UNIVERSIDAD AUTNOMA DE SINALOA

ESCUELA SUPERIOR DE AGRICULTURA DEL VALLE DEL FUERTE

DEPARTAMENTO DE PROTECCIN VEGETAL RAMA DE FITOPATOLOGA

NOTAS DEL CURSO DE:

VIRUS (VIRUS FITOPATGENOS)

PROTECCIN VEGETAL 7mo. SEMESTRE

ING. MENA ADRIANO JORGE DANIEL

Profesor

JUAN JOS ROS, SINALOA. AGOSTO DE 2010

 UNIVERSIDAD AUTNOMA DE SINALOA
ESCUELA SUPERIOR DE AGRICULTURA DEL VALLE DEL FUERTE

NOMBRE DE LA CARRERA Licenciatura en Ingeniera Agronmica

NOMBRE DE LA ASIGNATURA : Virus (Virus Fitopatgenos)
SEMESTRE: Sptimo
FASE DE FORMACIN: Acentuacin
LNEA CURRICULAR: Produccin Agrcola
AREA: Proteccin Vegetal
HORAS HORAS
TERICAS: 3 PRCTICAS: 2 CRDITOS: 8

FUNDAMENTACIN CURRICULAR

La asignatura de Virus se encuentra incluida en el VII semestre de la Licenciatura en

Ingeniera Agronmica en el rea de Proteccin Vegetal y se encuentra vinculada de
manera directa a las asignaturas de Fitopatologa General, Fitopatologa Agrcola,
Hongos, Bacterias, Nematodos, Manejo de Enfermedades, Fungicidas y
Enfermedades de hortalizas. Es de gran importancia ya que se considera que el 15
% de las enfermedades ocurridas en campo son causadas por estos patgenos y
adems por el auge y el impacto que estas enfermedades tienen actualmente en el
mbito agrcola; es por eso que un alumno egresado de esta Fase de Acentuacin
necesita conocer la importancia de estos agentes como causantes de
enfermedades.

PROPSITO(S) GENERAL(ES) DEL CURSO

Que los alumnos conozcan las caractersticas ms importantes de estos patgenos

de plantas, sus formas de ataque y el dao que causan, las formas de transmisin
en campo, las tcnicas de identificacin usadas y el impacto como agentes
causantes de enfermedades, para que sean capaces de manejar de manera correcta
las tcnicas de diagnstico ms empleadas en su identificacin y aprenda el manejo
correcto de los principios de control que se usan para estos agentes fitopatolgicos.

ACTIVIDADES DE ENSEANZA

1) Exposicin oral y escrita por parte del profesor

2) Exposicin oral y visual por parte del profesor y los alumnos
3) Conferencias sobre enfermedades virales
4) Seminarios sobre temas relacionados con virus de plantas
6) Prcticas de laboratorio y campo

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ACTIVIDADES DE APRENDIZAJE

1) Lectura de textos
2) Trabajo en equipo
3) Consultas bibliogrficas y sitios de Internet
4) Debate por equipos de los temas impartidos
5) Reportes de trabajos de prcticas de campo y laboratorio

CRITERIOS DE EVALUACIN DE LOS APRENDIZAJES ESCOLARES

Asistencia (80 % de asistencia obligatoria para aprobar curso y tener

derecho a examen ordinarios y extraordinarios)
Participacin en clases0.5
Cumplimiento de tareas escolares.0.5
Elaboracin de trabajos escritos ....0.5
Asistencia y reporte de las prcticas de laboratorio y campo1.5
Exmenes terico-prcticos sobre las diversas unidades del programa.6.0
Presentacin oral y visual sobre un tema especfico..1.0

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CONTENIDO TEMTICO

UNIDAD I. INTRODUCCIN E IMPORTANCIA EN EL ESTUDIO DE LOS VIRUS

DE PLANTAS

1.1. Concepto de virus

1.2. Importancia de los virus
1.3. Sntomas causados por virus en plantas
1.3.1. Importancia de la sintomatologa causada por virus
1.3.2. Latencia, Enmascaramiento, Planta portadora, Periodo de incubacin
1.3.3. Clasificacin de sntomas por su localizacin
1.3.3.1. Sntomas externos
1.3.3.1.1. Sntomas locales
1.3.3.1.2. Sntomas sistmicos
1.3.3.2. Sntomas internos
1.3.3.2.1. Histolgicos
1.3.3.2.2. Citolgicos
1.3.4. Factores que intervienen en la variacin de sntomas
1.4. Factores causantes de sntomas semejantes a los inducidos por virus

UNIDAD II. FORMA, COMPOSICIN QUMICA Y TAXONOMA DE LOS VIRUS

QUE AFECTAN PLANTAS

2.1. Principales formas de virus de plantas

2.2. Tamao de los virus
2.3. Estructura qumica de los virus de plantas
2.4. Composicin y funciones del cido nucleico viral
2.5. Composicin y funciones de la protena viral
2.6. Replicacin de virus
2.7. Translocacin de los virus de plantas
2.8. Nomenclatura

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2.9. Posicin taxonmica de los virus que afectan plantas
2.9.1. Grupos de importancia de virus fitopatgenos

UNIDAD III. FORMAS DE TRANSMISIN E IDENTIFICACIN DE LOS VIRUS

DE PLANTAS

3.1. Concepto de transmisin de virus

3.2. Tipos de transmisin de virus
3.2.1. Transmisin por propagacin vegetativa
3.2.2. Transmisin mecnica
3.2.2.1. Tcnica de Frotis
3.2.2.1.1. Factores que intervienen en una transmisin por frotis
3.2.2.2. Tcnica de injerto
3.2.2.3. Tcnica de inyeccin
3.2.3. Transmisin por semilla
3.2.3.1. Importancia de la transmisin por semilla de virus en plantas
3.2.3.2. Mecanismos de entrada de los virus en la semilla
3.2.3.3. Tcnicas de deteccin de los virus en semillas
3.2.4. Transmisin por polen
3.2.5. Transmisin de virus a travs de Biotransmisores
3.2.5.1. Transmisin por insectos
3.2.5.1.1. Clasificacin de virus de acuerdo a la transmisin por insectos
3.2.5.1.1.1. Virus no persistentes
3.2.5.1.1.2. Virus persistentes
3.2.5.1.1.2.1. Persistentes circulativos
3.2.5.1.1.2.2. Persistentes propagativos
3.2.5.1.1.2.3. Persistentes transovricos
3.2.5.2. Transmisin de virus por hongos
3.2.5.3. Transmisin de virus por nematodos
3.2.5.4. Transmisin de virus por caros
3.2.5.5. Transmisin de virus por plantas parsitas

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3.3.5.6. Transmisin de virus por vertebrados
3.3. Identificacin de virus
3.3.1. Pruebas de eliminacin de virus
3.3.2. Rango de hospedantes
3.3.3. Propiedades de infectividad de los virus
3.3.3.1. Punto de inactivacin trmica (PIT)
3.3.3.2. Punto final de dilucin (PFD)
3.3.3.4. Longevidad in Vitro
3.3.4. Tipo de partcula viral
3.3.5. Formas de transmisin
3.3.6. Pruebas serolgicas
3.3.6.1. Doble difusin en agar
3.3.6.2. Prueba de Elisa

UNIDAD IV. DESCRIPCIN DE LAS PRINCIPALES ENFERMEDADES

CAUSADAS POR VIRUS EN PLANTAS CULTIVADAS

4.1. Descripcin de los principales virus que afectan hortalizas

4.1.1. Virus que afectan tomate
4.1.2. Virus que afectan chile
4.1.3. Virus de cucurbitceas
4.2. Descripcin de los principales virus que afectan cultivos bsicos
4.2.1. Virus que afectan frijol
4.2.2. Virus que atacan maz y trigo
4.3. Descripcin de los virus que afectan frutales
4.3.1. Virus de ctricos
4.3.2. Virus que afectan papaya

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UNIDAD I. INTRODUCCIN E IMPORTANCIA EN EL ESTUDIO DE LOS VIRUS
DE PLANTAS

1.1. CONCEPTO DE VIRUS

La palabra "virus" fue descrita por primera vez en el diccionario Phillips en 1720
como "veneno o toxina". Durante mucho tiempo este trmino fue utilizado en el
lenguaje mdico, para designar enfermedades infecciosas cuyas causas eran
desconocidas. Despus de las investigaciones llevadas a cabo por Pasteur en 1864
sobre la especificidad microbiana se pens por analoga, que cada enfermedad
deba de tener su agente causante ya fuera un hongo, una bacteria u otro
microorganismo. Para explicar este hecho en algunas enfermedades de las plantas,
producidas por agentes no visibles al microscopio comn, se cre el concepto de
"ULTRAMICROBIOS", para referirse a organismos ms pequeos a los que en
aquella poca se conocan y tenan la capacidad de causar infeccin.

Los virus son agentes infecciosos causantes de enfermedades de diversos

organismos vivos. La palabra virus es de origen latino y significa pus o veneno.
Los virus son partculas compuestas por cido nucleico (AN) y protena, de
tamao submicroscpico, son parsitos obligados que solo se multiplican en el
interior de las clulas del hospedante. Los virus no son clulas ni estn
constituidos por ellas, pero se propagan al obligar a la clula vegetal a que los
multiplique utilizando su propia energa y maquinaria biosinttica. A consecuencia
de lo anterior el metabolismo de las clulas vegetales se altera a tal grado que las
plantas se enferman. Los virus no matan a las plantas directamente mediante
toxinas ni enzimas. En cambio desvan el metabolismo y se generan substancias
extraas y se alteran diversas funciones vitales que inducen el desarrollo de
sntomas, que pueden variar desde simples cambios de color hasta necrosis
severa o muerte sbita de la planta. En otros el efecto es casi imperceptible como
en el caso de los hospedantes asintomticos.

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1.2. IMPORTANCIA DE LOS VIRUS
Los virus son importantes porque:

1. Causan enfermedades en el hombre (sida, cncer, poliomielitis, rabia, gripe

y hepatitis viral, etc.), animales domsticos y silvestres.

2. Afectan a otros microorganismos (bacterifagos, micovirus) por lo que

contribuyen al equilibrio microbiano de la naturaleza.

3. Causan enfermedades de plantas. Se han caracterizado ms de 1000 virus,

de los cuales ms de 500 son patgenos de plantas. Al alterar el
funcionamiento normal de la planta llegan a provocar prdidas hasta de
100%. Los daos no son nicamente en la cantidad sino en la calidad de la
produccin; por ejemplo frutos deformes y manchados pierden valor
comercial.

Prcticamente cualquier planta puede ser atacada por virus y es comn encontrar
a mas de dos virus afectando al mismo tiempo a la misma planta. Algunos como el
Virus del Mosaico del Tabaco tiene un rango de hospedantes muy amplio; puede
atacar ms de 300 especies de plantas herbceas y leosas distribuidas en 50
gneros.

A consecuencia de las enfermedades virales (o virosis) se derivan tambin una

serie de gastos adicionales para lograr el control: aplicaciones de insecticidas
contra vectores, cubiertas de agribn, trampas amarillas, etc.

1.3. SNTOMAS CAUSADOS POR VIRUS EN PLANTAS

Un amplio rango de anormalidades son causadas por virus y casi nunca las
caractersticas de la planta puede ser cambiada por la infeccin del virus, ya que la
mayora de los efectos notables son cambios de color o desarrollos anormales. La
mayora de los virus que atacan plantas infectan a sus hospedantes sistmicamente,
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esto es, se dispersan desde el sitio de la infeccin a otras partes de las plantas. Sin
embargo, no todos los tejidos o clulas son invadidos y los tejidos meristemticos de
races y retoos, por ejemplo, parecen escapar a las infecciones.

Las relaciones sobre la multiplicacin de los virus y sus consecuentes sntomas

(efectos visibles del patgeno sobre su hospedante), an es poco entendido, y es
conveniente sealar que depende en gran medida de algunos factores como: medio
ambiente, relacin virus-hospedante, condiciones fisiolgicas de las plantas, edad de
los tejidos del hospedante y el tiempo de infeccin de estos.

Los sntomas causados por virus en plantas eran de las nicas herramientas con
que se contaba en aos anteriores para la identificacin de estos patgenos y
actualmente juegan un papel de gran importancia debido a:

a) Con los sntomas se pueden reconocer plantas virosas en el campo y eliminarlas.

b) Se puede determinar en algunos casos la naturaleza virosa de la enfermedad.
c) Sirven en Virologa para expresar la nomenclatura de estos patgenos.
d) Se puede valorar por medio de los sntomas el grado fitopatolgico de una
enfermedad en una planta y un cultivo.

1.3.1. IMPORTANCIA DE LA SINTOMATOLOGA CAUSADA POR VIRUS

Sin negar la importancia de los sntomas para identificar enfermedades virales, el
diagnstico de estas en base a los sntomas, es con frecuencia de baja precisin.
Los sntomas son tiles para el diagnstico preliminar y solo en el caso de
enfermedades muy conocidas se puede afirmar con total certeza que el agente
causal de tal o cual enfermedad es determinado virus. Lo anterior se debe a que:

- Sntomas similares pueden ser producidos por diferentes virus.

- El mismo virus puede producir un amplio rango de sntomas, dependiendo
de la variante del propio virus, del ambiente y genotipo del hospedante.
- Otros patgenos o factores abiticos tambin producen sntomas similares.

ix
 - La falta de sntomas no necesariamente significa que la planta no est
infectada. Puede suceder simplemente que la infeccin est latente.

1.3.2. LATENCIA, ENMASCARAMIENTO, PLANTA PORTADORA, PERIODO

DE INCUBACIN
Las infecciones causadas por algunos virus en plantas no se manifiestan como
sntomas por lo que a estos virus se les conoce como VIRUS LATENTES y la planta
que tiene al virus se le conoce con el nombre de PORTADORA; por ejemplo, Datura
stramonium (Toloache) con el Virus del Enchinamiento del Tomate. Otras plantas
manifiestan los sntomas del dao por virus pero estos desaparecen temporalmente
conocindose a este fenmeno como ENMASCARAMIENTO. Se define como
PERODO DE INCUBACIN, al tiempo que ocurre desde la inoculacin de un virus
hasta la aparicin de los primeros sntomas y este es muy variable; en frutales es
largo (meses) y en herbceas las lesiones locales se presentan de 2-5 das y la
infeccin sistmica de 2-3 semanas.

1.3.3. CLASIFICACIN DE SNTOMAS POR SU LOCALIZACIN

Los sntomas causados por virus fitopatgenos se pueden clasificar en: EXTERNOS
e INTERNOS.

