El estilo de vida de Streptomyces, un gnero
de bacterias Gram-positivas que pertenece al
phylum Actinobacteria, es en muchos
aspectos sorprendentemente similar al de
los hongos filamen- tes: ambos crecen como
hifas ramificadas que forman un micelio
vegetativo y se dispersan a travs de esporas
que se forman estructuras reproductivas
especializadas llamadas hifas areas, que
emergen de la superficie de la colonia hacia
el aire. Estas similitudes son
presumiblemente resultado de adaptaciones
a nichos ecolgicos similares, aunque los
mecanismos subyacentes tienen diferentes
orgenes evolutivos. Como los hongos, la
mayora de los estreptomicetos viven como
saprofitos en el suelo, aunque Streptomyces
spp. tambin habitan exitosamente una
amplia gama de otros nichos, tanto
terrestres como acuticos, y algunas cepas
son patgenos de plantas y animales1. La
insuperable riqueza y diversidad del
metabolismo secundario de Streptomyces ha
hecho de estos organismos valiosos
proveedores de antibiticos y otras
molculas bioactivas, y la produccin de
estos compuestos se coordina con el
programa de desarrollo de Streptomyces1.
Cuando una espora tpica de Streptomyces
encuentra condiciones favorables y griseus. A continuacin, se describe la
nutrientes, germina y uno o dos tubos
germinales emergen y crecen para formar
hifas (Figura 1). Estos tubos germinales
crecen por extensin de punta y ramificacin
para formar un micelio vegetativo,
encontrndose a menudo profundamente en
el sustrato circundante. En respuesta al
agotamiento de los nutrientes y otras
seales, tanto la produccin de metabolitos
secundarios
y se inicia la diferenciacin morfolgica. Las
hifas areas rompen la tensin superficial,
escapan del medio acuoso del micelio
vegetativo y crecen en el aire. Las hifas
areas se dividen por una forma de divisin
celular perfectamente controlada en cadenas
largas de compartimientos de presps, que
luego desarrollan paredes de esporas
gruesas, sintetizan un pigmento de esporas
grises y adquieren las otras caractersticas de
las esporas maduras. En comparacin con las
endosporas formadas por especies de
Bacillus, las esporas de Streptomyces son
mucho menos resistentes a condiciones
adversas, aunque pueden sobrevivir durante
largos perodos de tiempo en un estado
desecado. Por lo tanto, parece que las
esporas Streptomyces, en su mayora
latentes, estn bien adaptadas para la
dispersin del organismo en el medio
ambiente1.
En esta revisin, analizamos los avances
recientes en
biologa celular y gentica del crecimiento de
Streptomyces y la morfognesis del
desarrollo, centrndose principalmente en
Streptomyces coelicolor como organismo
modelo. Se discute la base molecular del
crecimiento apical y la ramificacin de las
hifas, seguida de un relato de los procesos
morfogenticos que permiten a las hifas
romper la tensin superficial y crecer en el
aire. La regulacin de la formacin de micelio
areo y su integracin con el metabolismo
secundario se resumen para el sistema mejor
entendido a este respecto: Streptomyces
reorganizacin del desarrollo de los
elementos del citoesqueleto, la divisin
celular, la segregacin de los cromosomas y
peptidoglycan montaje que conduce y lo que
sabemos sobre la regulacin de estos
procesos. Finalmente, se discuten los
avances recientes en el estudio de la
expresin gnica especfica de clulas, y se
describen nuevas herramientas y sistemas
que facilitarn en gran medida la
investigacin de la biologa del desarrollo de
Streptomyces.
Crecimiento y ramificacin de hifas
Una caracterstica definitoria de los
estreptomicetos es que crecen como hifas de
ramificacin y forman un micelio (Figura 1).
