Mecanismos de accin de M.

anisopliae

Los hongos entomopatgenos usualmente causan la muerte del hospedero por deficiencia
nutricional, invasin y/o digestin de tejidos, y/o liberacin de toxinas. Las infecciones son
iniciadas por conidios, cuerpos hifales o blastosporas y micelio, entre otros. puede ser
separado en tres fases: (1) adhesin y germinacin de la espora sobre la cutcula del insecto, (2)
penetracin de la hifa en el hemocele y (3) desarrollo del hongo, lo cual generalmente resulta en
la muerte del insecto (Ferron 1978, Bidochka et al., 1997). Ver Figura 1 y Figura 2.

Figura 1. Mecanismo de
infeccin de hongos entomopatgenos, tomado de BIOMACA (2016).

Adhesin y germinacin del conidio

Un pre requisito para que se inicie el proceso de infeccin es la adhesin del conidio o de la
unidad infectiva a la cutcula del insecto, si falta algn factor para que se realice la adhesin, la
infeccin puede abortar (Hegedus y Khachatourians 1995, Hajek y St. Leger 1994, citados por
Hernndez, 2003). Se reporta una relacin positiva entre la velocidad de germinacin de
Metarhizium anisopliae y su virulencia (Samuels et al. 1989 citado por Hernndez, 2003). Bajo
condiciones naturales no es posible una infeccin a travs del intestino del hospedero ya que,
independientemente de las condiciones adversas en el ambiente intestinal, una hora despus de
su ingestin, los conidios, empiezan a ser excretados y despus de 2.2 horas, slo el 0.8% del
inculo inicial es retenido (Dillon et al., 1986). Debido a que los conidios y la cutcula del insecto
son hidrofbicos la primera interaccin es pasiva (Charnley 1992, Bidochka et al.1997). Los
conidios secos de los Deuteromycetes poseen fascculos o surcos, en stos casos, la unin no es
especfica y es debida a la hidrofobocidad de los surcos y la cutcula del insecto, estos fascculos
tambin le sirven de proteccin para la deshidratacin y como un medio de dispersin en las
corrientes de aire. La mayora de los Deuteromycetes entomopatgenos requieren nutrientes
externos para germinar (Dillon y Charnley 1990), estos nutrientes generalmente los toman de la
superficie del hospedero, la capa cuticular ms externa del hospedero est compuesta de lpidos
(principalmente alkanos C27 y C29) y Metarhizium anisopliae puede utilizar alkanos como fuente
de carbono; aparte de lpidos, la cutcula puede contener otros compuestos, aminocidos
primarios y azcares, los cuales actan como nutrientes para la germinacin, estos nutrientes
pueden ser endgenos o exudados por el hospedero; adems, compuestos encontrados en la
dieta de acrdidos pueden ser secuestrados en la cutcula e inhibir la germinacin del conidio; lo
anterior sugiere la posibilidad de interacciones tri-trficas entre el hongo, el insecto y su dieta
(Bidochka et al. 1997, Poprawski et al. 2000 citados por Hernndez, 2003).

Penetracin de la cutcula

Durante el inicio de la penetracin se observan depresiones superficiales de la cutcula, por

presin fsica y reas de histlisis, indicativo de digestin enzimtica de la cutcula. Debido a que
las protenas son el principal constituyente de la cutcula del hospedero, proteasas extracelulares
son producidas en abundancia por hongos en cultivos lquidos que contiene cutcula de acrdidos
(Gillespie et al. 1998, Tiago et al. 2002 citado por Hernndez, 2003), se ha propuesto que estas
proteasas estn relacionadas con la hidrlisis y penetracin de la cutcula (Bidochka y
Khachatourians 1987, Bidochka et al. 1997, Tiago et al. 2002, citados por Hernndez, 2003). Las
enzimas quitinasa y N-acetilglucoamidasas son producidas despus de las proteasa; la produccin
secuencial de enzimas es interpretada con relacin a la estructura de la cutcula, la quitina est
rodeada por una matriz de protena, por lo tanto no puede ser degradada hasta que las protenas
son removidas. Una vez liberada de las fibras de quitina, las protenas son degradadas por
aminopeptidasas y dipeptidilpeptidasas a pptidos y aminocidos, los cuales pueden ser utilizados
como fuentes de nutrientes por el hongo (Bidochka et al. 1997).

