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Universidad Mayor de San Andrs PREPARACION DE LOS COLORANTES PARA

Facultad de Ingeniera LA TINCION DE GRAM


Ingeniera Civil
DOCENTE: Dra. M E Brianon G.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA CIV- 358

PREPARACION DE LOS COLORANTES


PARA LA TINCION DE GRAM
1. OBJETIVOS:
Preparar los colorantes para poder realizar la tincin de gram como el colorante principal
(cristal violeta) el mordiente (lugol) el colorante de contraste la (fucsina)
preparar la solucin de fucsina con las cantidades correctas

2. MARCO TEORICO:

Colorantes

Los colorantes son sustancias de origen qumico o biolgico, generalmente tintes, pigmentos, reactivos u otros
compuestos, empleados en la coloracin de tejidos microorganismos para exmenes microscpicos, debiendo tener
al menos, un grupo cromforo que le proporcione la propiedad de teir.

Fuente de obtencin de los colorantes.


Atendiendo a la fuente de obtencin, los colorantes se clasifican en naturales y sintticos.

Colorantes naturales. Los colorantes naturales son bsicamente histolgicos, encontrndose entre los empleados
con mayor frecuencia, los siguientes:
ndigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigfera que contiene indican, el cual se fermenta
para producir el colorante.

Carmn: Se produce, mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metlicas a hembras del insecto cochinilla
"Coccus castis".
Orcena y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de lquenes de los gneros: Le canora tinctoria
y Rosella tinctoria.
Hematoxilina: Este colorante se extrae con ter de la madera de un rbol oriundo de Mxico y de algunos paises
suramericanos denominados Hematoxilium campechianum.

Colorantes sintticos. Se obtiene de la anilina, o es mas exactamente del alquitrn de hulla siendo todos
derivados del benceno.

Clasificacin
Los colorantes se clasifican, teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentra en el anin o el catin de su
estructura qumica. Sobre esta base se pueden dividir en tres grupos: bsicos, cidos y neutros.

Colorantes bsicos: La accin colorante est a cargo del catin, mientras que el anin no tiene esa propiedad, por
ejemplo: - cloruro de azul de metileno+.
Colorante cido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante esta a cargo del anin, mientras que el catin no
tiene propiedad, por ejemplo: eosinato- de sodio+
Colorantes neutros: Estn formados simultneamente por soluciones acuosas de colorantes cido y bsicos,
donde el precipitado resultante, soluble exclusivamente en alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene la
propiedad tintorial de sus componentes cidos y bsicos, por ejemplo: la giemsa.

Toxicidad de los colorantes. Ventajas y Desventajas.

Los colorantes son sustancias txicas, por lo tanto el proceso de la tincin generalmente resulta letal para los
microorganismos, provocando su inmovilizacin, lo cual puede significar una ventaja o desventaja para el
investigador segn sean los objetivos con la sustancia colorante. Veamos algunos Ejemplos:
Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tincin se reducen las posibilidades de
contaminacin para el manipulador.

Los colorantes pueden ser txicos para el manipulador, algunos incluso han resultado cancerigenos por lo que ha
habido la necesidad de retirarlos del mercado.
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Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies o gneros bacterianos, siendo utilizados
como constituyentes de medios de cultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables y
favorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. Por ejemplo: el verde de malaquita.
Otros se emplean como desinfectantes microbianos, mas que para teir, con fines de microscopia, por sus
propiedades bacterianas o bacteriostticas.
Algunos tipos de colorantes son empleados no para teir, sino como indicadores de pH, formando parte de la
composicin de los medios de cultivo para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en
el medio como consecuencia de su actividad metablica. Ejemplo: rojo fenol, azul de bromotimol, etc.

Mtodos de coloracin

Atendiendo a los objetivos que se persigan, los mtodos de coloracin se clasifican en: Tincin simple, tincin
compuesta y tincin especial.
Tincin simple: En la tincin simple se utiliza un solo colorante con el que se tie rpidamente el microorganismo,
utilizndose fundamentalmente para observar su morfologa y tamao. Los colorantes empleados con mayor
frecuencia para este tipo de tincin son los siguientes: azul de metileno, violeta cristal y fuscina fenicada, entre
otros.
Tincin compuesta: En este tipo de tincin, se utiliza ms de una sustancia tintrea. Los colorantes se aplican, a la
preparacin, separados o juntos, formando parte de una solucin. En consecuencia se puede determinar algunas
caractersticas propias de diversos gneros que permiten diferenciarlo de los dems, por lo que reciben tambin el
nombre de coloraciones diferenciales. Entre los mtodos mas utilizados se encuentran: La coloracin de Gram. y la
de Ziehl Neelsen.

3. MATERIALES
3.1. MORDIENTE: LUGOL

1 [g] de yodo

2 [g] de yoduro

100 [ml] de agua destilada

3.2. COLORANTE PRINCIPAL: CRISTAL VIOLETA

100 [ml] de agua destilada

2 [ml] de fenol

10 [ml] de alcohol

1 [g] de cristal violeta


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3.3. COLORANTE DE CONTRASTE: FUCCINA

1 [g] de fuccina

10 [ml] de alcohol

5 [ml] fenol

100 [ml] de agua destilada

1 Mortero con pilon

1 probeta de 10ml

4. PROCEDIMIENTO
El procedimiento es el mismo para la solucin de cristal violeta como para la solucin de fucsina en este caso
se preparo la solucin de la fucsina.
Se debe de llevar a la balanza a pesar un gramo de fucsina.

La balanza es de precisin
con cuatro dgitos donde se
realizo el peso de la fucsina
y fue de 1.0001 (g)

Se debe colocar en el mortero la masa de cristal violeta o de fucsina

Toda la fucsina pesada fue


vaciada en el mortero con
ayuda del asa
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,
Se debera incorporar el fenol y con la ayuda del piln mezclar cuidadosamente hasta obtener una
muestra homognea,

Teniendo ya la muestra homognea se tendra que mezcla que incorporar cuidadosamente, el alcohol
el agua destilada ,para luego poder vaciar al recipiente.

Vaciado de la
Recipiente solucin en el
hermticamente recipiente
cerrado para la correspondiente
solucin de
fucsina

Se realiza el procedo de colocar el alcohol y el agua destilada poco a poco a manera de lavar el
mortero, hasta que el mortero este limpio, utilizando las cantidades indicadas de agua destilada y
alcohol.

Luego de haber preparado las soluciones, guardar en recipientes hermticos y en lugares secos.

5. RESULTADOS
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La preparacin se la solucin de fuscina se realizo correctamente usando las cantidades correctas para la
solucin

6. CONCLUSIONES

Se realizo la solucin de la fucsina correctamente con este obteniendo asi el colorante secundario para la
coloracin de la tincin de Gram

7. RECOMENDACIONES

Se debe de tener cuidado con la preparacin de los colorantes ,teniendo en cuenta que son colorantes
muy fuertes y si te manchas no sldra rpido por eso se debe de realizar con guantes.
En el uso del fenol se debe de manejar con cuidado por ser una sustancia peligrosa

8. BIBLIOGRAFIA

Gua de laboratorio de microbiologa universidad mayor de san andres