El crecimiento se produce a travs de la
extensin de la punta y la iniciacin de
nuevas ramas y, por consiguiente, el nuevo
material de la pared celular se sintetiza slo
en las puntas de las hifas2. Este pronunciado
crecimiento apical puede ser visualizado
usando conju- gados fluorescentes de
vancomicina (Figura 1) que manchan los
sitios donde el lpido precursor de
peptidoglicano II se exporta y se expone en la
superficie celular3,4. Este patrn es
sorprendentemente diferente del de la
mayora de las otras bacterias. En Escherichia
coli, Bacillus subtilis y muchos otros
organismos en forma de varilla, la elongacin
celular es orquestada por un citoesqueleto
helicoidal que est formado por el homlogo
de la actina bacteriana mreB5,6. Este
elemento citoesqueltico dirige la insercin
de nuevo peptidoglicano en la pared lateral,
dando como resultado la extensin celular y
la adquisicin de la forma de la varilla,
mientras que los polos de clulas
hemiesfricas permanecen inertes una vez
que se han formado como resultado de la
divisin celular. Por el contrario, la extensin
de la punta de Streptomyces no depende del
mreB, y la sntesis de la pared celular ocurre
en la punta de la hifa ms que a lo largo de la
pared lateral. Aunque todos los genomas de
estreptomicetos que han sido secuenciados
hasta el momento contienen dos genes
mreB, los estudios de S. coelicolor muestran
que estos genes tienen poco impacto en la
extensin de la punta en el micelio
vegetativo y se involucran principalmente en
la esporulacin en las hifas areas7 (G. muth,
personal comunicacin). Adems, muchas
otras actinobacterias, como las
corinebacterias y micobacterias en forma de
varilla, no tienen genes mreB y, sin embargo,
al igual que los estreptomicetos, crecen
apicalmente construyendo sus sobres en los
polos celulares4,7-10.
El modo de crecimiento apical independiente
de mreB en las actinobacterias depende de la
protena de la bobina en espiral DivIVA y
parece representar una nueva forma de
dirigir la maquinaria biosinttica
peptidoglucana, de una manera que es
distinta de las observadas durante el
crecimiento y la divisin celular de otros
bacterias En S. coelicolor, DivIVA es esencial
y tiene un fuerte impacto en la extensin de
la punta, la ramificacin y la forma de la
clula. Forma un gran foco en cada punta de
hifas en crecimiento, y no surgen tubos
germinales de esporas sin un foco DivIVA
asociado3 (Figura 1). Los ortlogos
ciornebacterianos y micobacterianos tienen
una localizacin apical y una actividad
morfogentica similares, y el agotamiento de
DivIVA en Corynebacterium glutamicum
conduce a la prdida del ensamblaje de la
pared celular polar y la conversin a una
forma de clula esfrica, mostrando que
DivIVA es requerido para el mreB
independiente extensin de la pared celular
en este organismo9. Similar Similar
tambin se han
reportado datos para Mycobacterium smeg-
Figura 1 | Ciclo de vida del desarrollo de
Streptomyces coelicolor. La germinacin de
una espora implica hinchazn, polarizacin
del crecimiento y aparicin de un tubo
germinal que se convierte en una hifa. Este
modo caracterstico de crecimiento
polarizado se muestra en las micrografas,
que muestran las zonas apicales del conjunto
de clulas-pared activas teidas con un
conjugado fluorescente de vancomicina
(rojo) y la localizacin de la protena
determinante de polaridad DivIVA marcada
con protena fluorescente verde mejorada
(EGFP; verde) en dos hyphae emergiendo de
una espora. Las hifas crecen por extensin de
la punta y se ramifican en un micelio
vegetativo que crece a travs y
profundamente en el sustrato, dando lugar a
la colonia vegetativa. En respuesta al
agotamiento de nutrientes y otras seales,
las hifas areas rompen la tensin superficial,
escapan del medio ambiente acuoso y crecen
en el aire. Las hifas areas se diferencian en
una larga cadena de compartimientos de
prespore, que luego desarrollan paredes de
esporas gruesas, sintetizan un pigmento
esporo de polictido gris y desarrollan las
otras caractersticas de las esporas maduras.
Las esporas en gran parte latentes son los
medios para la dispersin de este organismo
en el medio ambiente, y pueden
eventualmente germinar cuando encuentran
condiciones adecuadas. La barra de escala
representa 6 m.
En Streptomyces, la iniciacin de la extensin
de la punta durante la ramificacin de las
hifas requiere la seleccin y marcado de un
sitio donde se establezca el crecimiento,
definiendo as un nuevo eje de polaridad
celular. las enzimas que participan en la
exportacin y el montaje de peptidoglycan
debe ser contratado a este sitio para iniciar
el crecimiento y crear una nueva punta de
hifa. La imagen en tiempo transcurrido de S.
coelicolor en crecimiento muestra que
DivIVA se rene en un foco en la pared
lateral antes de que cualquier crecimiento
sea visible y que la nueva rama emerja de
este foco12. Adems, la sobreexpresin de
DivIVA conduce al ensamblaje de mltiples
focos a lo largo de la pared lateral, y el
crecimiento de la pared celular es
Vancomicina
Un antibitico que inhibe la biosntesis de la
pared celular al unirse al lpido precursor de
peptidoglicano II cuando el lpido II est
expuesto en la cara externa
de la membrana citoplasmtica.
matis8,11. La DivivA heterloga tanto de S.
coelicolor como de Mycobacterium
tuberculosis, pero no de especies de Bacillus
o Streptococcus, puede restablecer la
polaridad de crecimiento y la forma de
vstago de las cepas de C. glutami- cum,
agotadas en DivIVA. As, DivIVAs de
actinobacterias altamente divergentes
pueden cumplir esta funcin en el montaje
apical de pared celular9.
establecidos en tales focos, dando lugar a
mltiples ramas de formas aberrantes12.
