MEDIOS DE CULTIVO

Mac Conkey Agar.

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos.
Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo.

Fundamento
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato
de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo
de gran parte de la flora Gram positiva.
Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH
(rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares.
Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 17.0
Pluripeptona 3.0
Lactosa 10.0
Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5
Mezcla de sales biliares 1.5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir
Cloruro de sodio 5.0 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121C
durante 15 minutos.
Agar 13.5
Rojo neutro 0.03
Cristal violeta 0.001
pH final: 7.1 0.2

Siembra
- Sembrar en superficie.
- Utilizando la tcnica de Pour Plate: sembrar 1 ml de muestra y agregar aproximadamente 15
ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 C.

Incubacin
Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica

Resultados

Microorganismos Colonias
Escherichia coli ATCC 25922 Rojas con halo turbio
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Rosadas mucosas
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras, transparentes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras, transparentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras, transparentes
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Diminutas, incoloras, opacas

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo prpura

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02-114-05 x 500g :Cdigo: B02-114-06

 MEDIOS DE CULTIVO

Manitol Salado Agar.

Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciacin de estafilococos.
Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patognicos a partir de muestras clnicas, alimentos, productos
cosmticos y otros materiales de importancia sanitaria.
Tambin, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halfilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados
(TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar.

Fundamento
Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. Los estafilococos coagulasa positiva
hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos
coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un
medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.
En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y
minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es
el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.
Las bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se
modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo.
Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.
Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del
mismo color.
Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o
prpura.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Extracto de carne 1.0
Pluripeptona 10.0
Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5
d-Manitol 10.0 minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos.
Cloruro de sodio 75.0 Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121C durante 15
minutos.
Agar 15.0
Rojo de fenol 0.025
pH final: 7.4 0.2

Siembra
Sembrar en superficie un inculo denso de la muestra.

Incubacin
De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 C, en aerobiosis.
La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubacin durante 3 das a 32 C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Caractersticas de las colonias

Staphylococcus aureus ATCC 25923 Excelente Amarilla
Staphylococcus epidermidis ATCC 14990 Bueno Roja
Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Inhibido
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Inhibido Inhibido

Caractersticas del medio

Medio preparado: rojo

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02-118-05 x 500g :Cdigo: B02-118-06

 MEDIOS DE CULTIVO

Nutritivo Agar
Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se
refiere a requerimientos nutritivos.
Su uso est descripto en muchos procedimientos para el anlisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia
sanitaria.

Fundamento
Por las caractersticas de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus
requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y
nitrgeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u
otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Pluripeptona 5.0
Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada. Mezclar y dejar
Extracto de carne 3.0 reposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2
Cloruro de sodio 8.0 minutos hasta su disolucin. Distribuir y esterilizar a 121C durante
15 minutos.
Agar 15.0
pH final: 7.3 0.2

Siembra
En superficie o por la tcnica de pour plate, segn el uso a que se destine.

Incubacin
En aerobiosis, a 35-37 C durante 24 horas.

Resultados
a-Agar nutritivo:

Microorganismos
Crecimiento

P. mirabilis ATCC 43071

Bueno-excelente

E. coli ATCC 25922 Bueno-excelente

S. aureus ATCC 25923 Bueno-excelente
B. cereus ATCC 10876 Bueno-excelente
E. faecalis ATCC 29212 Bueno-excelente
P. aeruginosa ATCC 27853 Bueno-excelente

b-Agar nutritivo suplementado con 5% de sangre de carnero:

Microorganismos Crecimiento Hemlisis

S. pyogenes ATCC 19615 Abundante Beta

S. pneumoniae ATCC 6305 Abundante Alfa

S. pneumoniae ATCC 49619 Abundante Alfa

Caractersticas del medio

Medio preparado: mbar claro a medio ligeramente opalescente.

Almacenamiento
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin

x 100g :Cdigo: B02-122-05 x 500g :Cdigo: B02-122-06 6 x 50 ml: B04-122-84

 MEDIOS DE CULTIVO

Baird Parker Medio Base.

Medio de alta especificidad diagnstica, selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos coagulasa
positiva en alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

Fundamento
En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrgeno,
el extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos.
Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro de litio, los cuales inhiben el
desarrollo de la flora acompaante. La yema de huevo permite demostrar la actividad lecitinsica.
Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color grisceo-negro, y dan reaccin
sobre la yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara mas
externa.
Se pueden encontrar cepas no lipolticas, que presentan igual caractersticas de colonias pero sin la zona opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioqumicas.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona de casena 10.0

Extracto de carne 5.0
Suspender 60 g del medio deshidratado en 940ml de agua destilada.
Extracto de levadura 1.0
Dejar en reposo 5 a 10 minutos. Calentar agitando frecuentemente y
Cloruro de litio 5.0 hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121C
(15 libras) durante 15 minutos. Enfriar a 45-50C y agregar 50 ml de
Agar 17.0 la emulsin de yema de huevo y 10ml de la solucin de telurito
Glicina 12.0 (Cdigo B03-601-61). Homogeneizar y distribuir en cajas de Petri.

Piruvato de sodio 10.0

pH final: 6.8 0.2

Siembra
Dejar secar la superficie de la placa preparada y extender 0.1 ml de la dilucin de la muestra a analizar.

Incubacin
24-48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Crecimiento Apariencia

E. coli ATCC 25922
P. mirabilis ATCC 43071
S. aureus ATCC 25923
S. epidermidis ATCC 14990
Inhibido ---
Bueno Colonias marrones sin zona clara u opaca alrededor
Colonias negras con borde incoloro, convexas, rodeadas de una zona
Bueno a excelente
opaca, con una zona clara externa.
Colonias negras, de tamao irregular. Zona opaca alrededor de la colonia
Escaso o bueno
(no hay zona clara).

