UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES

ESCUELA PROFESIONAL DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES

PREPARACIONES Y COLORACIONES
MICROSCOPICAS

ALUMNO : MALDONADO EULOGIO, Dara Camila

CURSO : BIOLOGIA

DOCENTE : Blgo. GOZME SULCA, Csar A.

SEMESTRE : 2017 I

TINGO MARA PER

 INDICE
PAGINAS

I. INTRODUCCIN ......................................................................................... 1

1.1. Objetivo general .................................................................................. 2

1.2. Objetivos especficos ......................................................................... 2

II. REVISION DE LITERATURA ...................................................................... 3

2.1. Microscopio ......................................................................................... 3

2.2. Estereoscopio ..................................................................................... 4

2.3. Preparaciones microscpicas ........................................................... 4

III. MATERIALES Y METODOS .................................................................... 5

3.1. Lugar de ejecucin.............................................................................. 5

3.2. Materiales y equipos ........................................................................... 5

3.2.1. Materiales ...................................................................................... 5

3.2.2. Equipos ......................................................................................... 6

3.3. Metodologa ......................................................................................... 6

3.3.1. Microscopio................................................................................... 6

3.3.2. Preparaciones microscpicas ..................................................... 7

IV. RESULTADOS ......................................................................................... 8

V. DISCUSIN ............................................................................................... 10

VI. CONCLUSINES................................................................................... 11

VII. RECOMENDACIONES .......................................................................... 12

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...................................................... 23

ANEXO ............................................................................................................ 24
 1

I. INTRODUCCIN

El microscopio es un instrumento que sirve para ver objetos

demasiados pequeos que no pueden ser observados con claridad por el ojo
humano. Aunque el hombre tenga el sentido de la vista, no pueden ver
correctamente objetos demasiados pequeos sin la ayuda de un microscopio, es
por ello que el microscopio es muy til.

Las preparaciones microscpicas son muy importante para los

universitarios, ya que ello les permite saber realizar correctamente las
preparaciones de acuerdo a su preparacin y coloracin, realizar un uso
adecuado del microscopio y as luego explicar las observaciones realizadas.

Las coloraciones microscpicas son compuestos orgnicos que

tienen alguna afinidad especfica por algn componente, lo cual permiten
aumentar el contraste de la muestra que se observar en el microscopio.

En el laboratorio de microbiologa reconocimos las partes

importantes y el uso adecuado del microscopio, tambin realizamos
preparaciones y coloraciones microscpicas mediante tres prcticas distintas.
Observamos palabras y clulas diminutas como: letras de un recetario, insectos,
diferentes tipos de tejidos. Tambin realizamos coloraciones microscpicas, lo
cual permiti la correcta visualizacin de la clula correspondiente a la muestra
observada.
 2

1.1. Objetivo general

Hacer uso adecuado del microscopio con las diferentes

preparaciones microscpicas.

1.2. Objetivos especficos

Identificar las partes principales del microscopio y sus funciones.

Realizar e identificar las preparaciones simples.
Reconocer y diferenciar las coloraciones microscpicas.
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II. REVISION DE LITERATURA

2.1. Microscopio

Se sabe a pesar de los progresos realizados en los siglos

posteriores, especialmente en el XIX, el hecho de emplear luz como fuente de
iluminacin limita el poder de resolucin de los microscopios y, en las mejores
condiciones, no se puede alcanzar un aumento mayor de 1500 veces, lo que
permite slo observar clulas enteras y algunos de sus componentes mayores.
Para mejorar la capacidad de observacin se han ido introduciendo tcnicas que
aumentan la resolucin de los microscopios pticos, como son el contraste de
fase, el campo oscuro o la tcnica de fluorescencia. Por ese motivo tambin se
han desarrollado microscopios que utilizan iluminacin distinta de la luz,
especialmente los electrones. El microscopio electrnico desarrollado en los
aos 50 del cientos de miles de veces. Con ellos se han podido observar los
rganos de las clulas y por ello constituyen uno de los principales instrumentos
de la investigacin celular (GUTIERREZ, 1998).

