Ingeniera gentica

Este artculo o seccin necesita referencias que aparezcan en

una publicacin acreditada. Este aviso fue puesto el 10 de noviembre de
2011.

Manipulacin gentica.

La ingeniera gentica es la tecnologa del control y transferencia del ADN de

un organismo a otro, lo que posibilita la correccin de los defectos genticos y
la creacin de nuevas cepas (microorganismos), variedades de plantas y razas
de animales para una obtencin ms eficiente de sus productos.

Tcnicas

La ingeniera gentica incluye un conjunto de tcnicas biotecnolgicas, entre

ellas destacan:

Amplificacin del ADN

La secuenciacin del ADN.
La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR).
Plasmocitosis
Clonacin molecular
Mutacin excepcional
Transgnesis
Bloqueo gnico
La tecnologa del ADN recombinante
Artculo principal: ADN recombinante

A. tumefaciens adhirindose a una clula de zanahoria.

La tecnologa del ADN recombinante consiste en aislar y manipular un

fragmento de ADN de un organismo para "recombinarlo" con el de otro
organismo.

Generalmente se trata el ADN con una endonucleasa de restriccin que

origina en este caso un corte escalonado en las dos hebras dobles de ADN.
Los extremos escalonados de ambas hebras de ADN son complementarios,
una condicin que deben de tener si se quieren unir. Los dos ADNs as
cortados se mezclan, se calientan y s enfran suavemente. Sus extremos
cohesivos se aparearn dando lugar a un nuevo ADN recombinado, con
uniones no covalentes. Las uniones covalentes se forman aadiendo ADN
ligasa y una fuente energtica para formar los enlaces.

Otra enzima clave para unir ADNs es la transferasa terminal, que puede
adicionar muchos residuos de desoxirribonucletidos sucesivos al extremo
3de las hebras del ADN. De este modo pueden construirse colas de poli
Guanina en los extremos 3 de una de las hebras de ADN y colas de poli
Citosina en los extremos de la otra cadena. Como estas colas son
complementarias, permitirn que los dos ADNs se unan por
complementariedad. Posteriormente, se forman los enlaces covalentes por la
ADN ligasa.

El ADN recombinado se inserta en un ADN vector que acte como vehculo

para introducirlo en una clula hospedadora que lo replique, los vectores o
transportadores ms utilizados son los plsmidos y el ADN del fago lambda.

La secuenciacin del ADN

Artculo principal: Secuenciacin del ADN

Es un conjunto de tcnicas que permiten conocer el orden en que aparecen

los nucletidos en el ADN, que es la base de la informacin gentica de los
organismos . Esta tcnica tiene aplicaciones mdicas, como la bsqueda de
algn polimorfismo gentico que se asocie con una enfermedad; bsicas:
comparar la historia evolutiva de un organismo; o forenses.

La reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)

Artculo principal: Reaccin en cadena de la polimerasa

La tcnica de la PCR aprovecha la actividad enzimtica por la que se replica el

ADN en las clulas para conseguir una gran cantidad de copias de ADN a partir
de cantidades pequeas. Se utiliza una polimerasa o una mezcla de varias que
puedan resistir temperaturas elevadas, siendo la ms comn la polimerasa
taq.

La tcnica consiste en realizar varios ciclos de temperaturas elevadas para

conseguir la desnaturalizacin del ADN y temperaturas ms bajas para la
amplificacin del ADN desnaturalizado mediante la polimerasa.

Biotecnologa gentica

En la dcada de 1970 se abrieron nuevas perspectivas en el campo de

las biotecnologas gracias a la elaboracin de nuevas tcnicas que permiten
llegar directamente al material que est en el origen de todas las
caractersticas y procesos vitales, es decir, el ADN. Este conjunto de tcnicas
moleculares de manipulacin gentica recibe el nombre de ingeniera
gentica.

Su objetivo es la manipulacin in Vitro del ADN, la introduccin de este ADN

as modificado en clulas vivas y la incorporacin del mismo como parte del
material hereditario de dichas clulas. De este modo, ADN de diversas
procedencias, por ejemplo, la fraccin de ADN humano que regula la sntesis
de insulina, puede introducirse en bacterias de manera que pasa a formar
parte de su genoma y lograr as que la bacteria adquiera la capacidad de
elaborar insulina.

Terapia gentica

La terapia gentica consiste en sustituir o aadir, segn el caso, una copia

normal de la regin defectuosa del ADN para poder solucionar y restablecer la
funcin alterada, evitando el desarrollo de enfermedades de origen gentico,
como por ejemplo la facultad defensiva ante las enfermedades infecciosas.
Las enfermedades con las que se ha empezado a trabajar son, entre otras, la
deficiencia de la enzima ADA (adenosina desaminasa), conocida como la de
los nios burbuja y la DMD o distrofia muscular de Duchenne.

La posibilidad de curar las enfermedades genticas con un tratamiento

especfico justifica los esfuerzos que se estn realizando en este sentido.

