UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTAD DE CIENCIAS
E.A.P BIOTECNOLOGA

Induccin in vitro de callos en hojas de Passiflora edulis utilizando

cido 2,4-diclorofenoxiactico y Bencilaminopurina

AUTORES:

YEIK MANUEL DVILA ESCUDERO

DAVID JASON CALDERON CARDENAS

CURSO:

BIOTECNOLOGA AGRCOLA

Docente:

JULIO CHICO

CHIMBOTE - PER

2017
RESUMEN

Se realizaron tres ensayos en el Laboratorio de Biotecnologa de la biotecnologa de la

Universidad Nacional del Santa con el objeto de determinar el efecto de diferentes
concentraciones de 2,4 diclorofoxiacetico y bencilaminopurina (BAP) sobre la induccin in
vitro de callos de las especies Passiflora edulis o maracuy. El ensayo se realiz utilizando
discos foliares de maracuy de 3 meses de edad. Se utilizaron diferentes concentraciones de
BAP (0.75; 0.9; 1.2 mg.L) y 2,4 diclorofoxiacetico (1.5; 0.9; 1,2 mg.L), en un medio de 30 mL
para cada tratamiento con macro y micro sales MS con la adicin de 3 %(w/v) de sacarosa,
a un ph 5.8 y solidificado con agar al 1.5 % (w/v). Se utiliz un diseo estadstico ANOVA y
de promedios (3 concentraciones de BAP en conjunto con 3 concentraciones de 2,4 -D) con
15 repeticiones para cada tratamiento respectivamente. Se evaluaron los caracteres:
formacin de callo y peso de explantes a los 30 das (15 das oscuridad y 15 das luz) despus
de la inoculacin al utilizar discos foliares. Se logr satisfactoriamente la induccin de callos
a partir de maracuy, siendo como las concentraciones de mayor eficiencia las que fueron
impartidas en el tratamiento 1, mientras que los que arrojaron una menor tasa de produccin
de callos fue el tratamiento 3.

Palabras clave: Ensayo, In vitro, concentraciones, discos foliares

INTRODUCCION

La Passiflora edulis se considera originaria de la regin amaznica, aunque crece de forma

silvestre en un rea que abarca principalmente desde Colombia hasta el norte de la Repblica
Argentina y Uruguay; en Paraguay, donde es considerada como flor nacional, las distintas
variedades estn adaptadas a regmenes ms o menos tropicales. A lo largo del siglo XIX las
variedades de utilidad gastronmica se introdujeron con xito en Hawi, Australia y otras islas
del Pacfico sur. Las condiciones climticas favorables hicieron que la planta se adaptara
rpidamente; si bien en Hawi la explotacin comercial no tuvo verdadero impulso hasta
mediados del siglo XX, la planta era frecuente en estado silvestre desde haca dcadas.
El cultivo de la pasionaria se ha extendido a numerosas islas del Caribe, Israel, el archipilago
malayo y la Polinesia. (Blog-Agroforum:Bruno Cillniz)

NOMBRE CIENTFICO O LATINO: pasiflora edulis

NOMBRE COMN O VULGAR: maracuy granadilla, frutos de pasionaria, fruta de la pasin,
maracuy de Brasil, parcha, parchita.
FAMILIA: passifloraceae (pasiflorceas).
ORIGEN: Brasil

CLASIFICACIN CIENTFICA O TAXONOMIA

DIVISIN: Espermatofita
SUBDIVISIN: Angiosperma
CLASE: Dicotiledonea
SUBCLASE: Arquiclamidea
ORDEN: Perietales
SUBORDEN: Flacourtinae
FAMILIA: Plassifloraceae
GNERO: Passiflora
SERIE: Incarnatae
ESPECIE: Edulis
VARIEDAD: Purperea y Flavicarpa

Existen dos variedades de maracuya:

-Maracuy amarillo (P. edulis variedad flavicarpa): son de hojas simples, miden entre 7 a
20cm de largo, de color verde profundo y plido en el envs.
-Maracuy morado (P.edulis variedad prpura): De color prpura y ms pequea que la
anterior mencionada.
La pasionaria es una planta trepadora; puede alcanzar los 9 metros de longitud en
condiciones climticas favorables, aunque su perodo de vida no supera por lo general la
dcada. Su tallo es rgido y leoso; presenta hojas alternas de gran tamao, perennes, lisas
y trilobuladas, de color verde oscuro. Las races, como es habitual en las trepadoras, son
superficiales.
La flor se presenta individualmente; puede alcanzar los cinco centmetros de dimetro en las
variedades silvestres, y hasta el doble en las seleccionadas por su valor ornamental. Es
normalmente blanca, con tintes rosceos o rojizos, en P. edulis; otras especies presentan
colores que van desde el rojo intenso hasta el azul plido. Contienen el Jugo de color amarillo
opaco, bastante cido y muy aromtico, de sabor agradable.
Crece con gran facilidad en climas clidos al igual que en climas templados, y en lugares con
bajas temperaturas el inicio de su produccin se retarda. En esta forma, la temperatura media
ptima para el desarrollo adecuado de esta planta se sita entre los 24 C y 28 C. Tolera las
pocas secas, aunque en periodos muy prolongados de sequa sus hojas caen, poniendo en
peligro la vida de la planta.
La flor del maracuy puede alcanzar los cinco centmetros de dimetro en las variedades
silvestres, e incluso hasta el doble en algunos casos, siendo por esta razn seleccionadas
por su valor ornamental. Esta es normalmente blanca, con tintes rosceos o rojizos, aunque
algunas especies muestran coloraciones que van desde el rojo intenso hasta el azul plido.

El cido 2,4-diclorofenoxiacetico es un herbicida sistmico hormonal auxnico muy comn,

usado en el control de malezas de hoja ancha. Tiene funcin de fitohormona en la induccin
de callos a nivel de cultivo in vitro y micro propagacin. Por ello su utilizacin de este regulador
en este proyecto que adems ha considerado usar 6-N-Bencilaminopurina el cual es un
regulador de crecimiento de las plantas de la clase de las citoquininas, por lo que se considera
que ser e inductor de organognesis en los callos formados en este experimento.

Cordova A. y colab. (2014): El objetivo fue establecer un mtodo eficiente para inducir la
formacin de callos in vitro a partir de explantes de M. dubia. Los explantes de hojas y nudos
fueron desinfectados y sembrados en medio MS suplementado con cido 2,4-D, BAP y Kin.
Los cultivos fueron mantenidos a 252C, en oscuridad por 2 semanas y posteriormente con
un fotoperiodo de 16 horas luz y 8 horas de oscuridad por 6 semanas. El tratamiento con 2
mg/L de 2,4-D y 0,1 mg/L de BAP estimul mayor callognesis en los tres tipos de explantes.
Los callos se generaron a partir de la primera semana (nudos), cuarta semana (hojas) y sexta
semana (pulpa) y estos fueron friables (hojas y nudos) y no friables (pulpa).

Beraud M. y colab. (2014): El objetivo fue estimular la produccin de callos, observar su

tipologa y respuesta organognica bajo diferentes medios de induccin y de diferenciacin
en explantes de cotiledn, hipoctilo y hoja de Ugni molinae. Los mayores porcentajes de
callos se lograron con cotiledones en un medio MS suplementado con 0,5 mg L-1 de cido
naftalenactico (ANA), como tambin en explantes de hipoctilo con 1,0 y 5,0 mg L-1 de ANA,
adems del testigo (62, 62, 74 y 64 %, respectivamente). El mayor tamao de callos se
observ en cotiledones y el menor en hojas. Posteriormente, los callos fueron transferidos a
un subcultivo sin reguladores de crecimiento, donde se observaron callos verdes, friables,
compactos y fenlicos, obteniendo la mayor sobrevivencia en callos inducidos con 0,5 mg L-
1
de ANA para cotiledn e hipoctilo y 1,0 mg L-1 de ANA en hoja.

