METODOS DE SEPARACION DE SUSTANCIAS: CROMATOGRAFIA EN PAPEL DE
FILTRO
Blgo. Kelvin FACUNDO SALAS
1. INTRODUCCION
La CROMATOGRAFIA es Un mtodo que se usa en bioqumica, para separar
componentes de una mezcla en solucin, estos componentes se desplazan a diferentes velocidades en una fase estacionaria. Existen diferentes tipos de cromatografa como la cromatografa de gases, de reparto, de intercambio inico, de capa fina, en gel de poliacrilamida y cromatografa en papel de filtro la que ser utilizada en la presente prctica con fines didcticos.
La cromatografa en papel de filtro se fundamenta en la solubilidad diferencial
de las sustancias en solventes orgnicos, las cuales migran sobre el papel, esta velocidad de desplazamiento se ve afectada por el tamao de los solutos, sus cargas elctricas, fuerzas hidrofbicas, fuerza de van der waals, puentes de hidrgeno y por el tamao de los poros de la fase estacionaria
Los solutos avanzan sobre la fase estacionaria segn sus coeficientes o
factores de retraso (Rf) y se mide en trminos relativos a la distancia avanzada por el frente de la fase mvil (FM)
2. OBJETIVOS:
- Extraer y separar los pigmentos fotosintticos mediante el uso de un
mtodo de separacin de sustancias: La cromatografa en papel de filtro - Determinar el factor de retraso para cada uno de los componentes separados
3. MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPOS: (materiales por cada mesa de
trabajo) - Hojas frescas de Spinacia olercea espinaca - Piln o mortero de piedra, vidrio o porcelana - Papel filtro - Tubos de ensayo de 10 mm * 15 cm con tapa rosca o caucho - Bagueta de vidrio - Vaso de precipitado de 100 ml - Placas petri de vidrio de 100 * 15 mm - Embudo de vidrio - Alcohol de 96 (Frasco de 100 ml) - Regla milimtrica - Cronmetro - Balanza de precisin
(*) Material de vidrio para cada mesa de trabajo
4. PROCEDIMIENTO:
4.1Extraccin de pigmentos:
4.1.1 Tomar 2 o 3 hojas frescas de espinaca y pesarlas
4.1.2 Colocarlas en el mortero e iniciar su trituracin adicionando alcohol de 96 a medida que este se vaya consumiendo 4.1.3 Filtrar sobre un tubo de ensayo haciendo uso de un embudo de vidrio con papel de filtro 4.1.4 Medir el volumen filtrado
4.2Separacin de pigmentos:
4.2.1 Transvasar el filtrado obtenido hacia un vaso de precipitado o una placa
petri 4.2.2 Cortar rectngulos de papel de filtro de 5 * 10 cm 4.2.3 Colocar el papel de filtro de forma vertical sobre la solucin 4.2.4 Esperar 30 minutos 4.2.5 Observar y reportar los resultados
5. RESULTADOS/OBSERVACIONES
Grafique los resultados obtenidos y complete la siguiente tabla
PIGMENTO COLO DISTANCIA SOLUTO DISTANCIA FASE FACTOR DE
R (cm) MOVIL (cm) RETRASO Clorofila A Clorofila B Beta caroteno Xantofila 6. CUESTIONARIO
1. Describa cromatografa y sus tipos
2. Explique que es el factor de retraso o coeficiente de retraso (Rf)