagens e potenciais
problemas de cada. Esse artigo tambm
discute a reviso de literatura feita pela
Labome de 98 publicaes. Essa reviso Figure1.SoluotamponantedeTris,contendoabase
Triseseucidoconjugado.OpKa doTrisa25C8.06,
indica que a cromatografia de afinidade,
indicandoquenopH=8.06,50%doTrisseencontrar
principalmente que contem os marcadores protonado(emsuaformacida)e50%desprotonada(na
excluso molecular, suaformabsica).
HIS, GST, e FLAG, e a excluso
so os principais mtodos citados nas
publicaes. A GE Healthcare foi a maior fornecedora de reagentes e instrumentos utilizados na
purificaodeprotenas.
Desenvolvimentodeumesquemadepurificaodeumaprotena
A principal considerao a se fazer no desenvolvimento de um esquema de purificao a

aplicao que se pretende dar a essa protena. Tanto a quantidade como a qualidade da protena
devem ser suficientes para a anlise experimental. Alm disso, informaes referentes ao
comportamento dessa protena como o dobramento correto e sua funcionalidade so necessrios
para estudos downstream . Durante a purificao e seu subsequente armazenamento, podem
ocorrermuitosprocessosqueafetamsuaqualidade:desnaturao,agregao,degradaoeperda
de funo. Um planejamento cuidadoso, que permita purificar a protena o mais rpido possvel e
em condies que promovam maior estabilidade da protena, maximizar a chance de uma
purificaobemsucedida.
http://www.labome.com.br/method/ProteinPurification.html 1/21
Componentesdotampo
Ascondiesdasoluoemqueaprotenaseencontraduranteasetapas
de purificao so essenciais para manter a funo e estabilidade da
protena.Asprotenasdevemsemanteremsoluotamponanteparaevitar
trocas repentinas de pH e que podem afetar de maneira irreversvel seu
dobramento, solubilidade e funo. Um tampo uma soluo que contm
Figure2.Sistema
AKTAprimePluspara umparconjugadocido/base.AvariaodopHdeumtampodadopelo
separao seupKa,definidocomoopHemque50%dasmolculasseencontramem
cromatogrfica
automatizadade suaformacidaeosoutros50%emsuaformabsica(Figura1).Umaregra
protenas.DaGE. geral para as solues tamponantes que o pH da soluo deve estar em
uma unidade de valor a mais ou a menos da respectiva unidade de pH do
seupKa,paraterumaboacapacidadetamponante.Issoasseguraquehajamolculassuficientes,
tanto em sua forma cida, quanto em sua forma bsica, para neutralizar o possvel influxo de
molculas de H+ ou OH. Assim, os tampes previnem mudanas de pH que poderiam afetar a
estabilidadedaprotena.
Um bom tampo deve conter as seguintes

caractersticas:[1]:
1.Solubilidadeaquosa
2.Estabilidadequmica
3.AltacapacidadetamponantenopHdesejado
4.Compatibilidadecomasaplicaesanalticase
experimentais
5.Compatibilidadecomoutroscomponentesda
soluo Figure3.LiganteNiNTAcovalentementeligadoauma
matrizdeligaocruzadadeagarose,parapurificao
seletivadeprotenasmarcadascompolihistidina.Os
Vrioscomponentespodemservirdetampo
resduosdehistidinapodemcoordenarcomoondeNi2+
biolgico. Os mais comumente utilizados substituindoasmolculasdegualigadas(indicadascom
possuem um pKa quase neutro, j que flechasroxas).Logoapspodeseutilizarimidazolou
histidinaparaeluiraprotena,graasasuacapacidadede
podem ser utilizados em pHs fisiolgicos. A coordenarcomoonNi2+esubstituiraprotenaligada.De
tabela 1 lista os quatros principais tampes BioKe.
mais utilizados, suas vantagens e
desvantagens, que podem determinar seu uso na purificao das protenas. Normalmente, esses
tampes so utilizados na concentrao de 25 mM, para garantir uma capacidade tamponante
adequada.
Aditivosdesolues
Tampo Variao Vantagensedesvantagens
depH
As solues utilizadas
durante a purificao de
OpHnodependentedetemperatura protenas, desde o lisado
atoarmazenamento,alm
Barato
de conter um sistema
Fosfato 5,88,0 Transparenteemvrioscomprimentos
tamponante adequado,
deUV
geralmentecontemtambm
Nopodeserutilizadocomctions outros componentes que
divalentes podemfacilitarapurificao
da protena, sua
Nopodeserautoclavado estabilidadeesuafuno.O
pHlevementedependentede tampo de lise, nos
MOPS 6.57.9 temperatura primeiros passos de
AltacapacidadetamponanteempH purificao, geralmente
fisiolgico contem inibidores de
proteases, para prevenir a
HEPES 6.88.2 degradao da protena de
Nopodeserautoclavado
interesse por ao de
pHlevementedependentede
proteases endgenas. Em
temperatura
Podeformarradicaisemcertas etapas posteriores de

condies[2] purificao,essesinibidores
no so mais necessrios,
j que a maioria das
pHdependentedetemperaturae
proteases contaminantes
diluio
foram separadas da
Barato
protena de interesse. Os
Tris 7.59.0
Podeinterferircomalgumasatividades reagentes quelantes de
enzimticas[3],[4] metais, como EDTA ou
Transparenteemvrioscomprimentos EGTA, so adicionados em
deUV tampes de
armazenamento. Esses
Tabela1.Ostampesbiolgicosmaisutilizadosparapurificaodeprotenas. quelantes de metais se
Ostampesmantemacapacidadetamponantedentrodeumavariao
especficadepH,ealgumascaractersticasdoscomponentesdostampes ligam ao Mg2+ e assim,
podeminterferircomalgunsprocedimentoscromatogrficoseanalticos. previnem a degradao da
ResumidodePromega,SigmaAldrich,Applichem,Embl.de.
protena purificada por
metaloproteases
contaminantes. Outros aditivos so adicionados para proteger as protenas de danos e aumentar
suasolubilidade.
Tipo Funo Reagentescomumenteutilizados
2mercaptoetanol(BME)
Agentes
Protegemcontraodanooxidativo Ditiotreitol(DTT)
redutores
Tris(2carboxietil)fosfina(TCEP)
Leupeptina(inibidordeserinae
cistenaprotease)
Inibidoresde Inibemaatividadadadecatalticade
proteases proteasesendgenas PepstatinaA(inibidordecido
asprticoprotease)
PMSF(inibidordeserinaprotease)
Quelantesde EDTA
Inativarmetaloproteases
metal
equao
Glicerol
Osmolitos
Estabilizaraestruturadaprotenaeaumentar Detergentes(e.g.,CHAPS,NP40,
suasolubilidade
TritonX100)
Acares(e.g.,glicose,sacarose)
Estabilizantes Sais(e.g.,NaCl,KCl,(NH4 )2 SO4

Aumentarasolubilidade
inicos
Tabela2.Aditivoscomumenteutilizadosnostampesdepurificaoparaaumentaraestabilidadedasprotenas.
ResumidodaThermoFisherPierceeEmbl.de.
Osaditivosdevemserutilizadossomenteemcasodenecessidade.importantetestarosaditivosantes,paradeterminar
quaisdelesserobenficosparaoesquemadepurificaodeumadeterminadaprotena.
Outrosfatoresparaconsiderar
Outros fatores tambm contribuem para a estabilidade da protena durante o processo de

purificao. Quanto menos se manipula a protena durante sua purificao, melhor. Desenhar um
esquema de purificao que utiliza a mnima quantidade de passos possvel e no menor tempo
assegura uma recuperao mxima da protena funcional. Geralmente, a purificao se realiza a
4C, j que nessa temperatura se diminuem as taxas de protelise (no caso de existir proteases
contaminantes)epromoveaintegridadeestruturaldasprotenas.
Introduoacromatografiadecoluna
Equipamentosparacromatografiasdecoluna
Oprincpiodacromatografiaemcolunadeseparaodegrandesgruposdeprotenasemgrupos
menores, sendo que em um deles que se encontra a protena de interesse. Apesar dos
equipamentosdisponveisseremcaroseespecializados,somentealgunsequipamentosbsicosso
necessriospararealizarcromatografia.
Equipamentosbsicosparacromatografiadecoluna:
1.Faseestacionria:umamatrizinerteutilizadaparaseparar
protenas,normalmentecomalgumgrupofuncionalligadopara
facilitarainteraodaprotena.Aescolhadafaseestacionriae
dogrupofuncionaldependertantodotipodecromatografiacomo
domtodoqueserrealizado.
2.Coluna:reservatriocilndrico,devidro,disponvelemvrias
alturasedimetros.Ascolunaspodemsercompradaspr
empacotadascomumafaseestacionriaeprontasparaserem
acopladasemsistemasautomatizados(discutidonaparte2dessa
seo)oupodemsercompradasvaziasparaseremempacotadas
manualmente.Diferentestiposdecolunassorequeridos
dependendoseosistemaforautomatizadooufordebaixapresso
(gravidade).
3.Solventes:tampescomaditivos,utilizadosparaequilibrar,lavare
eluirasprotenasdafaseestacionria.Diferentestiposde
cromatografiasdemandamdiferentescondiesdesolvente.
4.Tuboscoletores:recipientesparacoletarasfraesdeeluiono
geral,qualquertuboourecipientepodeserutilizadoparacoletar
asfraes.
Figure4.Esquemadepurificaopor 5.Ensaioparamedirapurezadaprotena:abordagensque
afinidadeusandoasProtenasA,GouL. determinamaquantidaderelativadeumaprotenaemrelaos
Osanticorposcontemvriasregiesde protenastotaisdeumaamostra.Inicialmentenecessrio
interesse:ofragmentoFc(regio determinarqualfraoquecontemaprotenadeinteresse,antes
constante),noqualigualparatoda dedarcontinuidadeaoesquemadepurificao.Algunsdos
classedeanticorpos,ofragmentoFv mtodosmaisfrequentementeutilizadosparaanalisarapureza
(regiovarivel),noqualconferea serodiscutidosnumaseoposterior.
especificidadedecadaanticorpo,eo
fragmentoFab(regiodeunioao
antgeno),noqualentraemcontatocom Sistemasparacromatografiadecoluna
oantgenoespecfico.B.Tipos
especficosdeanticorpospodemser A cromatografia de coluna pode ser realizada usando
purificadosdemaneiraseletivaatravs sistemas automatizados (figura 2), dos quais utilizam uma
dapurificaoporafinidade,ondeo
ligante(protenaA,GouL)conjugado bomba para forar o fluxo do solvente atravs da coluna
comamatriz.C.AsProtenasA,GouL, empacotada a uma velocidade determinada ou pode ser
tambmpodemserutilizadaspara
purificarprotenasespecficas.Nesse feito pela fora da gravidade. Ambos os sistemas, por
caso,oanticorposervecomoumligante bomba ou por gravidade, podem ser acoplados a um
intermedirioprotegendoaseletividade
doseuantgeno. sistema automtico de coleta de amostras. Cada sistema
possuivantagensedesvantagens.OsistemadeFPLCAKTA
daGEHealthcareumdosmaisutilizados[510].
Tiposde
Tiposde Vantagens Desvantagens colunas
sistema cromatogrfica
Os quatro tipos
Podecorrersozinho
de
Normalmente cromatografia
acopladoaum emcolunamais
detectorde importantes
Requerequipamentos
absorbncia incluem a
especficosecaros
Automatizado Podeprogramaros cromatografia
Ofluxomximodependente
passosdeequilbrio de afinidade,
dolimitedepressoquea
elavagem de troca inica,
colunasuporta
Facilidadepara defasereversa
realizarumgradiente e de excluso
deeluio molecular. A
Altareprodutibilidade maioria dos

esquemas de
Fluxopor purificao
gravidade Maiseconmico Maislaborioso
requeremouso
Ousuriotemmaior Ofluxoestlimitadopela de mais de um

controle gravidade desses
procedimentos
Podemserfeitos
para poder
ajustesdurantea
alcanar a
corrida
pureza
necessria
Tabela3.SistemasparaseparaocromatogrficadeprotenasdaGE.
para as
aplicaes
seguintes. Escolher os mtodos cromatogrficos apropriados e a ordem deles essencial para
otimizaroprocessodepurificao.
Tiposde Separaas Ligacom Eluicom

cromatografia protenaspor
Ausnciade
Umainterao Ligantecompetidor(especfico)condiesqueimpedem
Afinidade ligante
especfica asinteraesprotena/protena(noespecfico)
competidor
Cargalquida Baixafora
Trocainica AltaforainicapHalto(catinica)oubaixo(aninica)
carregada inica
Interao
Hidrofobicidade Altaforainica Baixaforainica
hidrofbica
Excluso Raio
molecular hidrodinmico
Tabela4.Osquatroprincipaistiposdecromatografiautilizadosparapurificaodeprotenas.
Analisandoasequnciadeprotenaspodeseidentificarcaractersticasnicasquepodemajudaremsuapurificao.
Podesedeterminarotamanhoeacargadaprotena(emumdadopH),assimcomoumasriederesduoshidrofbicos.
Cromatografiadeafinidade
A cromatografia de afinidade se baseia na ligao especfica e reversvel de uma protena a um

