cincia EVOLUOy

Um cardume
de zebrafish:
modelo de estudos
para a formao
dos trios
e ventrculos

48 z outubro DE 2014
 Como explicar
um corao
to dividido
Cmaras cardacas podem ser o resultado da ao
do cido retinoico, usado em cosmticos

Texto Carlos Fioravanti| Fotos Lo Ramos

P
equenos peixes de listras horizontais com o dimetro do corpo. Xavier parece no se
mantidos em um aqurio no Laboratrio importar com a proximidade. Do ponto de vista
Nacional de Biocincias (LNBio), em da cladstica, diz ele, referindo-se ao sistema de
Campinas, esto mostrando muito sobre classificao dos seres vivos que se baseia na rela-
a formao e a evoluo do corao das pessoas. o evolutiva entre as espcies, nunca deixamos
No final de junho, depois de meses examinando os de ser peixes. Somos peixes modificados, as na-
mecanismos de ativao de genes nos msculos dadeiras se transformaram em braos e pernas.
do corao do minsculo zebrafish, Jos Xavier Peixes primitivos como a lampreia j apresen-
Neto e sua equipe concluram uma srie de ex- tam um corao de quatro cavidades, mas orga-
perimentos que reforaram sua hiptese de que nizadas em sequncia, e no em um bloco nico,
a estrutura do corao dos seres humanos, com como no corao humano. Em outra espcie evo-
quatro cmaras internas divididas por vlvulas lutivamente muito antiga, que pode ter surgido h
que regulam o fluxo do sangue, poderia ter apa- cerca de 400 milhes de anos, a piramboia, um
recido h pelo menos 500 milhes de anos, bem peixe encontrado na Amaznia (h um exemplar
antes do surgimento da prpria espcie huma- tambm no laboratrio de Campinas), alongado
na, h 2 milhes de anos. O corao do homem, como uma cobra e dotado de pulmes, o corao
portanto, teria nascido antes mesmo do homem. j mais refinado, com uma diviso interna que
As implicaes dessa concluso so um pouco separa o sangue rico em oxignio do rico em gs
desconcertantes. Nosso corao praticamente carbnico. Para Xavier, o mais importante, a des-
o mesmo, em termos evolutivos, que o da lam- peito da forma, que o trajeto do fluxo do san-
preia, assegura Xavier. Em vista da importncia gue no corao j forma uma espcie de S, mais
e dos significados do corao humano, no mui- pronunciado nos peixes e mais sutil nas pessoas.
to confortvel pensar nessa semelhana, j que a Por meio de experimentos em zebrafish, tambm
lampreia um peixe alongado e primitivo, facil- chamados de paulistinhas e bem mais simpticos
mente considerado muito feio, sem nadadeiras que a lampreia, em camundongos, codornas e ga-
nem maxilar, e cuja boca uma ventosa circular linhas, a equipe de Campinas tem examinado a

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 veis por sua contrao, as miosinas, so lentas. O
ventrculo, de superfcie rugosa e paredes mais
grossas, maior que o trio, com miosinas de ao
rpida, pode contrair com fora para fazer o san-
gue chegar a todas as clulas do corpo. O corao
humano um rgo do tamanho aproximado de
um punho fechado, com 250 gramas (g) nas mu-
lheres adultas e 300 g nos homens adultos, que
bate 100 mil vezes por dia, bombeando cerca de
cinco litros de sangue tem dois trios acima
dos dois ventrculos.