Villalobos I. y colab. (1987): Los brotes de tres cultivos de caa de azcar B 4362, H 44-
3098 y H 54-775, se cultivaron in vitro en el medio de MS con 0, 1,5, 3, 4,5 y 6 mg / L de 2,4
- D con el fin de inducir la formacin de callos. Despus de un mes de incubacin, se
determinaron el tamao, la organognesis y el peso fresco del callo para cada tratamiento.
Los resultados mostraron que 3 mg/L de 2,4-0 produjeron el callo ms vigoroso. Para la
diferenciacin del callo, 2,4-D fue sustituido por 1 mg / L de cinetina y las plntulas obtenidas
se colocaron en el invernadero y posteriormente en el campo. Los callos perdieron su
capacidad para regenerar las plntulas despus de haber sido incubados durante veintids
semanas.
Quiones M. y colab. (2011) Tuvo como objetivo lograr la desdiferenciacin celular para
obtener tejido calloso a partir de explantes de tallo y pecolo de Nicotiana paniculata tabaco
cimarrn. Los explantes se esterilizaron con solucin de Hipoclorito de Sodio (NaClO) al
2.5%, luego se les realiz pequeos cortes (heridas) y fueron introducidos in vitro en el medio
MS suplementado con 1mg/L de cido 2,4-D, 30g/L de sacarosa y 100 mL/L de agua de coco.
Posteriormente, los explantes se incubaron en un cuarto oscuro a una temperatura de 20-22
C. Como resultado se obtuvo callos en los explantes de tallos a los seis, trece y veinte das
de la introduccin in vitro. A los 30 das de cultivo, se observ el proceso de fenolizacin como
producto de la reaccin de oxidacin en los explantes, lo que caus el cambio de color de los
callos de blanco amarillento a pardo claro.

Snchez M. y colab. (2009): Su objetivo es establecer las condiciones in vitro para la

induccin de organognesis directa y caracterizar la capacidad de respuesta al cultivo in vitro
de dos genotipos de calabaza (Cucurbita pepo L.): variedad Brujita y Round Zucchini
(semilla sin testa) y establecer el proceso de aclimatizacin de las plntulas obtenidas va
organognesis in vitro. Se emple el medio de cultivo MS complementado con 1,0 mg/l de
BAP. Despus de tres semanas de induccin en el medio de cultivo, los explantes de las dos
variedades regeneraron brotes. Los brotes adventicios fueron subcultivados para su
elongacin y emisin de races en el medio de cultivo MS sin la hormona BAP.

Becerra D. (2003): Tuvo el objetivo de evaluar la capacidad morfogenetica de discos foliares

de Passiflora edulis de material in vitro. Se colocaron adaxialmente, 4 discos foliares en
frascos con medio de cultivo MS, suplementado con BAP y KIN gelidificado en Agar-Agar a
pH 5.8. Al utilizar dos citoquininas como el KIN y BAP, se indujo una mayor produccin de
brotes en los discos foliares y adems se observ la formacin de callos. Se asume que la
formacin de los callos se les atribuye a los niveles endgenos de auxinas y citoquininas
presentes en discos foliares.

Otahola V. (2000): El objetivo fue producir plantas de maracuy a partir de organognesis

directa de explantes foliares, de manera que favorezcan su utilizacin en mejoramiento
gentico. Se utiliz diferentes concentraciones de BAP en medio MS con sacarosa y
solidificado con agar. Se utiliz hojas jvenes de maracuy de 1 cm. de dimetro como
explante. Los callos formados en los tratamientos y distintas pocas tuvieron un color verde
claro y una consistencia compacta, desarrollados a partir del mesfilo foliar.

Otahola V. y Daz M. (2010): El objetivo fue evaluar la respuesta de dos tipos de explantes
tomados de plantas adultas de las especies de maracuy y determinar la dosis de BAP que
permite mayor regeneracin en ambos explantes. Se hizo dos ensayos, para determinar la
regeneracin de plantas en cultivo in vitro de maracuy, utilizando como explante discos
foliares y yemas axiales. Se us diferentes dosis de BAP en medio MS con sacarosa y
solidificado con Agar a pH 5.8. Al utilizar discos Foliares no hubo regeneracin en maracuy.
En la primera evaluacin realizada 15 das despus de la siembra en los explantes foliares
no hubo formacin de brotes, pero si de callos en todos los tratamientos.

Adam J. (2011): El objetivo fue evaluar los beneficios del cultivo de tejidos vegetales in vitro
en dos especies del gnero Passiflora, como alternativa de propagacin masiva de material
de siembra seleccionado, con alta calidad fitosanitaria y estabilidad gentica (clones). Para la
micropropagacin Los explantes de passiflora de desinfectados fueron cortados en secciones
nodales y foliares de 1 cm. se sembr en medio MS enriquecido con Nitsh y Nitsh, Agar,
Sacarosa, inositol, AIA y kinetina. Se vio que la kinetina determina los cambios en los niveles
endgenos de los reguladores de crecimiento de las secciones nodales, apareciendo callo,
de modo que los explantes presentaron un crecimiento de grosor, pero su elongacin fue ms
lenta respecto al patrn.