ligante acoplado a matriz. O ligante pode se ligar de maneira direta a protena de interesse, ou a
algumamarcaomolecularqueseencontreligadanaprotena.Acromatografiadeafinidade,no
geral, a tcnica de purificao mais robusta e tipicamente utilizada nos passos iniciais dos
esquemas.Apurificaoporafinidadepodeseronicopassorequeridoparachegaraumgraude
purezaadequado,dependendodaaplicaoquesequeiradarparaaprotena.Afaseestacionria
para a cromatografia de afinidade constituda por uma matriz inerte unida covalentemente a um
ligante,queseligaespecificamenteaumaprotenaouaumgrupodeprotenas.
A matriz inerte composta de ligaes

cruzadas de agarose ou poliacrilamida. As
protenas podem ser purificadas por
cromatografia de afinidade de maneira
seletiva ou no seletiva. Na afinidade
seletiva, se usa um ligante especfico para
uma protena ou para uma marcao
molecular unida covalentemente a mesma.
Nadeafinidadenoseletiva,oliganteseune Figure5.Acargalquidadeumaprotenainfluenciada
pelopHdosolvente.QuandopH=pI,aprotenatercarga
aumgrupodeprotenascomcapacidadede lquidatotalnula,eporisso,noseligaraumafase
ligaosimilar,comoocasodasprotenas estacionriadetrocacatinicaouaninica.AjustaropH
paracimaouparabaixodopIdarumacargalquidae
A, G ou L para as imunoglobulinas a elaseligaraumafaseestacionriadetrocaaninica(pH
heparina para as protenas de ligao ao >pI)oucatinica(pH<pI).
DNA as lectinas para glicoprotenas. Em
ambos os tipos de cromatografia de afinidade, as protenas so carregadas em uma coluna sob
condies que promovam a ligao entre a protena (ou a marcao) e seu ligante. A protena
ligada lavada em uma determinada condies que no rompa a interao especfica de ligao,
porm rompa a ligao no especfica entre as protenas contaminantes e a matriz. A protena
ligada ento eluda utilizando um tampo que contenham uma molcula que v competir com o
ligante,esubstituaaprotena.Essamolculanormalmenteremovidadaprotenadeinteresseou
atravs de outra cromatografia ou por dilise. Os mtodos de eluio das protenas da matriz,
rompendo as interaes protena/protena, incluem a troca de pH ou de fora inica do tampo.

Esses mtodos podem afetar a estabilidade da protena e se sugere que a protena eluda seja
neutralizada imediatamente ou diluda, para minimizar o dano. Em algumas variaes da
cromatografia de afinidade, foram descritos condies de eluio alternativas, para maximizar a
recuperaodaprotenafuncional[11,12].
No desenho de um
Protenaaserpurificada Ligante Eludacom plasmdeoparaexpressar
Anticorpo(especficode
Peptdeoantignico Peptdeolivre
uma protena podese
antgeno)
agregar uma marcao
Protenamarcadacomcauda Imidazolou deafinidadetantodolado
Ni2+ouCo2+
dehistidina histidinalivre
N quanto C terminal (ou
Anticorpoespecfico PeptdeoFLAGou
ProtenamarcadacomFLAG em casos pouco
paraFLAG pHbaixo
frequentes, quando se
ProtenamarcadacomGST Glutationareduzida Glutationalivre
conhece a estrutura da
Anticorpoespecfico
ProtenamarcadacomMyc pHbaixo protena, em regies
paraMyc
Anticorpo(tipoespecfico) ProtenaA,G,ouL pHextremo

flexveis dela) para
facilitarapurificao.Veja
ProtenadeligaoaoDNA Heparina Forainicaalta
a reviso bibliogrfica da
Tabela5.Exemplosdeformasseletivasenoseletivasdecromatografiade Labome sobre
afinidadecomogrupofuncional(ligante)utilizadoparadarespecificidadee Marcadores de protenas
condiestpicasdeeluio.ResumidodeThermoFisherPierceeGE.Veja
abaixoosdistribuidoresusuaisparaosdiferentestiposdecolunas,segundoa e peptdeos para uma
revisobibliogrficafeitapelaLabomedemaisde200publicaes. lista de marcadores e
discussorelacionada.Os
anticorpos so normalmente purificados baseados em sua interao altamente especfica que
ocorre entre um anticorpo e seu antgeno (a sequncia reconhecida pelo anticorpo). Um peptdeo
contendooantgenopodeseracopladomatrizparaassimligaroanticorpodeformaespecfica.A
diminuiodopHdotampodeeluiorompeainteraoanticorpo/peptdeoeliberaoanticorpo.
Essemtodocomumenteutilizadoparaapurificaocomercialdeanticorposapartirdesoro.As
protenas tambm podem ser purificadas por afinidade de uma maneira no seletiva. Em uma
purificao no seletiva, o ligante, ligado matriz, se une a um grupo de protenas das quais se
associam a molculas similares. Um exemplo de purificao por afinidade no seletiva a
purificao de protenas de ligao ao DNA. A heparina imita o DNA tanto em estrutura, como em
carga, e pode ser utilizada como ligante a purificao de protenas de ligao ao DNA. Enquanto
quetodasasprotenasdeligaoaoDNApodem,nateoria,unirseafaseestacionria,amaioria
do resto das outras protenas passaro sem se ligar, permitindo assim um enriquecimento da
protena de interesse. Outro exemplo o enriquecimento de anticorpos atravs da ligao de sua
regioconstante(Fc)aosligantes,protenaA,G,ouL.AscolunasdeafinidadedeprotenaAdaGE
Healthcare so comumente utilizadas [1315], assim como as de protena G [16]. Utilizando um
mododeligaosimilar(umanticorpounidoaoligante,protenaA,GouL),aregiodoanticorpode
ligao ao antgeno (Fab) se encontra disponvel para se ligar ao antgeno especfico. Assim,
protenas especficas podem ser purificadas baseada na interao especfica entre o ligante e
anticorpo, e anticorpo e antgeno. Os problemas mais comuns e as solues esto listadas na
Tabela6.
Problema Causa Soluo
Omarcadornofoitraduzidoou Checarasequnciadoplasmdeooumovera
noestacessvel marcaoparaumalocalizaodiferente
Condiesdeligaonoforam
Protenanoseliga Ajustarcondiesdotampo
apropriadas
Nohouvetemposuficiente
Diminuirofluxoouparloparaocorrerincubao
paraligao
Aumentaraconcentraodocompetidor(especfico)
Afinidadeentreligantee
oudiminuirapermesividadedascondiesdeunio
marcadormuitoalta
Protenanoelui (noespecfica)
Ajustarascondiesdotampoparamaior
Protenaseagregounacoluna
estabilidadeproteica
Baixaresoluo Fluxoestmuitorpidooumuito Ajustarofluxo
devagar
Acolunanofoilavada Lavarcomumtampomaispermisivolavaramatrizde
suficientemente acordocomofabricante
Ajustarascondiesdetampoparamaior
Protenaseagregounacoluna
Acondiodeeluionofoi Aumentaraconcentraodocompetidor(especfico)
permissivaosuficiente ouajustarascondies(noespecfico)
Aprotenadesnaturouou Ajustarcondiesdotampoparamaior
Protenaperde agregou estabilidadadeproteica
atividadeduranteo Umcofatornecessrioparaa
procedimento atividadefoiremovidodurantea Adicionarcofator
purificao
Tabela6.Resoluodeproblemasrelacionadosacromatografiadeafinidade.ResumidodaGE.
CromatografiadeTrocainica(CTI)
A cromatografia de troca inica (CTI) separa as protenas em funo de sua carga lquida na
superfcie,atravsdeinteraeseletrostticasqueocorrementreasprotenaseafaseestacionria
carregada.ExistemdoistiposdeCTI:(1)trocaaninica(faseestacionriacarregadapositivamente,
ligando protenas carregadas negativamente) e (2) de troca catinica (fase estacionria carregada
positivamente, ligando protenas carregada positivamente). A cromatografia de troca inica
utilizada normalmente como um passo intermedirio em um esquema de purificao de protenas
no entanto, pode gerar alto rendimento para algumas protenas. Todas as protenas exibem uma
cargalquidaquedependedacomposiodeaminocidosdaprotenaedesuasmodificaesps
traducionaiscovalentes.Jqueasprotenasfazemtrocasdeonsdehidrogniocomosolvente,a
cargalquidadeumaprotenaestinfluenciadapelopHdosolventeemqueseencontra.Oponto
isoeltrico(pI)deumaprotenaopHemqueessaprotenapossuicargalquidatotalnula.Emum
pHmaiorqueopI,aprotenaterumacargalquidanegativa,enquantoqueemumpHmenorque
opI,aprotenatercargalquidapositiva.Porisso,opHdosolventepodeserajustadoparafacilitar
auniodaprotenacomafaseestacionria,parapromoverumamelhoreluiodaprotenaligada.
Nateoria,todasasprotenaspodemseligarasprotenas
detrocainica,tantocatinicaquantoaninicas,seopH
do tampo se ajustar adequadamente. Porm, na
purificao da protena, a estabilidade da protena a
considerao de maior importncia para escolher as
condies de purificao, e ento a coluna mais
adequada para ligar a protena. Tipicamente, as
condies de ligao so mais adequados para um tipo
de troca inica do que outra para uma determinada
protena. Conhecer o ponto isoeltrico de uma protena
podeajudaradeterminarotipodecromatografiadetroca
inica mais apropriado. Existem ferramentas onlines
disponiveisparacalcularopIdeumaprotena EXPASY .
Figure7.Cromatografiahidrofbica.Com
Esses clculos so baseados inteiramente na sequncia altaforainica,asprotenasseencontram
de aminocidos da protena e no contemplam a parcialmentedissolvatadas,oquefazcom
queelaadotemumaconformao
estruturatridimensionaldamesma.Noseuestadonativo, alternativa,nosquaisresduoshidrofbicos
algunsresduosdaprotenaseencontrammaisexpostos quenormalmenteseencontramforado
alcancedosolventepossamficarmais
queoutros,porisso,opIrealdacargalquidadaprotena expostos.Essesresduospodemformar
as vezes pode ser diferente daquele determinado interaeshidrofbicascomgrupos
funcionaishidrofbicosconjugadosna
teoricamente[17].Adistribuiodeaminocidostambm matriz.Umadiminuiodaforainica
podeafetaropIdeumaprotena[18],eissonolevado permitequeaprotenaadotenovamente
suaconfiguraonativa,ocultandoseus
em conta nos clculos do pI terico. Algumas tcnicas resduoshidrofbicos.Issodiminuias
permitem a determinao experimental do pI de uma interaeshidrofbicasentreasprotenase
afaseestacionria,facilitandoaeluioda
protena em seu estado nativo, incluindo a focalizao protena.
isoeltrica[19], focalizao isoeltrica capilar [20] e mais
recentemente, uma tcnica highthroughput baseada em
luminescncia[21]. Tipicamente, a ligao de uma protena com uma coluna de troca inica deve
ser determinada por tentativa e erro, utilizando solventes em uma variao de valores de pH para
determinaropHtimoparaaretenodaprotena.UmtampocomumaunidadedepHdiferente
do pI da protena j o suficiente para a unio da protena [22] porm, em alguns casos,
necessrioumpHmaisafastadodovalordopI[23].AfaseestacionriadaCTIcompostadeuma
matrizpolimricadeagarosenoqualseencontramunidoscovalentementegruposcarregados.As
partculas da matriz esto disponveis em vrios tamanhos e podem ser porosas ou no, e com
poros de diferentes tamanhos. A escolha da matriz depende da capacidade de unio, resoluo e
velocidadedefluxodesejadas.Partculasmenoresoferecemumamaiorresoluo,pormrequerem
velocidade de fluxo menor, sendo corridas mais longas.As matrizes porosas oferecem uma maior
capacidaade de ligao do que as no porosas. Em uma matriz no porosa, as protenas podem
entrar na resina, permitindo uma maior recuperao da amostra, maior resoluo e tempo de
corridamenorcomparadodoqueasmatrizesporosas.Umestudodemonstrouque,paraamaioria
dasprotenas,aresoluoearecuperaososimilaresquandosoutilizadasmatrizesporosase
no porosas respectivamente no entanto, para protenas de maior tamanho, as matrizes porosas
podemperderacapacidadederesoluodevidoaosefeitosdeexclusomolecular[
excluso 24].
Os quatro grupo funcionais carregados mais

