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Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos ms puros y que puedan ser usados
posteriormente (etapa final de muchas sntesis).
Medir la proporcin de los componentes de la mezcla (finalidad analtica). En este caso, las cantidades de
material empleadas suelen ser muy pequeas.
Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre un papel. Las principales
tcnicas son:
Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una columna. Segn el fluido empleado
como fase mvil se distinguen:
Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos
Dentro de la cromatografa lquida, destaca la cromatografa lquida de alta resolucin (HPLC, del ingls High
Performance Liquid Chromatography), que es la tcnica cromatogrfica ms empleada en la actualidad,
normalmente en su modalidad de fase reversa, en la que la fase estacionaria tiene carcter no polar, y la fase
mvil posee carcter polar (generalmente agua o mezclas con elevada proporcin de la misma o de otros
disolvente polares, como por ejemplo, metanol). El nombre de "reversa" viene dado porque tradicionalmente la
fase estacionaria estaba compuesta de slice o almina, de carcter polar, y por tanto la fase mvil era un
disolvente orgnico poco polar. Una serie eluotrpica es un rango de sustancias de diferentes polaridades que
actan como fase mvil y que permiten observar un mejor desplazamiento sobre una fase estacionaria.
Fase
Tipos Fase estacionaria
mvil
Cromatografa en
Lquido Papel de celulosa.
papel
Cromatografa
Lquido
lquida Relleno de siloxano de octilo o siloxano de octadecilo.
(polar)
en fase reversa
Cromatografa Lquido
Relleno de slice, almina o un soporte al que se unen qumicamente grupos
lquida (menos
polares (ciano, amino, etc).
en fase normal polar)
Cromatografa
lquida Lquido
Resinas de intercambio inico.
de intercambio (polar)
inico
Cromatografa
Relleno de pequeas partculas de slice o polmeros con red de poros
lquida Lquido
uniforme.
de exclusin
Cromatografa
lquida Lquido Partculas finamente divididas de slice o de almina.
de adsorcin
Cromatografa de
Columnas abiertas de slice fundida con recubrimientos internos de varios
fluidos Lquido
tipos de siloxanos enlazados y de enlaces cruzados.
supercrticos
A grandes rasgos la cromatografa se logra por medio de la utilizacin de dos fases: una
fase mvil, el cual es una solucin que est compuesta por distintos elementos; y una
fase estacionaria, esta se caracteriza por ser un material solido que permanecer sin
cambios antes o despus de la implementacin de la tcnica, la mezcla a estudiar
permanecer con el compuesto que posea ms afinidad bien sea el que se encuentra en
fase solida o en fase mvil, de esta forma se apreciara las caractersticas generales de
cada compuesto estudiado.
a cromatografa, puede ser clasificada segn la metodologa y los materiales utilizados
en:cromatografa plana, este tipo de tcnica se realiza por medio de la utilizacin de un
material slido como un papel, gracias a esto puede subclasificarse en capa gruesa o
capa fina, debido a que la fase estacionaria reposa sobre soporte totalmente rgido, esta
capa se pone en contacto con la fase mvil que es lquida y el mismo comienza a
ascender, de acuerdo a la ubicacin de cada elemento en el papel puede lograr
suidentificacin; por otra parte se encuentra la cromatografa en columna, en la cual se
utiliza varios cilindros largos cuyo nombre es bureta como fase estacionaria, y una
mezcla liquida como fase mvil, de igual forma pueden usarse otro estado fsico para la
fase mvil, como el gas, los distintos compuestos a separar van a ir ascendiendo de forma
progresiva por la columna; de acuerdo al estado fsico de las fases utilizadas para el
proceso la cromatografa puede clasificarse en: cromatografa de gases, ya que su fase
mvil es de carcter gaseoso, por otra parte est la cromatografa lquida, en la cual la
fase mvil est compuesta por un agente lquido, y por ltimo la cromatografa HPLC
caracterizada por poseer un alto nivel de eficacia y precisin en laseparacin de
compuestos.
Definicin:
Qu es la Cromatografa?
La cromatografa es una de las tcnicas ms usadas para separar los
distintos componentes de una mezcla para su posterior estudio.
Este forma de separar componentes de una mezcla se llama separacin
cromatogrfica.
Cromatografa Ejemplos
Un ejemplo, si sobre un mantel blanco se derrama un poco de vino tinto,
transcurrido un tiempo se observa que la mancha no es uniforme, sino
que hay una zona con predominio de tonos azules y otra en que la
tonalidad es roja. Eso es porque se ha producido una separacin
cromatografa de los pigmentos del vino.
