PROBLEMAS DE ENZIMAS

1. En una preparacin enzimtica conteniendo 58 g de enzima/mL, se

determin la actividad enzimtica midiendo la variacin de absorbancia
con el tiempo del sustrato empleado. La mezcla de reaccin contena
0,1 mL del extracto enzimtico al que se aadieron diferentes
concentraciones del sustrato disuelto en el mismo tampn, hasta un
volumen final de 2 mL. La medida de actividad se realiz al valor de pH
ptimo. Los valores de las velocidades iniciales de la reaccin figuran en
la tabla:

[Sustrato] (M) Velocidades iniciales (M/min)

-8
1,0 x 10 6,82 x 10-6
5,0 x 10-8 25,00 x 10-6
-7
1,0 x 10 37,50 x 10-6
2,5 x 10-7 53,50 x 10-6
-7
5,0 x 10 62,50 x10-6
7,5 x 10-7 66,18 x 10-6
-6
1,0 x 10 68,18 x 10-6
Determinar :
A) El valor de kM y Vmax
B) Sabiendo que el peso molecular de la enzima es 125000 Daltons,
determinar la actividad especfica y el nmero de recambio ( o
constante cataltica ).

--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Informacin adicional:
Actividad especfica = ( moles de producto x min-1) / mg proteina =
= Unidades / mg proteina

Actividad enzimtica total = (Unidades / mg proteina) x mg totales =

= Unidades totales

Constante cataltica de velocidad = Nmero de recambio =

= kcat = Vmax / [E]t = ( moles de producto x min-1) / moles de enzima=
= min-1
--------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Solucin: kM = 1,0 x 10-7M; Vmax = 75,02 x 10-6M/min; Activ. Esp. = 25,8 U/mg; Nmero de
recambio = 3232,7 min-1.

2. Un extracto crudo libre de clulas contiene 20 mg/mL de protena.

Sabiendo que 10 L del extracto en un volumen de reaccin estandar de
0,5 mL catalizan la produccin de 3 moles totales de producto en 1
minuto. Calcular (a) la velocidad inicial de la reaccin catalizada por la
enzima en moles/L x min-1, (b) la velocidad en moles/min, (c) la
velocidad en moles/L x min-1, si la misma cantidad de extracto, 10 L,
fuese ensayada en un volumen de 1 mL, (d) la concentracin de enzima
 en el extracto expresada Unidades/mL y (e) la actividad especfica del
extracto en Unidades/mg.
Solucin: (a) 6,0 x 103 moles/L min-1. (b) 3,0 moles/min. (c) 3,0 x 103 moles/L
min-1. (d) 300 Unidades/mL. (e)15 Unidades/ mg proteina.

3. Una preparacin enzimtica tiene una actividad especfica de 42

Unidades/mg de protena y contiene 12 mg de protena /mL. Calcular la
velocidad inicial de la reaccin en una mezcla que contenga: (a) 20 L,
(b) 5 L y (d) 50 L de la preparacin.
Solucin: 10,1 moles/min. (b) 2,5 moles/min. (c) 25,2 moles/min

4. Una solucin de 1 mg/L de una enzima pura ( P.M. = 25000, kM =

= 2x10-5M) cataliza una reaccin con una velocidad de 25 mmoles/l min
cuando la concentracin de sustrato tiene un valor de 3x10-3M. Calcular
el nmero de recambio de la enzima.
Solucin:6,25 x 105 min-1

5. En el estudio cintico de una reaccin enzimtica se obtuvieron los

valores de velocidad para determinadas concentraciones de sustrato que
figuran en la tabla siguiente. Determinar la kM y la Vmax mediante la
representacin (a) directa y (b) doble inversa.
[Sustrato] V(mol/mL min
-8
1,0 x 10 6,80
5,0 x 10-8 25,0
-7
1,0 x 10 37,5
2,0 x 10-7 50,0
-7
4,0 x 10 60,0
6,0 x 10-7 64,3
-7
9,0 x 10 67,5
2,5 x 10-6 72,1
-6
7,5 x 10 74,0
Solucin: Vmax = 75 moles/mL min; kM= 10-7M

6. Los datos de la siguiente tabla describen una reaccin enzimtica. La

concentracin de enzima es de 2 mg/mL (PM = 25 000). Calcular: (a) el
valor de KM, Vmax y Kcat. (b) la actividad especfica de la enzima.