Severin C. y Colab. (2011): El objetivo fue evaluar la respuesta in vitro de dos explantos y 3
biotopos de P. caerulea, y determinar histolgicamente a travs de qu tejidos se da la
regeneracin. Se us medio MS con vitaminas de Gamborg, se adicion sacarosa, agar,
benciladenina. A pH 5.8 con NaOH y HCl antes de agregar agar. Los entrenudos mostraron
un marcado engrosamiento seguido por una proliferacin celular en los extremos. Mostraron
que los entrenudos presentaron un marcado engrosamiento seguido por una proliferacin
celular en los extremos.

La mayora de las plantaciones de maracuy en Per se realizan mediante semillas

cosechadas de siembras anteriores, sin embargo, estas son especies que presentan
polinizacin cruzada, realizada por insectos, lo cual causa una considerable variabilidad
genotpica y fenotpica dentro de las plantaciones, presentndose plantas con diferencias en
el crecimiento, tipos de frutos, maduracin y tolerancia a diferentes condiciones ambientales,
lo cual tiende a disminuir la productividad y hace ms difcil las labores culturales en las
plantaciones. La propagacin de estas especies a travs de la tcnica de cultivo in vitro puede
permitir obtener un gran nmero de plantas idnticas a la planta madre, de ah la importancia
de poder regenerar nuevas plantas a partir de plantas adultas, a las cuales se les conozca su
comportamiento agronmico.

Los trabajos realizados por Kantharajah y Dodd (1990) reportan la regeneracin de plntulas
de P.edulis a partir de segmentos nodal es utilizando 8,88M de bencil adenina (BA). Los autores
tambin reportan la regeneracin de plntulas en gulupa mediante el empleo de segmentos
nodales y la multiplicacin de brotes utilizando explantes de hoja.

Tomando en consideracin las ventajas de la propagacin asexual y las tcnicas de cultivo

de tejidos vegetales in vitro se realizaron estos ensayos, con el fin de evaluar la respuesta de
explantes tomados de plantas adultas de las especies de maracuy y determinar la
concentracin de 2,4-diclorofenoxiacetico y Bencilaminopurina (BAP), los cuales inducirn
callos y organognesis en los explantes.

Por tanto, el objetivo de esta investigacin fue inducir la formacin de callos in vitro a partir
de explantes de hojas de maracuy, a diferentes concentraciones de 2-4-D y BAP.
MATERIALES Y MTODOS

Poblacin muestral:

45 explantes de hoja de maracuy (Passiflora edulis)

Procedimiento:

Se colecto hojas jvenes de Passiflora edulis f. conocido comnmente como maracuy, de

aproximadamente 3 meses de edad, obtenidas en la agropecuaria Agromen Group S.A.C en
Chimbote, Ancash, Per. Esta colecta se realiz en el mes de junio del 2017. Los explantes
fueron obtenidos en pequeas macetas y una vez ubicados en el laboratorio de biotecnologa
de la Universidad Nacional del Santa, se procedi a realizar el corte de las hojas y la posterior
obtencin de los discos foliares mediante protocolo.

Una vez las hojas en el laboratorio, se procedi a realizarse los cortes respectivos con ayuda
de pinzas y sacabocado para obtener los discos foliares, los cuales tuvieron 1 cm. de dimetro
aproximadamente. Estos discos foliares fueron extrados de la seccin media de la hoja,
tomando parte de la nervadura central. Posteriormente, los cortes realizados se procedieron
a desinfectarse colocndolos en alcohol al 70% de concentracin por aproximadamente 30
segundos, luego se lav con agua destilada estril para posteriormente sumergirlo en
hipoclorito de sodio al 2.5% de concentracin por aproximadamente 2.5 minutos, finalmente
se lav con agua estril 3 veces. Dicho proceso descrito anteriormente se realiz en la cmara
de flujo laminar y en presencia de dos mecheros a una cercana de manejo menor a 20
centmetros con la finalidad de mantener la asepsia en el medio de trabajo.