La espora en germinacin est continuamente movindose a travs de diferentes ambientes

durante la penetracin de la cutcula; respondiendo a estos cambios con una serie de estructuras
morfolgicas especficas envolviendo procesos bioqumicos adaptativos y diferenciacin celular
(Gunnarsson. 1988); por ejemplo, Metarhizium anisopliae desarrolla apresorio (en la superficie de
la cutcula), clavija de infeccin (en la epicutcula), hifa y plato de penetracin (en la procutcula), y
cuerpos hifales (blastosporas) en el hemocele para dispersin; estas transiciones morfolgicas
sugieren que el conidio en germinacin es sensible a su ambiente y se ajusta para colonizar el
insecto (Hajek y St. Leger. 1994). La formacin de apresorio y la extrusin de una capa de mucus
adhesiva parece ser comn entre Deuteromycetes patgenos, pero se han reportado apresorios
distintivos entre cepas de M. anisopliae sobre cutcula de acrdidos (Bidochka et al. 1997).

Desarrollo en el hemocele

Despus de cruzar la barrera que representa el integumento, el hongo se desarrolla en el

hemocele en presencia de reacciones defensivas celulares (Charnley 1992). Una vez en el
hemocele el hongo prolifera y se dispersa por el sistema circulatorio del insecto; los cuerpos
hifales (blastosporas) llenan el hemocele. En este medio rico en nutrientes el hongo crece como
blastosporas; posteriormente produce toxinas (Roberts 1980 citado por Hernndez, 2003), como
beauvericin y destruxinas (Strasser et al. 2000 citado por Hernndez, 2003); el insecto muere con
los tejidos invadidos y degradados; eventualmente la hifa emerge del cadver produciendo
conidios capaces de iniciar el ciclo una vez ms; no obstante que el modelo ha sido comprobado
con diferentes hongos y hospederos, el mecanismo de invasin y proliferacin dentro del insecto
depende de interacciones especficas entre el insecto y el patgeno (Hegedus y Kachatourians
1995).
Figura. 2. Mecanismo de infeccin de Metarhizium anisopliae, tomado de Calle (2015).

Sntomas de infeccin por M. anisopliae

Las caractersticas generales de la infeccin ocasionada por hongos entomopatgenos consideran

ninguno o pocos sntomas en los estados iniciales del desarrollo de la enfermedad, observndose
en algunos casos, manchas necrticas desarrolladas en los sitios de penetracin o invasin del
hongo (Poinar y Thomas 1978), y conforme avanza la infeccin, el insecto se observa agitado,
disminuye actividad (Arthurs y Thomas 2001), su apetito se reduce (Moore et al. 1992) y pierde
coordinacin (Arthurs y Thomas 2001); frecuentemente cambia de color.

Eventualmente el insecto se paraliza y despus de la muerte es cubierto por micelio, por lo que la
momificacin es la caracterstica ms notable de la infeccin por hongos (Tanada y Kaya 1993). Ver
Figura 3.
http://biomacacr.com/78-microorganismos-beneficos
Figura 3. Insecto momificado cubierto por el hongo Metarhizium anisopliae, tomado de CENICANA
Colombia (2016).

Bacillus thuringiensis

Mecanismo de ccion

El modo de accin de las -endotoxinas ha sido estudiado principalmente en lepidpteros, aunque

ciertos trabajos muestran unas caractersticas muy similares en otros rdenes de insectos. El
modelo actual para el modo de accin de las toxinas de B. thuringiensis es el siguiente: La
ingestin del cristal por larvas susceptibles, es el primer paso de una serie de eventos en el interior
de los insectos y que finalmente dar lugar a la muerte, bien por inanicin, septicemia o colapso
osmtico, siendo este pas de vital importancia. (Endo y Nishitsutsuji-Uwo, 1980).

Una vez ingeridos los cristales por las larvas, estos pasan intactos a travs del primer tramo del
tubo digestivo. El pH alcalino del intestino medio del insecto, as como las caractersticas y la
composicin del cristal, hacen que ste sea solubilizado liberando pptidos sin actividad
insecticida denominado protoxinas. Algunos estudios muestran que la velocidad de
solubilizacin depende del pH, por ejemplo el insecto A. kueniella, presenta un pH de baja
alcalinidad cuyos resultados mostraron lenta disolucin del cristal. Por el contrario, B. mori, cuyo
pH intestinal es altamente alcalino (alrededor de 10), a los pocos minutos de ingestin comienza a
mostrar sntomas de infeccin (Lthy y Wolfersberger, 2000). Cada tipo de toxina tiene
condiciones ptimas de solubilizacin, as las toxinas activas contra lepidpteros se disuelven a pH
alcalino mientras que las toxinas contra colepteros lo hacen a pH neutro (Herrero-Sendra, 2002).