[SUSTRATO] (mM) Velocidad (mole/mL s)

2 13
4 20
8 29
12 33
16 36
20 38
Solucin:Vmax= 48,23 moles/mL s; KM= 5,5 x 10-3M; kcat= 602,9 s-1; Actividad especfica =
1447 U/mg proteina
7. Una disolucin de almidn al 1% a pH 6,7 se digiere por 15 g de
amilasa (PM 152 000). Se determin que la liberacin de maltosa tiene
una velocidad inicial de 8,5 mg de maltosa formada por minuto. Cul es
el nmero de recambio?. Cul es la actividad especfica de la enzima.
(Peso molecular de la maltosa: 342).

Solucin:Nmero de recambio = 2,52 x 105 min-1; actividad especfica = 1,66 x 103

unidades/mg proteina

10 Una reaccin catalizada por una enzima tiene una velocidad de 35moles/l
x min.,cuando la concentracin de sustrato es 0.01M. La Km para el
sustrato es 2x10-5M. Cual ser la velocidad inicial para las siguientes
concentraciones de sustrato?. a) 3.5xl0-3M. b) 4.0x10-4M c) 2.0x10-4M.

Solucin: a)V=34.8mol/L x min. b)V=33.38 mol/L x min. c)V=31.88mol/Lxmin.

11 Una solucin al 1% de almidn se digiere a pH 6.7 mediante 15 gr de

-amilasa (PM 152 000). La velocidad inicial mxima de liberacin de
maltosa fue de 8.5mgr/min. Calcular el nmero de recambio de dicha
enzima (PM de la maltosa, 342)

Solucin: 2.53x10-5 min-1

12 A partir de una representacin de Lineweaver - Burk para una reaccin

enzimtica cuya recta corta al eje de ordenadas en 1/V = 25 horas/mol y
extrapolando al eje de abcisas en 1/[S] = -1.3x102 (mol/L)-1. Calcular Vmax
y Km.
Solucin: Vmax=4x10-2 mol/h. Km=7.7x10-3 mol/L

13 Calcular la Km y la Vmax de una reaccin enzimatica sabiendo que la

recta obtenida en una representacin de Lineweaver - Burk corta al eje de
ordenadas en 1/V = 5x103 (moles/min)-1 y la pendiente de dicha recta es
120 min/L.
Solucin: Vmax= 2x10-4moles/min. Km = 24 mM.

14 La descarboxilacin enzimtica de un -cetocido tiene lugar con las

velocidades iniciales para las concentraciones de cetocido que se
indican.
V(moles CO2,/2 min) Concentracin cetocido (M)

0.586 2.50x 10-3

0.476 1.00x 10-3
0.417 0.71x 10-3
0.370 0.52x 10-3
0.252 0.24x 10-3
A partir de estos datos calcular Vmax y Km de la reaccion.
Solucin: Vm = 0.35 moles/min; Km = 0.476 mM.
15 Un sustrato fue hidrolizado por una enzima, determinndose la velocidad
de catlisis a distintas concentraciones de sustrato. Calcular la Km y Vmax
a partir de los siguientes datos:
Concentracin de sustrato (M) V(mol/min)

2.3 x 10-3 0.95

3.0 x 10-3 1.13
4.5 x 10-3 1.42
12.0x 10-3 2.14
38.0x 10-3 2.64
Solucin: Vm = 3.03 mol/min; Km = 5.6 mM

16 Calcular la Km y la Vmax a partir de los siguientes datos:

Concentracin de sustrato (mM) V(mol/min)

0.5 1.00
1.0 1.67
1.5 2.14
2.0 2.50
2.0 2.78
3.0 3.00
Solucin: Vmax = 5.0 mol/min; Km = 2 mM

17 Al representar por el mtodo de Lineweaver-Burk los datos obtenidos en

diferentes condiciones para una reaccin enzimtica, se obtienen dos
rectas con los siguientes puntos de corte:
SIN INHIBIDOR CON INHIBIDOR (1mM)

CORTE EN ORDENADAS 0.2 0.2

(moles/min)-1

CORTE EN ABCISAS -2 -0.5

(mM)

a) Calcular Vmax y Km en ausencia y presencia de inhibidor.De qu tipo

de inhibicin se trata?. Calcular la Ki para el inhibidor.
b) En ausencia de inhibidor y con una concentracin inicial de sustrato de
0.1M, qu cantidad de sustrato se habr consumido al cabo de 4 minutos
de reaccin?.
c) Tambin en ausencia de inhibidor, pero con una concentracin de
sustrato de 2M, que concentracin de sustrato quedar tras 3 minutos
de reaccin?. Se sabe que en estas condiciones t1/2=1.2 minutos.
(Cintica de primer orden: 2,3 log [S0]/[St] = K t, siendo K = 0,693/t1/2)
Solucin: a) Km = 0.5 mM; K'm = 2mM; Ki = 0.33 mM
b) [P] = 20 moles.
c) [s] = 3.5 x 10-7M