Las tintas de los rotuladores son una mezcla compuesta por algn
disolvente (parte lquida de la mezcla) y diferentes pigmentos. Algunos
colores, como el negro, suelen ser mezcla de dos o tres pigmentos
diferentes. Para separar estos pigmentos podemos realizar una
cromatografa. Luego veremos como.
- Para mirar los niveles de contaminacin, por ejemplo, del agua o del
aire.
Fases de la Cromatografa
Las cromatografas se hacen en dos fases. Una esttica y otra mvil.
En la fase mvil se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya est sobre el
soporte de la fase esttica, por ejemplo un lquido que se mueve por el papel con la
mezcla. En la fase mvil empezar el proceso de separacin de los componentes de la
mezcla al moverse a distintas velocidades por el lquido los distintos componentes de la
mezcla sobre el papel.
Adsorcin y absorcin son dos palabras muy similares que tienden a ser confundidas por
muchas personas debido a que su pronunciacin es muy similar. Ante todo, se trata de
dos procesos fsico-qumicos en los cuales los tomos, iones y molculas de una sustancia
se trasladan o camban en su composicin y forma.
Adsorcin
La adsorcin es un proceso fsico o qumico por el cual tomos, iones o molculas son
atrapados o retenidos en la superficie de un material. Se puede decir adems que, la
adsorcin es un fenmeno superficial, ya que, la sustancia adsorbida no se introduce en
el volumen del cuerpo, sino solo se adhiere a la superficie del mismo. Por lo que, en este
proceso, existe una verdadera fuerza de atraccin que hace que una partcula se adhiera
a otra partcula de otro material.
Absorcin
La absorcin es un proceso fsico o qumico en el cual tomos, molculas o iones pasan
de una primera fase a otra, incorporndose al volumen de la segunda fase. La absorcin
puede ser un proceso qumico o fsico segn exista o no reaccin qumica:
Por ejemplo: Los gases que contienen dixido de azufre, como los gases de las calderas,
se pueden poner en contacto con la piedra caliza para formar un insoluble sulfito de
calcio.
Tal y como se aprecia en las definiciones, existen diferencias importantes entre estos dos
conceptos, a manera de resumen se puede decir que:
La absorcin es cuando una sustancia se introduce en la estructura de otra. Ejemplo: una esponja absorbe agua,
entonces si cortamos la esponja en pedazos vamos a encontrar agua en todas partes de la estructura de la esponja
La adsorcin es un fenmeno superficial, la sustancia adsorbida no se introduce en el volumen del cuerpo, sino solo
se adhiere a la superficie. No es que la sustancia se deposit en la superficie, como su fuera tierra que est sobre la
mesa, sino que existe una verdadera fuerza de atraccin que hace que esa partcula sea difcil de sacar.
Los catalizadores de los autos, funcionan sobre este mecanismo, los gases de escape se adsorben sobre la
superficie del catalizador y all se descomponen qumicamente, para despus desorberse y seguir el camino hacia la
salida del cao de escape.
Adsorcin es un proceso por el cual los atomos de sustancias gaseosas y lquidas se unen a una superficie slida,
pero en algunos casos los atmos comparten electrones con los atmos de la sustancia slida con lo cual se forma
una capa fina pero no penetra en el interior.
Ejemplo prctico para el da durillo, vamos que si te das una crema y se te queda como una capa fina en el exterior
se a producido una ADSORCION. Mientras que si la crema penetra en tu piel es una ABSORCION.
Se llama sorcin a los procesos qumicos y fsicos por los que una sustancia queda agregada o
unida a otra sustancia, cada una proveniente de fases separadas. Segn como se produzca, la
sorcin se puede clasificar en diferentes tipos, los dos ms comunes son la absorcin y
la adsorcin. El fenmeno contrario a la sorcin es la desorcin.
La diferencia clave entre ambos procesos es que en la absorcin hay transferencia de masa y
volumen entre ambas fases, mientras que la adsorcin es un fenmeno superficial y cada fase
permanece separada.
Absorcin
La absorcin es el fenmeno de sorcin en el que tomos, molculas o iones pasan de una fase fluida (lquido o gas) a
otra fase que puede ser fluida o slida. En la absorcin hay transferencia de materia de una fase A (absorbato) a una
fase B (absorbente), la sustancia absorbida difunde en el material absorbente y queda disuelta o dispersa en el.