Estos datos sugieren que Streptomyces
DivIVA puede actuar como una protena de
referencia que, directa o indirectamente,
recluta la maquinaria biosinttica de pared
celular a nuevos sitios. En contraste con el C.
glutami- cum en forma de varilla, en el que
DivIVA se rene en sitios de fase tarda de la
divisin celular y luego permanece en los
nuevos polos celulares9, las hifas de S.
coelicolor forman focos DivIVA y nuevas
ramas en sitios que no estn relacionados
con sitios de divisin o polos celulares
existentes. Esto es consistente con la
demostracin anterior de que la extensin
de la punta y la ramificacin son
independientes de la divisin celular13. Las
cuestiones importantes que an no se han
abordado incluyen la identificacin de las
protenas con las que Streptomyces DivIVA
interacta para iniciar la sntesis de la pared
celular y determinar qu tipo de estructura
intracelular DivIVA se forma en la punta hifal.
La punta de hifa es probablemente un punto
caliente al que se dirigen muchas funciones
importantes. El peptidoglicano, as como
otros componentes de la envoltura celular,
tales como los cidos teicoicos, las protenas
de la superficie celular y los lpidos de la
membrana, podran ser secretados y
ensamblados especficamente en la zona de
crecimiento apical, pero esto debe ser
investigado experimentalmente.
Curiosamente, la protena celulosa sinttica
Cs1A se encuentra en las puntas de las hifas,
interacta con DivIVA y parece estar
implicada en el depsito de un glucano no
enlazado hasta el momento en el envoltorio
celular14. Como otro ejemplo, la maquinaria
que produce y secreta el pptido surfactante
SapB (protena B asociada a esporas) parece
estar localizada en puntas de hifas (j.
Nodwell, comunicacin personal). Adems,
se encuentra una DnA translocasa codificada
por plsmido de la familia FtsK (tambin
conocida como familia SpoIIIe) en puntas de
hifas: la protena de transferencia TraB
participa en la transferencia conjugada del
plsmido pSG5 de Streptomyces y un TraB-
eGFP mejora la protena fluorescente verde)
se acumula la fusin en las puntas de
hifas15. DivIVA es claramente uno de los
marcadores moleculares que identifican este
sitio subcelular ocupado en Streptomyces,
pero tambin pueden estar involucrados
otros jugadores.
Formacin de micelio areo
Para romper la tensin superficial del medio
y crecer en el aire, S. coelicolor tiene que
recubrir sus hifas areas en una vaina
hidrfoba que est ausente de las hifas
vegetales que crecen en la fase acuosa y, en
los medios ricos, debe tambin producen el
pptido surfactante SapB16-18. Aunque la
vaina hidrofbica se identific por primera
vez mediante microscopa electrnica a
principios de los aos sesenta19,20 y SapB se
identific a principios de los aos
noventa21,22, ambos componentes
eludieron la caracterizacin gentica y
bioqumica durante muchos aos, incluso
despus de la secuenciacin completa de la S
coelicolor genome23. La reciente elucidacin
de la estructura de SapB, la identificacin de
los genes que especifican su produccin y la
caracterizacin de los componentes
principales de la vaina hidrofbica son, por
tanto, avances importantes en nuestra
comprensin de la morfognesis de
Streptomyces. La importancia de SapB. en los
medios ricos, S. coelicolor debe producir
SapB para permitir la formacin eficiente de
hifas areas21. Ahora sabemos que SapB es
especificado por el
rpido micelio areo
(ram) la formacin de clster de genes,
laboratorios de experimentos de clonaje de
escopeta. Por el contrario, la supresin del
racimo de ram, o el grupo de amf
orthologous en S. griseus, causa la prdida
de formacin de hifa area (el fenotipo
"calvo") en medios ricos25-27,30,31. La
funcin bioqumica de las protenas Ram
permaneci oscura hasta que se realiz que
el carboxilo terminal de RamC es similar a las
sintetasas lantibiticas24. Los antibiticos
son antibiticos oligopptidos ribosomales
sintetizados que son producidos por
bacterias Gram-positivas. Se traducen como
prepptidos inactivos que sufren extensa
modificacin post-traduccional antes de ser
escindidos para producir el pptido maduro.
