Determinarea densitii sngelui i plasmei - Metoda Phillips - Van Slyke

Principiul determinrii. Determinarea densitii sngelui sau plasmei se face comparativ,

fa de o serie de soluii de sulfat de cupru ale cror densiti ne sunt cunoscute. Pictura
de plasm sau snge se acoper cu o pelicul de proteinat de cupru care-i permite
plutirea, pentru cteva secunde, n interiorul lichidului, n momentul cnd densitile celor
dou lichide sunt egale.
Materiale necesare.
- snge i plasm;
- flacoane cu soluii de sulfat de cupru cu densiti diferite;
- pipete.
Tehnica de lucru.
Se iau dopurile de la flacoanele cu sulfat de cupru i se las ctva timp la temperatura
camerei. Din eprubeta cu snge integral, se iau 2ml cu o pipet i se las s cad n
fiecare flacon cte o pictur de snge de la o nlime de maximum 1cm de la suprafaa
lichidului.
Pot exista trei situaii:
- pictura de snge se ridic la suprafaa lichidului, ceea ce nseamn c densitatea
picturii e mai mic dect densitatea soluiei;
- pictura de snge coboar spre partea inferioar a flaconului, fiind, deci, cu densitate
mai mare dect a soluiei din flacon;
- pictura de snge plutete n interiorul soluiei timp de cteva secunde pn la
1/2min., deci densitatea sngelui este aceeai cu densitatea soluiei din flaconul
respectiv.
La fel se procedeaz i pentru determinarea densitii plasmei. Seria de soluii de sulfat de
cupru cu densiti cunoscute poate fi folosit la mai multe determinri (dup un timp, att
picturile de plasm ct i cele de snge integral se vor strnge n partea inferioar a
flacoanelor). n general, soluiile se vor schimba cnd depozitul de snge sau plasm
depete 1/4 din volumul total al soluiei.
Rezultate. Prin aceast metod, obinem dou valori: densitatea sngelui integral (DS) i
densitatea plasmei (DP).
R.A. Phillips i Van Slyke au construit o nomogram cu ajutorul creia, cunoscnd
densitatea unei probe de snge i a plasmei, se pot obine valorile hematocritului (Ht) n
%, a hemoglobinei (Hb) n g% i a proteinelor totale din plasm n g% (vezi nomograma,
(figura1.5.). Metoda permite determinarea proteinemiei i a Hb cu erori foarte mici.
Valori de referin (kg/m3):
- Plasm: 1027 cu limite ntre 1024-1030.
- Snge integral: 1055-1067 -brbai; 1051-1061 -femei;
Variaiile densitii plasmei
- Creteri fiziologice:
la altitudine, prin splenocontracie, crete numrul de eritrocite;
n efort, prin acelai mecanism;
n deshidratri, prin transpiraie.
- Creteri patologice:
deshidratri - prin diaree, vom, arsuri - se pierde ap;
poliglobulii primare sau secundare;
oc - n care se produce o concentrare a eritrocitelor, ca urmare a creterii
permeabilitii capilare i trecerii lichidului circulant n interstiii.
- Scderi fiziologice:
la gravide, prin creterea fraciunii plasmatice, ca urmare a atragerii apei n vas,
sub aciunea progesteronului i a estrogenilor;
ingerare masiv de lichide.
 - Scderi patologice:
anemii;
posthemoragie, la cteva ore de la producerea acesteia, cnd lichidul interstiial
este atras n vase, pentru compensarea pierderii de volum i meninerea
presiunii arteriale.
Importana determinrii.
- determinarea densitii sngelui integral i a plasmei permit aprecierea rapid, prin
nomograme, a hematocritului, a cantitii de Hb i a concentraiei proteinelor
plasmatice;
- metoda Van Slyke permite diagnosticul de oc postoperator, oc datorat arsurilor
ntinse i oc posthemoragic. De asemenea, ajut la stadializarea ocului i
orientarea tratamentului n oc, anemii, deshidratri etc.

Studiu individual

1. Consultnd un dicionar medical, definii urmtorii termeni: hormon, anticoagulant,

ser, fibrinogen, coagulare, hematocrit, sistem tampon.
2. Consultnd un tratat medical, determinati situaiile patologice n care presiunile
osmotic i coloid-osmotic intervin n patologia uman.
3. Consultnd un tratat medical, determinai situaiile patologice n care exist
modificri ale pH-ului sanguin.
 Figura 1.5. Graficul Van Slyke i colab. (Hb - hemoglobin; Ht - hematocrit)
Punctul n care linia care unete scala I cu scala a III-a i intersecteaz scala a II-a, arat
valoarea hemoglobinei i hematocritului
FI DE LUCRU N LABORATOR

1. Notai valorile obinute pentru densitatea plasmei i a sngelui integral.

................................................................................................................................................
2. Identificai parametrii de care depinde densitatea sngelui integral.

................................................................................................................................................
3. Identificai parametrii de care depinde densitatea plasmei.