Se utiliz diferentes concentraciones de 2,4-diclorofenoxiactico (1.5; 1.8 y 4.8 mg/L) y bencil-

amino-purina (BAP) (0.75; 0.9 y 1.2mg/L), ambos inductores trabajaron a la par
respectivamente en medio MS (Murashige y Skoog, 1962) suplementado con 30 g/L de
sacarosa y solidificado con 7 g/L de Agar-Agar. Se utilizaron frascos de vidrio de
aproximadamente 10 mL de capacidad total, en donde el volumen til de medio de cultivo
ser 2 mL. Este medio de cultivo se esterilizo en autoclave (Raypa) a 121C por 20 minutos.
se utilizararon 15 frascos vidrio por tratamiento con medio de cultivo, en cada uno de estos
fue depositado 1 disco foliar y 2 mL de medio de cultivo, de tal manera que por tratamiento
sern 15 discos por observar. Esto con la finalidad de dar a cada tratamiento un margen de
seguridad promedio. Una vez que fue cultivados los explantes en sus respectivos medios, las
capsulas se colocaron en oscuridad durante 15 das y luego colocados bajo fotoperiodo de
15 horas de luz y 9 horas de oscuridad por da a una temperatura oscilante entre 252C
(temperatura ambiente)
Los tratamientos (Tx) empleados fueron:

Tratamientos BAP 2-4-D Frascos Volumen(mL)

T1 0.75 mg/L 1.5 mg/L 15 30

T2 0.9 mg/L 1.8 mg/L 15 30

T3 1.2 mg/L 4.8 mg/L 15 30

Los parmetros evaluados sern:

a. Porcentaje de explantes o discos con formacin de callos, evaluados a los 15, 20, 25
das despus de la inoculacin. estos parmetros sern observados cualitativamente
a simple vista en cada uno de los tratamientos sometidos.

Se obtuvieron las siguientes proporciones de nutrientes necesarios para la preparacin de los

medios de cultivo de acuerdo con cada uno de los tratamientos establecidos de la siguiente
manera:
C1*V1=C2*V2

Obteniendo as los siguientes valores:

- Tratamiento 1 para 30 mL de medio de cultivo:

0.023 mL de BAP
0.045 mL de 2,4-D
0.9 gr. de sacarosa
0.12 gr. de medio MS
0.45 gr. de agar-agar

- Tratamiento 2 para 30 mL de medio de cultivo:

0.027 mL de BAP
0.054 mL de 2,4-D
0.9 gr. de sacarosa
0.12 gr. de medio MS
0.45 gr. de agar-agar

- Tratamiento 3 para 30 mL de medio de cultivo:

0.036 mL de BAP
0.144 mL de 2,4-D
0.9 gr. de sacarosa
0.12 gr. de medio MS
0.45 gr. de agar-agar
RESULTADOS:

Los ensayos realizados en un total de 45 unidades experimentales, distribuidos en 15

unidades por tratamiento hecho respectivamente (tratamiento 1, tratamiento 2, tratamiento 3)
se obtuvo que en el tratamiento 1(ver tabla 1) hubo un mayor desarrollo de callo, mientras
que en el tratamiento 2(ver tabla 1) hay una disminucin de una unidad en la obtencin de
esta masa celular en crecimiento desmesurado, por otro lado, en el tratamiento 3 hay an
una reduccin mucho mayor respecto al tratamiento 1 en cuanto a la formacin de callos. Si
observamos detenidamente, veremos que las concentraciones de los reguladores de
crecimiento van en incremento partiendo desde el tratamieno 1 hacia el tratamiento 3,
respectivamente de lo cual se puede determinar que las concentraciones ptimas para la
generacin de callos utilizando 2,4 Diclorofenoxiacetico y bencilaminopurina estn dentro
del margen utilizado en el tratamiento 1. Mientras que las utilizadas en el tratamiento 3 son
las menos efectivas en cuanto a la induccin de callos (ver tabla 1).

En cuanto a la no obtencin de callos vemos que el que tiene menor nmero de resultado es
el tratamiento 2 con una unidad por experimento; sin embargo, es el tratamiento 2 el mismo
que tiene mayor ndice de muestras contaminadas, seguido del tratamiento 3 en cuanto a
contaminacin y el tratamiento 1 con menor ndice de contaminacin.