comumente utilizados nas CTI esto descritos
abaixo. Eles se classificam como trocadores fortes
ou fracos, onde os fortes podem se ionizar numa
variaodepHmaiorqueosfracos.Trocaaninica
(faseestacionriacarregadapositivamente):
1.Amniaquaternria(Q)trocadorforte
2.dietilaminoetil(DEAE)trocadorfraco
Troca catinica (fase estacionria carregada

negativamente):
1.metilsulfonato(S)trocadorforte
Figure8.Protenaeludadeumacoluna
hidrofbicacomumgradientedecrescentedesal 2.carboximetil(CM)trocadorfraco
(sulfatodeamnio).Emcadafraoseanalisou
tantoaquantidadetotaldeprotenasassimcomo
atividadeespecficadaprotenadeinteresse.O Trocadores fortes devem ser usados quando o pH
picoconcentradonafrao45contemaprotena
requerido para a ligao muito cido ou muito
deinteresse,talcomoindicaaatividadeda
protena.Dehttp://www.insectscience.org/9.04/. bsico (assumindo que esse pH tambm
apropriadoparamanteraestabilidadedaprotena),
j que grupos funcionais permanecem carregados em uma variao ampla de pH [25]. Foi
demonstradoqueostrocadoresfracosretemmenosprotenas,permitindoasuaeluiocomforas
inicas menores [26]. J que a fora inica alta pode alterar a estabilidade de algumas protenas
[27], os trocadores fracos podem ser mais apropriados para protenas que no demandam de um
pH extremo pra poder ligar.Na cromatografia de troca inica, a fase estacionria primeiro
equilibrada com um tampo de baixa fora inica. A amostra proteica carregada ento na fase
estacionria com o mesmo tampo de baixa fora inica utilizado no equilbrio. A protena ligada,
antesdesereluda,lavadaabundantementecomumtampodealtaforainica,ouemalgums
casos,comumtampodepHdiferente(Figura6).Oscontraonsdotampodeeluiointeragem
com a fase estacionria carregada, liberando a protena que estava ligada. Alguns sais so mais
eficientes que outros nas cromatografias de troca inica, graas a sua habilidade em liberar as
protenasligadasenoseefeitosobreaestabilidadeproteica[28].TipicamenteseusaNaClouKCl
paraaeluio,comoNa+ouK+servindocomoocontraonnatrocacatinicaeClservindocomo
contraonnatrocaaninica.Alternativamente,podesealteraropHdotampoparareduziracarga
deprotenaeassimromperainteraocomafaseestacionria.Paraprotenasligadasaumafase
estacionria catinica, um aumento no pH do tampo diminuir as cargas positivas da protena,
fazendo com que ela elua da coluna. Para protenas unidas a uma fase estacionria de troca
aninica,umadiminuionopHdotampodiminuirascargasnegativasdaprotena,fazendocom
queelaeluadacoluna.
Alternativamente,opHdotampopodeseajustardemaneiraqueaprotenadeinteressenose
unaafaseestacionria,enquantoqueasprotenascontaminantessim.Nessecaso,aprotenade
interesse recolhida nas fraes que passam, enquanto que as protenas contaminantes so
removidas atravs de sua ligao com a fase estacionria. Tal como com outras tcnicas
cromatogrficas, a cromatografia de troca

inica possui uma resoluo de problemas
parasedeterminaramelhorcondioparaa
ligao e eluio da protena, alm da
resoluoadequada.
Cromatografiadeinteraohidrofbica(CIH)
A cromatografia de interao hidrofbica

(CIH) separa as protenas baseadas em sua
hidrofobicidade e, geralmente, se utiliza em
Figure9.Umamisturadetrsprotenascomraios
um paso intermedirio do esquema de hidrodinmicosdiferentescarregadaemumacolunade
excluso
exclusomolecular.Asprotenasdemaiortamanhoeluem
purificao. As protenas se encontram primeiro,jquenotemumcaminhodiretopelacoluna.
unidasfaseestacionriaemumtampode Asprotenasmenorespodempenetrarnosporos,tendo
umcaminhomaiornacoluna,levandomaistempopara
alta fora inica, e por isso, a cromatografia atravessaramatrizeeluirdacoluna.
pode ser realizada imediatamente aps uma
Corrermaistampodeequilbriopelacolunae
Colunanofoiequilibrada
carregarmaisamostraproteica
Forainicadotampodeligao
Protenanoseliga Diminuiraforainicadotampo
muitoalta
AjustaropHdotampo(diminuiropHparatroca
pHepIsovaloresprximos
catinica/aumentarparatrocaaninica)
Forainicadotampodeeluio
Aumentarforainica
estmuitobaixa
Protenanoelui
Protenasagregadasnacoluna
Fluxoestmuitorpidooumuito
Ajustarofluxo
devagar
Lavarcomumtampodeforainicamaior
Baixaresoluo Acolunanofoilavadaosuficiente Lavarafaseestacionriadeacordocomo
fabricante
Protenasagregadasnacoluna
Protenaestdesnaturadaou Ajustarascondiesdotampoparamaior
Protenaperde agregada estabilidadeproteica
atividadeduranteo Umcofatornecessriopara
procedimento atividadefoiremovidodurantea Adicionarcofator
purificao
Tabela7.Resoluodeproblemasrelacionadosacromatografiadetrocainica.ResumidodaGE.
cromatografiadetrocainica,semprecisardiluiroutrocarotampodomeio.ACIHtambmpode
ser realizada logo depois de uma precipitao com sulfato de amnio, um procedimento utilizado
para remover de maneira rpida algumas protenas, mediante a precipitao delas com sal.A
presena de ons provenientes do sal podem levar a desnaturao parcial de uma protena e a
conseguinte exposio de resduos hidrofbicos, nos quais geralmente se encontram enterrados
dentrodaprotena.Amedidaqueseutilizaumtampocommenorforainica,asprotenasquese
encontramunidasnafaseestacionriavoltaparasuaconfiguraonativa.Issodiminuiaexposio
dos resduos hidrofbicos que podem interagir com a fase estacionria e facilitar a eluio da
protena. Para protenas que podem renaturar espontaneamente a partir de uma diminuio da
fora inica, a CIH pode ser um mtodo valioso de purificao. Tipicamente, se deve utilizar um
tampodeligaocomaforainicamaisbaixa,quepermitaaligaodaprotenadeinteresse,ao
mesmotempoqueimpedesuaprecipitao.Seaforainicarequeridaparaqueumaprotenase
liguesejaaltaecausesuaprecipitao,podeseutilizarumtampocomforainicamenor.Nesse
caso, o procedimento cromatogrfico pode ser utilizado para separar todas as protenas que se
ligam,enquantoaprotenadeinteressepassariasemligar.Antesdecarregaraprotenanacoluna,
a fase estacionria deve ser equilibrada com tampo de alta fora inica (o mesmo em que a
protenaseligar).Feitoisso,aamostraaplicadanacoluna,acolunalavadaabundantementee
aprotenaeluicomumtampodebaixaforainica(Figura7e8).Afaseestacionriautilizadana
cromatografiadehidrofobicidadecompostadeumamatrizdeagarosecomligaescruzadas,ou
de um polmero sinttico. A essa matriz se conjuga um ligante alquil ou aril, no qual promove a
especificidadeparamolculashidrofbicas.Tiposdegruposfuncionais:
1.Alquilcadeiadehidrocarbonetodetamanhovariadogeralmenteseutilizaumgrupobutilouoctil.Acapacidade
deuniodafaseestacionriaaumentacomotamanhodacadeiadogrupoalquil[29].Osgruposfuncionaisunem
protenasbaseadasinteiramentenahidrofobicidadedaprotena
2.Arilgrupofuncionalderivadodeumanelaromticogeralmenteumgrupofenil.Osgruposarilsoferecemmaior
especificidade,jqueasprotenastambmpodeminteragircomogrupofuncionalatravsdeempilhamento.
O tipo e a concentrao do sal utilizado na ligao e na eluio devem ser determinados

empiricamenteparacadaprotena.Adicionalmente,sedeveassegurararenaturaoeafunode
cadaprotenalogoapsaeluio.Talcomocomoutrasformasdecromatografia,umprocedimento
timo de CIH requer uma resoluo de problemas importante. necessrio ajustar, para cada
protena,ascondiesdetampoedafaseestacionria,paraassegurarumaseparaotima.
Corramaistampodeequilbrionacolunae
Acolunanofoiequilibrada
carreguemaisamostra
Forainicadotampode
Protenanoseliga Aumentarforainicadotampo
ligaoestmuitofraca
Protenaagregadanaforainica Diminuiraforainicadotampooutentarumsal
utilizada diferente
Forainicadotampoest
Diminuirforainica
muitoalta
Protenanoelui Protenaagregadanacoluna
Tentarumafaseestacionriadiferentequeoferea
Retenomuitoalta
menorreteno
Fluxoestmuitorpidooumuito
Ajustarofluxo
devagar
Acolunanofoilavadao LavarcomumtampodeforainicamenorLavar
suficiente afaseestacionriadeacordocomofabricante
Baixaresoluo
Ajustarascondiesdetampoparamaior
Protenaagregadanacoluna
estabilidadadeproteica
Tentarumafaseestacionriadiferentequeoferea
Baixaretenonacoluna
maiorreteno
Aprotenaestdesnaturadaou Ajustarascondiesdotampoparamaior
agregada estabilidadeproteica
Tentarligarcomumsaldiferenteoucomumamenor
Protenaperde Aprotenanoretornaasua
forainicaIncluiraditivosparaestabilidade
atividadeduranteo conformaonativa
proteica
procedimento
Umcofatorrequeridopara
atividadefoiremovidodurantea Adicionarcofator
purificao
Tabela8.Resoluodeproblemasrelacionadosacromatografiadefasereversa.ResumidodaGE.
Cromatografiadeexclusomolecular(CEM)
excluso
A cromatografia de excluso
excluso molecular separa as protenas em funo do seu raio hidrodinmico,
uma propriedade determinada tanto pelo tamanho como pela forma da molcula. A diferena em
relaoaosprocedimentoscromatogrficosdescritospreviamente,asprotenasnoseunemauma
fase estacionria. Em troca, elas so separadas pela velocidade a qual migram atravs da fase
estacionriainerte(Figura9).ACEMummtodovalioso,utilizadogeralmenteemetapasfinaisde
esquemasdepurificao,graasasuahabilidadedeseparardiferentesespciesdeumaprotena.
Protenas oligomricas [30], protenas desnaturadas [31], e protenas truncadas [32] podem ser
separadasdaprotenanativaaomesmotempoquesetrocacomponentesdotampo.Emdiversas
vezes a CEM utilizada como um mtodo mais veloz e mais confivel que a dilise, j que
compatvelcomumagamadesolventeserequermenostampo.Umnicosolventeutilizadoao
longodetodooprocessodeCEM,easfasesestacionriascomerciaisdisponveissocompatveis
com a maioria dos componentes dos tampes mais utilizados.Tanto o tipo da fase estacionria
utilizada como o comprimento da coluna possuem um papel crtico em relao a resoluo das
protenas separadas por CEM. Vrios tipos de fases estacionrias se encontram disponveis em
nvel comercial, e a melhor opo depende tanto do peso molecular das protenas que sero
separadascomoascondiesemqueaseparaoserfeita.
Tipodefase Matriz Caractersticas

