INFORME PARA LA IMPLEMENTACIN DEL MTODO DE

COLIFORMES TOTALES

ENSAYO : COLIFORMES TOTALES

METODO : SMEWW 22nd Ed. 2012. Part-9221 B, Pg 9-66, 9-69 . APHA-AWWA-

WEF.Multiple-Tube Fermentation Technique for Members of the
Coliform Group. Standard Total Coliform Fermentation Technique .

PRODUCTO: Agua para Uso y ConsumoHumano, Aguas Naturales, Aguas Residuales

y Agua de Mar.

DETALLE ELABORADO POR REVISADO POR APROBADO POR

Nombre Gianina Aguilar Elvira Allende Jhonathan Romero

Cargo Analista II Analista I / Analista I Jefe Ambiental

Fecha 2017-07-04 2017-07-15 2017-07-25

Firma
 INFORME PARA LA DETERMINACIN DE COLIFORMES TOTALES

I. OBJETIVO :

Asegurar la validez de los datos resultantes asociados a un mtodo de ensayo desarrollado

adecuadamente bajo las condiciones del laboratorio mediante la evaluacin de los Parmetros de calidad.

II. APLICACION

Este informe contiene la evaluacin de los Parmetros de Calidad definidos para el anlisis de Coliformes
Totales segn la metodologa 9221 B. Multiple-Tube Fermentation Techinque for members of the Coliform
Group.Standard Total Coliform Fermentation Technique para muestras de agua de la matriz Agua de Uso y
Consumo Humano, Agua Natural, Agua Residual y Agua de Mar.

III. METODOLOGA
Para llevar a cabo la implementacin del ensayo de Coliformes Totales en muestras de aguas, fue
necesario realizar un control de la calidad de los medios de cultivo que se trabajaron y la verificacin de
los equipos.

3.1. MATERIALES Y EQUIPOS

3.1.1. Materiales y Equipos

- Incubadora: 35 C 0.5 C
- Autoclave: 121 C 1 C
- Estufa de esterilizacin: 170C 10C
- Balanza con resolucin de 0.01g
- Potencimetro
- Microscopio Compuesto
- Propipeta de 10, 1ml
- Pipetas estriles graduadas de 10mL, 1mL
- Frascos de 100mL
- Frascos de 250mL
- Placas petri 100 x 15 mm
- Tubos de 16x150 mm y 20x150mm
- Tapas N 16 y 20
- Durhams 75x10 mm
- Asa de siembra platinum iridium diametro 3mm
- Portaobjetos y cubreobjetos

3.1.2. Medios de cultivo :

- Caldo Lauril Sulfato
- Agar MacConkey
- Caldo Bilis Lactosa Verde Brillante
- Agar Nutritivo
- Caldo Tripticasa de Soya
3.1.3. Reactivos
- Coloracion Gram
- Fosfato Dihidrogeno de Potasio (KH2PO4)
- Cloruro de magnesio (MgCl26H2O)

3.1.4. Cepas:
- Escherichia coli ATCC 25922
- Staphylococcus aureus ATCC 25923
 IV. PRUEBAS ESTADSTICAS APLICADAS A LOS RESULTADOS

Matriz: Agua para Uso y consumo Humano ( Agua Potable )

Analista: Analista 1: Gianina Aguilar

Analista 2: Rosario Uzuriaga
Analista 3: Miguel Pajuelo

Fecha de Anlisis:

4.1. Resultados Experimentales

Se realiza la corrida de tres analista para evaluar homgenieidad entre analistas,para ello se evala la normalidad de
los datos:

Coliformes
O/T - Analista N de Ensayos Totales Analista
NMP/100mL
1 2.2 1
2 1.1 1
3 2.2 1
4 1.1 1
5 2.2 1
Ensayos 1
6 3.6 1
7 1.1 1
8 2.2 1
9 2.2 1
10 1.1 1
11 2.2 2
12 2.2 2
13 3.6 2
14 3.6 2
15 1.1 2
Ensayos 2
16 1.1 2
17 1.1 2
18 2.2 2
19 2.2 2
20 2.2 2
21 3.6 3
22 2.2 3
23 1.1 3
24 1.1 3
25 2.2 3
Ensayos 3
26 3.6 3
27 2.2 3
28 1.1 3
29 1.1 3
30 3.6 3
4.2. Prueba de Normalidad

Para verificar si la distribucin es normal, realizamos la Prueba de Normalidad de Anderson Darling.