En el estudio de las ciencias naturales ocupa una parte

particularmente importante el microscopio, ya que permite observaciones que
estn fuera del alcance de la visibilidad directa del ojo humano. La estructura
pormenorizada de los seres vivos y de gran cantidad de estructuras que ya se
conocen seran an desconocidas por nosotros si no fuese por la ayuda del
microscopio. La accin de las lentes ya es conocida desde el siglo XII. A partir
de esta fecha la lente comienzan a tener distintos usos; aparecen las primeras
verdaderas lupas y se empiezan a utilizar vidrios para corregir los s defectos de
la visin humana. En el siglo XVI se utilizan ya lupas en la investigacin cientfica,
y algunos naturalistas de esa poca ya construyeron microscopios simples. En
 4

el siglo XVII, fabricantes de lentes desarrollan los primeros microscopios

compuestos. Estos aparatos utilizaban la luz reflejada por las muestras
fuertemente iluminadas. Existieron diversos modelos y uno de ellos sirvi a
Robert para observar las primeras clulas en un corte de corcho (TULIO, 2004).

2.2. Estereoscopio

Los seres humanos estn equipados con dos ojos en la parte frontal
de la cabeza; y, gracias a esta posicin cada ojo adquiere una visin de la misma
rea desde un ngulo diferente, de forma que cada ojo captura su propia visin
y las dos imgenes equiparando las semejanzas y aadiendo pequeas
diferencias, y dndole el efecto de profundidad o tercera dimensin. Esto se
conoce como visin estereoscpica. Los estereoscpicos crean una ilusin de
profundidad en fotografas bidimensionales llamadas estereogramas. Un
estereograma consta de dos fotografas de una misma escena, tomadas desde
ngulos ligeramente distintos. Al ser vistas a travs de un estereoscopio, ambas
imgenes se funden engaando al cerebro, que crea una nica imagen
tridimensional (RIVEYRO, 2000).

Los estereomicroscopios sirven para observar imgenes ampliadas

de pequeos objetos, siendo la imagen creada, no invertida y conservando el
color original del objeto observado, por eso, el estereoscopio ofrece una gran
comodidad en su uso y calidad de la imagen observada (TRUJILLO, 1999).

2.3. Preparaciones microscpicas

Las preparaciones microscopias son de gran aporte porque nos

ayuda a mejorar la previsualisacion de las pruebas, ya que logra romper esa
membrana que tiene para poder observar mejor la gran positiva o la gran
negativa.
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III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar de ejecucin

El presente trabajo se realiz en la biblioteca nacional de la

Universidad Nacional Agraria de la Selva, Tingo Mara Hunuco

El recorrido para llegar al lugar de ejecucin del presente trabajo es

por la carretera central Av. Universitaria Km 1.5 carretera central Hunuco,
Coordenadas (9 19 03 S 75 59 48 O) en el laboratorio de microbiologa.

3.2. Materiales y equipos

3.2.1. Materiales

Libreta de apuntes.
Lapicero.
Portaobjetos.
Cubreobjetos.
Hoja copa de oro.
Piojo.
Pulga.
Recetario.
Bistur.
Alcohol.
Algodn.
Cebolla.
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Sangre.
Semen.
Lancetas.
Mucosa labial.
Pinzas.

3.2.2. Equipos
Laptop, celulares, impresora, cmara fotogrfica, microscopio.

3.3. Metodologa

3.3.1. Microscopio

Primero enchufamos el microscopio, prendemos el iluminador, a

travs del interruptor y ajuste la intensidad de luz a un nivel cmodo. Ajuste la
distancia inter ocular para adaptar la distancia entre los lentes oculares a la
distancia entre sus ojos; mueva lateralmente la base de los lentes oculares hasta
que vea claramente una sola imagen.

El propsito principal de tener dos lentes oculares, en vez de uno, es

eliminar el cansancio que se produce al mantenerse un ojo cerrado y reducir la
interferencia de luz ambiental y de otras imgenes si se mantiene el ojo abierto.

Escogemos la laminilla con la muestra del recetario hasta encontrar

el nivel adecuado.

Luego pasamos a colocar en el portaobjetos la pulga y por

consiguiente el piojo.
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Luego cortamos cuidadosamente la hoja de la copa de oro para verlo

a mayor escala.

3.3.2. Preparaciones microscpicas

Reiniciamos nuevamente el microscopio lo encendemos, colocamos

la muestra ya que en esta ocasin ser la semen (espermatozoides) en el
portaobjetos y luego pasamos a cubrirlo con el cubreobjetos y luego graduamos
la mira, para observarlo con mayor claridad.