estacionria
Ofereceumatrocarpidadetampoe
separaodegrupos
Trabalhabemparadeterminaramassa
molecular
Ligaocruzadadedextranoe
Sephadex Autoclavvel
epicloridrina
Amatrizpodeseencolhercomalguns
solventes
EstodisponveisdiferentestiposdeSephadex
parausocomsolventesorgnicos
Separamolculascomamplavariaode
massamolecular
LigaocruzadadedextranoeN
Sephacryl Autoclavvel
Nmetilenobisacrilamida
Trabalhacomsolventesaquososeorgnicos
Altarecuperao
Separamolculascomamplavariaode
massamolecular
Sepharose Ligaocruzadadeagarose
Altarecuperao
Nopodeserautoclavada
Autoclavvel
Ligaocruzadadealta
Superose possvelquehajainteraohidrofbicaentre
intensidadedeagarose
amatrizeasprotenas
Compatvelcomsolventesviscosos
Ligaocruzadadeagarosee Autoclavvel
Superdex
dextrano
Altaresoluo
Altarecuperao
Tabela9.Tiposdefasesestacionriasdisponveiscomercialmenteparacromatografiadeexclusomoleculare
excluso
caractersticasdecadauma.ResumidodaGEeSimgaAldrich.
Geralmentea
Superdex a melhor opo para CEM tpicas, j que compatvel com a maioria dos solventes e
oferece melhor resoluo de todas as fases estacionrias disponveis. Igual aos outros mtodos
cromatogrficos, a CEM tem vantagens e desvantagens, e a deciso de utilizar esse mtodo
dependetantodaprotenacomodaaplicaoquepretendesedaramesma.VantagensdaCEM:
1.Permiteintercmbiodetampoedessalinizao.
2.Permiteaseparaodeespciessimilares(porex.protenastruncadaseoligomricas)quenocostumamser
separadasporoutrastcnicasdepurificao.
3.compatvelcomvriossolventes.
4.Nodependedenenhumapropriedadeespecficadaprotenaparasuaretenoeeluio.
DesvantagensdaCEM:
1.Performancemuitosensveldeacordocomoempacotamentodacoluna.
2.Podehaverinteraonoespecificaentreaprotenaearesina,oquediminuiaresoluo.
3.Oferecebaixaresoluoparamisturascomplexasdeprotenas.
4.Aamostradeveseraplicadaemumvolumepequenoparaseobterumaresoluoadequada.Issopodeser
problemticoparaprotenasqueprecipitamemaltasconcentraes.
Otimizar as condies de CEM para alcanar uma mxima resoluo costuma ser laborioso, pois
algunsfatorespodemterumimpactoenormenaresoluo.Condiesqueaumentamaresoluo
naCEM:
1.Minimizarovolumedeamostra.Quantomenorovolume,menosdifusasseroasprotenaseludas.
2.Adicionarsalaotampo.Umapequenaquantidadedesalaajudaaprevenirasinteraesnoespecficasentre
asprotenaseafaseestacionria.Issopermitirqueasprotenascorramdeformaconcisapelacoluna.
3.Usarumfluxomoderado.Fazerumacorridarpidanopermitirquemolculaspequenasadentremamatriz
porosa,enquantoqueumfluxomaisbaixopermitirmaiordifusodasprotenas.
4.Garantirqueaviscosidadedotampoedaamostrasosimilares.Ajustasascondiesdaamostradetalmaneira
queseassemelheaotampodecorrida.
5.Ajustarocomprimentodacoluna.Umacolunamuitocurtanopermiteumaseparaoadequadadasprotenas.
Poroutrolado,umacolunamuitocompridalevaaumadifusodaamostraproteica.
Se as partculas no se encontram bem dispersas, ou se h bolhas de ar presas na coluna, a

migrao atravs da fase estacionria no ocorrer de maneira adequada. Alm disso, se deixar
secar a coluna, preciso reempacotla. Um mal empacotamento , no geral, o culpado de uma
baixaresoluoinexplicvel.DevidoaCEMnosepararprotenasbaseadaemsuasinteraescom
grupos funcionais, todas as protenas eluem sob as mesmas condies, e por isso s se obtem
resoluo de protenas com raio dinmico muito diferente. Portanto, a CEM no uma tcnica
cromatogrfica apropriada para etapas inicias de um esquema de purificao, quando h muitas
protenascontaminantes.ACEMoferece,noentanto,umaformaconfivelerpidaderemoversais
epequenasmolculasdeumaamostranospassosiniciaisouintermediriosdeumapurificao.E
a CEM um mtodo valioso nas as etapas finais da purificao, quando existem apenas
contaminantes em uma baixa concentrao, para o isolamento da protena e sua passagem para
umtampodearmazenamento.
Eluioeanlisedaprotena
Mtodosdeeluiodeprotenas
Protenas que se unem a fase estacionria so eludas em condies de solvente que rompem
essasinteraes.Essascondiesdeeluiovariamtantocomotipodecromatografiacomocom
aspropriedadesdaprotenadeinteresse.Existemtrsmtodosgeraisparaaeluiodasprotenas:
descontnuo, passo a passo e eluio por partes e gradiente linear. O melhor mtodo a ser
escolhidodependedotipodecromatografiaqueseestfazendoearesoluorequerida.
1.Descontnuosomenteumacondiodeeluioliberatodasasprotenasunidas,emapenasumpasso.Esse
mecanismofuncionamelhorparaprocedimentoscromatogrficosquesebaseiameminteraesespecficas(por
ex.cromatografiadeafinidade).Aeluiodescontnuanooferecenenhumaresoluo,pormidealpara
eliminaroscontaminantesdemaneirarpida.Requeremumconhecimentoprviodascondiesdetampo
necessriasparaliberarasprotenasdeinteresse.
2.Passoapassoserealizammltiplospassosdeeluio,demaneirasequencial,emcondiesmenos
permissivasemcadacaso.Naeluio,onmerodefraescoletadasdependedonmerodecondiesde
eluiosequenciais.Aeluioempassospermiteumamelhorresoluoqueaeluioemgrupo,porema
resoluopiorqueadegradientelinear.
3.Gradientelinearmltiplasfraesconsecutivassocoletadasenquantoseajustamascondiesdeeluiode
maneiralinear.Umgradientelinearofereceumamaiorresoluoparaascromatografiasdetrocainicaede
hidrofobicidade.Tipicamentesecoletamumgrandenmerodefraesconsecutivas.
Acromatografiadeexclusomolecularnodemandanenhumdessesmtodosdeeluio,jqueas
excluso
protenas no interagem com a fase estacionria. A protena carregada na coluna e um grande
nmerodefraessocoletadasattodasasprotenasseremeludas,semalterarascondiesdo
tampo ao longo do procedimento. Idealmente, o tampo de eluio de uma coluna compatvel
comacolunasubsequente,eliminandoanecessidadedetrocarostampesoudedialisarentreos
diferentespassosdepurificao.
Anlisedapurezadasfraes
Apscadaseparaocromatogrficasedeveanalisarasfraesparaterminarquaisdelascontem
a protena de interesse, alm do grau de pureza dessas fraes. Essa anlise necessria logo
aps cada passo para decidir quais fraes devem ser combinadas para seu uso posterior. Para
determinar a pureza necessrio um ensaio que possa medir a quantidade de uma protena
especfica relativa a quantidade de protenas totais. Os seguintes ensaios so utilizados de rotina
paraanlisesdepureza:
1.Eletroforeseemgeldepoliacrilamidacomdodecilsulfatodesdio(SDSPAGE)umgeldesnaturantequesepara
asprotenasemfunodeseutamanho.Coloraesdisponveiscomercialmentepermitemobteruma
representaovisualdetodasasprotenasdaamostra,permitindorealizarumamensuraoqualititativada
purezaproteica(Figura10).OSDSPAGEnooidealparaanlisedeumaaltaquantidadedefraesepode
levarhorasnoentanto,utilizadocommaiorfrequenciadevidoasuafacilidade,econmicoefuncionapara
qualquerprotena.
2.Espectroscopiaummtodoparaanalisaraspropriedades
pticasdasprotenas.Essatcnica,paraanalisargraude
pureza,sserveparaprotenasquetenhamumacaracterstica
espectroscpicanica,talcomoocitocromoP450.As
protenasdessafamliaabsorvemluzaumcomprimentode
ondaqueoutrasprotenasno(porvoltade420nm[33]),
ento,umacomparaoentreaabsorbnciaa420ea280nm
(ocomprimentodeondaquetodasasprotenasabsorvem)
podefornecerumamedidaquantitativadapurezadaprotena.
Essemtodorpidoeprontoparaprocessarumaalta
quantidadedeamostras.
3.Atividadedeprotenasumensaioenzimticoquedependeda
protenadeinteresse.Essemtododeavaliaodograude
purezanormalmenteacopladoaoutromtodode
determinaodeconcentraodeprotenas,paracalculara
atividadeemfunodaconcentraototaldeprotenas.Os
ensaiosdeatividadesomentesofeitoscomprotenasque
Figure10.SDSPAGEdeamostras tenhamfacilidadeparadeterminaodeatividade,utilizando
coletadasduranteapurificaodeuma umensaiodealtacapacidadedeprocessamento,comoas
protena.Ogelfoicoradoparavisualizar proteases.Paraalgumasprotenas,osensaiosdeatividade
todasasprotenas.De soummtodorpidoeconfivelparaadetecode
http://www.omicsonline.org/. protenas.Amediodeatividade,nogeral,idealpara
enzimas,jqueasprotenasqueperderamatividadepodeser
excludasdospassossubsequentes.
Armazenamentodaprotenapurificada
Umavezqueseobteveaprotenacomumgraudepurezasuficienteparaserutilizadoemestudos
experimentais, a mesma deve ser armazenada de forma apropriada. A escolha de um tampo de
armazenamento final to importante quanto a escolha dos tampes utilizados durante a
purificao. Essa escolha deve se basear na estabilidade da protena e das condies requeridas
parasuaposterioraplicao.Nogeral,acromatografiadeexclusomolecularescolhidacomoa
excluso
etapa final de um esquema de purificao, j que o tampo final de armazenamento pode ser
trocado efetivamente nessa etapa cromatogrfica. As fraes puras podem ser combinadas para
armazenamento imediato. Alternativamente, as fraes finais que foram combinadas, podem ser
dialisadas em um tampo selecionado, prvio ao seu armazenamento. As condies de
armazenamento da protena dependem da protena de interesse e devem ser otimizadas de tal
maneira que a protena mantenha sua estabilidade estrutural e funcional ao longo de perodos de
tempo prolongados. No geral se incluem aditivos no tampo de armazenamento, para prolongar o
tempo de vida de protenas purificadas, e geralmente necessrio um procedimento de erro e
acerto para determinar as condies timas, j que cada protena se comporta de maneira
particular.
RevisobibliogrficadaLabomecitandoprocedimentosdepurificao
ALabomerevisou261publicaescitandomtodosdepurificaodeprotenas,comototalde620
exemplos. A Tabela 10 lista os principais fornecedores e mtodos de purificao. Os mtodos de
afinidadeeexclusomolecularforamasabordagensmaisutilizadasnaliteratura.AGEHealthcare
excluso
amaiorfornecedoraparatodososmtodos,aQiagenofornecedormaissignificativodemtodos
depurificaodeprotenasbaseadosnamarcaoHIS,eaSigmaAldrichdosmtodosutilizandoa
marcaoFLAG.
Tipo Fornecedor grandemarca num Referncia
Tipodeafinidade
DELE Qiagen NiNTAagarose 52 [7,14,3482]
NiSepharose,HisTrap
GEHealthcare 20 [6,63,78,8399]
FF/HP
Afinidadepormetal
Clontech 14 [6,100112]
TALON
Resinadeafinidade
BDBiosciences 5 [113117]
pormetalTALON
SigmaAldrich NiNTAagarose 5 [9,118121]
GlutationaSepharose [9,10,3840,44,45,52,54,57,66,75,76,78,81,82,
GEHealthcare 53
4B 93,98,106,113,115,122153]
GST
SigmaAldrich Glutationaagarose 3 [69,154,155]
EMDMillipore EsferasdeGlutationa 2 [156,157]
BANDEIRA SigmaAldrich AfinidadeFLAGM2 19 [52,88,134,158169]

OutrosmtodosdepurificaoporafinidadecitadosincluemaJacalinaligadaaagaroseparaOglicoprotenas[110],a
resinadeamilosedaNewEnglandBiolabsparaamarcaodeprotenasdeligaoamaltose[69,109,170],matrizde
afinidadedeligaoaprotenaC,daRoche[88],sistemasbaseadosemestreptabiotinadaThermoFisherPierce[109,
171173],daEMDMillipore[174,175],daQiagen[96],daIBA[51],edaSigmaAldrich[171],resinadeimunoafinidadeda
SigmaAldrich[167],asepharosequelantedealtofluxoparaprotenasdeligaoametaisdaGEHealthcare[176]ea
colunaHiTrapIMACHPdaGEHealthcare[177],colunasdeheparinadaGELifeSciences[10,176,178,179],protenaA
HiTrapdaGEHealthcareLifeSciences[14],sepharoseIgGdaGEHealthcare[180],sepharose4Bpoli(A)daGE
Healthcare[10],aresinaSulfoLinkdaThermoScientific[181],aresinaAffiGel10daBioRad[181],aagaroseunidaa
protenaAdaRepliGen[181]eaagaroseconjugadaaV5daSigma[143].
Exclusomolecular
[5,7,49,51,54,55,57,63,64,66,70,73,7578,82,
Superdex GESade 74 84,87,91,92,94,96,97,102,105,106,111,117,
121,125,137,166,176,177,179,182204]
Superose GEHealthcare 11 [10,49,64,74,82,99,134,194,204206]

Sepharose GEHealthcare 2 [68,207]
Trocainica
GEHealthcare ColunaMonoQ 5 [58,70,98,194,208]
GEHealthcare HiTrapQ 6 [64,67,71,78,99,209]

GEHealthcare 15QSource 2 [69,105]
anionica
GEHealthcare QSepharose 1 [76]
resinadetroca
Quehomem 1 [178]
aninicaDE52
Cationica GEHealthcare ColunaMonoS 3 [49,76,96]

