INGENIERA AMBIENTAL

Bachiller: Mara de los ngeles Gonzlez Salazar Profesor: Jess Prez

C.I. 23 702 693 Seccin 01
BIODEGRADACIN DE LA FRACCIN DE ASFALTENO PROVENIENTE
DE LOS CRUDOS HAMACA Y GUAFITA

Debido a diversos compuestos encontrados en suelos cercanos a la produccin

petrolera, la cual son considerados poco biodegradables, la contaminacin en los
mismos ha aumentado considerablemente por efecto de estos hidrocarburos. El
asfalteno, por ejemplo, es uno de ellos, debido a su compleja estructura molecular, por
lo tanto, posee una resistencia a la descomposicin microbiana elevada. El objetivo
principal de la tesis doctoral realizada por la LC. CELESTE FERNNDEZ fue evaluar la
biodegradacin de estos compuestos mediante una serie de sociedades bacterianas,
estos hidrocarburos son provenientes de crudos extra pesados y medianos.

Especficamente seleccion una pool o muestra de diferentes bacterias a raz

de un crudo extrapesado extrado del rea de exploracin Ayacucho, ubicada en la
Faja Petrolfera del Orinoco y mediano proveniente del estado Apure (Guafita),
estudiando las caractersticas que poseen cada una de estas bacterias provenientes de
los diferentes crudos de originar la degradacin en asfaltenos. Tambin, plante
ensayos para tratar a escala de laboratorio la eficiencia de bacterias aisladas y la
eficiencia de la lombriz roja (Eisenia fotida) en la degradacin del asfalteno en los
suelos. Conjuntamente se evalu la eficiencia en cuanto al sistema biolgico de la
degradacin en estos suelos mediante el uso de tcnicas cromatogrficas, resonancia
magntica nuclear de carbono, relacin de H/C y produccin de dixido de carbono,
para luego realizar un anlisis de cada uno de los resultados obtenidos para as
determinar la diferencia ms representativa en cada uno de los mtodos empleados.

Realizando una interpretacin de los resultados obtenidos para cada uno de los
objetivos planteados. De acuerdo a la seleccin de bacterias en diferentes tipos de
crudos se realiz una grfica donde se encuentran muestras de crudo Guafita y
Ayacucho, se pudo observar el crecimiento bacteriano y una fase estacionaria, la cual
indic que el crecimiento de las mismas se lleva a cabo al mismo instante en que
mueren; en esta etapa las bacterias compiten para sobrevivir, al agotarse el medio
nutritivo empiezan a consumirse entre ellas.

Las bacterias son las responsables de las reacciones de biodegradacin. En el

microcosmo Gbact, se introdujo bacterias degradadoras obtenidas del crudo, mientras
que en el tratamiento Glomb se generaron bacterias procedente del estircol y de los
excrementos de la Eisenia fotida. Las muestras de crudo medio y pesado fueron
depositadas en frascos con contenido de nitrgeno para su posterior degradacin.
Entre los das dos y tres se alcanzaron densidades poblacionales de uno 108 UFC/mL
en cada una de las atmosferas que contenan las muestras ya mencionadas, la cual
disminuy hasta obtener una densidad poblacional de 05 UFC/mL. Se llev a cabo la
prueba Gram, la cual permite identificar bacterias de acuerdo al color que adopte su
superficie, donde todas experimentaron cambio de tonalidad. Luego, teniendo en
consideracin el grupo morflogico perteneciente a cada microorganismo, se realizaron
pruebas bioqumicas. Finalmente se reconocieron las siguientes bacterias para los
diferentes tipos de crudos; Crudo Ayacucho: Pseudomonas aeruginosa, Crudo Guafita:
Citrobacter freundii, Citrobacter spp, Enterobacter agglomerans, Pseudomonas spp y
Pseudomonas aeruginosa.

El crudo Ayacucho presenta la bacteria Pseudomonas aeruginosa, adaptada a utilizar

al asfalteno como fuente de energa y carbono. Durante el proceso, el microorganismo
presenta un crecimiento acelerado y luego un estado estacionario, la cual se debe a
que estos son insolubles en agua y su estructura molecular dificulta el ataque de
microorganismos, por lo que la actividad vara muy poco. Mediante el comportamiento
bacteriano en la mineralizacin de asfalteno Ayacucho a travs del tiempo se observ
que los tratamientos sin introduccin de bacterias presentan menores promedios de
densidad poblacional. Entonces, respecto a la mineralizacin, la mayor produccin de
CO2 es en asfalteno con bacteria, respecto al asfalteno sin bacterias.