Tambin colocamos la mucosa labial (clula epitelial) y lo

observamos.

Tambin recortamos una parte de la cebolla, para luego colocarle

una tinta para que algunas de sus partes se noten con ms facilidad
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IV. RESULTADOS

4.1. El microscopio

En la experimentacin que se realiz en el laboratorio, se tuvo como

primero el uso del microscopio, de acuerdo con las observaciones respectivas
se aprecia en el rea de campo de las muestras: las letras o palabras que fueron
de un recetario teniendo una imagen de microscpica a un aumento a
macroscpica viendo as una infinidad de tejidos entrecruzados en los objetivos
de 5X-10X, a continuacin se realiz con insectos diminutos observando en un
objetivo de 5X toda el cuerpo entero de los insectos diminutos y en el objetivo
de 10X se obtuvo una imagen macroscpica observando las partes internas de
dichos insectos y para finalizar se realiz la observacin de clulas epiteliales de
la hoja de copa de oro dando objetivos de 5X- 10X dando observacin de
micromtricas a micromtricas , en el aumento se observ las clulas epiteliales
en conjunto y la aparicin de estomas en el envs de la hoja donde cual se
realiza el intercambio gaseoso, ingreso de agua y en otro caso nutrientes.

4.2. Preparaciones microscpicas

En las preparaciones microscpicas teniendo en cuenta que se da

en fresco y en seco ,como en resultado se obtuvo cuatro observaciones en el
microscopio tal cual se obtuvo muestras: el semen humano teniendo una
preparacin en fresco donde se tuvo objetivos de 10X dando un aumento de
100X ,realizando una muestra macroscpica, dando una observacin de
espermatozoides en movimiento en la cual constituidas de sus partes;
posteriormente se realiz con la muestra de mucosa labial observada en el
microscopio en un objetivo de 10X-40X y en un aumento macroscpico de 100X-
 9

400X ,observando as la membrana celular, citoplasma y el ncleo; al finalizar

se realiz con la muestra de sangre teniendo como en observacin de los
eritrocitos con el objetivo de 10X, llegando a ver la forma d un glbulo rojo y
entre algunos los leucocitos.

4.3. Coloraciones microscpicas

En las coloraciones microscpicas se tuvo como resultado dos

muestras, primero de coloracin simple de la cebolla donde se observ el Allium
Capa teniendo como objetivo 10X-40X, se observ las clulas epiteliales
conglomeradas en coloracin cristal violeta teniendo algunas partes visibles tal
cual fueron: pared celular, citoplasma y ncleo; posteriormente se realiz con la
coloraciones GRAM en la muestra del sarro dentario con un objetivo de 10X-
40X ; en dicho aumento de micromtrico a micromtrico se visualiz bacterias
GRAM+ teniendo una forma de puntos negros en conglomeraciones y otros en
separaciones de las bacterias.
 10

V. DISCUSIN

Las preparaciones simples realizadas fueron de clulas vivas en

fresco y en seco, estas preparaciones permiti que nosotros podamos observar
las clulas, adems de ello diferenciamos la preparacin en fresco con la
preparacin en seco.

Se reconoci que gracias a la coloracin microscpica pudimos

observar las bacterias del GRAM positivo con la muestra del sarro dental. Existen
diversos tipos de coloraciones que permiten observar distintas bacterias
presentes en los seres vivos.

Tambin en las coloraciones logramos reconocer que sus

membranas son destruidas, pero algunas Gram positivas soportan este
fenmeno.

Se reconoci que gracias a la coloracin microscpica pudimos

observar las bacterias del GRAM positivo con la muestra del sarro dental. Existen
diversos tipos de coloraciones que permiten observar distintas bacterias
presentes en los seres vivos.
 11

VI. CONCLUSINES

El microscopio es uno de los instrumentos de mayor utilidad en el

estudio de las clulas y tejidos, que permiten tanto la observacin del aspecto
y forma de las clulas y tejidos como la cuantificacin de variables observadas,
tales como dimensiones, dimetros, longitudes, cantidades, entre otras. Adems
de su uso en la biologa, tienen un sinfn de aplicaciones en medicina forense,
mineraloga, ciencia de los materiales, entre otras. El uso adecuado del
microscopio nos brinda una imagen ms clara de lo que estamos buscando, as
como su buen cuidado le alarga la vida y nos brinda ventajas a nosotros en este
caso los universitarios al poder tener acceso a este material, que si no se cuidara
de manera correcta no tendramos acceso a este equipo que es indispensable
para los universitarios.

