BIOLOGA

DEL HEPATOCITO

Mara Luz Martnez Chantar

mlmartinez@cicbiogune.es
Group Leader Liver Disease Laboratory
CICbioGUNE
Technological Park of Bizkaia
BIOLOGA DEL HEPATOCITO
GENERALIDADES DEL HIGADO
ORGANIZACION DEL HIGADO
HISTOLOGIA HEPTICA
HISTOLOGIA HEPATICA
Se presentan dos componentes:

Estroma. Constituido por tejido conectivo que sirve de soporte.

Esta dado por la capsula de Glisson que se introduce a nivel de
hilio y se ramifica hasta alcanzar el espacio porta.

Parenquima. Constituido por clulas epiteliales especializada, los

hepatocitos, que son clulas poligonales dispuestas en cordones
de una a dos clulas tejido llamadas columnas de hepatocitos.

Entre las columnas y cordones hay capilares sinusoidales cuya

pared esta recubierta por endotelio y macrofagos (clulas de
Kuppfer)

Entre el capilar y la columna se encuentra el Espacio de Disse

(espacio perisinusoidal) que es el sitio de intercambio entre la
sangre y el hepatocito y donde se encuentran las clulas de ito o
estelares que almacenan Vitamina A
Clulas de Kupffer

-Ncleo grande y plido

-Citoplasma abundante
-Origen mdula sea
-Macrfagos anclados al Espacio de Disse
-Su funcin principal es metabolizar Hemates
viejos, digerir hemoglobina, secretar
protenas y digerir bacterias
EL HEPATOCITO
FUNCIONES del
HEPATOCITO
FUNCIONES METABOLICAS DEL HGADO
METABOLISMO DE CARBOHIDRATOS
METABOLISMO DE HIDRATOS DE CARBONO
METABOLISMO DE LIPIDOS
METABOLISMO DE PROTENAS
ALMACENAMIENTO DE VITAMINAS Y MINERALES
ACTIVACIN DE LA VITAMINA D
EXCRECCIN DE BILIRRUBINA
PROCESAMIENTO DE FARMACOS Y HORMONAS
 EMPLEO DE HEPATOCITOS
EN EXPERIMENTACION BASICA Y CLNICA

Aislamiento de Hepatocitos primarios de ratn y de rata

como modelo de experimentacin animal en investigacin
bsica

Trasplante celular heptico. Aproximacin Clnica

Testado de Drogas e Hgados Artificiales. Aproximacin

Industrial y Clnica
 TERAPIA CELULAR. APROXIMACIN CLNICA
El trasplante celular heptico (TCH) se basa en el empleo de clulas
hepticas adultas, hepatocitos humanos, viables y metablicamente
funcionales provenientes de rganos desechados para trasplante
convencional.

El TCH consta de 3 pasos: el aislamiento del hepatocito del hgado no

vlido para trasplante heptico, la preparacin de las suspensiones
celulares y, finalmente, su implante en el receptor.

La obtencin de los hepatocitos se realiza mediante digestin heptica

con colagenasa a 37C. Tras el aislamiento, las clulas pueden
congelarse o administrarse en fresco. La criopreservacin permite
realizar el procedimiento de forma programada.

Los aspectos clave del implante celular son la va de infusin, el nmero

de clulas por infundir, el nmero de infusiones y la viabilidad celular. La
implantacin es mediante catter para infusin en la vena porta o la
arteria esplnica.
 AISLAMIENTO DEL HEPATOCITO
. La perfusin enzimtica se realiza previa canulacin de la arteria heptica y la vena porta del
tejido heptico desechado. Se perfunde primero un lbulo y luego el otro

.La digestin enzimtica consta de 2 etapas: una primera etapa de perfusin no

recirculante:Krebs-Ringer exenta de calcio, pero que contiene EGTA y; una segunda etapa de
perfusin recirculante: solucin salina sin EGTA y contiene 5mmol de Cl2Ca y el 0,05% de
colagenasa para conseguir la digestin completa del parnquima heptico.

Se procede a la disgregacin mecnica del tejido heptico para obtener una suspensin de
hepatocitos.

Esta suspensin celular se lava varias veces, se centrifuga, y se desecha el sobrenadante y se

resuspende el sedimento celular.

Finalmente, se determina la viabilidad mediante el colorante azul de tripn,

 PREPARACIN DE LA SUSPENSIN CELULAR

Los hepatocitos aislados se resuspendenen el medio de infusin adecuado para

trasplantarse en fresco o en el medio de congelacin si se crioconservan para
utilizarse.

Se remiten muestras para estudio microbiolgico a fin de descartar cualquier

contaminacin en el proceso de obtencin celular, con adicin de antibiticos de
forma profilctica
 PREPARACIN DE LA SUSPENSIN CELULAR

El trasplante celular requiere la infusin de los hepatocitos humanos en

suspensin en un perodo que oscila entre minutos y horas

La composicin del medio se basa en un buffer de protenas plasmticas con

agentes anticoagulantes y glucosa. La adicin de N-acetil-cistena ha demostrado
que disminuye el estrs oxidativo y disminuye la apoptosis
 CONTROL DE LA CALIDAD CELULAR

Control de calidad funcional de los hepatocitos que se realiza mediante la

determinacin de la actividad de 5 isoenzimas del citocromo P450 (CYP1A2,
CYP2A6, CYP3A4, CYP2C9 y CYP2E1) y enzimas de conjugacin de fase ii (UGT
y SULT).

. Se determina su capacidad ureognica mediante la medicin de la

conversin de amonio en urea.
 TESTADO DE DROGAS E HGADOS ARTIFICIALES

Takanori Takebe (Nature 2013) describen por primera vez la formacin

de un tejido humano heptico a partir de cultivos de clulas madre
potenciales inducidas (iPS)
 TESTADO DE DROGAS E HGADOS ARTIFICIALES

Estan disponibles los primeros hgados artificiales construidos con ayuda

de una impresora 3D.

El rgano artificial no cuenta con el tamao de un hgado normal, sino que

nicamente mide unos pocos milmetros, pero su funcin no es servir para
trasplantes, sino ayudar a la investigacin mdica determinando el
impacto de la toxicidad de drogas y emplendose como modelo de dao
heptico.
 TESTADO DE DROGAS E HGADOS ARTIFICALES

La descelularizacin consiste en eliminar todas las clulas de un rgano

(por ejemplo un hgado), preservando los componentes de la matriz
extracelular y los vasos sanguneos para, posteriormente, repoblar la
estructura con clulas del paciente que va a recibir el trasplante.