La absorcin implica que la concentracin de absorbato aumenta en la fase absorbente, la cual aumenta de masa y
volumen. La absorcin suele darse por procesos fsicos, como la disolucin de absorbato en el absorbente, pero
tambin qumicos, cundo el absorbato sufre una reaccin qumica con algn componente del absorbente.
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Desde un punto de vista termodinmico, el proceso de absorcin es endotrmico, pues implica que el absorbente
capture y transforme energa al distribuir el absorbato en su propia masa y volumen.
Adsorcin
La adsorcin es el fenmeno de sorcin en el que una sustancia A (adsorbato) presente en una fase fluida (lquido o
gas) queda adherida a la superficie de una sustancia B en fase slida (adsorbente).No hay transferencia de masa
entre las fases, sino que el adsorbato crea una capa superficial sobre el adsorbente.
La adsorcin se puede producir tambin por fenmenos fsicos o qumicos. Por ejemplo, el adsorbato puede quedar
fijado en la superficie por atraccin elctrica o por fuerzas de van der Waals, ambos fenmenos fsicos (fisisorcin),
pero tambin puede quedar adherido por formacin de un enlace qumico, es decir, con intercambio de electrones
(quimisorcin).
La adsorcin es un fenmeno exotrmico que ocurre de forma espontnea hasta que el adsorbente queda saturado.
La capacidad de adsorcin, al ser un fenmeno superficial, depende en gran medida de la superficie expuesta del
adsorbente. La mayora de adsorbentes comerciales se distribuyen en forma microcristalina para aumentar la
superficie por volumen. Por ejemplo, el carbn activado presenta superficies de hasta 1200 m 2 por gramo de producto.
Otros adsorbentes muy utilizados son el gel de slice, la almina activada y la zeolita.
La cromatografa es un conjunto de tcnicas que permiten identificar, separar y determinar compuestos qumicos en mezclas complejas.
Cabe destacar desde un principio que en todas las tcnicas cromatogrficas hay:
En Cromatografa de gases, la fase mvil es un gas, el cual se hace pasar a travs de una fase estacionaria.
En Cromatografa Lquida, la fase mvil es un lquido que se hace pasar a travs de una fase estacionaria.
Un Cromatografa de Fluidos Supercrticos la fase mvil es un fluidos supercrtico que tambin pasa a travs de una fase estacionaria.
Cromatografa
Keulemans ha definido la cromatografa como un mtodo fsico de separacin en el cual los componentes a
separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales constituye la fase estacionaria, de gran rea
superficial, y la otra es un fluido (fase mvil) que pasa a travs o a lo largo de la fase estacionaria.
La fase estacionaria puede ser un slido o un lquido dispuesto sobre un slido que acta como soporte, de
gran rea superficial. La fase mvil es un fluido (puede ser gas, lquido o fluido supercrtico) que se usa como
portador de la mezcla.
En la cromatografa ocurren dos fenmenos muy importantes y que son prcticamente los rectores del proceso
de separacin: la adsorcin y la absorcin.
La adsorcin es la retencin de una especie qumica en los sitios activos de la superficie de un slido,
quedando delimitado el fenmeno a la superficie que separa las fases o superficie interfacial.
Esta retencin superficial puede ser fsica o qumica. La adsorcin depende de la naturaleza de la substancia
adsorbida, de la temperatura, de la naturaleza y estado de subdivisin del adsorbente, y de la concentracin.
La absorcin es la retencin de una especie qumica por parte de una masa y depende de la tendencia que
tiene sta a formar mezcla o reaccionar qumicamente con la misma.
El proceso cromatogrfico, aparentemente simple en prctica, es en realidad una compleja unin de fenmenos
tales como hidrodinmica, cintica, termodinmica, qumica de superficie y difusin.
Hasta la fecha se han propuesto muchas teoras, que incluyen complejos modelos matemticos para poder
explicar el comportamiento de los solutos en las columnas cromatogrficas. Las ms estudiadas son: La Teora
de los Platos Tericos (Martin y Synge), la Teora Cintica (Van Deemter, Zuiderweg, Klinkenberg y Sjenitzer) y
la Teora Desarrollada (Golay) para Columnas Capilares.
Segn la Teora de los Platos, una columna cromatogrfica est constituda por una serie de platos que
contiene una fase estacionaria. Supone que el volmen de fase estacionaria en cada plato es constante; que el
volmen de fase mvil es constante de plato a plato; que en cada plato las dos fases estn en equilibrio, y que
el valor del Coeficiente de Distribucin es constante e independiente de la concentracin del soluto.