Las partes del microscopio se distinguen en dos partes: la parte

mecnica y ptica. La parte mecnica del microscopio comprende el pie, el tubo,
el revlver, el asa, la platina, el carro, el tornillo macromtrico y el tornillo
micromtrico. Estos elementos sostienen la parte ptica y de iluminacin;
adems, permiten los desplazamientos necesarios para el enfoque del objeto.
La parte ptica est constituido por el sistema ptico y de iluminacin. El sistema
ptico comprende un conjunto de lentes dispuestas de tal manera que produce
el aumento de las imgenes que se observan a travs de ellas. El sistema de
iluminacin comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y
regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observacin a travs del
microscopio.
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VII. RECOMENDACIONES

Para esta investigacin nos hizo falta mayor informacin, indagar

ms a fondo sobre el tema que tratbamos, la poca informacin que nos ofreca
la biblioteca no nos ayud en mucho, ya que haba distintas explicaciones que
no se lograban aclarar por ello se busca mejorar ese tipo de problemas.

Una vez hecha el trabajo se debe pasar por un proceso de correccin

para constatar que el informe este muy bien hecho, nos ha faltado mucho ms
tiempo del que est predestinado para usar, pero estos errores nos ayudaran
mucho para el siguiente informe.
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MICROSCOPIO

1.- De qu partes del microscopio depende la correcta iluminacin?

El microscopio depende de la fuente de los, la abertura del

diafragma, uso correcto de objetivo y oculares.

2.- A qu partes del microscopio debe dirigirse la luz de lmpara?

La luz de la lmpara del microscopio se dirige al tubo ocular,

objetivos (seco e inmersin) y los oculares.

3.- Cmo varia la iluminacin a abrir o cerrar el diagrama?

Modifica gradualmente el campo visual, sin variar la iluminacin de

la imagen.

4.- Cmo varia la iluminacin al desplazar el condensador?

La iluminacin al desplazar el condensador varia en el brillo, el

contraste, la profundidad de campo e iluminacin uniforme.

5.- Cuntos grupos de lentes objetivos hay? Qu nombre reciben?

Existen 3 grupos de lentes:

Objetivos: acromticos, sema pro cromtico y apocromticos.

6.- Enfocando las preparaciones con las letras o palabras observadas en

el microscopio, interpreta el funcionamiento de los tornillos macro y
micromtrico.

Al interpretar el funcionamiento de los tornillos micromtrico y

micromtrico se mueve la platina hacia arriba y hacia abajo. El macro mtrico lo
hace de forma rpida y el micromtrico de forma lenta.

7.- Qu se entiende por profundidad de campo?

Se refiere entre la distancia de ambos objetos ms cercanos y

lejanos que estn aceptablemente ntidos.
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8.- Al desplazarse el portaobjetos en qu sentido se mueve l imagen al mirar

por el ocular.

Al mirar la imagen por el ocular esta se mueve en sentido contrario

de cmo lo mueves porque el microscopio tiene dos lentes convexos.

9.- Cmo se calcula el aumento total de la imagen?

El aumento total de la imagen se calcula multiplicando el aumento

del lente ocular por el aumento del lente objetivo para determinar el aumento
total.

10.- Menciona un ejemplo de un tipo de microscopio simple

Un ejemplo de microscopio simple es la LUPA.

11.- Cules son los tipos de microscopios que existen actualmente?

Entre los ms conocidos son los siguientes:

-Microscopio compuesto.

- Microscopio ptico.

- Microscopio digital.

- Microscopio fluorescente.

- Microscopio electrnico.

- Microscopio estreo.
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PREPARACIONES MICROSCOPICAS

1.- Que es una preparacin microscpica?

Las preparaciones microscpicas son producidas en laboratorios

bajo riguroso control cientfico. Son el producto de una larga experiencia
combinada con las tcnicas ms avanzadas, bien preservado y fijado de manera
que las estructuras ms finas se puedan mantener en el estado ms similar
posible al natural.

2.- Qu es una preparacin en fresco?