Implicaciones ticas

La ingeniera gentica tiene aplicaciones en campos muy diversos; dos de los

ms importantes son la medicina y la creacin de nuevas especies o mejora
de las existentes. El progreso en estos mbitos puede aportar resultados
capaces de aliviar algunos problemas de gran importancia, pero no se debe
olvidar que la explotacin comercial de las tecnologas requeridas slo est al
alcance de unas pocas empresas multinacionales. Como era de esperar, la
tradicional dependencia econmica de los pases subdesarrollados tiene en la
ingeniera gentica un nuevo elemento de desequilibrio. En otro orden de
cosas, la ingeniera gentica puede plantear graves problemas ticos. Hay
opiniones muy diversas sobre dnde han de situarse los lmites de
manipulacin del material que est en la base de todos los procesos vitales.

Al inicio de los experimentos del ADN recombinante, varios investigadores

mostraron su preocupacin por los riesgos que se pueden realizar con dichas
tcnicas. En varios pases se crearon comits para discutir el uso y la
aplicacin de tcnicas de ingeniera gentica.

Ingeniera gentica en seres vivos

Ingeniera gentica en bacterias

Son los seres vivos ms utilizados en Ingeniera Gentica. La ms utilizada es

la Escherichia coli. Se usa prcticamente en todos los procesos de I.G.

Otra de las aplicaciones ms actuales que se han hecho, ha sido modificar

genticamente bacterias que vivan en el sistema digestivo del ser humano en
un lapso mnimo de 6 meses a 1 ao, con el objetivo de disminuir el apetito.
Esta investigacin se basa en N-acil-fosfatidiletanolamina, y N-acil-
etanolamina, encargadas de mandar seales al hipotlamo, que es el
encargado de la ingesta de alimentos.

Ingeniera gentica en levaduras y hongos

Son junto con las bacterias los sistemas ms utilizados. El Saccharomyces

cerevisiae fue el primer sistema eucariota secuenciado completamente. Otra
levadura importante es P. pastoris, utilizada para conseguir proinsulina en
cultivo discontinuo y quitinasa en cultivo continuo. En el campo de los hongos
destaca por su labor mdica el Penicillium.

Otra aplicacin ha sido la levadura P. pastoris se ha usado para producir

grandes cantidades de protenas, gracias a que es capaz de crecer en los
reactores hasta alcanzar muy altas densidades celulares. Por ejemplo, se ha
utilizado para producir quitinasa humana en cultivo continuo (0,3 g/L/da) o
proinsulina humana en un sistema discontinuo (1,5 g/L).

Ratones knockout.

Ingeniera Gentica en animales

La manipulacin gentica de los animales persigue mltiples objetivos:

aumentar el rendimiento del ganado, producir animales con enfermedades
humanas para la investigacin, elaborar frmacos, etc.

Produccin animal por ingeniera gentica:

Peces transgnicos: las principales aplicaciones en animales se han realizado

en peces, debido a que la fecundacin es externa, lo cual permite la
introduccin del gen en el cigoto antes de que se unan el ncleo del
espermatozoide y el del vulo. Se han producido carpas transgnicas que
crecen mucho ms rpido, debido a la incorporacin del gen de la hormona
del crecimiento de la trucha, y salmones transgnicos, que resisten mejor las
bajas temperaturas.

Mamferos: se han obtenido ratones transgnicos, con distintos genes

modificados. Sin embargo, todava su aplicacin para la mejora de especies
es preliminar, enfocndose el estudio desde un punto de vista ms bien
puramente cientfico

Ingeniera Gentica en plantas

Actualmente se han desarrollado plantas transgnicas de ms de cuarenta

especies. Mediante ingeniera gentica se han conseguido plantas resistentes
a enfermedades producidas por virus, bacterias o insectos. Estas plantas son
capaces de producir antibiticos, toxinas y otras sustancias que atacan a los
microorganismos. Tambin se han conseguido otro tipo de mejoras, como la
produccin de distintas sustancias en los alimentos que aumentan su calidad
nutricional, mejorar las cualidades organolpticas de un producto o que ciertas
plantas sean ms resistentes a determinados factores ambientales, como el
fro.

Las tcnicas de ingeniera gentica tambin permiten el desarrollo de plantas

que den frutos de maduracin muy lenta. As, es posible recoger tomates
maduros de la tomatera y que lleguen al consumidor conservando intactos su
sabor, olor, color y textura. La mejora de la calidad de las semillas es tambin
un objetivo.

Las aplicaciones farmacuticas son otro gran punto de inters. La

biotecnologa permite desarrollar plantas transgnicas que producen
sustancias de inters farmacolgico, como anticuerpos, ciertas protenas y
hormonas, como la hormona del crecimiento.

Aplicaciones de la Ingeniera Gentica en medicina e industria

farmacutica[editar]

Obtencin de protenas de seres vivos

Una serie de hormonas como la insulina, la hormona del crecimiento, factores

de coagulacin, etc., tienen un inters mdico y comercial muy grande. Antes,
la obtencin de estas protenas se realizaba mediante su extraccin directa a
partir de tejidos o fluidos corporales. En la actualidad, gracias a la tecnologa
del ADN recombinante, se clonan los genes de ciertas protenas humanas en
microorganismos adecuados para su fabricacin comercial. Un ejemplo tpico
es la produccin de insulina que se obtiene a partir de la levadura
Sacharomyces cerevisae, donde se copia el gen de la insulina en humanos.