Se realiz un anlisis del espectro de FTIR, tanto en la muestra de crudo Guafita

como Ayacucho, donde se identificaron una serie de grupos funcionales, tales como
grupos OH y bandas atribuidas por humedad de muestra. Se localizaron grupos H-C
alinfticos, bandas de grupo carbonilo y carbonos aromticos. A su vez se encontraron
bandas que indican la presencia de alcanos, como grupos metilo y metileno, as como
tambin la presencia de azufre y cidos carboxlicos o ster, la cual desaparece en la
muestra de asfalteno tratado. Tambin se indicaron cambios estructurales producto de
la degradacin bacteriana.

Durante esta investigacin se realiz un anlisis comparativo entre la relacin H/C

en el crudo Ayacucho respecto al da cero, disminuyendo su valor, lo que sustenta la
degradacin, ya que esto indic un mayor grado de insaturacin, por ende, un mayor
carcter aromtico. Respecto al crudo Guafita, observ la actividad microbiana
presentando el mismo comportamiento que en el estudio realizado con el asfalteno
Ayacucho anteriormente descrito. De igual forma, la mayor produccin de CO2 se
present en el asfalteno con bacterias, respecto al libre de stas. En asfaltenos Guafita
se obtuvo una relacin de H/C de 1,10, lo cual demuestra que estos presentan una alta
aromaticidad en relacin con el crudo Ayacucho. Se observ que no existi variacin
en la relacin en el tiempo con bacterias, tambin se presenci cambios en los
heterotomos, lo que sustenta una pequea degradacin. En el caso de Guafita la
degradacin es ms complicada, posiblemente por ser una estructura ms aromtica
que el Ayacucho.

Se destaca que la muestra correspondiente al da cero de Ayacucho present una

mayor rea de carbonos aliftico, cuando se contrast con el tratamiento del da
catorce, obtenindose la mayor diferencia con respecto a la muestra del da cero. Esto
indica que los microorganismos presentes en el tratamiento son capaces de degradar
las cadenas alifticas, que estn como sustituyentes en los anillos aromticos de los
asfaltenos al transcurrir el tiempo, resultando una estructura ms aromtica del
contaminante. Respecto al crudo Guafita, luego del tratamiento, no se apreci con
exactitud la desaparicin de las seales, pero al calcular el porcentaje bajo la curva de
los carbonos alifticos y aromticos, en cada muestra al inicio y al final del tratamiento,
se tiene que la muestra correspondiente al da cero present un rea de carbonos
alifticos de 56% y en el tratamiento utilizando bacterias degradadoras de 49%.

De acuerdo a lo establecido en la norma para el control de la recuperacin de

materiales peligrosos y txicos de la Repblica Bolivariana de Venezuela, se establece
que un suelo, para biorremediar, tiene que cumplir ciertas especificaciones. La cantidad
de arcilla que posee este tipo de suelo, tiene la capacidad de almacenar agua y
nutrientes, la arena ayuda a conseguir una buena aireacin y permeabilidad. El suelo
present un potencial de acidez de 5,66, ste parmetro es importante para los
microorganismos degradadores, siendo los valores ms recomendables aquellos
comprendidos entre 6 y 8. Por lo que fue necesario aplicar carbonato de calcio para
elevar el pH a la neutralidad.

Ahora bien, los resultados obtenidos para conductividad elctrica del suelo
indicaron una baja concentracin de sales solubles, lo cual permite clasificar el suelo de
tipo no salino. Las concentraciones de los elementos K y Mg se encontraban en valores
de 168 y 136 ppm, condicin que resulta ptima, ya que las plantas requieren grandes
cantidades de ambos minerales para su desarrollo. En relacin con el crecimiento
bacteriano, el N es esencial para sintetizar aminocidos y enzimas, mientras que el P
ayuda a la formacin de compuestos energticos en la clula, que son usados en los
procesos de reproduccin y degradacin

La saturacin debe contener un valor mayor al 40 %, por lo que se determin que

el mismo deba mantenerse entre un 40 y 70% de su capacidad de retencin. Con esto
se logr que la humedad se encontrara en condiciones aceptables, para el buen
desarrollo de los organismos presentes en los microcosmos, como lo son las bacterias
y la lombriz Eisena fotida. De acuerdo con los valores obtenidos en la caracterizacin
del crudo Ayacucho, se pudo apreciar su alto contenido de asfaltenos 16 %, as como
su elevado porcentaje en resinas 29 %, mientras que los compuestos aromticos tienen
un 48 % y los saturados 6 %, y en el crudo Guafita se obtuvo una cantidad de 61 % de
saturados, 20 % de aromticos, 15 % de resinas y 4 % de asfalteno.