La principal desventaja de la Teora de los Platos Tericos es la falta de conexin entre la eficiencia de la
columna cromatogrfica, el tamao de la partcula, la difusin, la velocidad de flujo y la temperatura. La otra
desventaja es que utiliza un modelo basado en muchas suposiciones.
N = 16(tr/w)2
La Teora Cintica considera el proceso cromatogrfico en funcin de los factores cinticos que intevienen en
l.
Siendo estos factores:
Las mltiples trayectorias (diferentes rutas) que toma un soluto durante su movimiento (migracin) a travs del
empaque de la columna, provocando variaciones en la velocidad del flujo.
La Difusin Axial o Longitudinal del soluto en la fase mvil.
La cintica de la resistencia a la transferencia de masa entre las fases mvil y estacionaria.
La Ecuacin de Van Deemter,
HETP H = A + B/u + Cu
Columna
Empacadas
Analtica
Preparativas
Capilares
W.C.O.T. (Wall Coated Open Tubular)
S.C.O.T. (Support Coated Open Tubular)
Factores que Afectan la Eficiencia de una Columna
Longitud de la Columna
Dimetro de la Columna (1/4, 1/8, 1/16 de dimetro externo)
Tamao de las partculas del relleno
Naturaleza de las fases
Cantidad de fase estacionaria
Temperatura de la columna
Velocidad del gas portador
Cantidad de muestra inyectada
Material del cual est elaborada la columna
Enrollado de la columna
Soporte
La funcin bsica del soporte es la de mantener (sostener, retener) la fase estacionaria. Idealmente debera
ser un material inerte que mantiene la fase estacionaria sobre su superficie como una pelcula delgada.
La mayora de los soportes cromatogrficos est hecha de diatomita. Qumicamente es casi todo slice, con
algunas impurezas. Tambin se conoce como Tierras Diatomceas Kiselguhr (palabra alemana). Domina el
campo de los soportes debido a su estructura, superficie y disponibilidad.
la Qumica de Superficie Caractersticas Superficiales (gobierna la participacin del soporte en los resultados
de la separacin).
Grupos silanoles activos
Iones metlicos
Adems de las caractersticas anteriores, la seleccin del soporte va a depender tambin de:
la naturaleza de la muestra
la naturaleza de la Fase Lquida
el uso que se le va a dar a la columna:
General
Especfico
Precio
Podemos resumir que un buen soporte debe reunir las siguientes caractersticas:
Al hablar de fase estacionaria lquida entramos en contacto con dos palabras trminos: Polaridad y
Selectividad.
Las fases lquidas podemos clasificarlas segn sus polaridades cromatogrficas, nos valemos de unas
constantes que determinan dicha polaridad. Existen dos sistemas:
Constante de Rohrchneider
Constante de McReynolds
Existen muchas discusiones sobre este tema para poder definir y describir el parmetro polaridad en
cromatografa, podemos decir que la polaridad de una fase estacionaria lquida se refiere a las interacciones
intermoleculares que involucra dipolos permanentes.
Selectividad es definida como las diferentes atracciones intermoleculares
Varias cualidades ha de reunir un lquido para servir como fase estacionaria:
Viscosidad
Tensin Superficial
Tensin de Vapor
Selectividad respecto a los componentes de la fase mvil
Reversibilidad del Reparto
Estabilidad Trmica
Gas Portador
El gas portador cumple bsicamente dos propsitos: Transportar los componentes de la muestra, y crear una
matriz adecuada para el detector.
Debe ser inerte para evitar interacciones (tanto con la muestra como con la fase estacionaria)
Debe ser capaz de minimizar la difusin gaseosa
Fcilmente disponible y puro
Econmico
Adecuado al detector a utilizar
Detectores
Un detector es un dispositivo para revelar la presencia de las sustancias eludas a la salida de la columna
cromatogrfica. Podemos expresar que el detector son los ojos de un cromatgrafo.
El Detector es un dispositivo capaz de convertir una propiedad fsica, no medible directamente, en una seal
elaborable y ofrecernos informacin sobre la naturaleza y magnitud de la propiedad fsica.
En cromatografa un detector funciona comparando una propiedad fsica entre el gas portador puro y el mismo
gas portador llevando cada uno de los componentes que previamente se han separado en la columna, esta
accin se traduce en una seal tipo elctrica, que posteriormente se amplificar mediante un registrador grfico
integrador permitiendo indicar el momento que salen de la columna los componentes.