Interaohidrfbica
FenilSepharoseCL
sadeGE 1 [45]
4B
SigmaAldrich Fenilsefarose 1 [76]
Tabela10.EstatsticadarevisodaLabomesobre98publicaesquecitaramsistemasdepurificaodeprotenas.Num
nmerodepublicaes.
Naliteraturarevisada,asamostrasproteicasforampreparadasutilizandooreagentedeextraode
protenas BugBuster da EMD Millipore BugBuster [187],[175], [210] ou equipamento para romper
clulas Emulsiflex C3 da AVESTIN EmulsiFlex [58, 211], e foram concentrados utilizando os
concentradores Amicon EMD Millipore [10, 79, 99, 110, 117, 167, 173, 178, 189], ou atravs das
colunasdecentrfugaSartoriusdaThermoFisher[212]oucomconcentradoresVivaspin[107,117,
187,209].
referncias
1.BoaN,WingetG,WInverno,ConnollyT,SIzawa,SinghR.tampesdeiesdehidrognioparaapesquisabiolgica.Bioqumica.
19665:46777 PubMed
2.GradyJ,ChasteenN,HarrisD.radicaisdetamps"Good"de.AnalBiochem.1988173:1115 PubMed
3.DesmaraisW,benvindaD,BzymekK,RHolz,PetskoL,RingeD.A1.20Aestruturacristalinaresoluodaaminopeptidasede
AeromonasproteolyticacomplexadocomTris:umcontodeinibiotampo.Estrutura.200210:10631072 pubmed
4.GhalanborZ,GhaemiN,MarashiS,AmanlouH,HabibiRezaeiH,KhajehK,etal.AligaodeTrisaBacilluslicheniformisalfa
amilasepodeafectarasuaactividadedehidrlisedoamido.PeptProteinLett.200815:2124 pubmed
5.PejchalR,DooresK,WalkerG,KhayatR,HuangP,WangS,etal.Umanticorponeutralizantepotenteeamplareconhecee
penetraoescudoglicanoHIV.Cincia.2011334:1097103 pubmed publisher
6.CruzMigoniA,HautbergueL,ArtymiukP,PBaker,BokoriBrownM,ChangC,etai.UmatoxinaBurkholderiapseudomalleiinibe
aactividadedahelicasedefactordetranslaoelF4A.Cincia.2011334:8214 pubmed publisher
7.UmShenoy,WellingtonD,KumarP,KassaH,BoothC,CresswellP,etal.GBP5promoveamontageminflamassomaNLRP3e
imunidadeemmamferos.Cincia.2012336:4815 pubmed publisher
8.HernandezJ,SteinA,EBehrman,RiedelD,CypionkaA,persaZ,etal.Intermediriosdefusomembranaratravsde
montagemdireccionalecompletadocomplexoSNARE.Cincia.2012336:15814 pubmed publisher
9.MukherjeeS,MBehar,BirnbaumH,HoffmannA,WrightP,GhoshG.AnlisedaRelA:interacoCBP/p300revelaoseu
envolvimentonatranscrioNFkBdirigido.PLoSBiol.201311:e1001647 pubmed publisher
10.UmBohne,SchwarzC,SchottkowskiH,LidschreiberH,HPiotrowski,ZergesW,etal.Regulaorecprocadasnteseproteica
eometabolismodecarbonoparaabiognesedamembranadetilacoide.PLoSBiol.201311:e1001482 pubmed publisher
11.Arakawat,JPhilo,TsumotoK,YumiokaR,EjimaD.Aeluiodosanticorposapartirdeumaprotenadeumacolunapor
soluesaquosasdearginina.ProteinExprPurif.200436:2448 pubmed
12.ChongS,MershaF,PenteD,ScottM,DLandry,VenceL,etal.Purificaodecolunanicadeprotenasrecombinanteslivres
utilizandoummarcadordeafinidadedeautoclivelderivadoapartirdeumelementodeemendadeprotena.Gene.1997192:
27181 pubmed
13.JochumC,BesteH,pedraD,GravesS,StorbR.DesenvolvimentoecaracterizaoinvitrodecaninoCD40Ig.VetImmunol
Immunopathol.2008123:2605 pubmed publisher
14.CortiD,JVoss,GamblinS,CodoniL,MacagnoA,JarrossayD,etal.Umanticorponeutralizanteseleccionadoapartirde
clulasdoplasmaqueseligaahemaglutininasgrupo1egrupo2Adagripe.Cincia.2011333:8506 pubmed publisher
15.ShenY,TenneyA,BuschS,CornoK,CuascutF,LiuK,etal.PTPsigmaumreceptorparaoproteoglicanodesulfatode
condroitina,uminibidorderegeneraoneural.Cincia.2009326:5926 pubmed publisher
16.LiF,oenvolvimentodoreceptordeRavetchJ.InibitriaFcyimpulsionaadjuvanteseantitumoraisactividadesdeCD40
agonistas.Cincia.2011333:10304 pubmed publisher
17.SalamanH,WilliamsonA.focagemisoelctricadeprotenasnosestadosnativoedesnaturado.Comportamentoanmalode
albuminadeplasma.BiochemJ.1971122:939 PubMed
18.VesterbergO.isoelctricofraccionamento,anliseecaracterizaodeanflitosemgradientesdepHnaturais.V.Separaode
myoglobinseestudossobresuasdiferenaselectroqumicas.ActaChemScand.196721:20616 PubMed
19.AwdehZ,WilliamsonA,B.Askonasfocagemisoeltricaemgeldepoliacrilamidaesuaaplicaoparaimunoglobulinas.Natureza.
1968219:667 PubMed
20.RighettiP.Determinaodopontoisoelctricodeprotenasporisoelctricacapilarfocagem.JChromatogrA.20041037:4919
pubmed
21.PihlasaloS,AuranenL,PHanninen,HarmaH.Mtodoparaaestimativadopontoisoelctricodaprotena.AnalChem.201284:
82538 pubmed publisher
22.Ahamedt,ChilamkurthiS,NforB,VerhaertP,vanDedemL,VanderWielenL,etal.Selecodeparmetrosrelacionadoscomo
pHemcromatografiadepermutainicausandoasoperaesdegradientedepH.JChromatogrA.20081194:229 pubmed
23.TrodlerP,NievelerJ,RusnakH,SchmidP,PleissJ.Odesenhoracionaldeumanovaestratgiadepurificaodeumspasso
paraalipasedeCandidaantarcticaBporcromatografiadepermutainica.JChromatogrA.20081179:1617 pubmed
24.DuncanJ,ChenA,SiebertC.Aavaliaododesempenhodenoporosacontraembalagensdepermutainicaporosasna
separaodeprotenaspormeiodecromatografialquidadealtaeficincia.JChromatogr.1987397:312 PubMed
25.StabyA,JensenR,BenschH,JHubbuch,DnweberD,KrarupJ,etal.Comparaodepermutainicacromatogrficaresinas
VI.Resinasdepermutaaninicafracos.8294:1164JChromatogrA.2007 pubmed
26.DePhillipsP,LenhoffR.Determinantesdecaractersticasderetenodeprotenasobreadsorventesdepermutacatinica.57
72:933JChromatogr2001A. PubMed
27.vonHippelP,WongK.Noestabilidadeconformacionaldasprotenasglobulares.Osefeitosdevrioselectrlitosenoeletrlitos
sobreatransiotrmicaderibonuclease.JBiolChem.1965240:390923 PubMed
28.TsumotoK,DEjima,SenczukA,YKita,T.ArakawaEfeitosdossaisdeinteracesprotenadesuperfcie:aplicaespara
cromatografiaemcoluna.JPharmSci.200796:16771690 PubMed
29.ErZEl,ZaidenzaigY,ShaltielS.sepharosesHidrocarbonetorevestido.Usenapurificaodeglicogniofosforilase.Biochem
BiophysResCommun.197249:38390 PubMed
30.WoodburyR,SHardy,comportamentoComplexoRandallL.emsoluodeSecAhomodimrica.ProteinSci.200211:87582
pubmed
31.CorbettR,RocheR.Autilizaodecromatografiadeexclusodetamanhodealtavelocidadeparaoestudodedobragemde
protenaeaestabilidade.Bioqumica.198423:18881894 PubMed
32.Kimt,PaikS,YangC.estruturaleasimplicaesfuncionaisderegiesCterminaisdealfasinuclena.Bioqumica.200241:
1378290 pubmed
33.SchenkmanJ,JanssonI.anlisesespectraisdecitocromosP450.MethodsMolBiol.2006320:118 pubmed
34.HeiselS,KetterR,KellerA,KleinV,PallaschC,LenhofH,etal.Oaumentodareactividadesricadeantignioexpressoglioma
2empacientescomtumoresdocrebrosobradiao.PLoSONE.20083:e2164 pubmed publisher
35.UmTisserant,KnigH.sinalreguladadeprARNmdeocupaopelofactorU2AFsplicinggeral.PLoSONE.20083:E1418
pubmed publisher
36.MiuraG,JRoignant,WassefH,TreismanJ.mopeactuanaviaendocticaparamelhorarasinalizaopeloreceptordeEGFda
Drosophila.Desenvolvimento.2008135:19131922 pubmed publisher
37.YangX,GoldbergH,EleM,XuH,JBlevins,expressoNorgardM.Diferencialdeumreguladorputativotipocartode
transcrio,ltpa,emBorreliaburgdorferi.InfectarImmun.200876:443944 pubmed publisher
38.MazurkiewiczP,ThomasJ,ThompsonJ,LiuM,ArbibeG,SansonettiP,etal.SPVCumefectordeSalmonellacomactividade
fosfotreoninaliaseemprotenasquinasesactivadaspormitogniohospedeiras.MolMicrobiol.200867:13711383 pubmed
publisher
39.VafiadakiE,DArvanitis,PagakisS,PapaloukaV,SanoudouD,KontrogianniKonstantopoulosA,etal.Aprotenaantiapopttica
HAX1interagecomSERCA2eregulaosnveisdeprotenaparapromoverasobrevivnciadaclula.MolCellBiol.200920:
40.ZhaoY,TakeyamaK,SawatsubashiS,SIto,SuzukiE,YamagataK,etal.CorepressiveacodePFCnatransactivaodo
receptordeandrognioemheterocromatinapericntricaemumsistemamodeloexperimentaldeDrosophila.MolCellBiol.2009
29:10171034 pubmed publisher
41.PoucoH,RorickN,SuL,BaldockC,MalhotraS,JowittT,etal.MutaesquecausamasndromedeVanderWoudee
sndromedeptergiopoplteaafectarasfunesdeligaoaoADNedeactivaodatranscriodeIRF6.HumMolGenet.
42.YdenbergC,RoseM.regulaoantagonistadelocalizaonuclearFus2pporsinalizaoporferomonaseociclocelular.JCell
Biol.2009184:40922 pubmed publisher
43.LuY,AdegokeO,NepveuA,NakayamaK,BedardN,ChengD,etal.EnzimadeubiquitinatingUSP19suportaaproliferao
celularatravsdaestabilizaoKPC1,umaubiquitinaligaseparap27Kip1.MolCellBiol.200929:54758 pubmed publisher
44.WangH,WestinG,NongY,BirnbaumS,BendorJ,BrismarH,etal.Norbinumreguladorendgenodoreceptordeglutamato
metabotricodotipo5desinalizao.Cincia.2009326:15547 pubmed publisher
45.OkadaC,YamashitaE,LeeS,SShibata,KatahiraJ,NakagawaA,etal.AestruturadealtaresoluodoprmicroRNA
mquinasdeexportaonuclear.Cincia.2009326:12759 pubmed publisher
46.DasH,Draket,WileyD,PBuchwald,VavylonisD,dinmicaVerdeF.oscilatriosdeCdc42GTPasesnocontrolodo
crescimentopolarizada.Cincia.2012337:23943 pubmed publisher
47.PrasadR,LongleyH,ShariefF,EHou,WCopeland,ADNhumanoWilsonS.polimerasetetapossuiactividadedeliase5'DRPe
funesemumniconucletidodereparaoporexcisodebasesinvitro.NucleicAcidsRes.200937:18681877 pubmed
publisher
48.KraljJ,HochbaumD,DouglassA,CohenA.elctricaspikingemEscherichiacolisondadocomumaprotenafluorescenteque
indicaatenso.Cincia.2011333:3458 pubmed publisher
49.UmMayer,HeidemannH,LidschreiberH,SchreieckA,domH,HintermairC,etai.CTDfosforilaodatirosinaprejudica
recrutamentofactordeterminaoparaaRNApolimeraseII.Cincia.2012336:17235 pubmed publisher
50.NeubauerC,GilletR,KelleyA,RamakrishnanV.DescodificaonaausnciadeumcodoportmRNAeSMPBnoribossoma.
Cincia.2012335:13669 pubmed publisher
51.LiZ,YParque,domnioMarcotteE.UmBacterifagotailspikepromoveaautoclivagemdeumfactordetranscriohumano