Obtencin de vacunas recombinantes

El sistema tradicional de obtencin de vacunas a partir de microorganismos

patgenos inactivos, puede comportar un riesgo potencial. Muchas vacunas,
como la de la hepatitis B, se obtienen actualmente por ingeniera gentica.
Como la mayora de los factores antignicos son protenas lo que se hace es
clonar el gen de la protena correspondiente.

Vacunas atenuadas: Se eliminan los genes de virulencia de un agente

infeccioso para provocar una respuesta inmune. El organismo modificado
genticamente puede usarse como lo que es llamado una vacuna viva sin
que exista riesgo de que se revierta al tipo virulento.

Actualmente se est ensayando una vacuna de cepas estables del Vibrio

cholerae, ste se encuentra desprovisto del gen que codifica para su
enterotoxina, la cual provoca la enfermedad. Otro ensayo existente ha sido en
la Salmonella, donde se le han quitado ciertos genes que aunque no son
virulentos, convierten a la cepa en atenuada una vez desaparecidos, es decir
que disminuyen su virulencia 1, 000, 000 de veces. Su efectividad ha logrado
demostrarse en ovejas, bovinos, pollos y hasta en humanos recientemente

Vacunas de organismos recombinantes vivos: Para estas se utilizan

microorganismos no patgenos a los cuales se incorporan genes de agentes
patgenos que codifican para los antgenos que desencadenan la respuesta
inmune. El virus vacunal tiene un genoma amplio y secuenciado que permite
acomodar varios genes forneos en su interior por lo que es un vector
recombinante muy utilizado. A partir de ste mtodo se ha logrado desarrollar
la vacuna contra la rabia insertando el genoma del virus, provocando la
respuesta inmune en el organismo del hospedador. De igual manera se han
ensayado las expresiones de genes que codifican para antgenos de virus de
la hepatitis B, de la gripe y del herpes simple. Con este mtodo, se podra
lograr el desarrollo de vacunas que inmunicen simultneamente para varias
enfermedades, insertando en el virus recombinante varios genes de distintos
organismos patgenos a la vez.

Vacunas de subunidades: Para agentes infecciosos que no se pueden

mantener en cultivo, se aslan los genes que codifican para las protenas
causantes de la respuesta. Dichos genes se pueden clonar y expresar en un
husped alternativo tales como bacterias, levaduras o lneas celulares de
mamferos. Luego de insertado el gen de inters, la bacteria o levadura
recombinante inicia con la produccin de subunidades de protenas en
grandes cantidades, mismas que son recolectadas y purificadas para
utilizarlas como vacunas. La vacuna contra la hepatitis B fue la primera puesta
en el mercado y siendo producida por este mtodo.

Vacunas de ADN: Consisten en plsmidos en los que se introduce tan slo

una diminuta cantidad del material gentico del patgeno contra el que se
pretende luchar. Al inyectar el plsmido en el msculo o la piel, ste penetra
dentro de la clula y llega al ncleo, comandando entonces la produccin de
los antgenos del patgeno que desencadenarn la respuesta inmune. As, se
traslada la fbrica de la vacuna a los tejidos del husped. En la actualidad se
realizan ensayos de diversas vacunas de este tipo, algunos ejemplos son la
vacuna para la hepatitis B, para la malaria, para la gripe, para el herpes simple
y para el SIDA.

Diagnstico de enfermedades de origen gentico

Artculo principal: Diagnstico gentico preimplantacional

Conociendo la secuencia de nucletidos de un gen responsable de una cierta

anomala, se puede diagnosticar si este gen anmalo est presente en un
determinado individuo.

Hasta ahora ha sido posible la localizacin de los genes responsables de la

fibrosis qustica, la distrofia muscular, la hemofilia o el Alzheimer. Para
identificar estos genes se usan sondas de ADN.

La clonacin de genes puede rendir dos tipos de productos: el DNA clonado,

til como reactivo especfico en ensayos de diagnstico por hibridacin o bien
los productos proteicos de los genes clonados (antgenos purificados para
inmunodiagnstico en produccin de vacunas).
Hay descritas cerca de 500 enfermedades hereditarias producidas por
mutaciones recesivas. Las tcnicas de ingeniera gentica han servido para
diagnosticar algunas de ellas, por ejemplo, la anemia falciforme.

Obtencin de anticuerpos monoclonales

Este proceso abre las puertas para luchar contra enfermedades como el
cncer y diagnosticarlo incluso antes de que aparezcan los primeros sntomas.

El interfern fue el primer medicamento producido por ingeniera gentica. Es

utilizado como medicamento complementario a la quimioterapia para la cura
del cncer. Su produccin era cara hasta 1980, pero genes de interfern
fueron introducidos en bacterias usando tecnologa de recombinacin del ADN
permitiendo as el cultivo masivo y purificacin de las emisiones bacterianas.