1.3.3.1. SNTOMAS EXTERNOS

Son aquellos efectos visibles del dao causado por un patgeno sobre su
hospedante. Este tipo de sntomas son los ms importantes en la descripcin de los
virus en plantas y se clasifican en PRIMARIOS y SECUNDARIOS (por su secuencia
de infeccin) y en LOCALES y SISTEMICOS (de acuerdo al proceso infectivo).

1) Primarios.- Son las manifestaciones iniciales que presenta una planta y resultan
frecuentemente mediante inoculaciones mecnicas artificiales o en infecciones
naturales (transmisin de virus por medio de la semilla).

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2) Secundarios.- Ocurren posteriormente, y, se presentan en partes no inoculadas
de las plantas. Por ejemplo, el Virus Jaspeado del Tabaco en chile, primeramente
presenta marchitez (sntoma primario), las plantas se defolian y despus al brotar las
yemas, stas presentan sntomas de mosaico (sntoma secundario).

1.3.3.1.1. SNTOMAS LOCALES

Llamados tambin reacciones de hipersensibilidad, son aquellos que se manifiestan
en el lugar de la inoculacin. Carecen de importancia a nivel de campo (no se
presentan) pero son muy importantes a nivel experimental; las plantas que se usan
para obtener estos sntomas se les conoce con el nombre de PLANTAS
INDICADORAS y algunos ejemplos de estas son:

Nicotiana glutinosa (Tabaco) Virus del Mosaico del Tabaco

Chenopodium amaranticolor (Chual) Virus del Mosaico de la Sanda
Gomphrena globosa (Amaranto globoso) Virus Pinto del Tomate

1.3.3.1.2. SNTOMAS SISTMICOS

Son aquellos que se manifiestan lejos del punto de inoculacin; es decir, por toda la
planta y dentro de estos tenemos:

a) Mosaicos.- Son alternaciones de reas blancas, amarillas o verde-claro

entremezcladas con el verde normal de la hoja o fruto. Ejemplo: Virus del Mosaico
del Tabaco.

b) Moteados.- Son reas clorticas aisladas, muy pequeas y difusas. Ejemplo:

Virus Moteado Clortico del Clavel.

c) Clorosis.- Consiste en un amarillamiento de la planta, debido al decremento o

retraso de la clorofila. Puede existir en los mrgenes y se llamar clorosis marginal;
en el pice y entonces ser clorosis apical o entre las nervaduras y ser clorosis
intervenal o aclareamiento de nervaduras. Ejemplo: Virus del Enanismo Amarillo de
la Cebada, Virus Rayado Fino del Maz, etc.

xi
d) Virescencia (Autolisis).- Cambios de color que ocurren en las flores las cuales
adquieren una pigmentacin verde.

e) Variegacin.- Decoloracin irregularmente distribuida sobre las flores, las cuales

presentan reas clorticas o blancas. Ejemplo: Virus Variegado del tulipn.

f) Necrosis.- Implica muerte de clulas y tejidos, puede ocurrir en races, tallos,

hojas, flores y frutos. Ejemplo: Virus de la Marchitez Manchada del Tomate.

g) Manchas anulares.- Manchas que se presentan en forma de anillos. Ejemplo:

Virus de la Mancha Anular del Tabaco.

h) Tumores o agallas.- Sobrecrecimiento anormal de tejido debido al

agrandamiento de las clulas o a la multiplicacin excesiva de estas. Ejemplo: Virus
del Tumor y Heridas del Trbol.

i) Epinastia.- Prdida del ngulo normal de la hoja, en la cual el pice se dobla hacia
el envs. Ejemplo: Virus del Mosaico Comn del Frijol.

j) Escoba de bruja (Blastomania).- Proliferacin excesiva de brotes o yemas que

dan la apariencia de una escoba.

k) Filodia (Mal de agujetas).- Reduccin de la lmina foliar dando la apariencia de

nervadura principal. Ejemplo: Virus del la Mancha Anular de la Papaya.

l) Enanismo o achaparramiento.- Desarrollo reducido de la planta; es decir, sta no

alcanza la altura deseada. Ejemplo: Virus del Enanismo del Maz.

m) Enchinamiento.- Acortadura de la nervadura central, enrollndose las hojas

hacia el centro. Ejemplo. Virus del Enchinamiento del Tomate.

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Otros tipos de sntomas sistmicos que pueden provocar los virus en las plantas son:
islas verdes (zonas abolsadas de color verde intenso), deformacin de frutos,
leprosis o sarnas, brote hinchado, acortamiento de entrenudos, cambios de hbitos,
gomosis, raquitismo, rama ahulada, etc.

1.3.3.2. SNTOMAS INTERNOS

Son aquellos que se manifiestan en el interior de las plantas y pueden ser
HISTOLOGICOS Y CITOLOGICOS.

1.3.3.2.1. HISTOLGICOS
Este tipo de sntomas se manifiestan en los tejidos de las plantas. Ejemplo: el Virus
Tristeza de los Ctricos cuando ataca ctricos existe acumulacin de almidn entre el
patrn e injerto y para detectar la enfermedad se tiene que usar una solucin de
lugol o Ioduro de potasio. En el Virus del Enrollamiento de la Hoja de Papa hay
acumulacin de celulosa en el tejido vascular y para detectarlo se tie con resorcinol
o azul de algodn en los tubrculos.

1.3.3.2.2. CITOLGICOS
Son los sntomas que se manifiestan en las clulas de las plantas y se les conoce
con el nombre de cuerpos X o inclusiones virales; estas inclusiones fueron descritas
por Ivanowski en 1903 en clulas de plantas de tabaco infectadas con el Virus del
Mosaico del Tabaco.

Estos cuerpos o cristales se forman como producto del metabolismo anormal que
realizan las clulas infectadas y se forman por partculas de virus, substancias
producidas por estos patgenos (protenas), por organelos celulares anormales o
bien por una combinacin de todo lo anterior; su distribucin es abundante en la
epidermis de las hojas, pero tambin en tallos, races, flores y frutos. En las clulas
se localizan en el citoplasma, ncleo y nuclolo. Aunque hasta la fecha su funcin es
poco conocida se cree que forman parte de la replicacin; estas inclusiones son de

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gran importancia ya que nos ayudan a diagnosticar el origen de la enfermedad y en
la identificacin del virus.

Las inclusiones virales las podemos clasificar en AMORFAS, CRISTALINAS Y

PARACRISTALINAS. Dentro de la amorfas podemos encontrar: granulosas,
fibrosas, vacuoladas, bandeadas, laminadas y densas; dentro de las cristalinas
tenemos: hexagonales, cuadradas, rectangulares, piramidales y romboides.

1) Granulosas.- Son de formas redondas u ovaladas con la apariencia de pequeos

grnulos y de tamao variable. Ejemplo. Virus Jaspeado del Tabaco en chile.

2) Fibrosas.- Formadas por estructuras alargadas en forma de fibra. Ejemplo: Virus

del Mosaico de la Sanda.

3) Vacuoladas.- De forma redonda, con lmites bien definidos por una membrana y
con reas claras por dentro. Ejemplo: Virus del Mosaico de la Calabaza.

4) Laminadas.- Inclusiones con forma de lmina.

5) Densas.- Cuerpos densos redondos, de tamao variable. Ejemplo: Virus del

Mosaico del Pepino.

6) Paracristalinas.- Inclusiones cristalinas en forma de aguja. Ejemplo: Virus del

Mosaico del Tabaco.

1.3.4. FACTORES QUE INTERVIENEN EN LA VARIACIN DE SNTOMAS

La manifestacin de los sntomas en las plantas se ve influenciada por algunos
factores dentro de los que destacan:

a) Ambiente.- Dentro de las condiciones ambientales el factor ms importante es la

temperatura ya que influye directamente en la variacin de la sintomatologa de los

xiv
virus, por ejemplo, el Virus del Mosaico del Tabaco cuando es inoculado a plantas de
Nicotina glutinosa y la temperatura es de 18-20 C da lesiones locales muy
pequeas; si la temperatura alcanza los 25 C las lesiones son ms grandes y si se
inocula y se somete a temperaturas de 35 C se presenta un sntoma sistmico.
Otros factores ambientales que influyen son la luz (cuando el VMT se inocula y se
mantiene al hospedante en obscuridad continua no manifiesta sntomas), el mismo
virus cuando es inoculado a pepino y existe excesos de nitrgeno el virus se torna
muy agresivo.

b) Virus.- En este caso depende del tipo de virus, la virulencia y la capacidad de dar
origen a nuevas razas fisiolgicas.

c) Edad de la planta.- En forma general se puede mencionar que las plantas entre
ms jvenes son mayormente susceptibles al ataque de los virus.

d) Hospedante.- Este factor est muy relacionado con la susceptibilidad y/o

resistencia del hospedante al patgeno; es decir entre ms susceptible mayor grado
de virulencia.

1.4. FACTORES CAUSANTES DE SNTOMAS SEMEJANTES A LOS

INDUCIDOS POR VIRUS
Anormalidades genticas
Deficiencias nutrimentales
Dao por herbicidas
Dao por insectos o caros
Dao por pesticidas
Otros fitopatgenos

Los sntomas causados por estos ltimos agentes no son de naturaleza infecciosa;
es decir, que no se transmiten mediante injerto. Adems, al paso de los das la
recuperacin puede ser comn.
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Agentes infecciosos tambin pueden causar sntomas similares a los ya descritos:
por ejemplo el tizn tardo llega a ser confundido con el Virus de la Marchites
Manchada, por productores y tcnicos inexpertos.

El uso de los sntomas para la diagnosis de campo es una gua valiosa pero
imprecisa, sobre todo para los tcnicos no familiarizados con las enfermedades
comunes en un cultivo en una regin determinada. An el especialista debe ser
humilde antes de poder afirmar que un virus particular est involucrado en
determinada enfermedad.

Lo anterior no significa que cada vez que detectemos sntomas presuntamente

virales, se tendr que acudir a un experto. Dependiendo de la experiencia del
investigador y de los antecedentes del problema, los diagnsticos de campo
pueden ser relativamente precisos. El patrn de dispersin de la enfermedad
puede dar indicios del virus o grupo de virus que se trate. Por ejemplo en el caso
de Geminivirus en tomate, los sntomas ms notables son de enchinamiento y
reduccin en el crecimiento; su presencia en la regin est relacionada con las
poblaciones de Mosca Blanca y generalmente al inicio de las epidemias se aprecia
un gradiente en dnde las plantas de las orillas son las primeras en ser infectadas,
especialmente si hay maleza cercana en los drenes. En base a lo anterior en
sentido estricto, solo se puede afirmar que tenemos problemas de virosis, cuyos
sntomas coinciden con los descritos para Geminivirus, pero en ningn momento
podemos decir con precisin de que Geminivirus se trata; tampoco podemos
negar que posiblemente haya plantas infectadas por otros virus.

El apoyo del laboratorio puede ser indispensable para determinar con certeza a los
patgenos involucrados, sobre todo cuando se presentan sntomas que antes no
se haban observado en el cultivo en la regin.

xvi
UNIDAD II. FORMA, COMPOSICIN QUMICA Y TAXONOMA DE LOS VIRUS
QUE AFECTAN PLANTAS

2.1. PRINCIPALES FORMAS DE VIRUS DE PLANTAS

xvii
Con los descubrimientos de Takahashy y Rawlins (1932), cuando por el fenmeno
de refringencia mencionaron que las partculas del Virus del Mosaico del Tabaco
(VMT) medan alrededor de 10:1 (largo y ancho) y con la primera microfotografa
tomada al microscopio electrnico por Kausche, Pfankuch y Ruska (1939) en donde
mostraron que este virus presentaba forma de varilla rgida; se iniciaron las
investigaciones para determinar la forma, tamao y composicin qumica de los virus
de plantas. Actualmente se tienen determinadas varias formas de virus fitopatgenos
dentro de las cuales tenemos:

a) Varillas rgidas, como el Virus del Mosaico del Tabaco y el Virus Cascabeleo
(Rattle) del Tabaco.

b) Varilla (filiforme) flexible, como el Virus X de la Papa, Virus de la Tristeza de los

Ctricos, Virus de la Mancha Anular de la Papaya, Virus del Mosaico de la Sanda y
Virus Jaspeado del Tabaco.

c) Baciliforme, como el Virus del Mosaico de la Alfalfa.

d) Baliforme, como el Virus del Mosaico del Maz.

e) Polidricos, como el Virus del Mosaico de la Calabaza, Mosaico del Pepino, etc.

f) Gemelos (Geminivirus), como el Virus del Mosaico Dorado del Frijol, Virus del
Mosaico Estriado del Maz y Virus del Chino Amarillo del Tomate.

2.2. TAMAO DE LOS VIRUS

Las dimensiones de los virus que afectan plantas son muy variables y su tamao se
mide en nanmetros o milimicras.

+ Un nanmetro (=1 milimicra) = 0.000 000 001 m; o 0.000 001 mm; o 0.001 micras

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El tamao de los virus isomtricos vara de 17-70 nanmetros (nm) de dimetro;
los baciliformes alcanzan 300 nm de longitud x 95 nm de ancho; los de varilla
rgida miden 114-215 nm de largos por23 nm de ancho; las dimensiones de los
virus de varilla flexible alcanzan hasta 2000 nm de longitud por 10 nm de ancho.

As, por ejemplo, el grupo del Virus del Mosaico del Tabaco (varilla rgida-
Tobamovirus) mide 18 por 300-315 milimicras de longitud; el grupo del Virus Rattle
del Tabaco (varilla rgida- Tobravirus) alcanza una longitud de 20-22 por 130-180
milimicras. El grupo del Virus X de la Papa (Potexvirus) que es una varilla flexible,
mide de 13 por 480-580 nm., mientras que el Virus Tristeza de los Ctricos (Flexible-
Closterovirus) alcanza hasta 2000 nm., de longitud, siendo el virus ms grande de
los que atacan plantas. Los virus que poseen forma bacilar (Mosaico de la Alfalfa) y
bala (Marchitez Manchada del Tomate) miden alrededor de 66-227 nm., de longitud
y los polidricos miden de 18-90 nm , siendo el ms pequeo el virus satlite de la
necrosis del tabaco que mide 18 nm de largo (Smith ,1977; Lozoya, 1987 y Gibs y
Harrison, 1976).