................................................................................................................................................
4. Indicai cum poate fi densitatea sngelui la o gravid, n ultimul trimestru de sarcin.
Cum numii situaia respectiv i de ce apare la gravide?

................................................................................................................................................
5. Care este importana clinic a determinrii densitii sngelui i a plasmei?

................................................................................................................................................
6. Notai valorile corecte pentru presiunea osmotic.

................................................................................................................................................
7. Notai valorile corecte pentru presiunea oncotic.

................................................................................................................................................
8. Notai valorile corecte pentru pH-ul sanguin.

................................................................................................................................................
9. Calculai volumul plasmatic aproximativ existent n corpul dumneavoastr.

................................................................................................................................................
10. Analizai densitile plasmei la dou persoane care au valori diferite ale proteinemiei,
de exemplu 5 g/dl i 7,5 g/dl.

..............
.
2.3. DETERMINAREA HEMATOCRITULUI
Definiie. Etimologic, hematocrit nseamn volumul hematiilor. Hematocritul este
fraciunea din volumul total al sngelui, ocupat de hematii, exprimat procentual. Mai
poate fi definit ca raportul dintre plasm i elementele figurate ale sngelui, exprimat
procentual, innd cont c, n mod normal, volumul leucocitelor i trombocitelor nu
depete 1 %. Germanii exprim acest parametru i n l de E/l snge
Este un triaj obligatoriu pentru investigaia incipient a oricrui bolnav mpreun cu
determinarea hemoglobinei i a numrului de hematii. Este o determinare de urgen n
strile de oc.
Hematocritul depinde de numrul total de eritrocite (masa eritrocitar), de volumul
eritrocitar mediu i volumul plasmatic.
Principiul metodei. Prin centrifugarea sngelui recoltat pe anticoagulant se separ
hematiile de plasm i apoi se evalueaz valoarea procentual a masei de hematii.
Citirea rezultatelor. n tubul cu snge centrifugat se
observ (figura 2.7.):
- un strat inferior: masa eritrocitar;
Plasm - un strat mediu: leucocite i trombocite (se
observ numai n patologie);
Leucocite
- un strat superior: plasma.
Uneori, ntre stratul de leucocite i
H eritrocite, se poate observa un strat
negru stratul Bramberger, format din
eritrocite modificate de ctre enzimele
Hematii leucocitare.
h n anemiile hipocrome, limita dintre leucocite i
eritrocite este tears, puin evident, pentru c
eritrocitele hipocrome au greutate specific mai mic
dect cele normocrome i apropiat de cea a
leucocitelor.
Fig. 2.7. Tub Pentru calcularea hematocritului, se msoar
nlimea total a coloanei de lichid i se noteaz cu
H, apoi se msoar nlimea coloanei de eritrocite i se noteaz cu h. Hematocritul se
calculeaz cu ajutorul relaiei:
h
Hematocrit 100 [%]
H
Lucrri practice efectuate n laborator.
Determinarea hematocritului prin micrometod. Se folosete echipamentul Janetzki
(sau alte echipamente similare).
Materiale necesare:
- instrumentar steril de unic folosin pentru puncie venoas sau puncie capilar;
- centrifug (model TH-11 Janetzki sau similar) cu un rotor special pentru a putea
cuprinde un mare numr de tuburi;
- tuburi de hematocrit (diametrul de 1 mm i lungime de 50 mm) din sticl subire,
negradate, heparinate n interior;
- suport pentru pstrarea tuburilor de hematocrit ntre momentul recoltrii i al
centrifugrii;
- rigl pentru citirea rapid a hematocritului.
Tehnica de lucru
Se recolteaz snge capilar prin puncionarea pulpei degetului sau snge venos. Dup
umplerea tubului, capetele se nchid la flacr sau cu plastilin i se aeaz n suportul de
pstrare pn n momentul centrifugrii. Dup terminarea recoltrilor, tuburile sunt aezate
radiar pe suportul special amenajat, fixat pe rotorul centrifugii. Se centrifugheaz timp de
30 de secunde la 3000 rot/min, dup care tuburile se scot i se citesc cu ajutorul riglei ce
nsoete aparatul (figura 2.8.).
Tubul de hematocrit se pune n ghidajul A al riglei de citire i se potrivete cu ajutorul
butonului B, astfel ca limita inferioar a coloanei de hematii s coincid cu linia de zero a
riglei, iar limita superioar a plasmei s coincid cu linia de 100.
Se citete limita superioar a coloanei de hematii, gradaia corespunztoare reprezentnd
valoarea hematocritului exprimat n procente.