O
s estudos da equipe de Campinas e outros
nessa linha esto ajudando a entender a
origem de problemas cardacos associa-
dos ao cido retinoico, um derivado da vitamina
A bastante usado em cosmticos. Se uma mu-
lher usa no comeo da gestao, a m-formao
quase certa. Por isso os mdicos pedem um teste
1 de gravidez antes de receitarem cido retinoico
para tratamento de pele, diz Xavier, carioca for-
mado em medicina pela Universidade Federal do
Cear. O ser humano extremamente sensvel
ao cido retinoico, mas sem ele no estaramos
aqui. Tudo depende da dose e do lugar onde vai
atuar. A possibilidade de preveno e a correo
de problemas cardacos por enquanto so remo-
tas, porque o cido retinoico atua nas primeiras
semanas de gestao, quando a mulher em geral
ainda no sabe que est grvida.
Com os experimentos mais
recentes, assim que forem pu-
Se uma blicados, Xavier pretende re-
forar sua hiptese e contestar
mulher usar as vises antagnicas de outras
equipes interessadas em eluci-
cido retinoico dar os mecanismos que definem
As cores do no incio o tamanho, a forma e o modo de
corao: de peixe formao das cmaras internas funcionamento de cada cmara
e de camundongo
(ao lado)
do corao trios ou ventr- da gestao, cardaca. Em 2008, um artigo da
culos, essenciais para o arma- equipe de Deborah Yelon, atual-
zenamento ou distribuio do a m-formao mente na Universidade da Ca-
sangue que circula pelo orga- lifrnia em San Diego, Estados
nismo. Quase duas dcadas de
fetal Unidos, amenizou o papel do
trabalho fizeram concluir que quase certa cido retinoico, que estaria as-
os tipos de cmara do corao sociado apenas ao tamanho do
devem resultar da ao do cido corao, e valorizou a prote-
retinoico. uma ao em ondas, na produzida a partir do gene
ora mais intensa, ora menos, em momentos espe- Hox-B5, que tambm atua na formao do intes-
cficos do desenvolvimento embrionrio. Segundo tino e dos pulmes, com base em experimentos
ele, quando entram em contato com o cido re- em zebrafish. Quando vi esse paper, lembra-se
tinoico, clulas ainda pouco especializadas rece- Xavier, quase chorei. Por causa da situao de
bem instrues para se organizar na forma de um meu trabalho em 2008, diz Xavier, eu sabia que
reservatrio de sangue, ou seja, um trio. Quando iria demorar para contestar.
no detectam nada, formam uma forte bomba Em 2005, como pesquisador do Instituto do
propulsora de sangue um ventrculo. Corao (InCor) da Universidade de So Paulo
So estruturas bem diferentes: o trio, de su- (USP), Xavier, com sua equipe, tinha apresentado
perfcie lisa, funciona como um reservatrio que sua hiptese sobre a formao e a evoluo dos
infla ao receber sangue. As protenas respons- compartimentos de sangue no corao de ani-

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mais vertebrados. Com base em experimentos Mesmo agora, com mais argumentos, Xavier
com uma variedade impressionante de organis- sabe que ter de batalhar muito para fazer sua
mos, a exemplo da Ciona intestinalis, um inver- viso prevalecer; se no conseguir, poder ser
tebrado marinho cilndrico que representa os desconsiderada ou mesmo esquecida. Hipteses
parentes vivos mais prximos dos vertebrados sobre evoluo dificilmente podem ser testadas,
(a formao do corao desse grupo, os tunica- observa. Alm disso, o corao facilmente enga-
dos, similar aos estgios iniciais da formao na quem procura entend-lo. O mdico romano
do corao dos vertebrados), a equipe argumen- Claudio Galeno, um dos fundadores da medicina
tava que o corao de cmaras de vertebrados ocidental, afirmou que o corao era feito de um
poderia ter surgido a partir de modificaes de tecido especial. Quase 1.500 anos depois, Leo-
nardo da Vinci, depois de
dissecar cadveres, como
Galeno, e fazer vrios de-
Depois de dissecar cadveres, senhos da anatomia do co-
rao, sentenciou: O cora-
Da Vinci corrigiu Galeno ao ver que o o o principal mscu-
lo em relao fora. J
corao era um poderoso msculo era um avano, mas outros
equvocos persistiram. Du-
rante sculos se pensava
que as veias transportavam
um tubo cardaco equivalente ao da Ciona, que ar, j que estavam vazias em animais e pessoas
capaz de fazer movimentos semelhantes ao do mortas. Um sculo depois de Da Vinci, o mdi-
intestino quando impulsiona a massa alimentar co ingls Willian Harvey descreveu a circulao
durante o processo de digesto. Animais como do sangue em detalhes, mostrando que as veias,
a lagosta e outros crustceos representam outro como as artrias, transportavam sangue e no ar.
modelo para a formao das cmaras cardacas,