La similitud de RamC con las sintetasas
lantibiticas plante la posibilidad de que
SapB estuviera estructuralmente relacionado
con lantibiticos y especificado por los genes
ram. Esto condujo directamente a un
descubrimiento clave en 2004 en el que SapB
se caracteriz estructuralmente y mostr ser
un pptido de tipo lantibitico derivado de
un prepptido codificado con ramS de 42
aminocidos por modificacin extensiva a la
trasmisin mediada por RamC24 (Figura 2) .
Aunque SapB est estructuralmente y
biosintticamente relacionada con
lantibiotricos, una clase importante de
productos naturales de estreptomicetos, no
tiene actividad antibitica aparente y parece
haber desarrollado una funcin distinta
como un pptido tensioactivo que es
importante para la diferenciacin de
estreptomicetos en medios ricos.
Chaplins y rodlins son componentes
principales de la vaina hidrfoba. SapB no se
produce en condiciones mnimas
medio y, sin embargo, S. coelicolor produce
hifas areas, lo que indica que existe una va
independiente de SapB de formacin de
micelio areo. Esta va independiente de
SapB est mediada por las protenas de la
vaina hidrfoba: los chaplins y los rodlins
(figura 3). En S. coe- licolor, la familia chaplin
consta de ocho protenas secretadas, ChpA-
H, que comparten un dominio hidrofbico
altamente conservado de ~ 50 aminocidos
llamado el dominio chaplin32-34. Chaplins se
puede subdividir en corto (de los cuales hay
cinco en S. coelicolor) o largo (de los cuales
hay tres en S. coelicolor) chaplins. Los cinco
chaplins cortos, ChpD-H, consisten en un
dominio chaplin precedido por un pptido
seal Sec (secrecin). Los tres chaplins
largos, ChpA-C, tienen un pptido de seal
Sec de amino-terminal, dos dominios de
chaplin que estn separados por una regin
de enlace flexible y una "seal de
clasificacin" C-terminal que se dirige al
chaplin para la unin covalente a la clula
por el peptidoglicano de las hifas areas por
enzimas sortasas32, 33 (Figura 3a). Los
chaplins se autoensamblan en filamentos de
amiloide en las interfases aire-agua in
vitro33, y es probable que los capelones
cortos estn anclados a la superficie de las
hifas areas in vivo a travs de la
heteropolimerizacin con los capelones
largos anclados en la pared celular forman
filamentos de chaplina hidrfobos (figura
3a).
la expresin de los genes chp se activa antes
de la formacin de micelio areo en medios
ricos y pobres, y una cepa suprimida para los
ocho genes chaplin no puede producir hifas
areas en medios mnimos y es severamente
Familia FtsK
Una familia de ATP-dependiente
ADN translocases que son
que contiene ramR, un gen que codifica un
regulador de respuesta que activa
directamente la convergencia tran-
24-28
deficiente en medios ricos30,35. Las cepas
que no pueden hacer tanto SapB como
chaplins son calvas bajo
30
importante en el cromosoma
descrito opern ramCSAB
(FIGURA 2). copias adicionales de la
ditions
. Sin embargo, la produccin forzada de SapB
segregacin e intercelular
Transferencia de ADN.
ram inducen una formacin rpida de micelio
areo29, y
los genes ram fueron identificados de forma
independiente por varios
sobreexpresin) sobre un medio mnimo, en
el que SapB
normalmente no produce, restaura
dbilmente el crecimiento Sin embargo,
usando microscopa electrnica de barrido,
se observ que en lugar de tener una
superestructura superficial de "cestera de
pares de rodillos" que es caracterstico de las
esporas de tipo salvaje (Figura 3c), el
mutante rdl-nulo posee una red
desordenada de filamentos finos33,35,37.
Por lo tanto, parece probable que los
filamentos de capilla estn organizados en la
ultraestructura ms grande de "rodillo" por
los rodlins (figura 3c). En apoyo de este
punto de vista, las esporas de otra especie,
Streptomyces avermitilis, cuyo tipo salvaje
carece de los genes rodlin pero que, sin
embargo, sufre un desarrollo normal, tienen
una ultraestructura superficial similar a la de
un mutante rdlA y rdlB de S. coelicolor 37.