2.3. ESTRUCTURA QUMICA DE LOS VIRUS DE PLANTAS

Con los descubrimientos de Stanley (1935), cuando aisl las partculas del Virus del
Mosaico del Tabaco y mencion que los virus estaban constituidos de protena y el
de Bawden y Pirie (1936), cuando describieron la naturaleza nucleoproteica de los
virus se lleg a la conclusin que los virus de plantas bsicamente estaban
constituidos de cido nucleico (ARN o ADN) ms una cubierta de protena. Las
partculas de los virus que atacan plantas contienen diferentes cantidades de AN,
variando de 15-45 % en virus isomtricos, de 5 a 42 % en virus helicoidales (varilla,
bala y baciliforme) y los virus que contienen lpidos en su constitucin su porciento
vara de 1 -20 %.
La siguiente tabla nos muestra algunos ejemplos del contenido de AN y protena de
algunos virus de plantas:
VIRUS % DE AN % DE PROTENA
(Acido Nucleico)
Virus Mosaico del Tabaco 5 95
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 Virus X de la Papa 6 94
Virus Mosaico de la Alfalfa 20 80
Virus Mosaico de la Calabaza 35 65
Virus Mancha Anular del Tabaco 22 58
Viroides 100 0

Las partculas de la mayora de los virus que atacan plantas contienen una cadena
simple (sencilla) de ARN, pero el Virus del Tumor y Heridas del Trbol y el Virus del
Enanismo del Arroz contienen doble cadena de ARN; el Virus del Mosaico de la
Coliflor posee doble cadena pero de ADN y el Virus del Mosaico Estriado del Maz
contiene una cadena simple de ADN en su composicin.

Otros virus adems de poseer protena contienen lpidos como es el caso del Virus
de la Marchitez Manchada del Tomate, Virus del Mosaico del Maz y el Virus del
Enanismo Amarillo de la Papa.

2.4. COMPOSICIN Y FUNCIONES DEL CIDO NUCLEICO VIRAL

El AN viral est formado por la unin de nucletidos; cada nucletido del AN viral
est formado por dos purinas (adenina y guanina) y tres pirimidinas (citosina, uracilo
y timina), los cuales para poder unirse requieren de un glcido (azcar) y un puente
de fosfato. Cada nucletido del ARN viral est conformado por adenina, guanina,
citosina y uracilo y el del ADN por adenina, guanina, citosina y timina; por lo tanto,
las diferencias bsicas entre los dos cidos es que el ARN tiene la base de uracilo
(ribosa) y el ADN tiene la base de timina (desoxiribosa) y el ARN tiene un oxidrilo
ms que el ADN.

Como ya se mencion, el cido nucleico es el resultado de la unin lineal de una

gran cantidad de nucletidos y la secuencia de stos determina la estructura del
citrn y cada citrn se le llama codons y est compuesto por tres nucletidos; de tal
forma que una cadena de ARN (como el caso del VMT) posee 6500 nucletidos
distribuidas de la siguiente manera: 1900 molculas de adenina, 1680 de guanina,
1180 de citosina y 1740 de uracilo para un total de 6500 nucletidos.

xx
El AN viral tiene como funcin especfica el de dar arreglo a las subunidades de la
protena del virus y la ms importante, que es causar infeccin en la planta. Los
experimentos de Gierer y Schramm (1956), y de Conrad y Williams (1957)
demostraron que el AN del Virus del Mosaico del Tabaco es suficiente para causar
infeccin en plantas, por lo que se ha concluido que es el cido el que contiene la
informacin gentica del virus. La evidencia de que el AN viral es el encargado de la
infeccin en plantas se basa en las siguientes evidencias:

A) Al Hidrolizar la enzima ribonucleasa y desoxiribonucleasa se pierde la infectividad;

B) El antisuero que reacciona con la protena no destruye su infectividad y C) Al
inocular por separado el AN viral y la protena; solo se observaron sntomas donde
se inocul el cido.

En algunos virus el AN viral est seccionado o divido en partes por lo que ha estos
virus se les conoce como virus multiparticulados; por ejemplo, el Virus del Mosaico
de la Alfalfa tiene divido su AN en cuatro partculas y para poder causar infeccin
requiere que estn presentes las cuatro partculas; a cada una de las partculas
virales que estn seccionadas se les conoce con el nombre de Virin. Otro virus que
tiene seccionado su AN es el Virus del Mosaico del Chcharo de Vaca y la que
codifica la infeccin es la partcula del medio; el Virus Cascabeleo del Tabaco est
dividido en dos partculas y si slo se inocula una se codifica la informacin para la
reproduccin de sntomas y no para la formacin de protena por lo que se deben de
inocular ambas.

2.5. COMPOSICIN Y FUNCIONES DE LA PROTENA VIRAL

La estructura de los virus es la protena y es la que forma el cuerpo del virus. La
protena viral est formada por subunidades de protena llamadas capsmeros, los
cuales al unirse y arreglarse conforman lo que se conoce con el nombre de cpside
o protena viral; tan pronto como un AN viroso se produce, induce a las clulas del
husped a producir las molculas de protena que debern formar la cubierta
proteica de dicho virus. La sntesis de protena en las clulas depende de la

xxi
presencia de aminocidos, la cooperacin de los ribosomas y de los ARN de
transferencia y los ARN mensajeros. El ARN mensajero que se produce refleja parte
de la clave que determina la clase de protena que deber producirse por
codificacin y la secuencia en la cual los aminocidos debern de arreglarse y la
protena formada es para uso exclusivo del virus que form dicha cubierta.

La protena viral est compuesta de alrededor de 20 aminocidos diferentes,

conteniendo en mayores proporciones la serina y trionina; el tipo y arreglo de estos
aminocidos es regido por el AN viral. Algunos virus de plantas tienen composicin
compleja, ya que adems de poseer aminocidos la protena contiene algunas
substancias polippticas, por ejemplo, el Virus del Enanismo Amarillo de la Papa
contiene cuatro diferentes tipos de polipptidos y los virus que contienen lpidos se
les ha encontrado glucsidos. Las funciones de la protena viral son bsicamente el
dar forma al virus, proteger al AN de factores externos y juega un papel muy
importante en la transmisin de virus por pulgones.

2.6. REPLICACIN DE VIRUS

La infeccin de una planta por un virus esta en relacin directa con la sntesis del
mismo, puesto que la infeccin no ocurrir a menos de que el virus se multiplique en
el tejido del husped susceptible. Los virus y viroides estn constituidos de
molculas reguladoras; es decir, el cido nucleico viral ordena a la planta que realice
funciones para su beneficio, y dentro de las funciones bsicas ordenadas esta la
patogenicidad y la replicacin de ste.

El proceso de replicacin de los virus es un tanto complejo pero en forma general lo

podemos dividir en las siguientes etapas: a) Adsorcin y penetracin; b) Liberacin
del AN; c) Replicacin del AN; d) Sntesis temprana de protena; e) Sntesis tarda de
protena y f) Ensamblaje.

Las partculas virales no tienen capacidad de penetrar a las clulas autnomamente

(por s solas) o por aberturas naturales como lo hacen los hongos y las bacterias.

xxii
Los virus que afectan a los vegetales entran a las clulas a travs de heridas hechas
mecnicamente, por vectores o por la fecundacin de un vulo por el grano del polen
infectado. Una vez dentro el siguiente contacto del virus es con el citoplasma de la
clula en donde existen ciertos sitios de infeccin que son saturados con partculas
virales; se da una asociacin electrosttica entre el virus y el citoplasma y de esta
manera queda inmerso en dicho citoplasma. Puesto que la parte activa del virus, que
es el cido nucleico est cubierto de protena, deber liberarse de la vaina proteica
para establecer la infeccin. La liberacin del AN tiene lugar durante las primeras
horas siguientes a la inoculacin, ocurriendo los pasos siguientes en forma
ordenada, y probablemente esto se concluya ms bien por la clula husped que por
el virus, puesto que ningn virus de planta contiene o produce por si mismo alguna
enzima. Los fragmentos de la cubierta proteica degradada permanecen en la clula y
son utilizados en los procesos sintticos de la misma. Una vez que el AN se libera de
la protena, este acta como ARN mensajero y se asocia con los ribosomas
celulares (esta fase se conoce como fase de eclipse o polisoma) para sintetizar una
protena funcional conocida con el nombre de enzima replicasa la cual tiene un peso
aproximado de 130,000 a 165,000 daltons; la enzima replicasa se asocia con el virus
y forman los moldes de AN los cuales son negativos debido a que sus bases de
adenina, guanina, citosina y uracilo estn cambiadas y son ledas como una imagen
del virus vista a un espejo, la cual a medida que se va formando, se conecta
temporalmente a la cadena virosa progenitora, a los ribosomas y a la enzima
replicasa para convertirse en AN positivos y por tanto infectivos. La enzima replicasa
tambin tiene como funcin formar protena de encapsulamiento o protena
temprana. Una vez que los ARN son infectivos pueden tomar dos caminos: a) volver
a entrar a los ribosomas celulares (aparentemente estos ARN son de bajo peso
molecular) y formar otra vez moldes y seguir el mismo proceso anterior y formar otra
vez protena (la cual se llamar sntesis tarda de protena) o b) darse el ensamblaje
con la protena formada tempranamente, estos es, el ARN organiza las subunidades
de protena alrededor de l y al unirse forman la partcula completa.

xxiii
El los sitios de la clula en los cuales el ARN del virus y de la protena se sintetizan
y los sitios en los cuales estos componentes se unen para producir los viriones
todava no se ha determinado con absoluta certeza pero los estudios efectuados con
el VMT sugieren que el ARN viroso, despus que est libre de su cubierta proteica
se mueve a los ncleos o posiblemente a los nuclolos, en donde se duplica. El
primer virin intacto aparece en las clulas de las plantas 10 horas despus de la
inoculacin. Las partculas virosas pueden existir solas o en grupos formando las
inclusiones virales.

2.7. TRANSLOCACIN DE LOS VIRUS DE PLANTAS

Despus de la introduccin de un virus en la clula, el virus aparentemente se
mueve, antes y despus de desprenderse de su cubierta proteica, hacia los sitios de
sntesis y ensamblaje de sus componentes. El movimiento probablemente es pasivo
y depende de la corriente protoplasmtica de la clula, pero otros mecanismos
tambin pueden estar implicados.

Para que un virus realice la infeccin en una planta el virus deber moverse de una
clula a otra, y multiplicarse en la mayora de ellas o al menos en las clulas en las
que se mueve. Se cree que los virus en sus movimientos de clula a clula, siguen
un camino a travs de las conexiones plasmodesmatales de las clulas adyacentes
y se cree tambin que el retculo endoplsmico puede conectar una clula a otra. Sin
embargo, es posible que los virus no se muevan a travs de la clula del parnquima
a menos que los virus infecten las clulas y se multipliquen en ellas, esto ocasiona
una invasin continua y directa de clula a clula.

Se considera que el radio de dispersin de los virus de clula a clula vara de

acuerdo con la clase y edad de las clulas de las plantas infectadas y es mayor en
las clulas alargadas y jvenes que en las viejas y redondas. Otras formas de
movimiento de los virus en plantas ocurren a travs de los tejidos vasculares (floema
y xilema).

xxiv
El transporte de los virus por el floema ocurre aparentemente, a travs de los tubos
cribosos, pudindose mover hasta 15 cm en solo seis minutos. En forma general se
puede indicar que los virus que ocasionan sntomas de lesiones locales o de
hipersensibilidad su movimiento lo realizan a travs de las conexiones
plasmodesmales que existen entre clula y clula y los virus que provocan sntomas
sistmicos lo realizan por medio de los tejidos vasculares.

2.8. NOMENCLATURA
A travs del tiempo se han seguido varios sistemas de nomenclatura de virus
incluyendo el uso de sistemas binomiales, el cual se encuentra solamente en la
literatura antigua. Actualmente el nombre particular de cada virus se adopta en
base a los sntomas los ms caractersticos de la enfermedad (a juicio del
descubridor del patgeno), en hospedante en el que se observ por vez primera al
virus. As por ejemplo, el Virus Mosaico del Pepino lleva este nombre porque fue
descubierto en pepino y uno de los sntomas principales es el mosaico.

En virologa es comn el uso de siglas para designar de manera abreviada a los

virus, lo cual resulta prctico. As se utiliza VMP para el Virus Mosaico del Pepino,
VMT para el Virus Mosaico del Tabaco o VMAT para el Virus Mancha Anular del
Tabaco. Es necesario aclarar que estas abreviaturas se usan de manera uniforme
por la mayora de los investigadores, con el fin de facilitar la comunicacin oral o
escrita.

Es pertinente sealar que en el idioma ingls tambin se usan abreviaturas,

aunque estas no sean las mismas que en espaol; en lugar del VMP se usa CMV
(Cucumber Mosaic Virus) y en lugar del VMT la abreviatura es TMV (Tobaco
Mosaic Virus). En esta poca de globalizacin es muy comn el uso de las siglas
en ingls para referirse a los virus y algunos investigadores latinos hasta se
olvidaron de las siglas en espaol, para referirse a tal o cual virus; por ejemplo
todo mundo habla de TSWV (Tomato Spotted Wilt Virus), en lugar de VMMT para
referirse al Virus de la Marchitez Manchada del Tomate. Este fenmeno no es

xxv
deseable desde el punto de vista idiomtico o nacionalista, pero que a veces
facilita la comunicacin.

Resulta evidente que el sistema de nomenclatura en uso resulta inapropiado, ya

que los sntomas pueden variar incluso en el mismo hospedante y con el mismo
virus. Los sntomas tambin pueden ser diferentes de acuerdo a la variante del
virus y por el efecto del ambiente. Sin embargo el uso del sistema binomial, tan til
en hongos y bacterias, no es aceptado por los virlogos, entre otras razones
porque no se acepta que los virus son seres vivos, en sentido estricto.