Tabla 1: ANALISIS DE RESULTADO DE FORMACION DE CALLOS Y CONTAMINACION

TRATAMIENTO TRATAMIENTO TRATAMIENTO PROMEDIO
DESCRIPCION
1 2 3

Con callos 9 8 7 8

Sin callo 3 1 3 2.3 <> 2

Contaminado 3 6 5 4.6 <>5

Total 15 15 15 15

De acuerdo con lo observado en la tabla 1 podemos ver que los diferentes tratamientos
respondieron de acuerdo con el objetivo planteado, puesto que la cantidad promedio de
formacin de callos es de 8 unidades experimentales por total del experimento realizado.
Respecto a la no formacin de callos se puede ver que se trata de 2 unidades en promedio
por experimento total. Por otro lado, vemos que la cantidad de muestras contaminadas en
promedio es de 5 unidades lo cual es evidencia de algn tipo de mala manipulacin de
condiciones aspticas durante la inoculacin de los explantes en el medio de cultivo.

Modelo estadstico:

De acuerdo con los resultados obtenidos, para la realizacin del modelo estadstico de
anlisis de varianza (ANOVA) se procedi a realizar la construccin de la matriz estadstica
en base a una clasificacin cualitativa elegida subjetivamente en una escala del 1 al 10 en
base a la formacin de callos en los tratamientos preparados, cada valor obtenido se ingresa
de manera aleatoria en el modelo estadstico propuesto.
 Tabla 2. RESULTADOS DE LA MASA DE LOS CALLOS FORMADOS
Tratamiento 1 Tratamiento 2 Tratamiento 3
0.0707g 0.0768g 0.0374g
0.0302g 0.0642g 0.0448g
0.0601g 0.0401g 0.0341g
0.0834g 0.0398g 0.0411g
0.0551g 0.0546g 0.0458g
0.0484g 0.0485g 0.0523g
0.0636g 0.0504g 0.0370g
0.0572g 0.0507g 0.0563g
0.0265g 0 0.0276g
0.0905g 0 0
0.0351g 0 0
0.0639g 0 0
0 0 0
0 0 0
0 0 0
0.0457 0.0283 0.0251 PROMEDIO

En esta tabla se detallan los resultados obtenidos en cuanto a la masa de los callos formados
en los explantes en cada uno de los tratamientos realizados. Con estos datos obtenidos es
posible obtener los resultados del modelo estadstico propuesto, el cual es el anlisis de
varianza (ANOVA). Los pesos de los callos formados difieren evidentemente en cada uno de
los tratamientos respectivos y podemos de esta manera determinar que en el tratamiento 1
se obtuvo mejores resultados en cuanto a la masa de los callos.
Al ingresar esta informacin en el programa informtico Excel office 2010 y hacer el
modelamiento estadstico propuesto llegamos a los siguientes datos, los cuales sern
detallados a continuacin:

De acuerdo con Tabla 2 decimos que:

Variable categrica: Muestras -> 3 tratamientos

Variable cuantitativa: Masa de los callos presentes en los explantes al cabo de 20 das de
exposicin a cada uno de los tratamientos establecidos.

Existen diferencias significativas entre los tratamientos a diferentes concentraciones de

factores de crecimiento a los que fueron expuestos los explantes de Passiflora edulis? Es
decir que se desea verificar si las concentraciones de los factores de crecimiento vegetal o
inductores de callos es similar entre los tratamientos o si al menos una difiere. Para ello se
plantea lo siguiente:
 Ho: T1 = T2 = T3
H1: Las medias de los tratamientos son diferentes, al menos uno.

Segn bibliografa, est establecido que si:

F tabla > F calculado -> Acepta Ho

F tabla < F calculado -> Acepta H1
En este punto tomaremos referencia de Tabla 4.

Anlisis de varianza de un factor:

Tabla 3. RESUMEN DE MODELO ESTADISTICO

Grupos Cuenta Suma Promedio Varianza
Tratamiento 1 15 0.6847 0.045646667 0.000866208
Tratamiento 2 15 0.4251 0.02834 0.00082919
Tratamiento 3 15 0.3764 0.025093333 0.000496148

En esta tabla se puede observar de manera resumida los datos estadsticos bsicos para la
realizacin de la investigacin.