18 Al ensayar una enzima frente a un sustrato especifico, en presencia y

ausencia de un inhibidor, a las concentraciones que se indican, se
 obtuvieron los datos reflejados en la tabla. Calcular los valores de Km y
Vm en presencia y ausencia de inhibidor y la Ki de este.
Vi(moles/L x min)(
[S] M V(moles/L x min) [I]=1mM)

1.00x10-3 250 166

0.50x10-3 200 143
0.30x10-3 166 111
0.25x10-3 166 91
0.20x10-3 166 77

Solucin: Vm = 333mol/L x min; Km = 0.33 M; K'm = 0.66 M.Ki =1 mM.

19. La actividad de la N-aspartato - 4 - descarboxilasa puede ensayarse

manomtricamente siguiendo el desprendimiento de CO2, procedente de
la descarboxilacin del cido L-asprtico. En un experimento realizado con
esta enzima a 30oC y a pH=5 en presencia del cido treo - -
hidroxiaspartico como inhibidor, se obtuvieron los siguientes resultados:
Asprtico (M) Vinicial(mol C02 Vinicial(mol C02
liberado/min xmg prot. ) liberado/min x mg prot. )
SIN INHIBIDOR CON INHIBIDOR (0.02M)

25.0 17 ---
33.3 21 5.7
50.0 27 8.1
100.0 41 14.7
200.0 52 25.0
Calcular Km, Vmax y Ki de la enzima.
Solucin: Vmax = 73 moles/min x mg prot.
Km = 83.3 M; K'm = 200 M; Ki = 13.6 M

20. Para establecer los parmetros cinticos de una enzima se determin la

velocidad de esta a distintas concentraciones de sustrato en presencia y
ausencia de un inhibidor. A partir de los datos reflejados en la tabla
determinar la Km y Vmax de la reaccin inhibida y sin inhibir, as como la
Ki para el inhibidor.

[S] mM V(moles/L x 2min) V'(moles/L x 2min).I=lmM

6.250 0.625 0.488
0.862 0.435 0.355
0.424 0.340 0.265

Solucin: Km = 4.5 x 10-4 M; Vm = 0.33 mol/L x min; V'm = 0.25 mol/L x min
Ki = 3.12 x 10-3M

21 A partir de los datos presentes en la tabla, referidos a una reaccin

catalizada enzimaticamente en la que se ha determinado la velocidad
inicial a las concentraciones de sustrato indicadas, en ausencia de
inhibidor y en presencia de los inhibidores X, Yo Z, calcular el tipo de
inhibicin y la Ki para cada inhibidor
 V(moles/min) V(moles/min) V(moles/min) V(moles/min)
CONTROL INHIB. X INHIB Y INHIB Z
[S] mM [I]=0M [I]=6M [I]=30M [I]=4mM

0.200 16.67 6.25 5.56 10.00

0.250 20.00 7.69 6.67 11.11
0.333 24.98 10.00 8.33 12.50
0.500 33.33 14.29 11.11 14.29
1.000 50.00 25.00 16.67 16.67
2.000 66.67 40.00 22.22 18.18
2.500 71.40 45.45 23.81 18.52
3.330 76.92 52.63 25.64 18.87
4.000 80.00 57.14 26.67 19.00
5.000 83.33 62.50 27.77 19.23

Solucin: CONTROL: Km=1mM; Vm=100nmoles/min.

INHIB X: K'm=3mM, competitiva
INHIB Y: V'm=33.3mM; Ki=5M, no competitiva.
INHIB Z: V'm=20nmoles/min;K'm=0.2mM; Ki=1mM; acompetitiva

22 Una mezcla de bencilamina, tampn fosfato 0.05M pH 7.00, 30 g de

monoamino oxidasa y o naftol, fu seguida espectrofotomtricamente
a lo largo del tiempo a 250 nm y anotados los cambios de absorbancia
por minuto que present dicha mezcla. Los resultados obtenidos se
resumen en la siguiente tabla:

(1/V) x 10-3 (1/V) x 10-3 (1/V) x 10-3

(1/[S])x10-3 (DO-1x min) (DO-1x min) (DO-1x min)
(M-1) SIN INHIB. 2X10-4M naftol 2x10-4M naftol

20 60 103 150
10 39 61 86
8 33 52 70
4 25 34 44
Determinar la Km para la benzilamina, la naturaleza de la inhibicin y las Ki
de los inhibidores.
Solucin = Km=0.14x10-3M;K'm=0.26x10-3 (naftol); K'm=0.42x10-3 M(naftol)

Resolucin del problema 1

a) La determinacin de los valores de Vmax y kM se realiza a partir de los puntos de
corte con el eje de ordenadas (1/Vmax) y con el eje de abscisas (-1/kM) en la
representacin grfica de Lineweaver-Burk, por lo tanto hay que obtener los inversos
de los valores experimentales:
[S] x 106(M) 10-6 x 1/[S] (M-1) V x 106 (M/min) 10-3x1/V (M/min)-1
0,01 100,00 6,82 146,67
0,05 20,00 25,00 40,00
0,10 10,00 37,50 26,67
0,25 4,00 53,50 18,67
0,50 2,00 62,50 16,00
0,75 1,33 66,18 15,11
1,00 1,00 68,18 14,67
La representacin grfica de la columna 1/v (eje Y) frente a la 1/[S] (eje X), da lugar a una recta
que corta a Y en 13,33 (M/min)-1x10-3, y a X en -10,0M-1x10 -6

KM = 1/(10 x 106) = 1 x10-7 M

Vmax = 1/ (13,33 x103) =75,2 x 10-6 M/min

b)Actividad especfica: U/mg = (moles de producto x min-1)/mg de protena

La enzima genera 75, 02 x 10-6 moles /L en 1 minuto, es decir 75,02 moles/L x min-1.
Por otra parte, como la concentracin de la preparacin enzimtica de la que se toman 0,1 mL
es de 58 g/mL, en los 2 mL de la mezcla de incubacin tendremos:

58g x 0,1 mL = 5,8 g

luego la concentracin de enzima en la mezcla de incubacin ser:

(5,8 g / 2 mL) x (1000 mL/1L) = 2 900 g / L = 2,9 mg/L

Actividad especfica = (75,02 moles/L x min )/(2,9 mg/L) =25,8U/mg

-1

N de recambio = Vmax /[E]total

Vmax = 75,02 x 10-6 mol/L x min-1

[E]total : En 1 L tenemos 2,9 mg (0,0029g) de enzima, por lo tanto
n de moles = gr/PM = 0,0029/125 000 = 2,32 x 10-8 moles,
como estos moles se encuentran en 1 L, la concentracin de enzima ser:
2,32 x 10-8M

luego, n de recambio = (75,05 x 10-6moles/L x min-1)/(2,32 x 10-8 moles/L) =

=3 233 min-1

Resolucin del problema 2

a) V = ( moles x L-1)/ min = ((3 moles / 0,5 mL) x (1000 mL / 1L)) / min =
=6 x 103 ( moles/L) / min , o lo que es igual: 6 x 103 M / min

b) 3 moles / min

c) V = ( moles x L-1)/ min = ((3 moles / 1,0 mL) x (1000 mL / 1L)) / min =
=3 x 103 ( moles/L) / min , o lo que es igual: 3 x 103 M / min

d) 1 Unidad es la cantidad de enzima que genera 1 mol de producto / minuto

10 L de extracto (=0,2 mg) generan 3 moles de producto / min, luego 1 mol de

producto ser generado por 0,2/3 = 0,06 mg de extracto. Como tenemos 20mg de proteina
/ mL, la concentracin de enzima ser igual a 20/0,06 = 300 Unidades/mL

e) 300U/mL x 1/20 mL/mg = 15 U/mg

Resolucin del problema 3

42 U/mg x 12 mg/mL = 504 U/mL

para 20L; 540U/mg x 20 L = 10,8 moles/min

para 5L; 540U/mg x 5 L = 2,7 moles/min

para 250L; 540U/mg x 50 L = 27 moles/min

Resolucin del problema 4

Primero comprobamos si la velocidad es la Vmax:

[S]/KM = 3x10-3M / 2x10-5M = 150 Orden 0, luego V = Vmax

Los mmoles de enzima en 1 L sern: [E] = 1mg/25 000 = 4x10-5 mmoles [E] = 4x10-5mM

N de recambio (Kcat) = 25 mM x min-1/4x10-5 mM = 6,25x105 min-1