ligadomembrana,ofactordemielinaMYRFreguladora.PLoSBiol.201311:e1001624 pubmed publisher
52.QianW,MikiD,ZhangH,LiuY,ZhangX,TangK,etal.AacetiltransferasedehistonareguladesmetilaodeADNactivoem
Arabidopsis.Cincia.2012336:14458 pubmed publisher
53.YangJ,Zhaot,GoldsteinJ,BrownM.InibiodagrelinaOaciltransferase(cabra)porpentapptidosoctanoilada.ProcNatl
AcadSciUSA.2008105:107505 PubMed editora
54.HsiaoY,NakagawaA,ShiZ,MitaniS,XueD,aestruturadecristaldeYuanH.CRN4:implicaesparaafunododomniode
degradaodeADNporapoptose.MolCellBiol.200929:44857 pubmed publisher
55.DiskinR,ScheidJ,MarcovecchioP,WestA,KleinM,GaoH,etal.OaumentodapotnciaedalarguradeumanticorpodeHIV,
utilizandoodesenhoracionalbaseadanaestrutura.Cincia.2011334:12891293 pubmed publisher
56.AvinoamO,FridmanK,ValansiC,AbutbulI,ZeevBenMordehaiT,MaurerU,etal.Fusogenseucariticasconservadospode
fundirenvelopesviraisparaasclulas.Cincia.2011332:58992 pubmed publisher
57.DickinsonD,WNelson,W.WeisUmepitliopolarizadaorganizadoporbetaealfacateninaantecedecaderinaeorigens
metazorios.Cincia.2011331:13369 pubmed publisher
58.FleishmanS,Whiteheadt,EkiertD,DreyfusC,milhoJ,StrauchE,etal.Concepocomputacionaldeprotenasdestinadas
regioconservadahastedehemaglutininadeinfluenza.Cincia.2011332:81621 pubmed publisher
59.EkiertD,FriesenR,BhabhaL,Kwakst,JongeneelenM,YuW,etal.Umepitoponeutralizantealtamenteconservadaemvrus
influenzaAgrupo2.Cincia.2011333:84350 pubmed publisher
60.ShiW,ZhangX,JiangX,YuanH,LeeJ,BarryC,etai.PirazinamidainibeatranstraduoinMycobacteriumtuberculosis.
61.ParqueH,HohnH,Umeharat,GuoG,OsborneE,BennerJ,etal.ExpandindoocdigogenticodeEscherichiacolicom
fosfosserina.Cincia.2011333:11514 pubmed publisher
62.DiTacchioG,LeH,VollmersC,HatoriH,WitcherH,SecombeJ,etal.HistonalisinademethylaseJARID1aativaCLOCKBMAL1
einfluenciaorelgiocircadiano.Cincia.2011333:18815 pubmed publisher
63.DueberE,SchoefflerA,LingelA,ElliottJ,FedorovaA,GiannettiA,etal.Antagonistasinduzirumamudanaconformacionalna
cIAP1quepromoveautoubiquitination.Cincia.2011334:37680 pubmed publisher
64.ArmacheK,JGarlick,CanzioD,LNarlikar,KingstonR.baseestruturaldesilenciamento:domnioSiR3BAHemcomplexocom
umnucleossomaa3,0deresoluo.Cincia.2011334:97782 pubmed publisher
65.WiluszJ,JWhipple,PhizickyE,aSharpP.ARNtmarcadocomCCACCAsoalvoparaadegradao.Cincia.2011334:817
21 pubmed publisher
66.SteferS,ReitzS,WangM,WildK,PangY,DSchwarz,etal.Baseestruturalparaabiogneseprotenademembrana
ancoradascaudapelocomplexoreceptorGet3.Cincia.2011333:75862 pubmed publisher
67.UmCopic,LathamC,HorlbeckH,D'ArcangeloJ,propriedadesdecargaMillerE.ERespecificarumrequisitoparaarigidez
revestimentoCOPIImediadaporSec13p.Cincia.2012335:13591362 pubmed publisher
68.TagliabracciV,EngelJ,WenJ,WileyS,WorbyC,KinchL,etal.Quinasesecretadafosforilaprotenasextracelularesque
regulamabiomineralizao.Cincia.2012336:11503 pubmed publisher
69.ZalatanJ,CoyleS,SRajan,SidhuS,LimW.controloconformacionaldaprotenaandaimeSTE5isolacontramisactivationMAP
quinase.Cincia.2012337:12181222 pubmed publisher
70.BarthelmeD,SauerR.Identificaodoproteassoma20SCdc48comoumantigoAAA+mquinaproteoltica.Cincia.2012
71.Hirotat,JLee,StJohnP,SawaH,IwaisakoK,Noguchi,T,etal.Identificaodemolculapequenaactivadoresdocriptocromo.
72.MetcalfW,GriffinB,CicchilloR,GaoJ,JangaS,CookeH,etal.Sntesedecidometilfosfnicopormicrbiosmarinhos:uma
fonteparaometanonooceanoaerbico.Cincia.2012337:11047 pubmed publisher
73.JinekH,ChylinskiK,FonfaraI,HAUERH,JDoudna,CharpentierE.UmaendonucleasedeADNprogramveisdeduploARN
guiadanaimunidadeadaptativabacteriana.Cincia.2012337:81621 pubmed publisher
74.BreitsprecherD,RJaiswal,aBombardierJ,GouldC,GellesJ,B.GoodemecanismoRocketdemontagemactinacolaborativa
definidoporimagiologiadeumanicamolcula.Cincia.2012336:11648 pubmed publisher
75.McCloskeyA,TaniguchiI,ShinmyozuK,OhnoM.hnRNPCdocomprimentodoRNAmedidastetreroparaclassificaraRNA
polimeraseIIparatranscritosdeexportao.Cincia.2012335:16436 pubmed publisher
76.DiaoJ,Jburre,VivonaS,CiprianoD,SharmaH,KyoungM,etal.Nativosinuclenainduzaagregaodeimitasinpticosde
vesculasatravsdeligaoafosfolpidosesinaptobrevina2/VAMP?2.eLife.20132:e00592 pubmed publisher
77.ZimmermannI,MarabelliA,BertozziC,SivilottiL,R.DutzlerInibiodocanaldependentedeligandopentamicaprocariticaio
ELICporcatiesbivalentes.PLoSBiol.201210:e1001429 pubmed publisher
78.WalserR,BurkeJ,GogvadzeE,BohnackerT,ZhangX,DHess,etai.PKCfosforilaPI3Kparaativloeliberlodocontrole
GPCR.PLoSBiol.201311:e1001587 pubmed publisher
79.YaoP,PotdarA,RayP,EswarappaS,FlaggA,BWillard,etai.OcomplexoHILDAcoordenauminterruptorcondicionalnaregio
3'notraduzidadoARNmVEGFA.PLoSBiol.201311:e1001635 pubmed publisher
80.BeyhanS,GutierrezM,VoorhiesH,SilA.umaformaclulaligaesderedeedevirulnciadetemperaturasensveltraosem
umfungopatognicoprimrio.PLoSBiol.201311:e1001614 pubmed publisher
81.TaoL,QXie,DingY,LiS,PengS,ZhangY,etal.CaMKIIecalcineurinaregularotempodevidadeCaenorhabditiselegans
atravsdofactordetranscrioFOXODAF16.eLife.20132:e00518 pubmed publisher
82.PolleyS,HuangD,HauensteinA,FuscoA,XZhong,VuD,etal.AbaseestruturalparaaIkBcinase2dependentedeactivao
atravsdeoligomerizaotransautofosforilao.PLoSBiol.201311:e1001581 pubmed publisher
83.OkunukiY,YUsui,KezukaT,Hattorit,MasukoK,NakamuraH,etal.Vigilnciaproteomicdeautoantigniosretinaisemuvete
endgena:implicaodaesteraseDedotipodocrebrodecreatinaquinase,comonovosautoantignios.MolVis.200814:
1094104 pubmed
84.HuangN,ChelliahY,YShan,TaylorC,YooS,PartchC,etai.Estruturadecristaldorelgioheterodimrica:BMAL1complexo
ativadortranscricional.Cincia.2012337:18994 pubmed publisher
85.IwigJ,VercoulenY,DasP,TBarros,LimnanderA,CheY,etal.AnliseestruturaldeautoinibionofatorcmbioRasGRP1
Rasspecific.eLife.20132:e00813 pubmed publisher
86.DepuydtH,LeonardS,VERTOMMEND,DenoncinK,MorsommeP,WahniK,etal.Umsistemaredutorperiplasmticoprotege
resduosdecistenanicadeoxidao.Cincia.2009326:11091111 pubmed publisher
87.LuW,DuJ,Wackert,GerbigSmentekE,AndradeS,gatingEinsleO.dependentesdopHemumcanaldeformiatoFoca.
88.UmPuel,CypowyjS,BustamanteJ,WrightJ,LiuG,HLim,etal.Candidasemucocutneacrnicaemsereshumanoscom
errosinatosdeimunidadedeinterleucina17.Cincia.2011332:658 pubmed publisher
89.DunkleJ,WangL,FeldmanM,PulkA,ChenV,KapralL,etal.Estruturasdoribossomabacterianoemestadosclssicose
hbridosdeligaoARNt.Cincia.2011332:9814 pubmed publisher
90.EntreF,BalmandS,VallierA,VincentMonegatC,VigneronA,WeissGayetM,etal.Pptidosantimicrobianosmanter
endosimbiontesdeinsectosobcontrole.Cincia.2011334:3625 pubmed publisher
91.DuJ.,ZhouY,XSu,YuJ,KhanS,JiangH,etal.Sirt5umdemalonylaselisinaprotenadependentedeNADedesuccinylase.
92.ReiN,ShefflerW,SawayaH,VollmarB,JSumida,AndreI,etal.Designcomputacionaldenanomateriaisdeprotenaauto
montagemcomprecisonvelatmico.Cincia.2012336:11714 pubmed publisher
93.HawleyS,FullertonM,RossM,SchertzerJ,ChevtzoffC,WalkerK,etal.Oantigosalicilatodedrogaativadiretamentea
protenaquinaseactivadaAMP.Cincia.2012336:91822 pubmed publisher
94.GagnonH,SeetharamanS,BulkleyD,SteitzT.baseestruturalparaoresgatedosribossomasparalisados:estruturadeYaeJ
ligadoaoribossoma.Cincia.2012335:13702 pubmed publisher
95.UmLaganowsky,LiuC,SawayaH,JWhitelegge,ParqueJ,ZhaoM,etal.Atmicavistadeumpequenooligmeroamilide
txico.Cincia.2012335:12281231 pubmed publisher
96.LazarusJ,MoughamianA,TokitoH,HolzbaurE.dinactinap150subunidade(colada)umfactoranticatstrofeespecficapara
neurnios.PLoSBiol.201311:e1001611 pubmed publisher
97.CastilloAcostaV,RuizPerezG,YangW,GonzalezPacanowskaD,VidalA.Identificaodeumresduocrticoparaaexciso
de3'bloqueioterminaemendonucleasesdeapurnicos/apirimidnicadafamliaXth.NucleicAcidsRes.200937:18291842
pubmed publisher
98.YiC,MaH,RanG,ZhengJ,JTong,ZhuJ,etal.Funoemecanismomoleculardeacetilaonaregulaoautofagia.Cincia.
99.SchulzS,IglesiaslatasM,KrahA,YildizS,LeoneV,MathiesD,etal.UmnovotipodeNa(+)conduzidorotormembranaATP
sintasecomummotivodeacoplamentodeiesdeduascarboxilato.PLoSBiol.201311:e1001596 pubmed publisher
100.RansonOlsonB,ZeilstraRyallsJ.regulamentodoRhodobactersphaeroides2.4.1geneHEMAporPRRAeFnrL.JBacteriol.
101.LiuW,ChunE,ThompsonA,ChubukovP,FXu,KatritchV,etal.BaseestruturalparaaregulaoalostricadeGPCRspories
desdio.Cincia.2012337:2326 pubmed publisher
102.ColomboM,JBourhis,ChamontinC,SorianoC,VilletS,CostanzoS,etal.Ainteracoentreanucleoprotenadovrusdo
sarampoeoInterferoFactorderegulador3baseiasenumambientecelularespecfico.VirolJ.20096:59 pubmed
publisher
103.MiyagawaY,OkitaH,ItagakiH,ToyodaH,KatagiriY,FujimotoJ,etal.EWS/ETSregulaaexpressodafamliaDickkopfem
clulastumoraisfamliaEwing.PLoSONE.20094:e4634 pubmed publisher
104.TomishigeN,KKumagai,KusudaJ,NishijimaM,K.HanadacasenacinaseI{gama}duassubregulaotrficodeceramidana
sntesedeesfingomielina.MolCellBiol.200920:34857 pubmed publisher
105.OldhamM,ChenJ.estruturadecristaldotransportadordemaltoseemumestadointermediriopretranslocation.Cincia.2011
106.NeunuebelM,ChenY,GasparA,BacklundP,YergeyA,MachnerM.DeAMPylationdapequenaGTPaseRab1pelopatgeno
Legionellapneumophila.Cincia.2011333:4536 pubmed publisher