Simultneamente, las protoxinas, son activadas por la accin de las proteasas intestinales, sern
proteasas principalmente. En el caso de las protenas Cry1 (peso molecular de 130 kDa), el
fragmento resultante de la activacin produce una protena de alrededor 60kDa. La digestin
proteoltica mayor se realiza en la regin Ct (500 aminocidos en las toxinas Cry1), y en menor
tamao en la regin Nt (aproximadamente 30 aminocidos). Son importantes las condiciones de
activacin, ya que pueden producir ligeras variantes de la misma toxina y distintas actividades
txicas (Iriarte y Caballero, 2001).

Posteriormente, las toxinas Cry se unen a la membrana de las clulas columnares del intestino
medio a travs de receptores o sitios de unin especficos en dos pasos. El primero, de carcter
reversible, consiste en la interaccin entre la toxina y el receptor y el segundo paso, de carcter
irreversible, da lugar al complejo toxinareceptor. Esta unin es necesaria, pero no es suficiente
para determinar que una protena Cry resulte txica frente a un determinado insecto (Chang et al,
2001)

Una vez unida la protena Cry a su receptor, se desarrollan una serie de cambios conformacionales
en la protena que provocan que el dominio I interaccione y se inserte en la membrana apical. Se
desconocen los pasos desde la insercin del dominio I hasta la lisis celular, aunque bsicamente se
acepta la hiptesis de lisis coloide/osmtica. De acuerdo a este modelo, la apertura de las
membranas de las clulas columnares del intestino medio por la accin de las protenas Cry
permite una entrada de agua al interior de las clulas debido a su elevada concentracin de
solutos no difusibles. Dada la naturaleza flexible de las membranas celulares, el canal inico
formado permite el libre flujo de iones (principalmente K+) y lquidos, provocando la hinchazn de
la membrana, lisis celular y, la muerte del insecto (de Maagd et al, 1996; Chang et al, 2001; Iriarte
y Caballero, 2001; Rosas-Garca, 2002; Herrero-Sendra, 2002).
2.3.3. Mecanismo de accin Bacillus thuringiensis debe ser ingerido para llevar a cabo su efecto
patotxico, la bacteria sin el cristal no tiene la capacidad de invadir a su hospedero, al ingerirse el
complejo espora-cristal, los cristales pasan intactos por el estomodeo y se disuelven en el intestino
medio (mesentern) debido a su contenido altamente alcalino; el pH del intestino medio es un
punto crtico, ya que dependiendo de ste algunos cristales se solubilizarn liberando las
protoxinas y otros no (Koller, et al., 1992; Bradley, et al., 1995).

Tras el paso de solubilizacin del cristal se produce la activacin de la protoxina, llevada a cabo por
proteasas intestinales; sin embargo su degradacin no es completa, quedando intacta una
protena de aproximadamente 65 Kdal, sta es la llamada delta-endotoxina (Gallegos et al., 2003),
sta protena atraviesa la membrana peritrfica, la cual recubre la superficie apical de las clulas
epiteliales y protege al intestino de infecciones y de posibles daos mecnicos debido al paso del
alimento (Dow, 1986). Esta membrana est compuesta por fibras de quitina y glicoprotenas, que
actan como filtro fsico para molculas menores de 100kDa (Terra, 2001). La delta-endotoxina
adquiere una conformacin tridimensional que le confiere especificidad para acoplarse a un
componente glicoproteico de la membrana de las clulas epiteliales, comnmente llamado
receptor. La unin de las protenas a las microvellosidades intestinales tiene lugar a travs de
estos receptores especficos; es por ello que la unin a los receptores es un punto determinante
para la especificidad y la toxicidad de las protenas Cry, e incluso para el desarrollo de resistencia
(Ferre et al., 2002, Pigott et al., 2007).

Los primeros sntomas observables son alteraciones en la pigmentacin de la zona intestinal,

posteriormente la putrefaccin de todos los tejidos; cese de la ingesta, parlisis del intestino,
diarrea, parlisis total y finalmente la muerte (Sobern y Bravo, 2007). Las bacterias son tambin
invasores secundarios, a travs de lesiones causadas tanto por parasitoides y predadores u otros
entomopatgenos, como por hongos (Dulmage, 1981).