2.9. POSICIN TAXONMICA DE LOS VIRUS QUE AFECTAN PLANTAS

La mayora de los virus que afectan plantas fueron primeramente reconocidos por
los daos que estos causaban en ellas, y usualmente fueron nombradas usando el
nombre de la enfermedad y del hospedante que afectaban. Por ejemplo, un virus
que causaba mosaico y se le encontraba afectando plantas de tabaco se le deno-
minaba Virus Mosaico del Tabaco. En 1939 se reportaron los primeros acuerdos del
Comit para la Nomenclatura de virus designado por la Sociedad Norteamericana de
Fitopatologa, donde se seleccionaron cinco caractersticas importantes de los virus
para su clasificacin: 1) Sntomas; 2) alteraciones citolgicas y morfolgicas; 3)
transmisin por insectos; 4) relaciones serolgicas y 5) propiedades fsicas y
qumicas de los virus. Considerando que se desconoca la naturaleza del agente
causal, se propusieron tres alternativas de nomenclatura: a) Si el virus era un
organismo se le hara un binomio, por ejemplo, el Virus Mosaico del Tabaco se
llamara Paracrystalis altathermus; b) si resultaban ser compuestos qumicos se
debera agregar el sufijo "vir". As nuestro ejemplo sera, P. altathermovir y c) no
tomar en cuenta la naturaleza del agente y en este caso se llamara al VMT
Nicotiana virus altahermus. Como es costumbre, tan pronto como se public esta
propuesta surgieron crticos, adeptos y modificadores.

Tambin en 1939 Holmes propone la creacin de reino Vira, con dos divisiones,
Phytophagi y Zoophagi, para virus de plantas y animales respectivamente, utilizando

xxvi
el sistema binomial de nomenclatura. En 1940, Fawcett sugiere un sistema que
combina a los anteriores, iniciando una dcada de propuestas de diversos autores
que no fueron del todo aceptadas.

En 1950 se inicia una nueva era en la taxonoma de virus al crearse un subcomit

ex-profeso durante el Congreso Internacional de Microbiologa. Este grupo admite
que en virus no se puede usar la misma nomenclatura cientfica tradicionalmente
empleada para bacterias u otros microorganismos. Recomienda basarse en
aspectos morfolgicos, fsicos y qumicos de las partculas, y en composicin
antignica, en vez de amplitud de hospedantes y sntomas. A partir de entonces
surgen propuestas que incluyen la naturaleza del cido nucleico, la forma y tamao
del nucleocpsido, nmero de capsmeros, etc., con Gibbs et al., en 1966 nace el
criptograma, que tambin se ha perfeccionado con aportaciones posteriores.

La criptograma que es usada actualmente para nombrar virus y que es aceptada por
el Comit Internacional de Nomenclatura de virus es la siguiente (VMT):

R/1:2/5:E/E:S/0

En el criptograma anterior el significado de cada componente es:

R/1= La R significa que el virus est compuesto por ARM; el nmero 1 indica que
la cadena del ARN es de una sola banda.

2/5= El 2 representa el peso molecular del cido nucleico, expresado en millones.

El 5 representa la proporcin (%) de ARN que posee la partcula.

E/E= Se representa aqu la forma de la partcula que recubre al ARN.

E= Virus alargados con lados paralelos pero no redondeados (varilla rgida y

varilla flexible).

xxvii
 S= Virus esfricos (polidricos).
U= Virus alargados con lados redondeados (baliforme y baciliforme).
X= Virus de naturaleza compleja

S/O= Describe el tipo de hospedante (en este caso plantas de semilla o

angiosperma). El 0 (cero) indica el tipo de vector que en este caso no existe).

S/0= Clase de hospedante / tipo de vector

1) HOSPEDANTE

A= Parsito de algas
B= Parsito de bacterias
F= Parsito de hongos
I= Parsito de invertebrados
P= Parsito de Pteridofitas
S= Parsito de plantas
M= Micoplasmas
V= Vertebrados

2) VECTOR

Ac= caros y araas

Al= Aleyrodidae (moscas blancas)
Ap= Aphididae (pulgones)
Au= Auchenorrhyncha (chicharritas)
Cc= Coccidae (escamas)
Cl= Coleptera (escarabajos)
Di= Dptera (moscas y mosquitos)
Fu= Hongos
Gy= Gymnocerata (tingidae)

xxviii
 Ne= Nematodos
Ps= Psyllidae
Si= Siphonaptera
Th= Trips
0= Sin vector
Ve= Vector ninguno de los mencionados

2.9.1. GRUPOS DE IMPORTANCIA DE VIRUS FITOPATGENOS

A continuacin se mencionan 10 de los 28 grupos de virus aceptados actualmente
con algunas de sus caractersticas ms sobresalientes:

1) Tobravirus = R/1:2.3/5 + 0.6-1.3/5:E/E:S/Ne

El miembro tipo de este grupo es el Virus Rattle del Tabaco o Cascabeleo del
Tabaco y los miembros se caracterizan por poseer forma de varilla rgida con una
longitud de 180-210 nm y 45-115 nm de ancho, son transmitidos por nematodos de
la familia Trichodoridae; su punto de inactivacin trmica (PIT) es de 70 - 80 C, su
punto final de dilucin (PFD) de 10-6 y la longevidad in vitro de seis semanas.
Muchas razas de este grupo de virus se transmiten muy fcilmente mecnicamente
y tienen un amplio rango de hospedantes. Tiene un solo miembro que es el Virus del
Obscurecimiento Temprano del Chcharo.

2) Tobamovirus = R/1:2/5:E/E:S/O

El miembro tipo del grupo es el Virus Mosaico del Tabaco, poseen forma de varilla
rgida y la partcula mide alrededor de 300 nm de longitud, se transmite muy fcil
mecnicamente pero no por insectos, el PIT es de 90 C, su PFD es mayor a 10-6 y
la longevidad in vitro es por varios aos. Otros virus de este grupo son: el Virus
Mosaico del Tomate y Virus de la Mancha Anular del Odontoglussum.

xxix
3) Potexvirus = R/1: 3.5/5:E/E:S/Ap

Este grupo incluye al Virus X de la Papa como su miembro tipo y las caractersticas
ms sobresalientes es que sus partculas son de forma de varilla flexible y miden de
480- 580 nm de longitud, se transmiten mecnicamente, normalmente no se
transmiten por vectores; sin embargo, para PVX se reportan chapulines y al hongo
Synchytrium endobioticum, ocasionan generalmente sntomas de mosaico y su PIT
flucta entre 60-80 C, su PFD es de 10-5 a 10-6 y la longevidad in vitro es de meses.
Algunos miembros de este grupo son: Virus Mosaico de la Papaya y Virus Mosaico
de la Yuca.

4) Potyvirus = R/1:3.5/5:E/E:S/Ap

El nombre de este grupo se deriva de su miembro tipo, Virus Y de la Papa (PYV), el

cual ataca a papa y a otras solanceas. Estos virus tienen partculas flexibles que
miden entre 720-800 nm de longitud; pueden ser transmitidos experimentalmente por
medio de savia (mecnica), y en el campo sus principales vectores son los fidos,
los cuales lo transmiten de manera no persistente; el PIT es de 50-60 C, su PFD
est entre 10-2 - 10-3 y la longevidad in vitro es de 48-72 horas. Algunos miembros de
este grupo son el Virus Mosaico Comn del Frijol, Mosaico Amarillo del Frijol, Virus
Mancha Anular de la Papaya, Mosaico de la Soya, Virus Mosaico de la Sanda,
Mosaico de la Caa de Azcar, etc.

5) Cucumovirus = R/1:1.3/19+1.1/19 + 0.8/19 S/S:S/Ap

El Virus Mosaico del Pepino (CMV) es el miembro tipo de este grupo; aunque los
virus que pertenecen a este grupo tienen caractersticas en comn, pueden diferir
con respecto a la especificidad del hospedante y a la reaccin serolgica. Estos virus
poseen partculas polidricas que miden alrededor de 30 nm de longitud; el PIT es
de 60-70 C, el PFD es de 10-4 y fuera del hospedante dura alrededor de 3-6 das;

xxx
se transmiten muy fcilmente mecnicamente y los sntomas generalmente causan
mosaicos y algunas veces necrosis. Otros virus importantes de este grupo son el
Mosaico Amarillo del Pepino, Aspermy del Tomate y Virus del Enanismo del
Cacahuate.

6) Nepovirus = R/1:2.4/43+1.4-2.1/30+2.8/46:S/S:S/C,Ne

En este grupo se encuentran los virus cuyos vectores son principalmente nematodos
de los gneros Xiphinema y Longidorus, sus partculas son polidricas y miden 30
nm de dimetro. Son transmitidos mecnicamente, por semilla y polen, y los
sntomas principales son manchas anulares, moteados y necrosis; su PIT es de
55-70 C, el PFD de 10-4 y la longevidad in vitro es de una a tres semanas. El
miembro tipo de este grupo es el Virus Mancha Anular del Tabaco y tambin se
encuentra el Virus Mancha Anular del Tomate, el Enrollamiento de la Hoja de Papa,
Hoja de Abanico de la Vid, etc.

7) Sobemovirus = R/1:1.4/21:S/S:S/Ve,Cl

El miembro tipo de este grupo es el Virus Mosaico Sureo del Frijol (SBMV) y los
miembros se caracterizan por poseer forma polidrica con partculas que varan de
28-30 nm de dimetro, se transmiten por jugos de savia, semilla y en el campo
generalmente son diseminados por colepteros; su PIT es de 90-95 C, su PFD es
de 10-5 y fuera del hospedante dura entre 20 y 165 das; se relaciona con el Virus
Estriado Temporal de la Alfalfa.
8) Necrovirus = R/1:1.5/19:S/S:S/Fu

El miembro tipo de este grupo es el Virus de la Necrosis del Tabaco, el cual

normalmente causa necrosis en las races de sus hospedantes; las partculas son
polidricas de 26 nm de dimetro, su PIT es de 65-95 C, se desconoce su punto
final de dilucin y la longevidad in vitro es de ms de 30 das, en campo es
diseminado por las zoosporas de Olpidium brassicae.

xxxi
9) Tospovirus= R/1:7.4/2:S/S:S/Th

El nico miembro de este grupo es el Virus Marchitez Manchada del Tomate y se

caracteriza porque sus partculas son isomtricas de 70-90 nm de dimetro; su PIT
es de 40-46 C, su PFD es de 10-2-3 y la longevidad in vitro es muy corta (2-5 horas).
Se transmite mecnicamente y por Trips y causa mosaico y necrosis en sus
hospedantes atacados.

10) Grupo del Mosaico de la Alfalfa = R/1:1.1/16+0.8/16:U/U:S/Ap

El miembro nico de este grupo es el Virus Mosaico de la Alfalfa el cual posee cuatro
partculas baciliformes que miden de 18-58 nm de dimetro, se transmite muy
fcilmente mecnicamente, por pulgones y los sntomas que normalmente causa a
sus hospedantes son mosaicos y manchas anulares. Su PIT es de 60-70 C, su PFD
es de 10-5 y la longevidad in vitro es de 2-4 das; se le encuentra muy relacionado
con el grupo de los CUCUMOVIRUS.

Cuadro. Algunos ejemplos de virus importantes en Mxico.

Grupo Virus
Luteovirus Enrollamiento de la Hoja de la Papa
Nepovirus Mancha Anular del Tabaco
Sobemovirus Mosaico Sureo del Frijol
Mosaico de la alfalfa Mosaico de la Alfalfa
Cucumovirus Mosaico del Pepino
Tobamovirus Mosaico del Tabaco, Mosaico del Tomate
Potexvirus X de la papa
Potyvirus Y de la papa, Mosaico Comn del Frijol, Mancha Anular de
la Papaya, Mosaico de la Sanda, Jaspeado del Tabaco
Closterovirus Tristeza de los Ctricos
Tospovirus Marchitez Manchada del Tomate
Geminivirus Chino del Tomate, Mosaico Dorado del Frjol, Enrollamiento
de la Hoja de la Calabaza.

xxxii
UNIDAD III. FORMAS DE TRANSMISIN E IDENTIFICACIN DE LOS VIRUS
DE PLANTAS

3.1. CONCEPTO DE TRANSMISIN DE VIRUS

La propiedad de transmitirse de una planta enferma a una sana es una caracterstica
fundamental de los virus al igual que otros agentes biolgicos que causan
enfermedades. Los virus a diferencia de hongos y bacterias no tienen la capacidad
de diseminarse por el viento o agua porque fuera de las clulas se inactivan con
rapidez, adems, no pueden penetrar a la planta por sus propios medios y requieren
que se les deposite directamente dentro de una clula.

xxxiii
Dada su condicin como parsitos obligados los virus no se pueden desarrollar en
materia orgnica muerta; requieren del albergue en tejido vivo, ya sea en estado
de reposo o de multiplicacin activa. El Virus Mosaico del Tabaco (VMT)
constituye una de las pocas excepciones, ya que puede sobrevivir en restos de
tejidos infectados que quedan en el campo despus de la cosecha, de tal manera
que estos materiales sirven como fuente de inculo primario en el siguiente ciclo.
Los virus requieren pasar constantemente de un hospedante infectado a otro
sano, para poder sobrevivir en cualquier regin.

Los virus no penetran a las plantas de manera directa, ni salen de estas por sus
propios medios. La dispersin no es activa; es pasiva y se da mediante los
siguientes mecanismos:

3.2. TIPOS DE TRANSMISIN DE VIRUS

Las formas en que los virus son transmitidos de plantas enfermas a plantas sanas
son a) Propagacin vegetativa; b) mecnicamente; c) semilla; d) polen y e)
biotransmisores.

3.2.1. TRANSMISIN POR PROPAGACIN VEGETATIVA

Siempre que las plantas se propaguen vegetativamente mediante injerto, esquejes,
tubrculos, bulbos o rizomas, cualquier tipo de virus que se encuentre en la planta
madre, a partir de la cual dichos rganos de propagacin se obtienen casi siempre
sern transmitidos a la progenie. Tomando en cuenta que casi todas las frutas y la
mayora de los rboles de ornato, y los cultivos como papa se propagan mediante
estos medios, este tipo de transmisin adquiere importancia significativa.

3.2.2. TRANSMISIN MECNICA

Todos los virus pueden ser transmitidos a algunas plantas mediante inoculacin
mecnica, pero no todas pueden infectar y establecer infeccin. En teora las part-

xxxiv
culas virales pueden ser introducidas a clulas vivas por este mtodo, pero para que
el virus llegue a ser funcional depende de una gran variedad de condiciones como: el
grado de susceptibilidad de la clula receptora, funcionamiento del genoma viral
dentro de la clula, condiciones necesarias para la maduracin del virus, factores
ambientales, etc. La TRANSMISIN MECNICA es definida como el proceso por el
cual las partculas de virus son manualmente introducidas a una planta por heridas
mecnicas, para facilitar la iniciacin de la infeccin en clulas potencialmente
infectables.

La transmisin mecnica puede ocurrir de manera natural (campo) y de forma

artificial (laboratorio); en campo, dicha transmisin puede efectuarse entre plantas
bastantes prximas al rosarse con el viento, cuando las plantas son daadas por el
hombre en las labores de cultivo, por medio de fumadores (como el caso del VMT),
etc.