Sealizacin aguas arriba no resuelta. La
produccin de chaplins y SapB es un paso
clave en el inicio de la diferenciacin celular
en S. coelicolor. Sin embargo, las vas de
sealizacin que conducen a su expresin
son todava mal
entendido. El regulador de respuesta RamR
activa directamente los genes para la
produccin y exportacin de SapB, pero
ramR no tiene gene geneticamente ligado de
gen kinase cognoscitivo, y no se conoce
actualmente nada sobre los mecanismos
reguladores que rigen directamente la
transcripcin de ramR, que es upregulated
en el inicio de formacin de micelio areo25.
Del mismo modo, se sabe poco sobre la
regulacin aguas arriba de los chaplins.
Se han identificado una serie de genes que se
requieren para la formacin de hifa area,
muchos de los cuales han recibido una
designacin bld (calva) debido a que los
mutantes carecen de la morfologa
caracterstica de colonias difusas del tipo
salvaje. Sin embargo, la forma en que estos
genes interactan para producir la formacin
de micelio areo es en gran medida oscura.
La produccin de SapB y chaplin en medio
rico requiere casi todos los genes bld hasta
ahora probados21,22,26,32 y la
sobreexpresin constitutiva de ramR
restaura la produccin de SapB y la
formacin de micelio areo a todos los
mutantes bld de S. coelicolor26, lo que
implica que el gen bld culmina en la
produccin de SapB. Se ha propuesto una
cascada jerrquica de sealizacin 34
extracelular basada en la capacidad de
algunos mutantes bld para restaurar
parcialmente la formacin de micelio areo
en otros mutantes bld cuando se crecen
juntos 22, 38 y una
Figura 3 | Modelo para el papel de los
chaplins y Sapb en la morfognesis.
a | Los chaplins largos (ChpA, ChpB y ChpC)
se exportan a travs del sistema Sec
(secretory) y se unen covalentemente a la
pared celular de las hifas areas mediante
una enzima sortase a travs de una seal de
clasificacin carboxi-terminal. El dominio
central de los capelones largos abarca la
capa de peptidoglicano y el tndem,
Los dominios C-terminales, chaplin
hidrfobos se encuentran en la superficie de
la pared celular. Los chaplins cortos (ChpD-H,
tambin exportados a travs del sistema Sec)
consisten en un solo dominio de chaplin y se
propone heteropolimerizar con los chaplins
largos para formar filamentos de chaplin
hidrfobos extendidos sobre la superficie
celular y los filamentos estn por
consiguiente anclados a la clula pared. b |
SapB (protena B asociada a las esporas) es
secretada durante la fase vegetativa de
desarrollo, y la evidencia sugiere que acta
como un surfactante, recubriendo tanto las
hifas areas nacientes como las interfaces
aire-agua para facilitar la aparicin de
filamentos areos
en la atmsfera. Los chaplins y rodlins son
secretados y polimerizan para formar la
vaina hidrofbica alrededor de las hifas
areas, facilitando adems la salida al aire. c
| Los filamentos de chaplin estn
organizados en estructuras de orden
superior por los rodlins (RdlA y RdlB) para
producir la caracterstica "cestera de pares
de rodlets" ultraestructura observada en la
superficie de esporas Streptomyces
coelicolor y hifas areas. Las partes a y b se
modifican, con permiso, de REF. 16 (2008)
Sociedad Americana de Microbiologa. La
parte c se reproduce, con permiso, de REF.
(2008) Sociedad Americana de
Microbiologa.
de las molculas de sealizacin putativas se
ha caracterizado como un oligopptido de
655 Da que es reimportado por un
transportador de casete de unin a ATP
oligopptido codificado por el locus
bldK38,39. Sin embargo, la mayora de los
genes bld caracterizados codifican factores
de transcripcin y no determinantes
evidentes de la produccin o importacin de
seales, y por lo tanto deben tener roles ms
indirectos, por ejemplo en la percepcin y / o
transduccin de la seal.
La cascada del factor A en S. griseus. En
comparacin con S. coelicolor, se entiende
bien la va de sealizacin que conduce a la
iniciacin de la formacin de micelio areo
en S. griseus. Central a esta va es la
hormona-
como el factor A de la molcula de
sealizacin de la \ gamma - butirolactona
(figura 4). En estreptomicetos, las -
butirolactonas se producen ampliamente,
pero sus papeles varan de especie a
especie40-42. En S. coelicolor, por ejemplo,
las -butirolactonas desempean un papel
importante en el control de la biosintesis
antibitica, pero no parecen estar implicadas
en la diferenciacin42