Sensibilidad. Medida de la efectividad de un detector para convertir la muestra en una seal elctrica medible.
Linealidad. Rango de masa concentracin de muestra sobre el cual el detector mantiene una sensibilidad
constante sin una desviacin arbitraria. El significado prctico de la linealidad del detector es el que le indica al
analista la concentracin para la cual el detector es confiable. Hay dos lmites en la curva de linealidad:
El lmite de concentracin inferior, que es dado por el lmite de deteccin y,
El lmite Superior, definido por un porcentaje de desviacin arbitrario de la curva de linealidad, normalmente se
toma un 5% de desviscin.
Rango Dinmico Lineal.Rango sobre el cual la sensibilidad del detector es constante.
Ruido. Es cuantificado por el promedio de la amplitud pico-pico de la seal. El significado de conocer el nivel de
ruido de un detector es un factor determinante en la determinacin de la cantidad mnima detectable y el lmite
inferior del rango lineal.
Lmite de Deteccin. Est definido como la mnima cantidad de substancia que puede producir una seal que
sea el doble del nivel de ruido.
Corriente de Fondo. Seal constante de salida generada por el proceso en el que un detector est operativo sin
que alguna substancia pasa a travs de l. Esta seal es muy importante, ya que permite diagnosticar el buen o
mal funcionamiento del detector.
Detectores ms usados en Cromatografa de Gases
Detector de Conductividad Trmica. Mide la conductividad trmica del gas portador, ocasionada por la
presencia de substancias eludas.
Detector de Ionizacin a la Llama. Basado en la medida de las variaciones de la corriente de ionizacin en una
llama oxgeno-hidrgeno debido a la presencia de substancias eludas.
Detector de Captura Electrnica. Basado en la electronegatividad de las substancias eludas, y su habilidad
para formar iones negativos por captura de electrones.
Detector de Fotometra a la Llama. Basada en la medida de la intensidad de la emisin molecular de la
fluorescencia de heterotomos en las molculas orgnicas.
Detector de Ionizacin de Llama Alcalina
Detector de Espectrometra de Masas
Cromatograma y su Interpretacin
Los siguientes trminos son los utilizados en un cromatograma tpico y recomendados por la IUPAC:
Line Base
Pico Cromatogrfico
Base del Pico
rea del Pico
Altura del Pico
Ancho del Pico
Ancho del Pico a la mitad de la Altura
Medida de la Altura rea de Pico
Altura del Pico: Medida que se efectua, para cada pico de inters, desde la lnea base hasta el mximo del pico.
Los errores de malas mediciones se pueden atribuir a:
Insuficiente Resolucin
Variaciones en la lnea base
Picos extremadamente pequeos
Las desviaciones en la lnea base se pueden compensar por interpolacin de sta entre el prinpio y el final del
pico.
Mtodos Geomtricos
Triangulacin: En esta tcnica se trazan lneas tangentes a cada lado del pico. La altura se mide desde la lnea
base hasta la interseccin de las dos tangentes. El ancho se mide tomando la interseccin de las dos lneas
tangentes con la lnea base. Luego se utiliza la frmula A=1/2*Altura del Pico* Base del Pico. Las limitaciones
de esta tcnica estan en el trazado de las lneas tangentes, un pequeo error al trazar las tangentes puede
afectar la medida de la altura.
Mtodos Mecnicos
Planimtricos
Corte y Pesada: Esta tcnica requiere recortar el pico del cromatograma, luego pesarlo en una balanza
analtica. El recorte y pesada depende mucho de la habilidad del operdor. Pueden introducirse errores por
cambios en la humedad del papel, la grasa de las manos del operador, homogeneidad del papel. Generalmente
se recomienda utilizar una fotocopia del cromatograma para no destruir el original.
Integracin Automtica
Electromecnica
Electrnica
Anlisis Cualitativo
Los procedimientos para identificacin de los picos cromatogrficos podemos dividirlos en dos categoras:
Identificacin Cromatogrfica
Por Datos de Retencin
Por Serie Homlogas (Indices de Retencin de Kovacs)
Identificacin No Cromatogrfica
Anlisis Clsicos
Identificacin por:
Adicin de Estndar
Formacin de Derivados
Sustraccin de un Componente
Identificacin con Tcnicas Auxiliares: UV, IR, MS, RMN
Anlisis Cuantitativo
Normalizacin de rea
Normalizacin de rea con Factores de Respuesta
Estandarizacin Externa
Estandarizacin Interna
Referencias Bibliogrficas Recomendadas