La transmisin mecnica artificial es de gran importancia a nivel experimental y se

puede realizar de diferentes formas: frotis; injerto e inyecciones.

3.2.2.1. TCNICA DE FROTIS

Es la tcnica ms usada artificialmente ya que presenta varias ventajas entre las que
destacan de que es muy rpida y segura, facilita el estudio de los virus en ausencia
de vectores, facilita el estudio de los virus "in vitro", se pueden separar virus
mediante inoculaciones mecnicas por frotis y nos da pauta para realizar estudios
sobre el nmero de lesiones locales que se obtienen con inoculaciones mecnicas
(Holmes, 1929; demostr que el nmero de lesiones locales era proporcional a la
concentracin del inculo en ciertas especies de tabaco inoculadas con VMT). La
tcnica de transmisin por este medio es muy simple y la metodologa bsica es la
siguiente:

xxxv
a) Tomar aproximadamente dos centmetros cuadrados (preferentemente hojas),
con los sntomas bien marcados.
b) Macerar en un mortero el tejido de la planta enferma y agregar solucin buffer con
un PH de 7.0 a 8.5.
c) Adicionar carborundum de 400 o 600 mallas por pulgada cuadrada sobre las hojas
que se van a inocular.
d) Con un cotonete impregnado con savia infectiva se talla suavemente donde se
aplic el carborundum y lavar con agua corriente para eliminar el exceso de este
material.
e) Colocar la planta inoculada en un lugar fresco y fuera del alcance de los insectos
vectores para evitar traslape de resultados.

Otros detalles de la transmisin mecnica.

1) Preferible inocular hojas cotiledonales

2) En plantas grandes inocular las hojas medias a jvenes
3) Gramneas deben inocularse por el envs de las hojas
4) Cucurbitceas inocularse preferentemente en hojas cotiledonales.
5) Macerar e inocular preferentemente a bajas temperaturas
6) Lavar la hoja inoculada inmediatamente despus de la inoculacin.
7) Las lesiones locales tienen menor concentracin que la superficie verde.
8) Inocular de preferencia por la maana o por la tarde.

3.2.2.1.1. FACTORES QUE INTERVIENEN EN UNA TRANSMISIN POR

FROTIS
La eficiencia de la transmisin por frotis depende de varios factores como: FUENTE
DE INOCULO, PREPARACIN DEL INOCULO, APLICACION DEL INOCULO,
CONSTITUYENTES DEL INOCULO Y FACTORES AMBIENTALES.

FUENTE DE INCULO.- El inculo puede ser obtenido de varias partes de la planta

infectada, pero si las hojas muestran sntomas se deben de probar primero, ya que

xxxvi
los tejidos leosos usualmente son ms pobres en partculas virales que las hojas.
En hojas lo ms conveniente es usar la tiernas donde los sntomas estn ms
acentuados, en hojas viejas, la concentracin de virus es menor.

PREPARACIN DEL INCULO.- Los tejidos infectados pueden contener

numerosas partculas de virus infecciosos, pero la infectividad depender de varias
condiciones y tcnicas que pueden ser empleadas en la fase de la preparacin del
inculo, que es por tanto, un factor muy importante que puede influenciar la
efectividad del inculo. El inculo es preparado por extracto de virus de tejido
enfermo, por unos momentos el virus est expuesto al medio ambiente el cual puede
reducir su infectividad. Varias sustancias tales como metabolitos de la hospedera y
escombros celulares son liberados simultneamente con el virus; algunos de estos
componentes celulares producen substancias inhibitorias por lo que es necesario
agregar un solvente apropiado como antiinhibidor. Generalmente, al momento de la
preparacin del inculo se utiliza una solucin de fosfatos monobsicos y dibsico de
potasio (solucin buffer) con PH 7.0-8.5 ya que esta solucin ayuda a mantener la
configuracin del virus y aumenta la eficiencia de la infeccin ya que diluyen
inhibidores.

APLICACIN DEL INCULO.- En este caso es muy recomendable que la planta

que se va a inocular sea previamente herida con abrasivos, pudindose usarse
carborundum de 400 600 mallas por pulgada cuadrada, celite, arena, carbn
molido, caoln, etc., es importante evitar los excesos de abrasivo ya que causan
daos muy fuertes a las plantas que pudieran confundirse a los causados por virus,
tambin es necesario tallar muy suavemente la parte inoculada pudindose hacer
con los dedos, cotonetes (mas usado), manta de cielo, esptulas de vidrio, etc., y
posteriormente lavarse con agua corriente para eliminar los excesos de abrasivo.

CONSTITUYENTES DEL INCULO.- Como se mencion anteriormente, varios

componentes (INHIBIDORES) que resultan al momento de la maceracin, afectan la
infectividad de los virus. Los inhibidores son de distinta naturaleza pudiendo

xxxvii
encontrar a los taninos (los cuales actan sobre la protena y provocan precipitacin
de virus) y polifenoles oxidativos (oxidasas). Para contrarrestar el efecto de estos
componentes se usan los ANTIINHIBIDORES (sustancias que contrarrestan el
efecto de los inhibidores), pudiendo usar nicotina y cafena (para taninos) y para los
polifenoles usar cianamida, cido saliclico, hidroxilamina, cido tioglicolico y cido
ascrbico.

FACTORES AMBIENTALES.- Los factores ambientales juegan un papel muy

importante en la transmisin mecnica por frotis en virologa; la luz, temperatura,
nutricin y humedad son los factores ms importantes:

a) Luz.- Se ha observado que cuando la planta que es inoculada se le somete a

perodos de oscuridad continua, tres das antes se favorece la infeccin; tambin
cuando se inocula y despus se expone a altas luminosidades se aumenta la
eficiencia de la transmisin.

b) Temperatura.- Se ha determinado que cuando se inocula a altas temperaturas

(>36 C), existe una marcada tendencia a no presentarse la infeccin; esto mismo
sucede cuando las temperaturas son menores de 12 C. La ptima para inocular es
de 18-25 C.

c) Nutricin.- Se ha comprobado que es mejor inocular plantas con una nutricin

ptima o en ocasiones con ligeros excesos de nitrgeno.

d) Humedad.- La infeccin aumenta con los excesos de agua.

3.2.2.2. TCNICA DE INJERTO

Este mtodo fue usado desde el siglo XVIII para la obtencin de plantas de tulipn
que producan flores variegadas. Desde el siglo XX, el injerto se convirti en una
tcnica muy til para el estudio de los virus y fue la base para determinar la
naturaleza infecciosa de varias enfermedades.

xxxviii
El injerto es muy utilizado en virus que no se transmiten mecnicamente, pero hay
que tener mucho cuidado ya que por esta tcnica tambin se transmiten otros
agentes fitopatgenos. El injerto se puede realizar en plantas de diferentes especies
y de diferentes gneros; cuando se usa esta tcnica en plantas diferentes existe
menor posibilidad de que el injerto prenda pero, en este caso, lo nico que se
persigue en virus es poner en contacto los tejidos vasculares de la planta enferma
con los tejidos de la planta sana.

La metodologa usada es muy sencilla, se toma una planta que se utiliza como
patrn, a la cual se le hace un corte en el tallo tratando de que llegue a los tejidos
vasculares, se utiliza una hoja o una pequea rama de la planta enferma y con una
navaja de rasurar se le quita la epidermis con el fin de dejar los haces vasculares
descubiertos, posteriormente se introduce en el cuerpo del patrn, teniendo cuidado
que los haces vasculares se pongan en contacto, para la transmisin del virus, luego
se sella con Parafilm o polietileno y la planta se coloca en un lugar fresco, para
esperar la aparicin de sntomas.

Las condiciones que se deben de tomar en cuenta para el xito del injerto son las
siguientes:

1.- El corte debe de ser lo ms uniforme posible para que se establezca la unin
entre el patrn y el injerto.

2.-Tratar de que la superficie de contacto entre patrn e injerto sea lo ms grande

posible.

3.- Evitar la deshidratacin de los tejidos una vez que se haya realizado el injerto;
esto se puede lograr colocando la planta en una cmara hmeda y si no se tiene,
colocar una bolsa de polietileno hmeda.

xxxix
3.2.2.3. TCNICA DE INYECCIN
Esta tcnica fue una de las que se utilizaron por primera vez para la transmisin de
virus en plantas; en la actualidad solo se utiliza para transmitir algunos virus que no
se transmiten por frotis como por ejemplo, el Virus Curly Top de la Remolacha.

3.2.3. TRANSMISIN POR SEMILLA

Cuando un virus infecta a una planta, invaden todos los tejidos y llegan hasta la
semilla. La evidencia ms concluyente de que los virus se transmitan por medio de
la semilla fue la presentada por Reddick y Stewart en 1919, cuando demostraron que
las semillas de frjol infectadas con el Virus Mosaico Comn del Frjol producan
plantas infectadas desde un 10-90 %. Doolittle y Gilbert (1919), tambin demostraron
que el Virus Mosaico del Pepino se transmita por este medio en pepinillo. En la
actualidad alrededor del 20 % de los virus de plantas conocidos se transmiten a
travs de la semilla. La transmisin de virus por este medio ocurre cuando: el
hospedante es infectado sistmicamente en la floracin, cuando el virus es capaz de
invadir el polen y el vulo, cuando es capaz de sobrevivir en la gameta, cuando
sobrevive a la deshidratacin de la semilla y al almacenamiento y cuando no es
inactivado durante el desarrollo de la semilla.
3.2.3.1. IMPORTANCIA DE LA TRANSMISIN POR SEMILLA DE VIRUS EN
PLANTAS
La transmisin por semilla constituye uno de los factores ms importantes en el
desarrollo epidmico de algunos virus. Las semillas infectadas dan origen a
plntulas que representan una fuente de inculo inicial temprana, que adems se
halla uniformemente distribuido. Las plntulas infectadas constituyen reservorios a
partir de los cuales ocurre la dispersin secundaria del virus, lo cual sucede por
transmisin mecnica o mediante vectores.

La gran mayora de los virus que se transmiten por semilla, persisten en el embrin;
el porcentaje de transmisin depende de la raza del virus, el hospedante, las
condiciones ambientales, entre otros factores, y su "longevidad" depende del
hospedante, inculo, condiciones de almacenamiento y el perodo de almacenaje.

xl
A continuacin se mencionan algunos virus de gran importancia que se transmiten
por este medio, sus hospedantes y en algunos casos su perodo de viabilidad.
VIRUS CULTIVOS VIABILIDAD
Virus Mosaico Comn del Chcharo 3-3.8 aos
Frijol
Virus Mosaico de la Alfalfa Alfalfa, Chile 3 aos
Virus Mosaico Sureo del Frijol, Chcharo 6 meses
Frijol
Virus Mosaico del Pepino Pepino, Crtamo, Meln, 0.5-2.2 aos
Sandia, Calabaza, Tomate
Virus Mosaico del Meln Meln, Calabaza, Sandia 3-5 aos
Virus Mosaico de la Soya Soya 2 aos
Virus Mosaico de la Sandia 3-5 aos
Calabaza
Virus Mosaico del Tabaco Chile 3-9 aos
Virus Mancha Anular del Garbanzo, Meln, Soya, 0.7-5.5 aos
Tabaco Tabaco
Virus Mosaico Amarillo del Frijol, Haba X
Frijol
Virus Mosaico del Maz Maz X
Virus X de la Papa Papa X
Virus Y de la Papa Papa X
Virus Marchitez Manchada Tomate X
del Tomate
Virus Mosaico de la Sandia Calabaza X
Virus Mosaico del Trigo Trigo, Maz X

3.2.3.2. MECANISMOS DE ENTRADA DE LOS VIRUS EN LA SEMILLA

Los virus asociados con las semillas son acarreados de dos formas: como una
infeccin o como una infestacin. La infeccin implica que el virus es llevado
internamente, inmerso en los tejidos de la semilla y cuando el virus es llevado
pasivamente se le conoce como infestacin o contaminacin. El Virus Mosaico
Comn del Frjol, Virus Mosaico de la Soya, Mancha Anular del Tabaco, etc., son
ejemplo de algunos virus que van internamente; el Virus Mosaico del Tabaco en
tomate y la Marchitez Manchada del Tomate se encuentran en la cubierta de la
semilla.

xli
3.2.3.3. TCNICAS DE DETECCIN DE LOS VIRUS EN SEMILLAS
La deteccin de virus en semillas es ms difcil que detectar hongos, bacterias y
nematodos. Los virus son parsitos obligados y por tanto requieren de pruebas
especiales para su deteccin; estas varan desde una observacin visual simple,
hasta pruebas muy sofisticadas como el uso de serologa y microscopa electrnica.
Las pruebas ms usadas se describen a continuacin:

A) Observacin de semillas secas.

Las observaciones visuales de la semilla revelan anormalidades tales como

decoloracin, arrugamientos, reduccin en tamao, manchado, necrosis, etc. por
ejemplo, el Virus Mosaico de la Soya provoca un moteado en la semilla de soya, el
Mosaico del Tabaco causa necrosis y deformacin en semilla de tomate el Virus
Mosaico de la Calabaza reduce el tamao en un alto porcentaje cuando infecta
meln y calabaza.

B) Pruebas biolgicas.

Es uno de los mtodos ms usados por el agricultor ya que es econmico, fcil y

muy seguro. Existen dos pruebas biolgicas:

1) Prueba de crecimiento.

La prueba de crecimiento es usada para determinar el porcentaje de transmisin por

semilla. Se plantan 100 semillas en suelo, vermiculita u otro medio de crecimiento y
una vez germinado son examinadas regularmente siguiendo muy de cerca los
sntomas de los virus; en algunos casos como el V.M.C.F. la transmisin por semilla
puede ser detectada una vez que las hojas primarias hayan aparecido. Sin embargo,
los sntomas se observan ms claramente en el primero o segundo trifolio.

2) Deteccin usando plantas indicadoras.

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Los virus pueden ser detectados en la semilla haciendo extracciones de diferentes
partes de la semilla y posteriormente inoculando en plantas indicadoras. El Virus
Mosaico Comn del Frjol es detectado al inocular la savia del embrin y cotiledones
en plantas de frjol "Monroe" en donde reacciona con sntomas locales;
Chenopodium amaranticolor es usado para detectar virus como por ejemplo, el Virus
Mosaico del Pepino, Virus Mosaico de la Sanda, entre otros.