Son todas aquellas formas o mtodos de observacin, mediante los

cuales los objetos a investigarse, no sufren cambios o alteraciones en cuanto a
su forma, estructura o composicin qumica o sentido de vitalidad de los mismos;
para ello los objetos debern ser observados tal como existen o mximo
inmersos en un medio similar, como el caso de las soluciones fisiolgicas. Solo
as podrn ser estudiados en su real y verdadera naturaleza.

3.- Mencione y grafique los pasos de un preparado en fresco.

Las preparaciones hmedas se efectan colocando una gota del

lquido que contiene d vida normal, sin sufrir alteraciones ocasionadas por
algunos colorantes; permite apreciar la movilidad, los cambios citolgicos
durante el proceso de divisin celular y en la formacin de esporas.
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4.- Qu ventajas se tiene al realizar un preparado en fresco?

Permiten observar los organismos suspendidos en un lquido en

condiciones de vida normal, sin sufrir alteraciones ocasionadas por algunos
colorantes; permiten apreciar la movilidad, los cambios citolgicos durante el
proceso de divisin celular y en la formacin de esporas.

5.- Qu es una preparacin en seco?

Son mtodos de anlisis que nos van a permitir, gracias al

microscopio y otras herramientas de laboratorio, la visualizacin de una
complejidad de elementos que a simple vista no son captados por el ojo humano
preparado antes de hacer una observancia de cualquier elemento al
microscopio, no sera posible la completa visualizacin del objeto en mencin.

6.- Qu ventajas se tiene al realizar un preparado en seco?

Preparados fijos: los que se hacen en un momento determinado y,

como su nombre lo indica, se "fijan" al portaobjetos para ser observado en
cualquier otro momento. No todos las clulas o tejidos pueden ser fijados pero,
cuando puede hacerse (y cuando tiene sentido), tiene la ventaja de que no se
deterioran con el tiempo.

Un preparado en seco es cuando entre la lente frontal del objetivo

y el preparado existe una sustancia llamada aceite de cedro con un ndice de
refraccin como el vidrio. En general las bacterias y otros microorganismos son
transparentes, lo que dificulta su estudio cuando los exmenes se realizan en
fresco.

Por tal razn cuando se quiere conocer los detalles morfolgicos,

es necesario recurrir a coloracin, es decir debido a que el ndice de refraccin
de las bacterias y otros microorganismos es muy semejante al del medio de
montaje, las bacterias pueden a menudo no ser visibles al microscopio ptico
compuesto. Por ende, es necesario utilizar extensiones o frtices de muestras
secas y tenidas.
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7.- Mencione y grafique los pasos de un preparado en seco.

A continuacin se presenta los pasos de un preparado y sus

respectivos grficos:

A. Colocar una gota de solucin salina sobre la lmina portaobjetos

cuidadosamente.

B. Con uno de los extremos del baja lenguas o un hisopo (nunca

utilizar el mismo hisopo o baja lenguas en diferentes personas), raspe la
superficie interna de la mejilla y deposite el material obtenido sobre la gota
de agua. Observara que lo depositado ha formado una masa uniforme.

C. Distribuir la masa, revolviendo con una aguja de diseccin o un

palillo empezando desde el centro en forma de crculos hasta que haya
obtenido una capa delgada y homognea del material.

D. Agregar una gota del azul de metileno, cubra con una laminilla y
observe el microscopio en los objetivos de 4x, 10x y 40x. Anote y dibuje lo
observado. Para el desarrollo de esta parte de la prctica se puede agregar
directamente una gota de azul de metileno a la muestra una vez realizado
el raspado de la superficie interna de la mejilla u observar directamente
solo con la solucin salina.
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COLORACIONES MICROSCOPICAS

1.- En microscopia, Qu es un colorante?

Un colorante es una tcnica auxiliar utilizada en microscopa para

mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas
son sustancias que usualmente se utilizan en biologa y medicina para resaltar
estructuras en tejidos biolgicos que van a ser observados con la ayuda de
diferentes tipos de microscopios. Los diferentes colorantes pueden ser utilizados
para aumentar la definicin y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por
ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares (por
ejemplo clasificando diferentes clulas sanguneas) o incluso para
resaltar rganelas dentro de clulas individuales.

2.- Qu es una coloracin simple y cuanto se puede emplear?