100

A 90

80

70

60
100
50

80 40

60 30

40 20

20 10
0 0

Figura. 2.8. Rigl pentru citirea hematocritului

Corectarea rezultatelor. Corectarea rezultatelor este necesar deoarece:

- dup centrifugare, printre hematii rmne un volum de plasm reprezentnd 5% din
volumul eritrocitar;
- n cazul unui numr crescut de leucocite i/sau trombocite este necesar scderea
grosimii acestui strat din valoarea hematocritului;
- hematiile din sngele venos au volum mai mare dect hematiile din sngele arterial;
- utilizarea unui alt anticoagulant (n afara heparinei i amestecului Wintrobe) poate
produce ratatinarea hematiilor.
Pentru calculul hematocritului sngelui total se va corecta hematocritul venos gsit,
conform formulei:
Ht somatic = Ht venos x 0,96 x 0,91 x 1,09 n care:
- 0,96 factor de corecie pentru plasma aflat printre hematii dup centrifugare;
- 0,91 factor de corecie pentru volumul hematiei din sngele arterial fa de hematia
din sngele venos;
- 1,09 factor de corecie pentru anticoagulantele care ratatineaz hematiile (are
valoarea 1 pentru heparin i amestecul Wintrobe).
- n cazul tehnicii prezentate de noi, factorul global de corecie este 0,87.
Determinarea hematocritului se poate realiza i prin metode moderne, cu un
analizor automat. Se determin numrul de eritrocite/litru de snge prin msurarea
intensitii luminii reflectate de masa de eritrocite aflate ntr-un volum de snge predefinit
si se calculeaza folosind formula hematocritului.
Erori de determinare a hematocritului. Determinarea hematocritului poate fi afectat de:
- exces de anticoagulant;
- tipul de anticoagulant;
- sngele arterial are un Ht cu 2% mai mic dect Ht din sngele venos;
- analizoarele automate pot da valori fals crescute;
- situaii patologice care cresc (n mod fals) valoarea hematocritului: reticulocitoz,
leucocitoz mare, prezena de crioglobuline, macrotrombocite;
- situaii patologice care scad (n mod fals) valoarea hematocritului: hemoliz in vitro,
autoaglutinare, microcitoz.
Valorile normale i variaiile fiziologice ale hematocritului. Aceste valori sunt
prezentate n tabelul 2.3.

Tabelul 2.3. Valorile normale i variaiile fiziologice ale hematocritului

Teritoriul Efort Emoii,
Sex Vrst Altitudine Sarcin
circulator fizic stres
Nou
nscut:
56 %
Snge
1 lun: arterial:
Brbai: 44,6 % 45 %
46 5%
Ht Ht crescut
6 luni:
crescut prin
36,2 % Snge venos: Ht Ht sczut prin
prin scderea
47 % crescut hemodiluie
contracia pO2 n aerul
1 an:
splinei inspirat
Femei: 32 %
40 5% Snge
4 ani: splenic:
37 % 70 80 %

12 ani:
40 %

Variaii patologice ale hematocritului

- Scderea hematocritului apare n anemii i n situaiile n care crete volumul
plasmatic (hemodiluie).
- Creterea hematocritului apare n poliglobulii i n situaiile n care scade volumul
plasmatic.

Valorile extreme ale hematocritului se asociaz cu stri patologice cu risc

vital:
- Ht < 20% : se asociaz cu hipoxie sever care determin insuficien
cardiac i deces;
- Ht > 60%: se asociaz cu creterea accentuat a vscozitii sngelui,
tromboze locale i coagularea spontan a sngelui.
Importana clinic a determinrii hematocritului. Determinarea hematocritului se
recomand n:
- Stri patologice n care se modific numrul de hematii (anemii, poliglobulii).
- Stri patologice n care se modific volemia.
- Stri post hemoragie.
- Stri de oc.

Studiu individual

1. Consultnd un dicionar medical, cursul Fiziologia sngelui i materialele

recomandate n bibliografie, v rugm s definii urmtorii termeni: volemie,
hipovolemie, hipervolemie, normocitemie, oligocitemie, policitemie, factor de
corecie, coeficient, indice, raport, exprimare procentual.
2. Ce variaii fiziologice ale hematocritului cunoatei? Cum se explic?
3. Cum influeneaz numrul de hematii valoarea hematocritului?
FI DE LUCRU N LABORATOR

1. Prezentai principiul metodei de determinare a hematocritului.

................................................................................................................................................
2. Prezentai succesiunea etapelor corespunztoare modului de lucru pentru determinarea
hematocritului prin micrometod.

.
..............
3. Explicai necesitatea corectrii hematocritului citit. Care sunt indicii de corecie utilizai?

....................................
4. Care sunt valorile normale ale hematocritului?

....................................
5. Ce valoare are hematocritul plasmei?

....................................
6. Care sunt parametrii biologici de care depinde hematocritul?

....................................
7. Ce relaii exist ntre hematocrit i vscozitatea sngelui?

....................................
8. Explicai variaiile fiziologice ale hematocritului n funcie de vrst i sex.

....................................
9. Explicai variaiile hematocritului n funcie de altitudine.

....................................
10. Explicai modificrile hematocritului produse de efortul fizic.

....................................
11. n ce situaii concrete recomandai determinarea hematocritului la un pacient?

....................................
12. Cum explicai importana procedurii de luare de snge pacientului, aplicat foarte
frecvent n trecutul medicinei?

....................................