C) Pruebas bioqumicas.

Dentro de las pruebas bioqumicas el uso de a) Serologa, b) Tinciones de tejidos y

c) Microscopio electrnico son las pruebas ms confiables para detectar virus en la
semilla.
a) Serologa.

Los mtodos serolgicos son usados para caracterizar y determinar las relaciones
entre los virus. Estas pruebas estn basadas en la relacin entre un antisuero (virus
purificado) y un antgeno (virus a identificar). Dentro de las pruebas serolgicas ms
usadas para la deteccin de virus en la semilla se pueden mencionar las
microprecipitacin serolgica, doble difusin en agar, aglutinacin serolgica,
aglutinacin de cloroplastos y E.L.I.S.A., entre otros.

b) Tcnica de tincin.

Un gran nmero de colorantes tales como la acridina, giemsa, azul de triponina,

entre otros, pueden detectar infecciones virales en los tejidos de las plantas. El uso
de acridina (colorante fluorescente) sirve para diagnosticar la presencia del Virus del
Chcharo de Vaca en semillas de chcharo; es muy simple y consiste en poner las
semillas de chcharo en agua durante dos das, agregarle el colorante y si existe la
presencia del virus se observar un agregado de un color rojo fluorescente en las
semillas infectadas.

xliii
 c) Microscopa electrnica.

Consiste en hacer preparaciones de las posibles semillas infectadas y observarlas al

microscopio electrnico.

3.2.4. TRANSMISIN POR POLEN

Cuando una planta est infectada, el virus tiene la capacidad de llegar a infectar el
polen y cuando este es acarreado por el viento o por insectos el virus se transmite de
una planta enferma a una sana por este medio. La transmisin por medio del polen
est muy relacionada con la transmisin de virus por semilla, por ejemplo, el Virus
Mosaico Comn del Frijol tiene un mayor porcentaje de transmisin por semilla y por
polen ya que la planta es autgama. La gran mayora de los virus que se transmiten
por medio de la semilla tambin se transmiten por polen, por ejemplo, Virus Mosaico
Comn del Frijol, Virus Mosaico de la Calabaza, Virus Mosaico de la Lechuga, etc.

3.2.5. TRANSMISIN DE VIRUS A TRAVS DE BIOTRANSMISORES

Se aplica este trmino a cualquier agente vivo (excluyendo semilla y polen) capaz
de portar o transmitir un virus fitopatgeno de una planta enferma a una planta
sana. En sentido estricto la palabra vector no es sinnimo de biotransmisor,
aunque en el lenguaje comn se usan de manera indistinta. Siendo ms comn el
primer trmino. El ser vector implica que el virus es ingerido y se halla en contacto
ntimo con el transmisor. Un ejemplo til de vector es el del mosco Anopheles, que
transmite al protozoario causante del paludismo; el microorganismo ingerido se
multiplica y sufre transformaciones en el interior del cuerpo del insecto, antes de
poder ser transmitido. En muchos casos de biotransmisores de virus, el patgeno
si se multiplica en el insecto pero hay abundantes excepciones en las que no
sucede as.

Este tipo de transmisin incluye a los insectos, caros, nematodos, hongos, plantas
parsitas y vertebrados, y constituye la forma ms importante de diseminacin de los

xliv
virus en campo.

3.2.5.1. TRANSMISIN POR INSECTOS

Constituye el grupo de biotransmisores ms importante de virus. La primera
evidencia que se tiene de la transmisin por este medio fue la publicada por Takata
en Japn (1895) y Takami (1901), donde se menciona a las chicharritas Inzuma
dorsalis y Nephotettix cinctipes asociadas con el Virus Enanismo del Arroz. Ms
tarde Doolittle (1916) demostr que el pulgn Aphis gossypii transmita al Virus
Mosaico del Pepino; Botjes (1920) encontr que Myzus persicae poda transmitir al
Virus del Enrollamiento de la Hoja de Papa. Actualmente se reconoce que ms de
400 especies de insectos transmite virus, y de todas estas especies Myzus persicae,
es el ms importante ya que transmite alrededor de 85 virus diferentes. Las especies
de insectos reportadas como transmisores de virus se encuentran principalmente en
los rdenes Homptera (pulgones, moscas blancas, chicharritas, escamas, psilidos,
etc.); Thysanptera (trips); Coleptera (escarabajos); Orthptera (chapulines);
Dermptera (tijeretas); Lepidptera (palomillas y mariposas); Dptera (mosquitos) y
Hemptera (tingidos).

En general, durante la transmisin por insectos se pueden distinguir tres fases:

- Perodo de adquisicin. Es el tiempo mnimo que requiere el insecto para

adquirir el virus.
- Perodo de latencia. Tiempo transcurrido desde que el insecto adquiere el
virus hasta que es capaz de transmitirlo.
- Perodo de inoculacin. Tiempo mnimo requerido por el insecto para
poder trasmitir el virus adquirido, una vez que empieza a alimentarse de
una planta sana.

Hay otro trmino importante denominado perodo de retencin, que se refiere al

tiempo durante el cual el insecto permanece infectivo.

xlv
3.2.5.1.1. CLASIFICACIN DE VIRUS DE ACUERDO A LA TRANSMISIN POR
INSECTOS
En base al fenmeno de transmisin de los virus por insectos estos se han
clasificado en: virus no persistentes y virus persistentes.

3.2.5.1.1.1. VIRUS NO PERSISTENTES

Llamados tambin virus de estilete o virus no circulativos, constituye el grupo ms
grande y de mayor importancia en campo. Este grupo de virus se caracteriza por que
el insecto que los transmite (generalmente pulgones), tiene un perodo de
adquisicin (tiempo que tarda el insecto en adquirir a un virus) y un perodo de
transmisin (tiempo que tarda el vector en transmitir a un virus) sumamente cortos
(de 10-60 segundos). El insecto retiene al virus durante un perodo muy corto que
puede ser de minutos u horas; esto depende del insecto ya que si este se alimenta
ms rpido, ms pronto se deshace de los virus. El virus no penetra al tracto
digestivo del insecto por lo que al darse el proceso de muda en este se elimina al
virus; si el vector es sometido a un perodo de ayuno se aumenta la eficiencia de la
transmisin. La mayora de estos virus presentan las siguientes caractersticas en
comn:

1) Su punto de inactivacin trmica anda entre 50-65 C.

2) Generalmente son filamentosos (varilla rgida o flexible).
3) La longevidad "in vitro" es solamente de unos cuantos das.
4) Generalmente presentan sntomas de mosaico y manchas anulares.
5) La gran mayora se transmite por pulgones
6) Se transmiten muy fcilmente mecnicamente
7) Generalmente estn confinados a las clulas epidermales

3.2.5.1.1.2. VIRUS PERSISTENTES

Tambin llamados virus circulativos; y se caracterizan porque el insecto que los
transmite (pulgones, mosca blanca, chicharritas, etc.) tienen perodos de adquisicin
y transmisin largos (horas, das y hasta semanas) y adems poseen un perodo de

xlvi
incubacin (tiempo que tarda el virus en recorrer el tracto digestivo del insecto) que
tambin es de horas, semanas y hasta das. En este caso el virus si penetra al tracto
digestivo del insecto por lo que al darse el proceso de muda en este, no se pierde la
infectividad.

Los virus persistentes presentan las siguientes caractersticas:

1) Generalmente poseen forma polidrica

2) Los sntomas ms comunes son: amarillamientos, enchinamientos,
enrrollamientos, etc.
3) Su longevidad "in vitro" en algunos casos puede durar toda la vida del insecto.
4) Al mudar el insecto no se pierde la infectividad
5) Estn confinados a los tejidos vasculares de la planta.
6) Generalmente no se transmiten por medios mecnicos.
7) En la naturaleza sus principales vectores son mosca blanca, chicharritas,
nematodos, etc.

Los virus persistentes se pueden clasificar en: circulativos, propagativos y

transovricos.

3.2.5.1.1.2.1. PERSISTENTES CIRCULATIVOS

Son aquellos virus que penetran al tracto digestivo del insecto vector, pero no se
multiplican de este. Este tipo de virus generalmente son transmitidos por mosca
blanca.

3.2.5.1.1.2.2. PERSISTENTES PROPAGATIVOS

Son aquellos virus que penetran al tracto digestivo del insecto y se multiplican de
este. Este tipo de virus se multiplican en la hemolinfa, tubos de Malpighi, cerebro,
etc., y generalmente son transmitidos por chicharritas.

3.2.5.1.1.2.3. PERSISTENTES TRANSOVRICOS

xlvii
Son aquellos virus que penetran al tracto digestivo del insecto, se multiplican de este
y adems la infectividad se pasa la progenie. Estos virus solo se transmiten por
chicharritas y el virus aparentemente se multiplica en los rganos reproductores de la
hembra; el Virus Enanismo del Arroz es un ejemplo tpico de estos virus.

VIRUS TRANSMITIDOS POR FIDOS

Los fidos, llamados comnmente pulgones, constituyen el grupo ms importante
como vector de virus que transmiten alrededor del 60 % de todos los virus que se
transmiten por insectos y porque adems transmiten virus principalmente del tipo no
persistente pero tambin transmiten virus circulativos y propagativo. El ciclo de vida
de los pulgones es muy variado y en lugares donde el invierno no es muy fro, se
reproducen partenogenticamente y en las partes donde si hace fro existe
reproduccin sexual, es decir, los machos fertilizan a las hembras, las cuales ponen
huevecillos y de esta forma invernan. Los fidos generalmente tienen un hospedante
perenne que es el hospedante primario y un hospedante secundario que es una
planta herbcea; las formas ms importantes como transmisores de virus son las
aladas aunque las formas pteras son muy importantes en laboratorio; los pulgones
empiezan el vuelo en las maanas muy temprano y dejan de volar unas cuantas
horas antes de que acabe la luz, estos insectos son atrados por los colores
brillantes, principalmente amarillo. Cuando un fido se coloca en una planta,
primeramente realiza inserciones de su estilete de corta duracin cuya trayectoria es
hacia el interior de las clulas epidrmicas: Si la planta es de su agrado,
posteriormente, para alimentarse, realiza inserciones en la bsqueda de los haces
vasculares a travs de los espacios intercelulares. El piquete de probado de corta
duracin es el responsable de la adquisicin e inoculacin de virus no persistentes.
El piquete de alimentacin se encarga de la transmisin de virus persistentes.

Los fidos transmiten virus que pueden ser transmitidos manualmente muy
fcilmente y cuyos sntomas son generalmente los mosaicos, encontrndose dentro
de estos a los Potyvirus, Cucumovirus, Carlavirus, Grupo del Virus Mosaico de la
Alfalfa, etc., los cuales los transmite de manera no persistente y de manera

xlviii
persistente transmite a los de los grupo Luteovirus, Grupo del Virus Mosaico,
Enanismo del Chcharo y a la familia Rhabdoviridae.

VIRUS TRANSMITIDOS POR CHICHARRITAS

De los hompteros del suborden Auchenorrhincha, las chicharritas (Cicadellidae)
transmiten aproximadamente 40 virus distintos y la mayora de ellos son virus
persistentes circulativos propagativos por lo que su perodo de adquisicin es
sumamente grande (alrededor de 24 horas), el perodo de incubacin es de una a
dos semanas y el perodo de persistencia es casi toda la vida. Tambin transmiten
virus transovricos y los sntomas principales son amarillamientos, enrrollamientos y
enchinamientos.

Para comprobar que el virus se multiplica dentro del insecto vector, con una
microjeringa se extrajo hemolinfa de una chicharrita del genero Ogallia constricta y
se inyect a otra y la infectividad se pas hasta en ocho generaciones; se comprob
que el virus se multiplicaba en las clulas del epitelio, intestino, tubos de malpighi,
ovarios, hemolinfa, etc. Los virus anteriormente mencionados que son transmitidos
por chicharritas estn incluidos dentro de las familias Rhabdoviridae y Reoviridae, y
los grupos: Geminivirus, Grupo del Virus Rayado Fino del Maz y Enanismo Clortico
del Maz, principalmente.

VIRUS TRANSMITIDOS POR MOSCA BLANCA

Las moscas blancas son un grupo importante en la transmisin de virus ya que se
les ha encontrado transmitiendo alrededor de 10 distintos Geminivirus; por lo menos
cinco virus en forma de varilla distribuidos en los grupos Closterovirus, Carlavirus y
Potyvirus, y otras enfermedades de tipo viral cuya partcula no ha sido observada. En
todos los casos, la forma de transmisin es persistente circulativa. Para que la
mosca blanca adquiera al virus requiere de un perodo de alimentacin de cuando
menos 5 minutos, el cual va a depender del virus que se trate, su concentracin en el
tejido vegetal, el biotipo, etc. El perodo de alimentacin mnimo para inocularlo en
una planta sana es de 5 a 60 minutos y el perodo de incubacin es de 8-12 horas.

xlix
El principal vector es Bemisia tabaci y transmiten virus cuyos sntomas principales
son: aclareamiento de nervaduras, amarillamientos, enchinamientos, entre otros.
Algunos virus transmitidos son el Virus Mosaico Dorado del Frijol, Virus
Enchinamiento del Tomate, Virus Mosaico Amarillo de Chile, etc.

VIRUS TRANSMITIDOS POR ESCAMAS

Las escamas tambin tienen la capacidad de transmitir virus; aun a pesar de que
carecen de movimiento, pero las hormigas las trasladan de un lado a otro. El virus
ms importante transmitido por estos insectos es el Virus de la Macroyemas del
Cacao; al cual no se conoce con certeza su perodo de incubacin, su perodo de
transmisin es de 36 das y tiene una incubacin de alrededor de 10 das.