Coloracin simple: Se usa un nico colorante, que siempre es de

tipo bsico. Se utilizan solamente para incrementar el contraste; todas las clulas
absorbern el colorante y quedarn teidas del mismo color. Se fija el
espcimen, se aade el colorante y se deja el tiempo adecuado para que se
absorba, se retira el exceso de colorante y la preparacin ya est lista para ser
observada.

El colorante utilizado sirve solo para denotar la morfologa celular.

3.- Cules son los pasos de una coloracin simple?

Obtener una extensin de la muestra.

Fijar la extensin.
Tincin.
Lavado.
Secado.

4.- Mencione los pasos de una coloracin simple.

En un portaobjetos coloca una gota de agua.

Coloca con ayuda de asa bacteriolgica una gota de muestra, resuelve.
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Agrega una gota de azul metileno.

Esperar un minuto.
Colocar el cubreobjetos.
Observar a 10x, 40x y 100x.

5.- Qu es una coloracin diferencial y cuanto se puede emplear?

Coloracin diferencial: Se utilizan para distinguir entre tipos de

microorganismos. La tcnica de coloracin diferencial consta de dos etapas: una
coloracin simple seguida de una coloracin de contraste. En la coloracin de
contraste se utiliza otro colorante que tie (y por tanto, revela) las clulas no
teidas por el primer colorante. Estas coloraciones son muy utilizadas en
microbiologa.

Las dos coloraciones diferenciales ms utilizadas en bacteriologa

son la coloracin de Gram y la coloracin de cido alcohol resistencia.

6.- Mencione ejemplos de coloraciones diferenciales y explique

brevemente para que casos se utilizan cada uno.

Los colorantes ms usados son: azul d metileno, cristal violeta,

safranina, estos son catinicos y se combinan fuertemente con componentes
celulares cargados negativamente, como los cidos nucleicos y los
polisacridos.

Las clulas generalmente son tratadas para coagular el

protoplasma antes de teirlas, proceso conocido como fijacin. Despus de esta
habitualmente se realiza la tincin por lo contrario, hace que las clulas parezcan
mayores de lo que son realmente; algunas colorantes teirn mejor solo despus
de que la clula haya sido tratada con otra sustancia.

7.- Que es una coloracin Gram?

La coloracin o tincin de Gram, tambin conocida como coloracin

de Gram, es una tcnica de laboratorio que se utiliza rutinariamente en los
estudios microbiolgicos de las bacterias. Fue diseada por Christian Gram, un
 20

cientfico dans, en el ao 1884. El objetivo de Gram era conseguir una prueba

con la que fuera posible diferenciar diferentes grupos de bacterias para as poder
estudiarlas y clasificarlas. La prueba result todo un xito y pronto se convirti
en una tcnica muy til no solo para el estudio de las bacterias, sino tambin
para poder identificarlas rpidamente en una infeccin y seleccionar
el antibitico ms adecuado para tratarla.

8.- Cundo se realiza una coloracin Gram?

Se recomienda realizar una tincin de Gram en todas las

situaciones en las que se quiera hacer una primera aproximacin en la
clasificacin de las bacterias aisladas. Adems de realizarla en estudios de
investigacin cientfica, tambin se realiza en hospitales y clnicas de todo el
mundo ante estas enfermedades:

Neumonas: se puede recoger una muestra de esputo sobre la que

se realiza una tincin de Gram para identificar microorganismos responsables.

Infeccin de orina: se puede utilizar la coloracin de Gram en la

orina con sospecha de infeccin. La muestra debe ser recogida con cuidado para
no contaminarla con bacterias de la vagina o del prepucio.

Uretritis: es la infeccin de transmisin sexual ms frecuente y

suele producir secrecin a travs de la uretra, que se recoge para realizar la
tincin de Gram.

Meningitis: la tincin de Gram teir las bacterias que estn

infectando el lquido cefalorraqudeo.

Exudado vaginal: aunque en la vagina hay multitud de bacterias,

la tincin de Gram puede teir todas ellas y ver la proporcin de Gram positivas
y Gram negativas. As se diagnostican las vaginitis, tan frecuentes en las mujeres
con menopausia.
 21

Abscesos: cuando se acumula pus en cualquier lugar se debe

drenar y despus planificar la antibioterapia si es necesaria, y para ello es muy
til saber qu tipo de bacteria es la causante del cuadro.