Grfica de probabilidad de Coliformes Totales (NMP/100mL)

Normal
99
Media 2.077
Desv .Est. 0.9213
95 N 30
AD 2.473
90
Valor P <0.005
80
70
Porcentaje

60
50
40
30
20

10

1
0 1 2 3 4
Coliformes Totales (NMP/100mL)

Prueba de hiptesis:
H0: La concentracin de Coliformes totales se ajusta a una distribucin normal
H1:La concentracin de Coliformes Totales no se ajusta a una distribucin normal

Criterio usado para la prueba de hiptesis:

Si =0.05 < Pvalue no se rechaza Ho
Si =0.05 > P value Se rechaza Ho

Conclusin:
Como el p-value es menor que el nivel de significancia (=0.05), entonces los datos se ajustan a una
distribucin no normal, entonces se puede concluir que los datos son no paramtricos.
4.3. Homogeneidad de Varianza
Se realiza analisis de varianzas para verificar la homogeneidad entre los resultados de los analistas:

Prueba de Igualdad de Varianza : Coliformes Totales (NMP/100mL) versus Analista

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para deviaciones estndar

Analista N Inferior Desv.Est. Superior

1 10 0.515787 0.80966 1.72303
2 10 0.582502 0.91439 1.94590
3 10 0.695121 1.09118 2.32211
Prueba de Bartlett (distribucin normal) Prueba de Levene (cualquier distribucion continua)
Estadstica de prueba = 0.78, valor p = 0.677 Estadstica de prueba = 0.60, valor p = 0.555

Prueba de igualdad de varianzas para Coliformes Totales (NMP/100mL)

Prueba de Bartlett
Estadstica de prueba 0.78
1 Valor P 0.677
Prueba de Lev ene
Estadstica de prueba 0.60
Valor P 0.555
Analista

0.5 1.0 1.5 2.0 2.5

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Conclusin:
Como el p-value = 0.555, es mayor que el nivel de significancia (=0.05), entonces podemos
concluir que al 95% de confianza que los analistas reportan resultados similares con respecto
a sus varianzas. Las varianzas entre analistas son homogneas.

4.4. Homogeneidad de Media

Se realiza la Prueba de Kruskal-Wallis para verificar la homogeneidad entre los resultados de los analistas:

Kruskal-Wallis : Coliformes Totales (NMP/100mL) versus Analista

Analista N Mediana Clasificacin del promedio Z

1 10 2.200 14.2 -0.59
2 10 2.200 16.3 0.35
3 10 2.200 16.1 0.24
General 30 15.5

H = 0.36 GL = 2 P = 0.837
H = 0.41 GL = 2 P = 0.813 (ajustados para los vnculos)

Conclusin:
Como el p-value = 0.813, es mayor que el nivel de significancia (=0.05), entonces podemos
concluir que al 95% de confianza que los analistas reportan resultados similares con respecto a
sus medianas.
5. Veracidad
Para determinar la veracidad de los resultados con el valor de referencia, realizamos la Prueba de Wilcoxon.

Prueba de Wilcoxon: Coliformes Totales (NMP/100mL)

Prueba de mediana = 2.2 vs. mediana no = 2.2

Variable N Nmero de Prueba Estadistica de Wilcoxon P Mediana estimada

CT (NMP/100mL) 30 17 87.0 0.636 2.200

Conclusin:
Como el p-value = 0.636, es mayor que el nivel de significancia (=0.05), entonces podemos
concluir que al 95% de confianza los resultados son veraces, recupera el valor de referencia.