107.XuF,WuH,KatritchV,HanL,JacobsonK,ZGao,etal.EstruturadeumreceptordeadenosinaA2Ahumanoligadoaagonista.
108.PaigeJ,WuK,imitaJaffreyS.ARNdeprotenafluorescenteverde.Cincia.2011333:6426 pubmed publisher
109.MeisterS,PlouffeD,KuhenK,BonamyG,WuT,SBarnes,etal.ImagiologiadefasesdefgadodePlasmodiumparaconduzira
prximageraodedescobertadedrogasantimalria.Cincia.2011334:13727 pubmed publisher
110.InamoriK,YoshidaMoriguchit,HaraY,AndersonM,YuG,CampbellK.dystroglycanfunorequeractividadesxylosyle
glucuroniltransferasedegrandes.Cincia.2012335:936 pubmed publisher
111.BrohawnS,delMrmolJ,estruturaMacKinnonR.cristaldoTRAAKhumanoK2P,umlipdiosesensvelmecanoK+canalde
ies.Cincia.2012335:43641 pubmed publisher
112.SuzukiL,ShimazuN,TanakaM.Umpriolevedura,Mod5,promoveadquiridoresistnciaafrmacoseasobrevivnciade
clulassobstressambiental.Cincia.2012336:3559 pubmed publisher
113.Orgt,ChignolaF,HetnyiC,GaetaniH,RebaneA,LiivI,etal.OdedoreguladorPHDautoimuneseligaaH3K4histonano
metiladoparaactivaraexpressodogene.EMBORep20089:.3706 pubmed publisher
114.McClellandH,ZhaoL,CarskadonS,ArenbergD.ExpressodeCD74,oreceptorparaofactorinibidordamigraode
macrfagos,nocancrodopulmodeclulasnopequenas.AmJPathol.2009174:63846 pubmed publisher
115.OyamaS,YamakawaH,SasagawaN,HosoiY,FutaiE,IshiuraS.disbindina1,umaprotenarelacionadacomaesquizofrenia,
funcionalmenteinteractuacomocomplexodeprotenaquinasedependentedeADNdeummododependentedaisoforma.PLoS
ONE.20094:e4199 pubmed publisher
116.RayA,JamesH,LarochelleS,FisherR,BlainS.p27Kip1inibeaciclinaDquinasedependentedeciclina4pordoismodos
independentes.MolCellBiol.200929:98699 pubmed publisher
117.MillerA,estruturacompridaS.cristaldocanaldepotssiodomniodedoisporohumanaK2P1.Cincia.2012335:4326
pubmed publisher
118.WangY,LadungaI,MillerA,HorkenK,Plucinakt,SemanaD,etal.Opequenomodificadorubiquitinalike(SUMO)esistemade
conjugarSUMOdeChlamydomonasreinhardtii.Gentica.2008179:17792 pubmed publisher
119.SchollerN,GrossJ,GarvikB,WellsL,LiuY,LochC,etai.Usodecancroespecfico,emanticorposrecombinantesinvivo
biotiniladoparaadescobertadebiomarcadoressorosegregadaemlevedura.JMedTransl.20086:41 pubmed publisher
120.HoushmandiS,EmnettR,GiovanniniH,GutmannD.Aprotenaneurofibromatose2,merlin,regulaocrescimentodeclulasda
gliaemformaErbB2eSrcdependente.MolCellBiol.200929:14721486 pubmed publisher
121.UmRousseau,McEwenA,PoussinCourmontagneP,RognanD,NominY,RioM,etal.TRAF4umromancemigraode
clulasdeprotenademodulaojunesapertadasefavorecendodeligaoafosfoinositido.PLoSBiol.201311:e1001726
pubmed publisher
122.SzaboI,JBock,GrassmeH,SoddemannH,WilkerB,FLang,etal.MitocondrialKv1.3canaldepotssiomedeiaaapoptose
Baxinduzidanoslinfcitos.ProcNatlAcadSciUSA.2008105:148616 PubMed editora
123.UmRamachandran,ParisienJ,HorvathC.STAT2umalvoprimrioparaovrusdosarampoVmediadaporprotenade
interferoalfa/betainibiodesinalizao.JVirol.200882:83308 pubmed publisher
124.BereczkiO,UjfaludiZ,PardiN,NagyZ,GTora,BorsI,etal.ProtenadeligaoaTATfactorassociado3(TAF3)interage
comop53einibeasuafuno.BMCMolBiol.20089:57 pubmed publisher
125.ZhouB,LiuJ.,WangQ,LiuX,LiX,LiP,etal.Aprotenadanucleocpsidedegravescoronavrussndromerespiratriaaguda
inibeacitocineseeproliferaocelular,interagindocomofactordealongamento1alfadetraduo.JVirol.200882:696271
pubmed publisher
126.SonnbergS,SeetB,Pawsont,FlemingS,protenasanquirinarepetioMercerA.poxvrussoumaclassenicadeprotenas
FboxqueseassociamcomcomplexosdeubiquitinaligaseSCF1celular.ProcNatlAcadSciUSA.2008105:1095560
PubMed editora
127.EptingC,ReiF,PedersenA,JZaman,RitnerC,H.BernsteinStemantignio1declulaslocalizaparamicrodomnioslipdicose
associadoscominsulinaenzimaquedegradaemmioblastosesquelticos.JCellPhysiol.2008217:25060 pubmed
publisher
128.UmKodani,KristensenI,HuangL,SutterlinC.controloGM130dependentedeactividadeCdc42noGolgiregulaorganizaodo
centrossoma.MolCellBiol.200920:1192200 pubmed publisher
129.ConoverL,HendersonS,GregorioC.Aligadosamiopatiadesminaperturbamutaomsculoestriadoarquiteturadefilamentos
deactina.MolCellBiol.200920:83445 pubmed publisher
130.LeeK,QianD,ReyS,WeiH,JLiu,G.SemenzaAntraciclinaquimioterapiainibeHIF1eaactividadedetranscriomobilizao
induzidaportumoresdeclulascirculantesangiognicos.ProcNatlAcadSciUSA.2009106:23538 PubMed editora
131.BeauvaisD,EllB,McWhorterA,RapraegerA.sindecano1regulaalphavbeta3ealphavbeta5activaodeintegrinadurantea
angiogneseebloqueadoporsynstatin,umnovoinibidordeptido.JExpMed.2009206:691705 pubmed publisher
132.HataK,KaibuchiK,SInagaki,T.YamashitaassociadosUnc5BcomLARGparamediaraacodamolculadeorientao
repulsivo.JCellBiol.2009184:73750 pubmed publisher
133.KouzuFujitaM,MezakiY,SawatsubashiS,MatsumotoT,YamaokaI,YanoT,etal.Coativaodebetadoreceptorde
estrognioporgonadotropinainduzidacofactorGiot4.MolCellBiol.200929:8392 pubmed publisher
134.TrojerP,ZhangJ,YonezawaM,Schmidt,A,ZhengH,JenuweinT,etal.DinmicaHistonaH1Isotipo4MetilaoeA
desmetilaoporHistonaLisinaMetiltransferaseG9a/KMT1CeosJumonjicontendoodomiodeJMJD2/KDM4Protenas.J
BiolChem.2009284:8395405 pubmed publisher
135.GibbsS,EstrilB,BeckK,ProftJ,ZhaoX,NoskovaT,etal.CasaisHsp40comocomplexoacompanhanteCSPalphaaps
induodarespostaachoquetrmico.PLoSONE.20094:e4595 pubmed publisher
136.MacPhersonM,BeattyG,WZhou,DuH,protenaisoladorSadowskiP.OCTCFpstraducionalmentemodificadospor
SUMO.MolCellBiol.200929:71425 pubmed publisher
137.ZaitsevaL,PCherepanov,LeyensG,WilsonS,RasaiyaahJ,FassatiA.HIV1exploraesimportina7paramaximizara
importaonucleardoseugenomadeADN.Retrovirology.20096:11 pubmed publisher
138.YuksekK,ChenW,ChienD,degradaoOuJ.UbiquitinaindependentedaprotenaFdovrusdahepatiteC.JVirol.200983:
139.WangH,denHollanderA,MoayediY,AbulimitiA,LiY,RCollin,etai.MutaesemSPATA7causarLeberamaurosecongnitae
retinitepigmentosajuvenil.AmJHumGenet.200984:3807 pubmed publisher
140.ViiriK,JanisJ,Siggerst,Heinonent,JValjakka,BulykM,etal.DeligaoaoADNebendingactividadesdeSAP30LeSAP30
somediadosporummduloemonophosphoinositidesdependentedezinco.MolCellBiol.200929:34256 pubmed
publisher
141.SuJ,TakedaK,TamuraS,YFujiki,estruturaMikiK.cristaldodomnioNterminalconservadadoreceptordeimportaode
protenasdematrizdoperoxissoma,Pex14p.ProcNatlAcadSciUSA.2009106:41721 PubMed editora
142.UmSalahudeen,ThompsonJ,RuizJ.,MaH,KinchG,LiQ,etal.UmligaseE3possuindoumdomniohemerythrinferro
sensvelumreguladordahomeostasedeferro.Cincia.2009326:7226 pubmed publisher
143.FinoB,CHodakoski,KoujakS,SuT,SaalG,MaurerH,etal.AactivaodaviaPI3KemcancroatravdainibiodePTENpelo
factordetrocadoPREX2a.Cincia.2009325:12615 pubmed publisher
144.SimsR,RojasG,DBeck,BonasioR,RSchller,DruryW,etal.OdomniodoterminalCdaARNpolimeraseIImodificadapor
metilaoespecficodolocal.Cincia.2011332:99103 pubmed publisher
145.ZhangK,FischerT,PorterR,DhakshnamoorthyJ,ZofallH,HZhou,etal.Clr4/Suv39eARNfactoresdecontrolodequalidade
paracooperardesencadearARNiesuprimiroARNantisentido.Cincia.2011331:16247 pubmed publisher
146.ProtenaquinaseAmatoS,LiuX,ZhengB,CantleyL,PRakic,HomemH.AMPactivatedregulapolarizaoneuronalpor
interferircomaPI3quinaselocalizao.Cincia.2011332:24751 pubmed publisher
147.OakhillJ,aoR,ChenZ,ScottJ,LingN,STam,etal.AMPKumaprotenaquinasereguladaporcargadirectadeadenilato.
148.LongoD,RaschleH,JoukovV,WalterJ.MecanismodeADNdependenteRAD51intercadeiasreparaodeligaescruzadas.
149.HoffmeyerK,RaggioliA,SRudloff,AntonR,HierholzerA,DelValleI,etal.SinalizaodeWnt/cateninaregulatelomeraseem
clulasestaminaiseclulascancerosas.Cincia.2012336:15491554 pubmed publisher
150.BagijnH,GoldsteinG,SapetschnigA,WEICKE,BouaskerS,LehrbachN,etal.Funo,alvos,eevoluodeCaenorhabditis
eleganspiRNAs.Cincia.2012337:5748 pubmed publisher
151.CarltonJ,CaballeA,AgromayorH,KlocM,MartinSerranoJ.ESCRTIIIregulaopontodeverificaoabscisoAuroraB
mediadaatravsCHMP4C.Cincia.2012336:2205 pubmed publisher
152.XiongB,BayatV,JaiswalM,ZhangK,SandovalH,CharngW,etal.RochedoumGEFparaRab11necessriopararodopsina
trficoemanutenodeclulasfotorreceptorasadultos.PLoSBiol.201210:e1001438 pubmed publisher
153.BujalkaH,KoenningM,JacksonS,PerreauV,PapaB,HayC,etai.MYRFumfactordetranscrioassociadamembrana
queautoproteolyticallyclivaparaactivardirectamenteosgenesdemielina.PLoSBiol.201311:e1001625 pubmed publisher
154.RoblesH,BoyaultC,DKnutti,PadmanabhanK,WeitzC.IdentificaodeRACK1eprotenaquinaseCalphacomocomponentes
integraisdorelgiocircadianodemamero.Cincia.2010327:4636 pubmed publisher
155.JohnsonK,ZhuS,TremblayH,PayetteJ,WangJ,BouchezL,etal.Aabordagembaseadaemclulastroncoparaareparao
dacartilagem.Cincia.2012336:71721 pubmed publisher
156.PerezdeJesusV,Alastalot,WuJ,JAxelrod,CookeJ,AmievaM,etal.Ossoprotenamorfogentica2induzangiognese
pulmonarviadeWntbetacateninaeviasdeWntRhoARac1.JCellBiol.2009184:8399 pubmed publisher
157.MeiY,ZhangY,YamamotoK,WXie,MakT,H.EstregulaoFOXO3adependentedePink1(Park6)medeiaasinalizaode
sobrevivciaemrespostaprivaodecitocinas.ProcNatlAcadSciUSA.2009106:51538 PubMed editora
158.MisawaT,KArima,MizusawaH,SatohJ.estreitaassociaodecanaldeguaAQP1comdeposiodebetaamilidenos
crebrosdedoenadeAlzheimer.ActaNeuropathol.2008116:24760 pubmed publisher
159.MatsuyamaH,AizawaS,ShimonoA.SFRPcontrolapolaridadeapicobasaledivisocelularorientadanodesenvolvimentode
