AISLAMIENTO DE DNA DE ORIGEN VEGETAL Y SU

CARACTERIZACIN ESPECTROFOTMETRICA E HIDROLISIS DE

RNA Y DNA E IDENTIFICACIN DE BASES PRICAS Y PIRIMDICAS
POR CROMATOGRAFA EN CAPA FINA

Purn Hernndez Eduardo y Snchez Sandoval Saed / Grupo: 3FV1 / Seccin 2

INTRODUCCION Observar grfica anexa al reporte de absorbancia vs

Los cidos nucleicos se encuentran en todos los seres
vivos y an en los virus, desempeando las funciones
de almacenamiento y transmisin de la informacin
gentica.
longitud de onda.
Con ayuda del nomograma se obtuvieron las
concentraciones de DNA y protenas, a 260 y 280 nm
respectivamente:

Los cidos nucleicos al igual que las protenas son

260 = . 1.35
biopolmeros de alto peso molecular constituidos por
nucletidos, los cuales se encuentran unidos entre s
por enlaces covalentes denominados enlaces
280 = . 0.66
fosfodister. Un nucletido est formado por una base
heterocclica nitrogenada derivada de la purina o de la
pirimidina, de un azcar y un grupo fosfato.
Dependiendo del tipo de nucletido existen 2 clases de
cidos nucleicos: el cido desoxirribonucleico (DNA) y el Identificacin de bases pricas y pirimdicas
cido ribonucleico (RNA). por cromatografa en capa fina

El DNA est formado por desoxirribonucleotidos Guanina RNA hidrolizado

cuya base nitrogenada puede ser adenina,
DNA hidrolizado
guanina, citosina o timina; el azcar 2-desoxi-D- Citosina
ribosa y el grupo fosfato.
Uracilo de RNA
El RNA est formado por ribonucleotidos cuya Adenina
base nitrogenada puede ser adenina, guanina, Timina de DNA
citosina o uracilo; el azcar D-ribosa y el grupo Uracilo
fosfato.
Timina
Las funciones del DNA consisten en almacenar la
informacin gentica completa, necesaria para
especificar la estructura de todas las protenas y en
cada una de las clases de RNA del organismo, en
programar, tanto en el tiempo como en el espacio, la
biosntesis ordenada de los componentes de las clulas
Cromatografa en capa fina de
y de los tejidos, en determinar la actividad de un
DNA, RNA y bases nitrogenadas.
organismo a lo largo de su ciclo vital y finalmente, en
definir la individualidad de un organismo dado.
Tabla 1
OBJETIVOS
MUESTRA Rf
Aislar, purificar y caracterizar DNA de espinaca. DNA hidrolizado 0.76
Separar las bases nitrogenadas del DNA y el RNA hidrolizado 0.68
RNA por cromatografa en capa fina a partir de Guanina 0.40
hidrolizados de los mismos, identificndolas por
Adenina 0.46
la propiedad que tienen de absorber luz
ultravioleta. Citosina 0.32
Timina 0.78
RESULTADOS Uracilo 0.70