Tabla 4. ANLISIS DE VARIANZA

Origen de las Suma de Grados de Promedio de Valor crtico

F Probabilidad
variaciones cuadrados libertad los cuadrados para F
Entre grupos 0.003662505 2 0.001831253 2.506795768 0.09365761 3.219942293
Dentro de los
grupos 0.030681643 42 0.000730515

Total 0.034344148 44

De acuerdo con los datos obtenidos en tabla 4 decimos que, varianza de tratamiento es
0.003662505 y la varianza del error es 0.030681643. En cuanto al modelo decimos que F
calculado es 2.506795768 y F tabla es 3.219942293; por lo tanto, llegamos a la conclusin
de que se acepta la hiptesis nula. Es decir, de acuerdo con el modelo planteado no existe
evidencia suficiente para aceptar la hiptesis de la investigacin, por lo cual se acepta la
hiptesis nula.
 FIGURA 1. DIAGRAMA DE CAJA Y BIGOTE

En la figura 1 vemos que los bigotes o brazos de las cajas nos indican el mximo y mnimo
en cada uno de los tratamientos y las lneas trazadas de manera horizontal en las cajas nos
indican el 50% de los resultados cuantitativos para cada uno de los tratamientos. Para ello el
programa informtico por defecto realiza el ordenamiento de los datos obtenidos y procede
de acuerdo con estadstica.

Explante con presencia de callos en los 3 diferentes tratamientos

1
DISCUSION

La induccin in vitro de callos en discos foliares de Passiflora edulis o maracuy, al cabo de

15 das se obtuvo en su mayora en aquellos explantes jvenes que tenan en su tratamiento
una menor concentracin de 2,4 - Diclorofenoxiacetico al igual que bencilaminopurina (BAP).
En este sentido, considerando las investigaciones de Otahola (1999) es que se puede
aseverar que es posible inducir callos in vitro a concentraciones moderadas de inductores de
crecimiento usando hojas de maracuy joven, puesto que el menciona que el establece la
concretacin de dicho fenmeno en discos foliares de maracuy joven, quien reporta que la
hormona BAP en todas las concentraciones utilizadas (0; 0,3; 0,6; 0,9 y 1,2 mg.l-1), induce la
formacin de callos y brotes, sobresaliendo la concentracin de 0.6 mg.L-1 en la formacin de
brotes en los explantes.
Durante la induccin de callos, de los tres tratamientos evaluados, se encontr que la
formacin de callo en los discos foliares de hoja de maracuy se presenta en la mayora de
explantes al cabo de 15 das. El anlisis estadstico aplicado, demostr que un mayor
porcentaje de formacin de callos se registr en los medios de cultivo suplementados con
2,4D: 0,045mL y la combinacin BAP: 0,023 mL.
Cabe mencionar que el material vegetal o explantes fueron colocados en oscuridad por 15
dias, posteriormente en luz por 15 das en el anaquel, que no se encontraba en condiciones
aspticas, por lo tanto los explantes estaban expuestos a condiciones ambientales muy
variables y en contacto con una gama de fuentes de contaminacin. No obstante, el mtodo
de desinfeccin aplicado en los discos foliares de maracuy permiti obtener bajos
porcentajes de contaminacin (20-30%). Esto demuestra la eficiencia del mtodo de
desinfeccin.

CONCLUSIN

Es posible realizar la induccin de callos en Passiflora edulis de manera ptima usando las
cantidades necesarias de inductores de crecimiento. El 2,4 -D es un inductor de callos por
excelencia utilizado en diversos ensayos de micro propagacin in vitro. Adems, el
bencilaminopurina es otro de los factores que contribuye en ello. Es importante considerar
que a muy bajas o altas concentracin de estos componentes anteriormente mencionados
podra resultar perjudicial para el cientfico y los objetivos planteados antes de la ejecucin
de dicho proceso. El tratamiento 1 que fue el medio de cultivo con concentraciones
moderadas de 2,4 D y BAP arrojando esta un promedio de 9 explantes con callos del total
de 15 repeticiones. Por otro lado, es vlido mencionar que el mantener las condiciones
aspticas contribuye a reducir el nmero de explantes contaminados y por consiguiente el
margen de error se reducira a lo mnimo.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

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