6. Verificacin de precisin segn el intervalo de confianza

Para verificar la similitud de precisin entre los resultados del laboratorio y valor referencial, verificamos que los
resultados obtenidos se encuentren dentro de los intervalos de confianza del valor de referencia, segn la tabla 9221:IV

Coliformes Totales
O/T - Analista N de Ensayos Analista
NMP/100mL

1 2.2 1
2 1.1 1
3 2.2 1
4 1.1 1
5 2.2 1
Ensayo1
6 3.6 1
7 1.1 1
8 2.2 1
9 2.2 1
10 1.1 1
11 2.2 2
12 2.2 2
13 3.6 2
14 3.6 2
15 1.1 2
Ensayo2
16 1.1 2
17 1.1 2
18 2.2 2
19 2.2 2
20 2.2 2
21 3.6 3
22 2.2 3
23 1.1 3
24 1.1 3
Ensayo3 25 2.2 3
26 3.6 3
27 2.2 3
28 1.1 3
29 1.1 3
30 3.6 3

Resultado Resultado Valor Lmites de confianza tabla del NMP

O/T Valor Referencial Referencial (9221: IV)
E-1 2.2 Lmite inferior 0.37
2.2
Lmite superior 8.2

Conclusin:
Los resultados obtenidos por el laboratorio en evaluacin, se encuentran dentro de los lmites de
confianza de la tabla 9221:IV al 95%, por lo tanto el laboratorio tienen similar precisin en sus
resultados.
Conclusin:
Los resultados obtenidos por el laboratorio en evaluacin, se encuentran dentro de los lmites de
confianza de la tabla 9221:IV al 95%, por lo tanto el laboratorio tienen similar precisin en sus
resultados.
 IV. PRUEBAS ESTADSTICAS APLICADAS A LOS RESULTADOS

Matriz: Agua Natural (Agua Superficial)

Analista: Analista 1: Gianina Aguilar

Analista 2: Rosario Uzuriaga
Analista 3: Miguel Pajuelo

Fecha de Anlisis: 2014-02-03 al 2014-02-10

4.1. Resultados Experimentales

Se realiza la corrida de tres analista para evaluar homgenieidad entre analistas,para ello se evala la normalidad de
los datos:

Coliformes
O/T - Analista N de Ensayos Totales Analista
NMP/100mL
1 790 1
2 1300 1
3 790 1
4 1700 1
5 1300 1
Ensayo 5
6 1100 1
7 790 1
8 1700 1
9 1300 1
10 790 1
11 790 2
12 790 2
13 1300 2
14 1400 2
15 1100 2
Ensayo 6
16 2200 2
17 1700 2
18 1300 2
19 790 2
20 1400 2
21 1700 3
22 1700 3
23 1400 3
24 1100 3
25 1100 3
Ensayo 7
26 2200 3
27 790 3
28 1300 3
29 1700 3
30 790 3
 IV. PRUEBAS ESTADSTICAS APLICADAS A LOS RESULTADOS

4.2. Prueba de Normalidad

Para verificar si la distribucin es normal, realizamos la Prueba de Normalidad de Anderson Darling.

Grfica de probabilidad de Coliformes Totales (NMP/100mL)

Normal
99
Media 1270
Desv .Est. 418.7
95 N 30
AD 1.055
90
Valor P 0.008
80
70
Porcentaje

60
50
40
30
20

10

1
500 1000 1500 2000 2500
Coliformes Totales (NMP/100mL)

Prueba de hiptesis:
H0: La concentracin de Coliformes totales se ajusta a una distribucin normal
H1:La concentracin de Coliformes Totales no se ajusta a una distribucin normal

Criterio usado para la prueba de hiptesis:

Si =0.05 < Pvalue no se rechaza Ho
Si =0.05 > P value Se rechaza Ho

Conclusin:
Como el p-value es menor que el nivel de significancia (=0.05), entonces los datos se ajustan a una
distribucin no normal, entonces se puede concluir que los datos son no paramtricos.
4.3. Homogeneidad de Varianza
Se realiza analisis de varianzas para verificar la homogeneidad entre los resultados de los analistas:

Prueba de Igualdad de Varianza : Coliformes Totales (NMP/100mL) versus Analista

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para deviaciones estndar

Analista N Inferior Desv.Est. Superior

1 10 231.938 364.088 774.809
2 10 285.288 447.836 953.031
3 10 287.990 452.077 962.056
Prueba de Bartlett (distribucin normal) Prueba de Levene (cualquier distribucion continua)
Estadstica de prueba = 0.49, valor p = 0.784 Estadstica de prueba = 0.15, valor p = 0.863

Prueba de igualdad de varianzas para Coliformes Totales (NMP/100mL)

Prueba de Bartlett
Estadstica de prueba 0.49
1 Valor P 0.784
Prueba de Lev ene
Estadstica de prueba 0.15
Valor P 0.863
Analista

200 300 400 500 600 700 800 900 1000

Intervalos de confianza de Bonferroni de 95% para Desv.Est.

Conclusin:
Como el p-value = 0.863, es mayor que el nivel de significancia (=0.05), entonces podemos
concluir que al 95% de confianza que los analistas reportan resultados similares con respecto
a sus varianzas. Las varianzas entre analistas son homogneas.

4.4. Homogeneidad de Media

Se realiza la Prueba de Kruskal-Wallis para verificar la homogeneidad entre los resultados de los analistas:

Kruskal-Wallis : Coliformes Fecales (NMP/100mL) versus Analista

Analista N Mediana Clasificacin del promedio Z

1 10 1200 13.2 -1.01
2 10 1300 15.7 0.07
3 10 1350 17.6 0.95
General 30 15.5

H = 1.28 GL = 2 P = 0.527
H = 1.34 GL = 2 P = 0.511 (ajustados para los vnculos)

Conclusin:
Como el p-value = 0.511, es mayor que el nivel de significancia (=0.05), entonces podemos
concluir que al 95% de confianza que los analistas reportan resultados similares con respecto a
sus medianas.
5. Veracidad
Para determinar la veracidad de los resultados con el valor de referencia, realizamos la Prueba de Wilcoxon.

Prueba de Wilcoxon: Coliformes Totales (NMP/100mL)

Prueba de la mediana = 1100 vs. la mediana no = 1100

Variable N Nmero de Prueba Estadistica de Wilcoxon P Mediana estimada

CF (NMP/100mL) 30 26 225.0 0.213 124

Conclusin:
Como el p-value = 0.213, es mayor que el nivel de significancia (=0.05), entonces podemos
concluir que al 95% de confianza los resultados son veraces, recupera el valor de referencia.

6. Verificacin de precisin segn el intervalo de confianza

Para verificar la similitud de precisin entre los resultados del laboratorio y valor referencial, verificamos que los resultados
obtenidos se encuentren dentro de los intervalos de confianza del valor de referencia, segn la tabla 9221:IV.

Coliformes
O/T - Analista N de Ensayos Totales Analista
NMP/100mL
1 790 1
2 1300 1
3 790 1
4 1700 1
5 1300 1
Ensayo 5
6 1100 1
7 790 1
8 1700 1
9 1300 1
10 790 1
11 790 2
12 790 2
13 1300 2
14 1400 2
15 1100 2
Ensayo 6
16 2200 2
17 1700 2
18 1300 2
19 790 2
20 1400 2
21 1700 3
22 1700 3
23 1400 3
24 1100 3
25 1100 3
Ensayo 7
26 2200 3
27 790 3
28 1300 3
29 1700 3
30 790 3

Resultado Resultado Valor Lmites de confianza tabla del NMP

O/T Valor Referencial Referencial (9221: IV)
E-2 1100 Lmite inferior 340
1 100
Lmite superior 2500

Conclusin:
Los resultados obtenidos por el laboratorio en evaluacin, se encuentran dentro de los lmites
de confianza de la tabla 9221:IV al 95%, por lo tanto el laboratorio tienen similar precisin en
sus resultados.