VIRUS TRANSMITIDOS POR COLEPTEROS

Los colepteros transmiten virus circulativos y a diferencia de los hompteros,
poseen un aparato bucal del tipo masticador y en lugar de glndulas salivales
poseen glndulas gnetales las cuales secretan un jugo enzimtico en el tracto
digestivo. Todos los virus transmitidos por estos insectos conservan su infectividad
ante la accin de estas enzimas lo que no ocurre con otros virus. El perodo de
adquisicin de estos insectos es mayor de 5 minutos y el perodo de persistencia o
transmisin es de das a semanas. Cualquier virus adquirido por un coleptero es
detectado en el excremento, la hemolinfa y en el regurgitado que genera el insecto
en su alimentacin y que se piensa es la forma de transmisin. Las partculas de los
virus trasmitidos por escarabajos son de forma polidrica y miden alrededor de 30
nm de dimetro, son relativamente estables en el laboratorio y usualmente causan
mosaicos y moteados. Casi todas las especies vectoras pertenecen a la familia
Crysomelidae (Alticinae y Galerucinae) pero tambin la familia Coccinelidae y
Curculionidae (picudos) transmiten virus; la mayora de los virus transmisibles por
colepteros se encuentran en los grupos Comovirus y Tymovirus, encontrndose
principalmente al Virus Mosaico de la Calabaza ( Acalymma trivittata, Diabrotica
undecimpunctata y Ceratoma trifurcata), Virus Mosaico Sureo del Frijol (Ceratoma
spp., Diabrotica balteata y Epilachna varivestis), Virus Mosaico del Nabo, etc.

l
VIRUS TRANSMITIDOS POR TRIPS
Los trips presentan dos estadios larvarios pteros los cuales se alimentan de su
planta hospedante. Los siguientes dos o tres estadios larvarios muestran pequeas
protuberancias de alas, son inactivos y no se alimentan. El ltimo estadio preadulto
es una pupa encerrada en un capullo del cual sale el adulto. El virus ms
ampliamente estudiado, transmitido por estos insectos es el Marchitez Manchada del
Tomate, el cual se encuentra ampliamente distribuido, tiene un amplio rango de
hospedantes y es transmitido por Thrips tabaci, T. setosus, Frankiniella schultzei,
Frankiniella fusca, F. occidentalis y Scritothrips dorsalis; los cuales lo adquieren en
un perodo de 30 minutos, su latencia es de 5 a 12 das y su perodo de persistencia
es alrededor de tres semanas. Solamente las partculas virales adquiridas por el
insecto durante los primeros estadios larvales atraviesan el tracto digestivo y llegan a
las glndulas salivales para ser transmitidos en la etapa adulta. A pesar de que el
estado adulto no es virulfero (virulento), ste puede adquirir al virus pero no logra
trasmitirlo, supuestamente debido a que conforme aumenta la edad del insecto,
decrece la permeabilidad del intestino. Otros virus reportados que pueden ser
transmitidos por estos insectos son el Virus Mancha Anular del Tabaco y el Virus
Mosaico del Chcharo.

VIRUS TRANSMITIDOS POR OTROS INSECTOS

Varias especies de piojos harinosos (Homptera: Pseudococcidae), han sido
reportadas como transmisores de algunas razas del Virus de la Macroyemas del
Cacao, el virus puede ser adquirido en una hora e inoculado en 15 minutos y
persiste por tres o cuatro das. El transmisor de este virus es Planococcoides
njalensis y el virus se caracteriza por ser de forma baciliforme, se transmite muy
fcilmente mecnicamente y posee un rango moderado de plantas. Dos especies de
tingidos son reconocidos como transmisores de virus en remolacha, uno se
encuentra reportado en Europa y otro en Norteamrica.

3.2.5.2. TRANSMISIN DE VIRUS POR HONGOS

li
Desde hace mucho tiempo se empez a manejar la posibilidad de que los hongos
transmitieran enfermedades virales, sin embargo, los trabajos se iniciaron en la
dcada de los 70's y fue Olpidium brassicae, el primer hongo reportado
transmitiendo al Virus de la Necrosis del Tabaco. Existen dos grupos de hongos,
ambos de la clase Phycomycetes, que se han reportado como transmisores de
enfermedades virales; en los Chytridiales, Olpidium brassicae, transmite al Virus
Satlite de la Necrosis del Tabaco, Virus Necrosis del Pepino, Virus
Macronervaduras de la Lechuga y Achaparramiento del Tabaco; en los
Plasmodiophorales, Polymyxa graminis transmite al Virus Mosaico del Trigo,
Mosaico de la Avena y Virus Mosaico Amarillo de la Cebada , y Spongospora
subterranea, transmite al Virus Mop-top de la Papa. Tambin se reporta que una
especie de Pythiaceae (Pythium ultimum) transmite al Virus X de la Papa. El hongo
adquiere al virus y lo retiene indefinidamente en el esporangio (se ha comprobado
que los esporangios de reposo de Olpidium brassicae pueden sobrevivir hasta ocho
aos y mantener al virus) y despus es diseminado por las zoosporas.

3.2.5.3. TRANSMISIN DE VIRUS POR NEMATODOS

La transmisin de virus por nematodos fue reportada desde 1958 por Hewitt, Rashi y
Gehen, demostrando que el nematodo Xiphinema index transmita al Virus de la
Hoja de Abanico de la Vid. Actualmente, dos grupos de virus son transmitidos por
estos habitantes del suelo; los Nepovirus, los cuales tienen partculas isomtricas
que miden alrededor de 30 nm de dimetro y los Tobravirus, los cuales la gran
mayora son de partculas tubulares. Los nematodos vectores de estos dos grupos
de virus corresponden al orden Dorylaimida, los cuales incluyen relativamente pocas
especies conocidas como parsitos de plantas y los gneros ms comunes como
transmisores de virus son Xiphinema y Longidorus (para Tobravirus) y Trichodorus
(para Nepovirus). Tanto los Nepovirus como los Tobravirus pueden ser adquiridos de
15 minutos a una hora y puede ser inoculados en un perodo ms o menos similar,
ambos grupos son retenidos por sus vectores por semanas y son transmitidos tanto
por las larvas como por los adultos, no existe evidencia de transmisin transovarial,
ni de multiplicacin del virus en el vector, se transmiten muy fcilmente

lii
mecnicamente, por semilla, y los sntomas generalmente son mosaicos y manchas
anulares. Algunos virus que son transmitidos por estos vectores son: Virus de la Hoja
de Abanico de la Vid (Xiphinema index y X. diversidaudatum), Mancha Anular del
Tabaco (X. americanus), Virus Anillo Negro del Tomate (Longidorus elongatus),
Virus Cascabeleo del Tabaco (Trichodorus pachydermus) y el Virus Bronceado
Temprano del Chcharo (T. teres).

3.2.5.4. TRANSMISIN DE VIRUS POR CAROS

Los caros transmisores de virus se encuentran en las familias Eriophydae y
Tetranychidae y se cree que transmitan virus del tipo circulativo ya que cuando estos
artrpodos mudan no se pierde la infectividad. El cuerpo de los adultos (que son los
transmisores de virus) es alargado y mide alrededor de 2 mm de longitud, se
alimentan principalmente de hojas y otras partes de las plantas y con su estilete y
dos pares de apndices que tienen en el rostro succionan, la savia de las clulas de
las plantas. Cuatro de los virus transmitidos por Eriophydae tienen partculas
filamentosas de alrededor de 700 nm de longitud, son transmisibles por savia y los
sntomas que causan son principalmente mosaicos y moteados. El caso ms
conocido es Virus Mosaico del Trigo que es transmitido por Aceria tulipae; el virus
puede ser adquirido en 15 minutos, persiste alrededor de 9 das y puede ser
transmitido despus de 15 minutos. Los adultos no adquieren al virus pero si lo
transmiten. Otros virus transmitidos por caros son el Virus Mosaico del Higo (Aceria
ficus), Virus Mosaico del Durazno (Eriophyes insidiosus), el Virus Y de la Papa
(Tetranychus telarius) y el Virus Mancha Anular del Tabaco (Tetranychus spp).

3.2.5.5. TRANSMISIN DE VIRUS POR PLANTAS PARSITAS

En principio, la transmisin por injerto y la transmisin por plantas parsitas es de
manera similar, ya que ambos mtodos se pone en contacto el sistema vascular y
las clulas. La transmisin se realiza por medio de unas estructuras que poseen
estas plantas llamados haustorios. Alrededor de 20 especies de Cuscuta han sido
usadas para transmitir virus, sin embargo, Cuscuta campestris y Cuscuta subinclusa,
son las especies ms importantes al transmitir 24 y 12 virus, respectivamente. Los

liii
virus ms importantes transmitidos por plantas parsitas son el Virus Mosaico del
Pepino, Mosaico del Tabaco y Virus Mosaico del Meln.

3.2.5.6. VIRUS TRANSMITIDOS POR VERTEBRADOS

Dentro de los vertebrados transmisores de virus el hombre es considerado factor de
diseminacin ms importante ya que transmite virus por semilla (transporte), partes
vegetativas y labores culturales. Todos los animales vertebrados que se conocen
pueden transmitir virus de manera mecnica.

3.3. IDENTIFICACIN DE VIRUS

La identificacin de virus es considerado como el proceso mediante el cual se
diagnostica con precisin la presencia real del de los virus presentes en una planta
hospedante. Para diagnosticar una enfermedad, lo primero que hay que conocer es
la naturaleza de la misma, ya que ser la base primaria de identificacin del
patgeno causante y por tanto se implementarn las medidas de control pertinentes.
Cuando se nos presenta un problema en campo, en donde se especula la presencia
de patgenos; la primera muestra de que la planta est enferma ser basndose en
la sintomatologa que sta manifiesta. An a pesar de que los sntomas no son un
criterio bsico para determinar al agente causal de una enfermedad, si son de gran
utilidad para algunos, ya que los sntomas difieren del resto de los dems.

Comprobar la naturaleza infecciosa de la enfermedad

Antes que nada debe de determinarse que la enfermedad se puede transmitir de

una planta enferma a una sana, ya que solo las enfermedades de naturaleza
bitica son infecciosas. Este aspecto se prueba haciendo injertos de brotes de
plantas enfermas en plantas sanas cultivadas en invernadero. Es obvio que el
invernadero deber estar protegido para evitar el acceso de vectores.

A continuacin se mencionan algunas caractersticas para la identificacin de los

virus fitopatgenos.

liv
3.3.1. PRUEBAS DE ELIMINACIN DE VIRUS
El primer paso en la identificacin de un virus es saber si la enfermedad es causada
por ste y no por otros fitopatgenos como hongos, bacterias, nematodos,
micoplasmas, espiroplasmas, plantas parsitas, deficiencias de nutrientes, etc.

Para efectuar el diagnstico de enfermedades ocasionadas por plantas parsitas

superiores, solo se requiere encontrarlas en crecimiento activo sobre las ramas o
races de sus plantas hospederas. La presencia de nematodos fitoparsitos indica
que probablemente sea esta la causa de la enfermedad; si en un rea afectada se
localiza con la ayuda del microscopio biolgico se encuentra esporas de hongos y
bacterias entonces se recomienda aislar para realizar las pruebas de patogenicidad
con los microorganismos aislados. Si los sntomas de la enfermedad se reproducen
en una planta sana injertada se descarta la posibilidad de factores abiticos; si la
enfermedad se logra transmitir mecnicamente la enfermedad se considera de
origen viral; si no existe transmisin por savia y los sntomas se logran suprimir con
la aplicacin de tetraciclinas ser un micoplasma y si se hace con penicilina ser un
espiroplasma. Si los sntomas no desaparecen con la aplicacin de antibiticos
entonces ser un virus o viroide.

Una vez establecido que es un virus el causante de la enfermedad, se requiere de

una serie de pruebas para determinar su infectividad dentro de las cuales tenemos
las siguientes:

3.3.2. RANGO DE HOSPEDANTES

Desde hace mucho tiempo y hasta nuestros das los que se encargan del estudio de
los virus de plantas, utilizan hospedantes alternos en la identificacin de estos
patgenos, especialmente cuando estos son transmisibles por savia. Estos
hospedantes alternos responden con algn tipo de sntoma especfico (es mejor
cuando reaccionan con lesiones locales) al ataque de un virus y reciben el nombre
de plantas indicadoras o plantas diferenciales.

lv
El uso de plantas indicadoras es muy importante en los estudios de identificacin de
virus ya que mediante estas plantas se puede confirmar la presencia de un virus en
una planta cuando los sntomas sean desconocidos, son un factor de gran
importancia en la identificacin de enfermedades latentes causadas por virus y nos
pueden servir en la separacin de virus cuando exista un complejo viral atacando.
Las plantas indicadoras ms usadas en la identificacin de los virus son las
siguientes: Nicotiana glutinosa, Datura stramonium, Gomphrena globosa, Phaseolus
vulgaris, Chenopodium amaranticolor, C. quinoa, Physalis spp. etc., las cuales
reaccionan a los diferentes virus de plantas.

3.3.3. PROPIEDADES DE INFECTIVIDAD DE LOS VIRUS

Llamadas tambin propiedades fsicas de los virus y son usadas comnmente para
conocer la concentracin y estabilidad de las partculas virales en la savia. Las ms
importantes son el punto de inactivacin trmica (PIT), punto final de dilucin (PFD) y
la longevidad "in vitro".

3.3.3.1. PUNTO DE INACTIVACIN TRMICA (PIT)

Es la temperatura mxima que soporta un virus para seguir conservando su infectivi-
dad durante un perodo de exposicin de 10 minutos. La prueba es sencilla y
consiste en extraer al virus de la planta hospedante y depositar 5 ml de savia para
cada tratamiento. La savia se coloca en tubos de ensayo y se ajusta a distintas
temperaturas con un perodo de exposicin de 10 minutos y se separa con un
intervalo de 5 C; para mantener la temperatura constante se puede usar un bao
mara y una vez transcurrido el tiempo de exposicin se detiene el tratamiento
sumergiendo los tubos en agua helada. Posteriormente se inocula en plantas que de
preferencia reacciones con lesiones locales y en caso de no existir se usa plantas
que presenten sntomas sistmicos; es conveniente empezar a inocular del
tratamiento con mayor temperatura con el fin de evitar contaminaciones. El punto de
inactivacin trmica de de los virus tiene un rango de 45 C (como el Virus Marchitez

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Manchada del Tomate) hasta 95 C (algunas razas del Virus Mosaico del Tabaco),
pero la gran mayora est entre 55 y 70 C ; en virus ms complejos, como los que
poseen lpidos el PIT es bajo. Diferentes razas de un mismo virus pueden tener
diferente PIT; por ejemplo, para la raza B del Virus de la Necrosis del Tabaco est
entre 80 y 85 C, la raza A, entre 85 y 90 C y para la razas D y E, es de 90 a 95 C.