X
pois tm apenas uma cmara e so muito mais avier, como outros cientistas contempo-
rpidos, por exemplo, que os onicforos, vermes rneos, tambm tomou caminhos equivo-
dotados apenas de um tubo peristltico simples, cados. Logo depois de chegar Universi-
afirma. As cmaras cardacas so um atributo de dade Harvard para o ps-doutorado, em 1997, ele
vertebrados, apresentam contrao simultnea e se viu atrado, quase inevitavelmente, pela ideia
so separadas por vlvulas, tudo dentro de uma ento em moda de que um nico gene poderia
membrana, o pericrdio. Uma argumentao ser capaz de definir a formao do corao. Ha-
coerente, porm, no era o bastante. Eu sabia via um gene candidato, mas os experimentos os
que ainda teria de provar minhas hipteses, diz. camundongos, mesmo sem esse gene, nasciam
Tive de esperar seis anos at refazer os expe- com corao, embora morressem logo depois
rimentos e mostrar o papel do cido retinoico. indicaram que o corao dependia de muitos

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genes para se formar. E ele se rendeu: muito
mais complicado do que pensvamos.
Depois disso, Xavier conseguiu reunir animais
transgnicos e reagentes apropriados que aos
poucos caam nas mos da coordenadora do la-
boratrio, Nadia Rosenthal para planejar os
experimentos que poderiam indicar coisas novas
sobre a formao do corao. Mesmo se fracas-
sar, pensei, j sou grato por observar o desenvol-
vimento do embrio, ele recorda. E, como eu es-
tava comeando na biologia do desenvolvimento,
podia ver com meus prprios olhos os processos
de formao dos rgaos, sem estar contaminado
pelo excesso de leitura de artigos cientficos.
X
avier comeou ento a examinar como a
expresso da enzima betagalactosidade
poderia indicar a ao do cido retinoico
em diferentes regies do corao de embries
de camundongos de nove dias. Quase descolei
a retina tentando ver o que no existia nos em-
bries de camundongos, diz ele. Aos poucos ele
viu claramente o padro de colorao definido
pela ativao do cido retinoico: Dependendo
da expresso da enzima, as regies do corao
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As quatro cmaras
do corao, vistas
por Da Vinci: o
artista desfez
o equvoco de
Galeno, que
imaginava apenas
duas cmaras
ficavam verdes, indicando que o cido retinoico
estava atuando naquela rea, como ativador ou
represssor de vrios genes.
Ele observou que at o stimo dia da gestao,
que demora 21 dias, o corao ainda no havia
se formado, nem havia nenhum sinal da ao do
cido retinoico em tecidos cardacos. Dois dias
depois o corao j havia se delineado como um
tubo, ocorria uma descarga de cido retinoico e
o trio se formava. Logo depois, o cido retinoi-
co desaparecia e se formava o ventrculo. Ou- reproduo de desenho Leonardo da VinciSCIENCE PHOTO LIBRARY
tros experimentos, em codorna, indicaram que,
sem cido retinoico, o trio no se formava e, de
modo complementar, o excesso dessa substn-
cia impedia a formao do ventrculo. O cido
retinoico um ator que entra e sai do palco, na
mesma pea, em papis diferentes, diz Xavier.
O cido retinoico de fato um ator-chave
na formao das cmaras cardacas, observa
Didier Stainier, coordenador de uma equipe da
Universidade da Califrnia em So Francisco
(UCSF), que estuda a formao do corao em
zebrafish. Em 2002, Stainier e Deborah Yelon,
que trabalhou em seu laboratrio, viram o papel
do cido retinoico em um estgio anterior do de-
 Embrio de senvolvimento: com outras molculas, poderia
galinha: sob a induzir a formao de um tecido embrionrio
ao do cido
primordial chamado endoderme (o corao vai
retinoico
se formar a partir de outro tecido, a mesoderme).