La contaminacin del suelo con asfalteno se realiz de manera que la cantidad de

contaminante fuera aproximadamente 1%. La materia orgnica presente en los suelos
es poco estable debido a la baja relacin carbono/nitrgeno (C/N), por ende fue
necesario establecer un medio como fuente de nutrientes para el crecimiento
bacteriano. La cantidad de lombrices a aadir en cada microcosmo se determin
siguiendo lo establecido por el Centro de Estudios, cada uno tena un rea de 0,038
m2, por lo tanto se determin que la cantidad de especies a aadir son ocho lombrices.
La relacin C/N de los residuos orgnicos afecta la velocidad de descomposicin,
cuando no hay suficiente N para el crecimiento adecuado, la degradacin de los
compuestos orgnicos es ms lenta. La relacin ideal es 30/1 y la presente en l es
aproximadamente 20/1, la cual se considera un valor casi aceptable. Esta variable se
midi cuantitativamente a travs del tiempo, pero la adicin de agua o medio mnimo se
hizo segn las condiciones y necesidades de la misma, sin crear excesos acuosos y
tratando de mantener las condiciones de humedad iniciales. Los valores de este
parmetro, se encuentran alrededor de 40%, lo cual garantizaba la humedad. Cada
microcosmo fue aireado constantemente para garantizar la presencia de oxgeno, el
cual facilita el crecimiento microbiolgico.

La curva de crecimiento del tratamiento con lombriz, sigue una tendencia similar a
la del tratamiento con bacterias, pero con una menor carga bacteriana. Los
microcosmos con Eisenia fotida alcanzaron mayores porcentajes de degradacin
durante casi todo el tratamiento. Se llevaron a cabo cuatro anlisis que permitieron
evidenciar los cambios ocurridos; el primero de ellos fue el anlisis FTIR, para
determinar los cambios en los grupos funcionales; el segundo tipo de anlisis fue RMN
C, mediante el cual se determin el entorno magntico de los tomos de carbono y se
evaluaron los desplazamientos qumicos; el anlisis elemental que permiti determinar
la relacin H/C y los porcentajes de los elementos C, H, N, S y O en los asfaltenos y la
respirometra que determin la produccin de CO2 derivados por los microorganismos
en la degradacin de la materia orgnica. Al analizar los espectros de los asfaltenos
Guafita y Ayacucho obtenidos al final de cada tratamiento a los 49 das, la identificacin
de los grupos funcionales se puede interpretar dividiendo la figura en varias zonas de
absorcin, caractersticas de los compuestos.

El suelo virgen utilizado en los tratamientos presenta poco contenido de materia

orgnica, baja conductividad elctrica y pH ligeramente cido. El estircol utilizado
posee alto contenido de materia orgnica y proporciona cantidades adicionales de
fsforo y nitrgeno, favorables para el crecimiento bacteriano. Los microorganismos
degradadores de asfalteno fueron, para el Crudo Ayacucho la Pseudomonas
aeruginosa y para el Crudo Guafita, Citrobacter freundii, Citrobacter spp, Enterobacter
agglomerans, Pseudomonas spp y Pseudomonas aeruginosa. De la prueba de Tukey
se concluye que los valores de degradacin de asfalteno, humedad, respiracin celular
y potencial de acidez, para el tratamiento con la Eisenia fotida y con cepas
bacterianas muestra homogeneidad para ambos crudos, no arrojando ninguna
diferencia significativa en cada tratamiento, pero si presenta en algunos casos
heterogeneidad con respecto a los microcosmo control.

El porcentaje de degradacin obtenido en los tratamientos con Eisenia fotida

para el asfalteno Ayacucho fue de 92% m/m en comparacin con el tratamiento de
microorganismos aislados fue de 56 % m/m, y el crudo Guafita, la fraccin degradada
de asfaltenos en el tratamiento con lombrices fue de 83 % m/m, y con bacterias de un
76 % m/m. La investigacin a desarrollar presenta una alternativa en el marco
ambiental, ya que plantea la biodegradacin de las fracciones recalcitrantes de
asfaltenos en diferentes crudos en suelos contaminados, cuando se aplican tcnicas de
biorremediacin reduciendo con esto el impacto ambiental que provoca al derramarse
el petrleo.