3.3.3.2. PUNTO FINAL DE DILUCIN (PFD)

Es la dilucin mxima que soporta un virus para seguir conservando su infectividad.
La metodologa consiste en extraer la savia de la planta enferma y se agrega un
mililitro en un tubo de ensayo que contenga 9 ml de agua destilada o solucin buffer
al 0.01 molar y un PH de 7.0 para tener la dilucin de 10 -1; el tubo se agita hasta
mezclarse bien la savia con el agua y de este se agrega a otro tubo con la misma
cantidad de agua para obtener la 10-2 y as sucesivamente hasta llegar a 10-8. Una
vez realizadas las diluciones, inocular en plantas que reaccionen con sntomas
locales iniciando con la dilucin ms alta. Esta tcnica depende de la concentracin
del virus, del diluyente, las condiciones y especies de las plantas donde se tom el
inculo, las plantas inoculadas y el abrasivo usado para facilitar la infeccin. El PFD
de la mayora de los virus se encuentra entre 10-1 a 10-7.

3.3.3.4. LONGEVIDAD IN VITRO

Es el tiempo que dura el virus fuera del tejido hospedante una vez extrada su savia
y sometida a temperatura ambiental. La savia se guarda en un frasco y se va
inoculando a intervalos de tiempo dependiendo del grupo de virus que crea uno que
tenga hasta que se pierda la infectividad. La longevidad "in vitro" vara de una hora
(Virus Mosaico de la Manzana) hasta ms de un ao (Virus Mosaico del Tabaco).

3.3.4. TIPO DE PARTCULA VIRAL

Con el descubrimiento de la microscopa electrnica se logr un importante avance
en la identificacin de los virus de plantas ya que basta en muchos de los casos, una
observacin del tipo de partcula del virus en estudio para diagnosticar al virus que
se encuentra presente

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3.3.5. FORMAS DE TRANSMISIN
Desde un principio debe intentarse la transmisin mecnica ya que este aspecto
permite hacer diversos estudios y da una idea del posible grupo de virus al que
pertenece el patgeno en estudio.

Independientemente de que se transmita o no de manera mecnica el agente

infeccioso, se debe probar la transmisin por insectos y de ser necesario, la
posible transmisin por hongos, nemtodos y otros agentes sospechosos de
actuar como vector.

3.3.6. PRUEBAS SEROLGICAS

Todas las tcnicas anteriores forman parte del protocolo formal para identificar
virus desconocidos en una regin. Sin embargo, en los diagnsticos de rutina su
uso es cada da menor, ya que otras tcnicas ms rpidas y eficaces, como la
serologa presentan amplias ventajas (y algunas desventajas).

Los mtodos serolgicos han sido reconocidos desde hace miles de aos en
animales que mostraban inmunidad a ciertas enfermedades. La mayora de las
reacciones inmunolgicas tienen un comn bsico. El agente inmunolgico, llamado
tambin antgeno (en la enfermedad el patgeno), estimula al animal a la formacin
de protenas llamadas anticuerpos que aparecen en el suero; estas reaccionan
especficamente con el antgeno que estimul su formacin. El suero que lleva a los
anticuerpos se llama antisuero, y al que no lleva se le conoce como suero normal. Si
el antisuero se mezcla con el antgeno que dio origen a los anticuerpos, se presenta
una reaccin homloga o positiva y cuando la mezcla no fue con los que dieron
origen la reaccin es heterloga o negativa.
La serologa constituye una de las herramientas ms importantes en estudios tales
como:

lviii
 -Diagnsticos rpidos y precisos
-Estudios epidemiolgicos
-Relaciones entre virus y entre sus variantes

Bases de la serologa
La tcnica se fundamenta en el conocimiento que se tiene sobre la reaccin
(produccin de anticuerpos) que ocurre en los animales de sangre caliente cuando
son invadidos por un agente extrao (antgeno; en este caso el virus).

Los antgenos son molculas o partculas constituidas por polisacridos y/o

protenas de elevado peso molecular, ajenas al animal inoculado. De hecho un
proceso similar ocurre diariamente en la naturaleza cuando los animales
sealados se defienden del ataque de microorganismos potencialmente
patgenos. En contraparte los anticuerpos son macromolculas producidas por el
animal inoculado natural o artificial mente. Las reacciones antgeno anticuerpo se
caracterizan por ser relativamente especficas. As un antgeno "A" dar origen a
un anticuerpo "A" y un antgeno "B" inducir la sntesis de un anticuerpo "B"; pero
ni "A" dar origen a "B" y viceversa; tampoco "A" ni "B" producirn anticuerpos C,
D...ni N.

Los anticuerpos son protenas del tipo de las gamaglobulinas especficas. Los
anticuerpos funcionan como un sistema de defensa especfica contra el antgeno
que indujo su formacin. Partculas de nucleoprotenas, tales como los virus,
funcionan como antgenos; en este caso, la cpside (cubierta de protena)
determina el tipo de antgeno, (segn el arreglo de sus aminocidos) que ser
producido.

Este fenmeno que ocurre de manera natural tambin puede ser inducido
inoculando animales con virus conocidos, con el fin de aprovechar los anticuerpos
producidos en estudios de identificacin y diagnstico de virus. La produccin
controlada de antisueros (anticuerpos presentes en SL suero sanguneo) se lleva

lix
a cabo en algunos centros de investigacin y en los ltimos aos constituye un
prspero negocio de algunos laboratorios que se encargan de producir los a nivel
comercial. Ejemplos de estas compaas internacionales son Agdia y Sanofi.

Produccin de antisueros
Aunque en si la produccin de antisueros no es una tarea complicada, para lograr
una alta calidad si se requiere de personal altamente capacitado. En trminos
generales el proceso consiste en inocular plantas susceptibles con el virus
especfico. Posteriormente el tejido infectado se macera y se somete a proceso de
extraccin con solventes, agentes de precipitacin y otras substancias,
auxilindose tambin con el uso de centrfugas y ultracentrfugas hasta obtener al
virus con la mayor pureza posible.
El virus purificado se inyecta mediante un programa calendarizado en algn
animal de sangre caliente, tales como conejos de Nueva Zelanda, caballos,
borregos u otros. El virus tiene que combinarse con substancias coadyuvantes
antes de inyectarse, para que el virus sea liberado lentamente y no cause un
shock en el animal.

Despus de cierto nmero de inyecciones y 5-10 das despus de la ltima, se

puede hacer un sangrado previo para checar la concentracin de los anticuerpos
en la sangre del animal. Una vez determinada la concentracin ptima, el animal
se puede sangrar parcialmente o se sacrifica (aplicando antes un anticoagulante),
tratando de obtener la mayor cantidad de sangre posible.

Se deja la sangre en reposo y una vez que esta se coagula, se separa el suero
que contendr los anticuerpos (antisuero), el cual se guarda congelado (15-25C)
en pequeas ampolletas cerradas hermticamente, previa incorporacin de un
microbicida. Este antisuero est listo para su uso, previa dilucin del mismo a las
concentraciones adecuadas.

Reacciones serolgicas

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Es posible aprovechar la capacidad de los anticuerpos para reconocer y acoplarse
con el antgeno especfico que indujo su formacin con fines de identificacin de
virus. Es decir si tenemos una muestra de una planta infectada con un virus "X"
desconocido, podemos utilizar nuestro banco de antisueros para tratar de
identificar al patgeno en estudio. Si al hacer reaccionar por separado cada
antisuero disponible, y entre nuestros antisueros est un antgeno "X", habr un
reconocimiento y una reaccin entre antgeno "X" y los antisueros conteniendo al
anticuerpo "X", pero no con los antisueros "Y", o "Z"; estos ltimos daran reaccin
positiva solo en el caso de que en la muestra hubiera los antgenos (virus)
especficos correspondientes.

Existen diversidad de tcnicas disponibles, cada una con ventajas y desventajas,

entre las ms usuales: Doble Difusin en Agar, Latex, Elisa, Dot Blot, etc. La
tcnica ELlSA es la ms usada en la mayora de los laboratorios.

3.3.6.1. DOBLE DIFUSIN EN AGAR

Para efectuar esta reaccin se emplea una caja de petri, con agar puro. Se hacen
perforaciones equidistantes de un agujero central. Para evitar que el antisuero y el
antgeno se difundan por el fondo del vidrio, se sellan las perforaciones con una gota
de agar lquido. En la perforacin central se coloca el antisuero y en la periferia la
savia del virus y se espera 24-72 horas para observar la reaccin la cual si es
positiva se manifestar en forma de media luna o espuela (cuando los antgenos
estn relacionados).

3.3.6.2. PRUEBA DE ELISA

Las tcnicas serolgicas convencionales (aglutinacin, doble difusin en agar)
tenan numerosos inconvenientes, tales como una baja sensibilidad, o el efecto de
la forma la forma de la partcula, presencia de inhibidores de la reaccin presentes
en la savia. Estas desventajas quedaron superadas con la tcnica ELlSA, la cual
revolucion la serologa. Esta tcnica desarrollada inicialmente en patologa clnica
e inmunologa, fue adaptada en 1976 para utilizarse en la deteccin de virus

lxi
fitopatgenos. Desde entonces ha sido una de las tcnicas ms utilizadas, junto
con las tcnicas moleculares como PCR, que fueron desarrolladas poster. El
trmino ELlSA se deriva de "Enzyme-Lynked-Immuno-Sorbent-Assay" que puede
traducirse como "Ensayo de inmunoabsorbencia con enzimas conjugadas".

La ELlSA es ampliamente usada en investigacin por su alta sensibilidad y

especificidad, por su carcter prctico y verstil en su metodologa, lo que permite
trabajar gran cantidad de muestras con pequeas cantidades de tejido vegetal. Es
posible detectar virus an en plantas con sntomas muy tenues o asintomticas y
permite cuantificar concentraciones del virus. Tambin permite detectar virus en
semillas e incluso en insectos vectores. Tambin se pueden detectar hongos y
bacterias con ELlSA.

El mtodo ELlSA consiste bsicamente de cuatro fases principales:

1. La adsorcin de un antisuero especfico a la pared de un pozo de plstico.

2. Se agrega un extracto de la planta infestada. Las partculas virales se

adhieren a los anticuerpos portadas en el antisuero, que previamente se
adhiri a las paredes del pozo.

3. De nuevo se agrega el antisuero usado inicialmente, pero conjugado

previamente con una enzima (por ejemplo la fosfatasa alcalina). Este
conjugado se adhiere al virus, de tal forma que este queda atrapado entre
el conjugado y el anticuerpo agregado inicialmente (se forma un "sndwich"
con el virus en medio).

4. Se agrega un substrato sobre la cual pueda actuar la enzima conjugada. Al

combinarse la enzima con el substrato se registra un cambio de coloracin
a simple vista, cuya intensidad ser proporcional a la concentracin.

lxii
Cabe sealar que entre cada paso el pozo se lava con una solucin especial que
contiene detergente y se desecha el lavado, de tal manera que si la muestra de
savia no tena al virus correspondiente al antisuero utilizado, en el primer lavado
(despus del punto 1) los anticuerpos no atraparn ninguna partcula viral (dada
su especificidad). Si esto ocurre el conjugado (enzima-anticuerpo) tampoco se
pegar y ser eliminado por el segundo lavado. Despus al agregar el substrato,
este no ser afectado porque la enzima ya fue eliminada. En consecuencia no
habr cambio de coloracin.

Esta tcnica descrita es la que se usa con mayor frecuencia y se conoce como
"ELlSA Sndwich doble anticuerpo". Existen variantes de ELlSA, que se usan en
situaciones especiales.

Es claro que la tcnica es fcil de llevar al cabo, pero para que su utilizacin sea
confiable se requiere de experiencia, ya que pequeos detalles a veces son la
diferencia entre un diagnstico adecuado y uno errtico. La tcnica se facilita con
el uso de equipo apropiado y en algunos laboratorios bien equipados el
procedimiento es semiautomtico. Las placas con los pozos se pueden "leer" en
un espectrofotmetro especial, para cuantificar la concentracin del virus. Un
aspecto muy importante es la cantidad de antisueros que se tengan disponibles y
la calidad de los mismos. Algunas compaas como Agdia y Sanofi son
proveedores de equipo, reactivos y antisueros de alta calidad.

Cabe mencionar que desde la dcada pasada inici el desarrollo de las tcnicas
moleculares, las cuales hoy en da han alcanzado un alto desarrollo y su avance
es vertiginoso. Tcnicas como la de Reaccin de la Polimerasa en Cadena
(Polymerase Chain Reaction = PCR), tienen una sensibilidad mucho mayor que
ELlSA, de tal manera que muestras registradas como sanas mediante ELlSA
(porque el virus est poco concentrado) en realidad si estn infectadas. Estas
nuevas tcnicas tienen una gran importancia en la deteccin de virus en frutales,

lxiii
semillas, etc. Su utilidad prctica es grande en diversos casos: por ejemplo en la
certificacin de sanidad de semilla, material propagativo, etc.

Tcnicas moleculares
En este caso se usan tcnicas ms sofisticadas, que requieren de equipo especial,
que por su alto costo solo se tiene en aquellos laboratorios ms avanzados en la
investigacin en virolgica. Las tcnicas moleculares incluyen diversos aspectos
del anlisis bioqumico de los virus, entre ellas el anlisis del genoma vira!.
Ejemplos de estas son la Reaccin de la Polimerasa en Cadena tambin llamada
PCR, o la Hibridacin de cidos Nucleicos. Se caracterizan porque son muy
sensibles y ms precisas que otras tcnicas. Regularmente estas pruebas se
ejecutan, en casos especiales de diagnstico o con fines ms especficos. Sin
embargo, en la medida que los reactivos y el equipo utilizado sea ms barato y
cuando exista personas ms capacitado, estas tcnicas aparentemente se
volvern tan rutinarias como ELISA.

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UNIDAD IV. DESCRIPCIN DE LAS PRINCIPALES ENFERMEDADES
CAUSADAS POR VIRUS EN PLANTAS CULTIVADAS

4.1. DESCRIPCIN DE LOS PRINCIPALES VIRUS QUE AFECTAN

HORTALIZAS

4.1.1. VIRUS QUE AFECTAN TOMATE

4.1.2. VIRUS QUE AFECTAN CHILE

4.1.3. VIRUS DE CUCURBITCEAS

4.2. DESCRIPCIN DE LOS PRINCIPALES VIRUS QUE AFECTAN CULTIVOS

BSICOS

4.2.1. VIRUS QUE AFECTAN FRIJOL

4.2.2. VIRUS QUE ATACAN MAZ Y TRIGO

4.3. DESCRIPCIN DE LOS VIRUS QUE AFECTAN FRUTALES

lxv
4.3.1. VIRUS DE CTRICOS

4.3.2. VIRUS QUE AFECTAN PAPAYA

BIBLIOGRAFA CONSULTADA

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Mxico. 479 - 582 pp.

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lxvii