Sepsis: en este caso la muestra recogida es la sangre; un tubo

pequeo de cada brazo.

9.- Cuntos son los pasos de una coloracin Gram?

Los pasos de una coloracin Gram son los siguientes:

- Preparar la extensin del cultivo: En un portaobjetos limpio, libre

de grasa, y con un asa bacteriolgica colocar una pequea cantidad de la colonia
bacteriana. a) Muestra solida: colocar solucin salina previamente a colocar la
colonia, igual en muestra semislida. b) Muestra liquida: colocar la colonia
directamente.

- Dejar secar al aire, luego fijar la preparacin pasando la placa

rpidamente por el mechero (2 o 3 veces).

- Agregar violeta cristal durante 20 a 30 segundos, el cual tiene

afinidad con el peptidoglicano de la pared bacteriana (Colorante primario),
enjugar con agua seguidamente.

- Agregar yodo Gram durante 40 a 60 segundos que sirve como

mordiente (compuesto qumico intensificador del color) e impide la salida del
cristal violeta por la formacin de un complejo cristal violeta-yodo que satura los
espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. Enjuagar con agua
seguidamente.

- Agregar alcohol acetona y enjuagar con agua inmediatamente

(decoloracin, disuelve lpidos de la pared de Gram negativas). Esta mezcla de
alcohol-acetona, deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de la misma,
tambin destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido
a que sta es soluble a la accin de solventes orgnicos, como la mezcla de
alcohol acetona.
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- Agregar safranina durante 20 segundos, enjuagar con agua

seguidamente. La safranina funciona como un colorante secundario o de contra
tincin y sirve para teir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal
violeta-yodo.

10.- Qu son colorantes bsicos y mencione ejemplos?

Son sales en las que la base, normalmente una amina, aporta el

color, mientras que la parte cida es incolora. Es decir, con colorantes catinicos.
Tienen apetencia por sustancias cidas del tejido como el ADN o ciertos
componentes de la matriz extracelular como los glicosaminoglicanos. La unin
es por atraccin elctrica. As, ponen de manifiesto el ncleo y el ARN, sobre
todo el ARNr presente en los ribosomas por ser muy abundante, as como ciertas
matrices extracelulares ricas en componentes cidos.

Ejemplos de colorantes bsicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el azul

de metileno o la hematoxilina.

11.- Qu son colorantes cidos y mencione ejemplos?

Son sales con el anin coloreado y la base incolora. Son derivados

de grupos sulfnicos, carboxilos o hidroxilos fenlicos. Tienen apetencia por
sustancias bsicas, sobre todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma
celular y tambin por el colgeno de la matriz extracelular. La unin es por
atraccin elctrica.

Ejemplos de colorantes cidos son la fucsina cida, verde rpido,

naranja G o la eosina.
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VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

GUTIERREZ, P. 1998. Microscopia general; Principios y reconocimientos.

Trad. por Ricardo Martnez. 2 ed. Lima, Per, El aventurero S.A. 122 p.

RIVEYRO, J. 2000. Estereoscopio; Principios bsicos. Trad. por Pedro

Snchez. 1 ed. Madrid, Espaa, El dialecto S.A. 45-48 p.

TRUJILLO, R. 1999. Estereoscopio; Partes y generalidades. Trad. Por Julio

Prez. 8 ed. Bogot, Colombia, Maferro educ S.A. 98-99 p.

TULIO, A. 2004. Microscopia. Conceptos y descripciones bsicas. Trad. por

Alex Huaman. 3 ed. Lima, Per, El comercial S.A. 56-64 p.
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ANEXO
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Figura 01. Observacin del recetario a travs del microscopio.

Figura 02. Observacin de la pulga y el piojo

 26

Figura 03. Observacin de la clula vegetal (copa de oro)

Figura 04. Observacin semen humano (espermatozoide) en el microscopio.

 27

Figura 05. Observacin de la mucosa labial (clula epitelial) en el microscopio.

Figura 06. Observacin de la sangre (eritrocitos) en el microscopio.

 28

Figura 07. Observacin de la allium cepa (cebolla) con una coloracin simple.

Figura 08. Observacin de bacterias gram + (sarro dentario) en el microscopio.