Caracterizacin espectrofotomtrica del DNA

1
DISCUSIONES
Para la obtencin de DNA de origen vegetal, se
utilizaron hojas de espinaca, las cuales se colocaron en
un mortero y se procedi a triturar, de esta forma se
est rompiendo la pared celular de estas clulas
vegetales y a su vez separarlas. Al finalizar se adiciono
5 mL solucin de EDTA-Tris-NaCl y se sigui triturando,
en esta solucin el EDTA protege al DNA al no permitir
que lo ataquen las nucleasas (enzimas que atacan
cidos nucleicos) que tienen como cofactor al Mg+2, ya
que el EDTA forma un complejo con el cofactor y por lo
tanto no permite que las nucleasas realicen su funcin,
el Tris es una sal que da amortiguamiento de pH para
dar estabilidad al DNA.
Posteriormente se 0.3 mL de amilasa, la cual se
encarga de romper el almidn en molculas ms
pequeas, se mezcl y se incubo durante 10 minutos a
temperatura ambiente, de inmediato se agregaron 10
mL de una solucin saturada de NaCl, la cual favorece
la ruptura de la clula, ya que con esta se ejerce una
presin osmtica muy alta y por lo tanto las membranas
se rompen, por lo tanto se libera almidn, lpidos
protenas, etc. Tambin se adiciona 5 mL de SDS al
10%, el cual rompen las membranas tambin y se libera
el DNA, una vez adicionas estas soluciones se filtr el
homogeneizado a travs de una tela sinttica en un
embudo, colocando el filtrado en un tubo Falcon. Ms
tarde se adiciono 15 mL de la mezcla cloroformo:
alcohol isoamlico, en donde los lpidos son afines al
cloroformo y se van con l, mientras que el alcohol
isoamlico desnaturaliza a las protenas, por lo tanto
estas precipitan.
Posteriormente se procedi a centrifugar la mezcla a
4000 rpm durante 10 minutos, una vez finalizado esto,
se recuper el sobrenadante (ah se encuentra el DNA)
con una pipeta Pasteur, evitando tocar la interfase
donde se encuentran las protenas. Se verti el
sobrenadante a un frasco que contenga 30 mL de
alcohol 96 fro.
Caracterizacin espectrofotomtrica del DNA
Se recuper el DNA con una varilla de vidrio y se verti
en un tubo que contenga 3 mL aproximadamente de
agua, para posteriormente leer en el espectrofotmetro
en un intervalo de longitud de onda de 200 a 300 nm.
Las bases nitrogenadas son cclicas y aromticas,
debido a la presencia de dobles ligaduras conjugadas,
por lo tanto pueden absorber en el espectro ultravioleta.
Una vez obtenida la grfica de absorbancia vs longitud
de onda, se observa a la longitud de onda de 260 nm
una campana en la grfica, la cual corresponde al DNA,
mientras que a la longitud de onda de 280 nm se
observa otra campana pero ms pequea que la de 260
nm, esta corresponde a las protenas. Lo anterior
significa que se tiene ms DNA que protenas, lo cual se
puede comprobar cuando obtenemos las
concentraciones de estos con ayuda de nomograma, en
el cual se tienen que la concentracin de DNA es de
0.054 mg/mL, mientras que en las protenas se tiene
una concentracin de 0.05 mg/mL.
Identificacin de bases pricas y pirimdicas
por cromatografa en capa fina
Para la cromatografa se utiliz DNA y RNA hidrolizados
de los cuales se colocaron 5 aplicaciones sobre el
cromatograma, y tambin se colocaron 2 aplicaciones
de las bases nitrogenadas. Se desarroll la placa de
cromatografa, utilizando como fase mvil una mezcla
de butanol: cido actico: agua. Una vez desarrollado el
cromatograma se revelo por exposicin a la luz
ultravioleta en un cuarto oscuro. Se puede observar en
el cromatograma, dos manchas muy amontonas, las
cuales corresponden al DNA y RNA (de derecha a
izquierda) y estas al estar hidrolizados se tiene una
impureza y por lo tanto no se distingue la separacin de
manchas, estas largas manchas tienen a su lado
izquierdo las manchas de guanina, adenina y citosina
(de derecha a izquierda), lo cual significa que tanto DNA
como RNA contienen estas 3 bases nitrogenadas.
Las 3 bases nitrogenadas que contienen el DNA y el RNA.
Por ltimo, lo que s se puede distinguir en las primeras
manchas de DNA hidrolizado y de RNA hidrolizado, es
una mancha en la parte superior para ambas, al
camparlas con las manchas de timina y uracilo (de
derecha de izquierda), tenemos que la mancha de DNA
se encuentra a la misma distancia que la mancha de
2
timina, y la mancha de RNA se encuentra a la misma
distancia que la mancha de uracilo, con esto podemos
decir que el DNA y RNA tienen las mismas bases
nitrogenadas (adenina, guanina y citosina) a excepcin
de una ltima, que en el DNA corresponde a timina y en
el RNA corresponde a uracilo.

Las bases nitrogenadas timina y uracilo, que se

encuentran en DNA y RNA respectivamente.

CONCLUSIONES

El DNA se encuentra en una mayor

concentracin en las clulas vegetal que las
protenas.
Las bases nitrogenadas al ser aromticas y
tener dobles enlaces conjugadas pueden
absorber la luz ultravioleta.
El DNA y el RNA contienen adenina, guanina y
citosina, lo nico que lo diferencia es la timina
presente en DNA y el uracilo presente en RNA.

BIBLIOGRAFA

1. E. Conn Eric, Bioqumica fundamental,

Universidad de California, Editorial Limusa,
2001, Mxico D.F.
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Editorial Mdica Panamericana, 2 Edicin,
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