epitliointestinal.PLoSGenet.20095:e1000427 pubmed publisher
160.SathishN,ZhuF,ORF45deherpesvrusassociadoaosarcomadeYuanY.Kaposiinteragecomcinesina2transportar
complexoscpsidetegumentoviraisaolongodosmicrotbulos.PLoSPathog.20095:e1000332 pubmed publisher
161.WangF,P.TongSIRT2suprimeadiferenciaodeadipocitospordesacetilaoFOXO1ereforodainteracodorepressor
comFOXO1PPARgama.MolCellBiol.200920:8018 pubmed publisher
162.WangM,EleG,HuangyangP,JLiang,SiW,RYan,etal.JMJD6promoveacarcinogesedoclonatravsdaregulao
negativadep53porhidroxilao.PLoSBiol.201412:e1001819 pubmed publisher
163.DuongH,RoblesH,KnuttiD,WeitzC.Ummecanismomolecularparaareaconegativadorelgiocircadiano.Cincia.2011
164.EleY,LiB,LiZ,LiuP,WangY,QTang,etal.Formaode5carboxylcytosineeasuaexcisoporTDGemADNdemamfero
Tetmediada.Cincia.2011333:13037 pubmed publisher
165.NaiduS,FriedrichJ,RussellJ,J.ZomerdijkTAF1BumcomponenteTFIIBcomodamaquinariadetranscriobasaldeARN
polimeraseI.Acincia.2011333:16402 pubmed publisher
166.ChakrabortyA,WangD,EbrightY,YKorlann,KortkhonjiaE,KimT,etal.AbrirefecharogrampodeARNpolimerasebacteriana.
167.YiW,ClarkP,MasonD,KeenanH,EncostaC,GoddardW,etal.Fosfofrutoquinase1glicosilaoregulaocrescimentocelulare
metabolismo.Cincia.2012337:97580 pubmed publisher
168.MoinS,UrbanaS.Membranaimersopermiteproteasesrombideparaalcanarespecificidadeatravsdaleituradinmica
segmentotransmembranar.eLife.20121:e00173 pubmed publisher
169.LeeB,LuaJ,JShu,YuanG,NewmanZ,SchekmanR,etal.UNC93B1medeiatrficodiferencialdosTLRsendossomais.eLife.
20132:e00291 pubmed publisher
170.Pselvagem,FarhanH,DMcEwan,WagnerS,RogovV,BradyN,etal.Afosforilaodoreceptoroptineurinautofagiarestringe
ocrescimentodeSalmonella.Cincia.2011333:22833 pubmed publisher
171.SethD,HausladenA,WangY,protenaendgenaStamlerJ.SnitrosilaoemE.coli:regulaoporoxyR.Cincia.2012336:
172.KaiserC,DGoldman,ChoderaJ,TinocoI,BustamanteC.Oribossomamoduladobragemprotenanascente.Cincia.2011
173.ZhangH,WuP,FKelly,Penfermeira,cairH.controloquantitativodaprotenaSpalmitoilaoregulaaentradameiticana
leveduradefisso.PLoSBiol.201311:e1001597 pubmed publisher
174.PrevisH,BeckprevisS,GulickJ,RobbinsJ,mecnicaWarshawD.molecularesdacardacaprotenadeligaodamiosinaC
emfilamentosgrossosnativas.Cincia.2012337:12158 pubmed publisher
175.MaoZ,HineC,TianX,VanMeterH,AuH,VaidyaA,etal.SIRT6promoveareparaodoADNsobtensoatravsda
activaoPARP1.Cincia.2011332:14436 pubmed publisher
176.ColesC,ShenY,TenneyA,SieboldC,SuttonL,LuW,etal.Interruptormolecularespecficosdoproteoglicanopara
agrupamentoRPTPeextensoneuronal.Cincia.2011332:4848 pubmed publisher
177.WuX,Zhout,ZhuJ,ZhangB,IGeorgiev,WangC,etai.EvoluofocadodeHIV1Osanticorposneutralizantesreveladaspor
sequenciaodeestruturaseprofunda.Cincia.2011333:1593602 pubmed publisher
178.PinheiroV,TaylorA,CozensC,AbramovH,ProcessaM,ZhangS,etal.Polmerossintticosgenticoscapazesde
hereditariedadeeevoluo.Cincia.2012336:3414 pubmed publisher
179.WuC,LiT,FarhG,GLin,LinT,YYu,etal.BaseestruturaldetipoIIinibiodatopoisomerasepeloetoposidoanticancro
droga.Cincia.2011333:45962 pubmed publisher
180.Umcarter,ChoC,JinL,estruturaValeR.cristaldodomniomotordinena.Cincia.2011331:11591165 pubmed publisher
181.UmFarcas,BlackledgeN,SudberyI,LongH,McGouranJ,RoseN,etal.KDM2BligaoPolycombrepressivaComplexo1
(PRC1)aoreconhecimentodeilhasCpG.eLife.20121:e00205 pubmed publisher
182.SchopferP,HeynoE,FDrepper,geraoKriegerLiszkayA.Naftoquinonadependentederadicaissuperxidopelaquinona
redutaseisoladoapartirdamembranaplasmticadesoja.PlantaPhysiol.2008147:86478 pubmed publisher
183.NakaneS,NakagawaN,SKuramitsu,MasuiR.CaracterizaodeADNpolimerasedeThermusthermophilusXdeHB8revelao
POLXcedomniosPHPsoambosnecessriosparaa3'5'exonuclease.NucleicAcidsRes.200937:203752 pubmed
publisher
184.OganesyanV,DamschroderH,CookK,WuH,Dall'AcquaW.cristalizaoeanlisededifracoderaiosXpreliminardo
complexoentreumfragmentodeanticorpoantiinterferohumanoeointerferohumanoalfa2A.ActaCrystallogrSectFStruct
BiolCrystCommun.200965:146 pubmed publisher
185.GuoY,NadyN,QiC,AllalihassaniA,ZhuH,PanP,etal.Reconhecimentometilaoespecficadeestadodehistonaspelo
L3MBTL2protenarepetioMBT.NucleicAcidsRes.200937:220410 pubmed publisher
186.MullerM,PetersH,JBLUMER,BlankenfeldtW,GoodyR,protenaefectoraItzenA.ALegionellaDrrAAMPylatesoRab1b
reguladortrfegomembrana.Cincia.2010329:9469 pubmed publisher
187.AzoiteiH,CorreiaB,BanY,CarricoC,KalyuzhniyO,ChenL,etal.Enxertiaespinhadorsalguiadaclculodeummotivosobre
umandaimedescontnuaprotena.Cincia.2011334:3736 pubmed publisher
188.UmDey,SeshasayeeD,NoubadeR,FrancsD,LiuJ.,ChaurushiyaM,etal.PerdadosupressordetumorBaP1provoca
transformaomielide.Cincia.2012337:15416 pubmed
189.AyazP,AX,HuddlestonP,BrautigamC,arrozL.UmTOG:estruturacomplexatubulinarevelamecanismosbaseadosem
conformaodeumapolimerasedemicrotbulos.Cincia.2012337:85760 pubmed publisher
190.GaoY,ZormanS,GundersenG,XiZ,MaL,SirinakisL,etal.ComplexosSNAREneuronaisreconstitudosnicozperemtrs
fasesdistintas.Cincia.2012337:13403 pubmed publisher
191.LiuT,LiuZ,SongC,HuY,ZHan,ElaJ,etal.Dimerizaoinduzidaporquitinaactivaumreceptorimunitrioplanta.Cincia.
192.JandaC,DWaghray,LevinA,ThomasC,GarciaK.baseestruturaldereconhecimentodeWntporFrizzled.Cincia.2012337:
193.PolikanovY,BlahaL,SteitzT.ComohibernaofactoresdeRMF,HPF,eYfiAdesligarasnteseproteica.Cincia.2012336:
194.KudryashevH,StentaH,SchmelzS,AmstutzH,WiesandL,CastanoDiezD,etal.Naanliseestruturalsitudoinjectisome
Yersiniaenterocolitica.eLife.20132:e00792 pubmed publisher
195.AndersenK.,OnischenkoE,TangJ.,KumarP,ChenJ,UlrichA,etal.NucleoporinaandaimeNup188eNup192compartilhar
propriedadesestruturaisefuncionaiscomreceptoresdetransportenucleares.eLife.20132:e00745 pubmed publisher
196.PallesenJ,HashemY,KorkmazL,KoripellaR,HuangC,EhrenbergM,etal.CryoEMvisualizaodoribossomanocomplexo
determinaocomapoRF3eRF1.eLife.20132:e00411 pubmed publisher
197.EpistasiaGongL,MSuchard,BloomJ.Estabilidademediadaconstrangeaevoluodeumaprotenadagripe.eLife.20132:
e00631 pubmed publisher
198.LiuX,BushnellD,SilvaD,HuangX,KornbergR.Iniciaoestruturacomplexaerevisopromotor.Cincia.2011333:6337
pubmed publisher
199.LogoF,GNg,ZhouX,WestL,KovachA,TanH,etal.MimetismomolecularregulaasinalizaoABAporcinasesefosfatases
SnRK2PP2C.Cincia.2012335:858 pubmed publisher
200.GariK,LenOrtizA,VBorel,FlynnH,JSkehel,BoultonS.MMS19ligamontagemconjuntodoferroenxofrecitoplasmticapara
ometabolismodoADN.Cincia.2012337:2435 pubmed publisher
201.vandenElsenJ,D.IsenmanUmaestruturacristalinadocomplexoentreoreceptordocomplementohumano2eoseuligando
C3d.Cincia.2011332:60811 pubmed publisher
202.CooleyR,TRhoads,ArpD,KarplusP.Umaprotenadiferroautogeneratesumaligaotransversalvalinafenilalanina.Cincia.
203.KlingeS,VoigtsHoffmannF,LeibundgutH,ArpagausS,estruturaBanN.Cristaldos60Seucariticassubunidaderibossomalem
complexocomofactordeiniciao6.Science.2011334:9418 pubmed publisher
204.LeconaE,RojasG,BonasioR,JohnstonA,FernandezCapetilloO,SCML2protenaReinbergD.Polycombregulaociclocelular
porligaoemodulao/complexosdeciclina/CDKp21.PLoSBiol.201311:e1001737 pubmed publisher
205.ZchariaE,JiaJ,ZhangX,BarazG,Lindahl,U,PeretzT,etal.Recmcamundongosknockoutdeheparanasegerado
desvendarcoregulaodaheparanaseemetaloproteinasesdamatriz.PLoSONE.20094:e5181 pubmed publisher
206.RoostaluJ,HentrichC,BielingP,TelleyI,ESchiebel,SurreyT.direcionaldecomutaodacinesinaCin8atravsde
acoplamentodomotor.Cincia.2011332:949 pubmed publisher
207.Pengt,HuangB,SunY,LuY,BonewaldG,ChenS,etal.Obloqueiodeprocessamentoproteolticoeeliminaode
glicosaminoglicanocadeialateraldeDMP1ratoporsubstituioderesduosdeaminocidoscrticos.Clulastecidosrgos.
208.AtaideS,SchmitzN,ShenK,KeA,ShanS,DoudnaJ,etal.Aestruturadecristaldapartculadereconhecimentodosinal,em
complexocomoseureceptor.Cincia.2011331:8816 pubmed publisher
209.Spatzalt,AksoyogluM,ZhangL,AndradeS,SchleicherE,SWeber,etal.Evidnciasdecarbonointersticialemdanitrogenase
ferromolibdniocofactor.Cincia.2011334:940 pubmed publisher
210.ZhangS,BryantD.Ociclodocidotricarboxlicoemcianobactrias.Cincia.2011334:15513 pubmed publisher
211.GardnerB,protenasWalterP.UnfoldedsoIRE1activadoraligandosqueinduzemdirectamentearespostaprotena
desdobrada.Cincia.2011333:18914 pubmed publisher
212.McNultyN,WuH,EricksonA,PanC,EricksonB,EMartens,etai.Efeitosdadietasobreautilizaoderecursosporuma
microbiotaintestinalhumanamodelocontendoBacteroidescellulosilyticusWH2,umsimbiontecomumaextensaglycobiome.
PLoSBiol.201311:e1001637 pubmed publisher
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BANDEIRA SigmaAldrich AfinidadeFLAGM2 19 [52,88,134,158169]

Superose GEHealthcare 11 [10,49,64,74,82,99,134,194,204206]

GEHealthcare HiTrapQ 6 [64,67,71,78,99,209]

Cationica GEHealthcare ColunaMonoS 3 [49,76,96]

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180.Umcarter,ChoC,JinL,estruturaValeR.cristaldodomniomotordinena.Cincia.2011331:11591165 pubmed publisher

210.ZhangS,BryantD.Ociclodocidotricarboxlicoemcianobactrias.Cincia.2011334:15513 pubmed publisher

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