Segundo ele, Xavier tem estado na vanguarda
dessas investigaes que, sem dvida, levaro a
insights adicionais sobre o processo de desen-
volvimento do corao.
M
esmo depois do corao formado, o ator
verstil continua em cena. Em 2011, pes-
quisadores da Universidade Duke, Es-
tados Unidos, mostraram que o cido retinoico,
por causa de sua capacidade de induzir a mul-
tiplicao celular, facilitava a regenerao do
endocrdio, a camada interna do corao. Outra
vez, o modelo experimental era o zebrafish; essa
espcie usada h dcadas porque as fmeas pro- linhagens de animais transgnicos, a maioria sob
duzem muitos ovos, coletados com facilidade, e
o embrio se forma a partir de uma nica clula,
em apenas um dia aps a fertilizao.
Depois de dois anos em Harvard, Xavier voltou
feliz para o InCor disposto a montar um grupo de
pesquisa em gentica do desenvolvimento embrio-
nrio e continuar trabalhando como nos dois anos
em que passou em Harvard. Sua primeira dificulda-
de foi conseguir camundongos, que no chegavam
na quantidade e no prazo esperados. Ele no se aco-
modou e saiu perguntando onde poderia comprar
ovo de galinha fertilizado e estufa, de modo a no
deixar o trabalho parar. Muitos anos antes, com a
mesma avidez por fazer cincia, ele tinha caado
sapos para fazer os experimentos previstos em seu
estgio j no primeiro ano do curso de medicina
em Fortaleza. Desde a graduao eu j queria ser
pesquisador, diz ele, ao comentar, em seguida,
que gostava muito das disciplinas bsicas como
bioqumica, para as quais os aspirantes a mdicos
normalmente torcem o nariz. Desde antes ele j
gostava do mundo da cincia, acompanhando o pai,
que era professor de bioqumica na universidade,
aos laboratrios e estufas de plantas. Lembra do
kit Os cientistas, da dcada de 1970? Eu tinha to-
dos. Vivo nesse mundo desde cedo.
Xavier demorou cinco anos at montar sua pr-
pria equipe e o laboratrio de que precisava para
retomar o ritmo de trabalho que desejava. Se fi-
car sozinho, est perdido, ele conclui. Network
tudo. Por meio de testes em galinhas e em co-
dornas, ele verificou que a ao do cido retinoico,
por sua vez, era regulada pela enzima RALDH2.
Detalhei o que e quando acontecia, diz. Ele no
parou mais de aproveitar os estudos sobre outros
animais vermes marinhos, escargots, lagostas e
outros para examinar os processos evolutivos de
formao do corao e, a partir de 2010, quando
se mudou para o LNBio, continuou a produzir
encomenda, para experimentos de outros pes-
quisadores e de seu prprio grupo. Incapaz de
se aquietar, em agosto ele percorreu outra vez a
chapada do Araripe, no Cear, em busca de fs-
seis de peixes com idade mdia de 120 milhes de
anos que, examinados por tomografia, poderiam
revelar um pouco mais da evoluo do corao. n
Projeto
Evoluo e desenvolvimento das cmaras cardacas (n 06/50843-0);
Modalidade Auxlio Pesquisa Regular; Pesquisador responsvel
Jos Xavier Neto (LNBio); Investimento R$ 311.558,83 (FAPESP).
Artigos cientficos
SIMES-COSTA M. S. et al. The evolutionary origin of cardiac cham-
bers. Developmental Biology. v. 277, n. 1, p. 1-15. 2005.
MOSS, J. B. et al. Dynamic patterns of retinoic acid synthesis and res-
ponse in the developing mammalian heart. Developmental Biology.
v. 199, p. 55-71. 1998.
WAXMAN, J. S. et al. Hoxb5b acts downstream of retinoic acid signa-
ling in the forelimb field to restrict heart field potential in zebrafish.
Developmental Biology. v. 15, n. 6, p. 923-34.
YELON D. e STAINIER, D.Y. Pattern formation: swimming in retinoic
acid. Current Biology. v. 12, n. 20, p. 707-9.
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