DETERMINACIN DE BACTERIFAGOS PROVENIENTES DE UNA

MUESTRA AMBIENTAL NATURAL

Resumen.
Palabras clave:
INTRODUCCIN.
Los virus son parsitos obligados de las clulas, pues no pueden reproducirse
fuera de ellas, de acuerdo a su hospedadero, existen virus animales, vegetales,
de hongos, de protistas, de bacterias y de archeas. Los bacterifagos, o fagos,
son virus que infectan exclusivamente bacterias y han sido importantes en la
exploracin de diferentes procesos genticos celulares. Recientemente han sido
objeto de renovada atencin debido a su potencial como controladores
biolgicos de bacterias patgenas, especialmente debido al incremento en la
resistencia a los antibiticos de dichos patgenos han desarrollado [M. Gmez.,
M. Vives. 2009].
Los bacterifagos se componen de un solo tipo de cido nucleico (ARN o ADN)
encapsulado por una cubierta proteica que exhibe los elementos estructurales
necesarios para una infeccin especifica. Algunos presentan una envoltura
lipdica que se deriva de la clula hospedera. La conformacin y organizacin
proteica de sus capsides les confiere la habilidad de permanecer viables por
largos periodos de tiempo en el ambiente en condiciones adversas, como la
exposicin a ADN-asas, variaciones de Ph Y temperatura [G. Gaviria et al. 2011].
Los bacterifagos han sido tomados como modelo de estudio de la gentica
bacteriana y mecanismos de control de la expresin gnica, debido a que los
hospederos bacterianos son fcilmente cultivables en el laboratorio [A.
Hernndez. 2007].
La generacin de aguas residuales es una consecuencia inevitable de las
actividades humanas. Estas actividades modifican las caractersticas de las
aguas de partida, contaminndolas es invalidando su posterior aplicacin para
otros usos []. En el ambiente de las aguas residuales, se encuentran gran
cantidad de bacterias de diferentes especies, por lo tanto, se encuentran tambin
los bacterifagos que infectan a estas mismas bacterias. La presidencia de
bacterifagos en aguas residuales, se explica, adems, por el hecho de que, en
el agua dulce, que constituye la base primaria, la abundancia de bacterifagos
es de 10 a 20 veces mayor que la clula hospedera [Fuhrman J, Schwalbach M.
2003]
El objetivo de este estudio, fue el de determinar la presencia de bacterifagos en
una muestra ambiental de origen natural que en este caso fue una muestra de
agua de un canal de aguas lluvias, ubicado en la parte posterior de los aires
acondicionados presentes en los bloques del gimnasio de la universidad
Santiago de Cali, Colombia.
METODOLOGA
Preparacin y Dilucin del lisado viral:
Inicialmente, se inoculo la muestra de agua residual con 3 ml de E. coli incubada
a 37 C. Seguidamente, se realiz un mezclado de las soluciones por agitacin.
Finalmente, se realiz un filtrado de la mezcla anteriormente preparada mediante
una bamba de vaco con un filtro de celulosa de 0,45um.
En base a la solucin filtrada (Lisado viral 1). Inicialmente se prepararon 2 tubos
rotulados con los nmeros 2 y 3; con 9 ml de solucin salina al 0,85%.
Seguidamente, con ayuda de una micropipeta de 100-1000ul, se tom 1ml del
lisado viral y se pas al tubo nmero dos y se mezcl sutilmente con agitacin
(Solucin 1x10-2). Finalmente, se tom 1 ml del tubo numero dos con ayuda de
una micropipeta 100-1000ul y se pas al tubo 3 mezclando las soluciones
sutilmente mediante agitacin (Solucin 1x10-3). Como se muestra en la figura
1.
Figura 1. Esquema de la preparacin y dilucin del lisado viral.