Tiempo despus pasa de la hemolinfa hacia el intestino medio, lo que da lugar a que el pH alcalino
de sta tienda a neutralizarse, es as como las esporas ingeridas, ya en el medio casi neutro, inician
la germinacin y proliferacin en el individuo paralizado o muerto, pudiendo en algunos casos
causar la muerte por septicemia. Se ha demostrado tambin que la susceptibilidad vara entre las
especies de insectos y que la respuesta de una especie particular puede ser modificada por
factores como edad, vigor y la concurrencia de la infeccin con otros microorganismos, tomando
en cuenta humedad, temperatura, fuentes de alimento y otros (Cisneros, 1983; Faust y Bulla,
1986).

Las diferencias en la actividad proteoltica intestinal entre los diferentes insectos pueden ejercer
cierta influencia en el espectro de toxicidad de una determinada protena Cry (Oppert et al., 1994;
Forcada et al., 1999).
Anatoma interna del insecto. 1: cerebro; 2: ganglio; 3: cuerpo allatum; 4: cuerpo farngeo; 5: aorta; 6:
ganglio stomacal; 7: buche; 8: ventrculo; 9: vlvula cardaca; 10: mesentern; 11: hemocele; 12:
ventrculo; 13: corazn; 14: ostiolo; 15: recto; 16: ano; 17: vagina; 18: ganglio frontal; 19: anillo
periesofgico; 20: epifaringe; 21: faringe; 22: gnatocerebro; 23: esfago; 24: ganglio ventral; 25: vlvula
pilrica; 26: tubos de Malpighi; 27: proctodeo; 28: ovariola; 29: ovario; 30: espermateca
https://agronoticias2012.blogspot.mx/2016/04/que-es-bacillus-thuringiensis.html

http://concienciarural.com.ar/informacion-general/tratamiento-del-mosquito-del-dengue-con-un-
producto-biologico-no-toxico_a1905
Buenos das

Gracias por la informacin.

Le comento el ttulo del proyecto:

Entomopatgenos como agentes de control biolgico de la Chicharrita (Ribautiana tenerrima) en

frambuesa y zarzamora.

Solo un favor ms, me podra decir si est bien el nombre cientfico de la plaga o tienen
identificado a otro, tambin me podra proporcionar que entomopatgenos han utilizado.

Tambin me podra proporcionar su segundo apellido, cargo, grado acadmico y nmero

telefnico, esto porque me lo pide la universidad ya que le harn llegar un formato para que me
evalu durante el transcurso de la estancia.

De antemano le agradezco las atenciones brindadas al presente.

ATT

Cruz Jimenez Edgardo

e-mail. edgardo1541@hotmail.com

Cel. 5565730188 / 5538521535

Ing. Parasitologa agrcola

MODO DE ACCION 1. El insecto ingiere la dosis letal. 2. La enzima del tracto digestivo desdobla los
cristales proteicos liberando las toxinas. 3. Las toxinas producen la parlisis del aparato digestivo y
partes bucales cortando el apetito del insecto. 4. La toxina destruye las paredes intestinales del
insecto. 5. Las esporas penetran la pared intestinal reproducindose y causando una septicemia y
la muerte del insecto en un perodo de 2-3 das. Es necesario volver a aplicar a los 7 das para
romper el ciclo biolgico del insecto mojando abundantemente el follaje por ambos lados de la
hojas, utilizando una buena aspersin y un surfactante comercial (se recomienda aplicar PHC
Yuccah como adeherente al 0.1%).
http://mxsintransgenicos.tumblr.com/post/53787508110/resistencia-de-insectos-a-cultivos-bt

file:///C:/Users/Edgar/Downloads/CIBIOGEM_Bioseguridad_2011_Demandas-Especificas-1.pdf

https://www.researchgate.net/publication/237096959_Insect_resistance_to_Bt_crops_Lessons_fr
om_the_first_billion_acres
La siembra de los cultivos Bt a nivel mundial y la resistencia evolucionado campo. La siembra de
los cultivos Bt a nivel mundial cada ao y nmero acumulado de especies de insectos con
resistencia evolucionado campo y la reduccin de la eficacia inform. La siembra de los cultivos Bt
aument de 1,1 millones de hectreas (ha) en 1996 a 66 millones de hectreas en 2011 (ref. 2).
resistencia de campo-evolucionado asociado con reduccin de la eficacia de los cultivos Bt ha sido
reportado en cinco grandes plagas objetivo (detectado por primera vez el ao): H. zea (2002), S.
frugiperda (2006), B. fusca (2007), P. gossypiella ( 2008) y D. v. virgifera (2009) (Tablas 1 y 2). *,
Para el 2011, el nmero de especies con poblaciones resistentes puede ser subestimado porque
los informes de resistencia fieldevolved normalmente se publican 2 o ms aos despus de que se
detecta la resistencia en primer lugar.