Caractersticas del medio:

Medio preparado: mbar claro opalescente (sin el agregado de yema de huevo).

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-141-05 x 500g :Cdigo: B02-141-06
 MEDIOS DE CULTIVO

E.M.B. Agar. Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos
Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la
familia Enterobacteriaceae.

Fundamento
Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el
aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin entre organismos
capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y
azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia
coli y Citrobacter spp. presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con
periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida
spp. como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans.
Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras
bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de
acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este medio
se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

Frmula (en gramos por litro) Instrucciones

Peptona 10.0
Lactosa 5.0
Suspender 36 g del polvo en un litro de agua destilada. Reposar 5
Sacarosa 5.0 minutos; mezclar, calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos
Fosfato dipotsico 2.0 hasta su disolucin. Esterilizar en autoclave a no ms de 121C
durante 15 minutos. Enfriar a 45C y distribuir agitando
Agar 13.5 suavemente.
Eosina 0.4
Azul de metileno 0.065
pH final: 7.2 0.2

Siembra
En superficie, por estriado a partir de un inculo poco denso, para obtener colonias aisladas.
En profundidad, para favorecer el desarrollo de clamidosporas.

Incubacin
De 24 a 48 horas a 35-37 C, en aerobiosis.

Resultados

Microorganismos Tipo de Colonia

Escherichia coli ATCC 25922 Verdosas con brillo metlico y centro negro azulado
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 Mucosas, rosa prpura, confluentes
Proteus mirabilis ATCC 43071 Incoloras
Enterococcus faecalis ATCC 29212 Incoloras, pequeas, puntiformes
Shigella flexneri ATCC 12022 Incoloras
Salmonella typhimurium ATCC 14028 Incoloras

Caractersticas del medio:

Placas preparadas: color prpura.

La esterilizacin del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color prpura se restaura por agitacin.
La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del
mismo.

Almacenamiento:
Medio deshidratado: a 10-35 C.
Medio preparado: a 2-8 C.

Presentacin
x 100g :Cdigo: B02-101-05 x 500g :Cdigo: B02-101-06 6 x 50 ml: B04-101-84
 MEDIOS DE CULTIVO

Y. G. C. Agar (CHLORAMPHENICOL GLUCOSE AGAR)

AGAR AL EXTRACTO DE LEVADURA, DEXTROSA Y CLORANFENICOL

Deteccin y recuento de Levaduras y Mohos en productos lcteos
COMPOSICIN
Sacharomyces cerevisiae

Extracto de levadura 5.00 g

Glucosa 20.00 g
Cloranfenicol 0,10 g
Agar-agar 15.00 g
(Frmula por litro)
pH final: 6.6 0,2
PARA USO EXCLUSIVO EN LABORATORIO
MANTENGA EL BOTE BIEN CERRADO EN LUGAR SECO, FRESCO Y OSCURO.
AGITE EL BOTE ANTES DE USAR.
PREPARACIN
Disolver 401 gramos de medio en 1 litro de agua bidestilada. Calentar, agitando, hasta ebullicin, para la
total homogeneizacin. Repartir en tubos o en frascos. Autoclavar a 121 C durante 15 minutos, o mejor a
116 C durante 10 minutos. El color final del medio es crema. Evitar todo sobrecalentamiento que pueda
caramelizar la glucosa (medio mbar).

PRESENTACION: MEDIO DESHIDRATADO CODIGO: DMT155, TUBOS PREPARADOS CDIGO TPL022

CONTROL DE CALIDAD DEL MEDIO:

Realizado en nuestro laboratorio; es prudente repetirlo en su laboratorio siempre que varen las condiciones
(ms de 3 meses sin usar, tras desinfectar laboratorio, tras conservar a alta T, cuando adquiere aspectos
extraos aunque no haya llegado la fecha de caducidad terica de la etiqueta,)

DESHIDRATADO: Polvo grueso, Crema

PREPARADO: Estril, Crema

CONTROL DE CRECIMIENTO CUANTITATIVO 3-5 das a temperatura ambiente (21-28C

aproximadamente):
Aspergillus niger MKTA 16404, Correcto, Colonias negras y esporuladas en 5 das. Con respecto a
SDA estandarizado*, recuento medio 95%, pero de forma selectiva.
Candida albicans MKTA 10231, Excelente. Con respecto a SDA estandarizado*, recuento 133-140
%, pero de forma selectiva.
Saccharomyces cerevisiae MKTA 9763, Correcto. Con respecto a SDA estandarizado*, recuento
medio 95 %, pero de forma selectiva.
Staphylococcus aureus MKTA 6538P, Inhibido completamente.
E. coli MKTA 25922, Inhibido completamente.
* El que cumple con recuperacin superior al 92-125% con respecto a cepas cuantitativas trazables a la cepa
tipo.

SIEMBRA E INTERPRETACIN
Los mohos flotan: Agitar la solucin madre justo antes de tomar la alcuota. Sembrar en superficie 0.1ml de
la muestra y su serie de diluciones decimales, repartiendo con asa de Digralsky (VRR154, VLC155) (y mejor
un duplicado en masa para mejor sensibilidad de levaduras). Incubar 3-5 das a 21-25 C aproximadamente.
Medio para recuento rpido de levaduras y mohos que obtiene recuperaciones excelentes con respecto al
Sabouraud Dextrose Agar.

Elaborado: Anderson Delgado ENF, 203

Bibliografia:
Tomado de Laboratorios Britania
www.britanialab.com