Mezclado del lisado con el cultivo bacteriano:

Inicialmente se rotularon tres tubos estriles vacos con las letras A, B y C.
Seguidamente con ayuda de una micropipeta, se transfiri 0,1 ml del cultivo
bacteriano de E. coli en cada uno de los tubos (A, B y C). Posteriormente, se
transfiri 0,1ml del tubo 1 hacia el tubo A y se mezcl con el vortex; de la misma
manera, se transfiri 0,1ml del tubo 2 hacia el tubo B y 0,1ml del tubo 3 hacia el
tubo C. Finalmente, los tubos A, B y C, se incubaron a temperatura ambiente
durante un tiempo de 10 minutos. Como se muestra en la figura 2.
Figura 2. Esquema del mezclado del lisado con el cultivo bacteriano.
Sembrado en placa:
Se etiqueto 3 placas de agar TS con cada una de las letras A, B y C. Se tom el
tubo A (Mezcla de lisado viral y cultivo bacteriano), se agreg 3 ml de ABTS, se
tap y se mezcl con ayuda del vortex; el contenido se verti en el centro de la
placa de agar A, girando sutilmente la placa para que el agar se distribuya de
manera uniforme. Este procedimiento, se realiz de la misma manera con los
tubos B y C en las placas B y C respectivamente. Como se muestra en la figura
3.
Figura 3. Esquema simplificado del sembrado en placa.
Calculo No. 1 clculo para hallar el ttulo de la placa ltica.
(#de placas lticas*factor de dilucin) / (volumen de siembra) = UFP/ml o UFP/g

Se cumpli con el protocolo propuesto por la gua de trabajo del laboratorio para
la bsqueda de bacterifagos usando la placa ltica y un cultivo de E. coli. No se
encontraron indicio en de placa ltica observando a simple vista y usando el
estereoscopio en ninguna de las diluciones ni en el inoculo puro. Se puede
especular que el agua residual muestreada no contena el bacterifago
especfico de la E. coli inoculada, no se descarta la presencia de otro tipo de
virus (patgenos para humanos o animales) y bacterifagos (de otras especies
de bacterias) en el agua.
la presencia de otros bacterifagos especficos para Salmonella typhi, Vibrio
cholerae , Salmonella sp, Shingella sp, para bacterias mesofilas pueden hallarse
en este tipo de muestras, por lo que se pudieron haber encontrado en el agua
residual proveniente del desage, pero debido a la naturaleza de este, que solo
recibe agua de lluvia y la proveniente de los aires acondicionados en poco
probable que se encuentren este tipo de bacterias, a menos que provengan por
contaminacin proveniente de las aves, roedores o insectos.
En caso de haberse presentado ndicos de lisado viral se realiza un clculo de la
cantidad de virus o el ttulo de la preparacin viral, este se calcula contando el
nmero de placas que produce una determinada dilucin de la muestra, y
haciendo las correcciones necesarias para llegar a la cantidad de virus en la
muestra original. Cada partcula infecciosa da origen a una placa de lisis, y se
denomina en este caso "Unidad Formadora de Placa" (UFP) usando la formula
encontrada en calculoNo.1 . El ttulo se expresa como "UFP/ml" o "UFP/g", segn
corresponda, en el caso de la placa ltica del laboratorio se reporta un contenido
de 0 UFP/Ml especfico para E. coli.

Conclusin
La muestra de agua proveniente del desage de aguas lluvias no contena
bacterifago especfico para la E.coli pero no se descarta la posibilidad de la
presencia de otros fagos, por lo que se recomienda la realizacin de una batera
de bacterias e inocularlas todas con la muestra y realizar el procedimiento que
se realiz en esta prctica, todo siempre y cuando se desee observar y aislar la
presencia de fagos en general, en caso de que se desee uno en especfico se
debe realizar con la bacteria especfica para el fago.
La bsqueda de fagos se recomienda en sustratos con alta carga microbiana,
como los provenientes de industrias, de redes domsticas o plantas de
tratamiento de aguas residuales.
BIBLIOGRAFA:
Manual de Depuracin de Aguas Residuales Urbanas. Alianza por el Agua.
Monogrficas en Centroamrica.
M. Gmez., M. Vives. Bacterifagos: Virus de Bacterias que Curan Infecciones
(2009). Apuntes Cientficos Unidos. Universidad de los andes.
G. Gaviria., M. Gonzales., J. Castao. Tcnica para aislamiento de bacterifagos
especficos para E. coli DH5a a partir de aguas residuales (2011). Universidad
de Quindo. Facultad de ciencias de la salud. Centro de investigaciones
Biomdicas. Grupo de Inmunologa Molecular. Colombia.
Hernndez A. Aislamiento, caracterizacin y deteccin precoz de bacterifagos
de Streptococcus thermophilus en la industria Lctea. [Tesis doctorado en
ciencias]. Oviedo: Universidad de Oviedo; 2007.
Fuhrman J, Schwalbach M. Viral influence on aquatic bacterial communities. Biol
bull 2003; 204:192-5.