Prctica No.

2 Anlisis de cidos nucleicos

Equipo No. 1. 7 B
Medina-Prez BR, Mendoza-Guzmn J, Meza-Hernndez AG, Mota-Rodrguez DL.
Viernes 10:00-13:00. 29 de Septiembre de 2017, 06 de Octubre de 2017 y 13 de Octubre de 2017.
Agosto- Diciembre 2017.
Laboratorio de gentica, Unidad Acadmica de Ciencias Qumicas, Universidad Autnoma de Zacatecas.

Resumen: Los cidos nucleicos (AN) son las biomolculas portadoras de la informacin gentica, su subunidad
estructural es el nucletido (pentosa, base nitrogenada y fosfato). Existen dos tipos de cidos nucleicos que son,
ADN y ARN. Para su estudio, los AN deben aislarse del resto de los componentes celulares. Los mtodos
extraccin de cidos nucleicos depende de la muestra y tipo de AN. Mediante la electroforesis podemos separar
fragmentos de DNA y RNA en funcin de su tamao, visualizarlos mediante una tcnica sencilla de tincin, y de
esta manera determinar el contenido de cidos nucleicos de una muestra, teniendo una estimacin de su
concentracin y grado de pureza. Se realiz la extraccin de DNA y RNA de sangre perifrica por los mtodos
DNazol y Trizol respectivamente, se realiz una corrida electrofortica en gel de agarosa en donde solo se
obtuvo una banda correspondiente a DNA.
Palabras clave: Electroforesis, DNA, RNA, extraccin, gel de agarosa.
Introduccin
Los cidos Nucleicos son las biomolculas Para su estudio, los cidos nucleicos deben
portadoras de la informacin gentica. Son aislarse del resto de los componentes celulares,
biopolmeros, de elevado peso molecular, como lpidos y protenas, ms abundantes que los
formados por otras subunidades estructurales o cidos nucleicos. Asimismo, dependiendo del
monmeros, denominados nucletidos. Cada objeto de estudio debe aislarse de preferencia el
nucletido es una molcula compuesta por la ADN o ARN; as, para estudios de niveles de
unin de tres unidades: un monosacrido (una expresin gnica se extraer ARN, mientras que,
pentosa), una base nitrogenada (purnica para la bsqueda de modificaciones o
adenina, guanina o pirimidnica citosina, alteraciones gnicas, ADN (Brown, 2007).
timina o uracilo ) y uno o varios grupos fosfato
Todos los mtodos extraccin de cidos
(Watson et al, 2006).
nucleicos pueden dividirse en una serie de pasos
Atendiendo a su estructura y composicin existen generales, de tal forma que la necesidad de cada
dos tipos de cidos nucleicos que son, cido paso depende de la muestra y tipo de AN (Faraga
desoxirribonucleico (ADN) y cido ribonucleico et al, 2004):
(ARN), que se diferencian por el azcar (Pentosa)
Liberacin de los cidos nucleicos de las
que llevan: desoxirribosa y ribosa,
bacterias, hongos, muestras biolgicas
respectivamente. Adems, se diferencian por las
(sangre).
bases nitrogenadas que contienen, adenina,
guanina, citosina y timina, en el ADN; y Adenina, Proteccin y estabilizacin de los cidos
guanina, citosina y uracilo en el ARN. El ADN es nucleicos frente a la degradacin. El RNA es
una cadena doble y en el ARN es una cadena mucho ms difcil de estabilizar que el DNA.
sencilla (Lodish et al, 2005). Eliminacin de inhibidores de la separacin.
Para algunas muestras (esputo, sangre)
 pueden ser necesarios ms pasos que para
otras
Concentracin de la muestra y la diana en un
pequeo volumen.
Colocacin de la diana en un medio acuoso
compatible con el mtodo de separacin
La extraccin nos permite analizar los cidos
nucleicos por diferentes tcnicas como lo son:
Southern blot o Norrthen blot, reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR), electroforesis y
construccin de bibliotecas genmicas (Brown,
2007).
La electroforesis en gel de agarosa es una de las
metodologas ms utilizadas en el laboratorio en
todo lo relacionado con el trabajo de cidos
nucleicos. Mediante la electroforesis podemos
Materiales y mtodos
-Extraccin de DNA
separar fragmentos de ADN y ARN en funcin
de su tamao, visualizarlos mediante un a tcnica
sencilla de tincin, y de esta manera determinar
el contenido de cidos nucleicos de una muestra,
teniendo una estimacin de su concentracin y
grado de pureza (Lodish et al, 2005).
En esta prctica se realiz la extraccin de ADN
y ARN de sangre perifrica por el mtodo de
DNazol y Trizol respectivamente para su
posterior anlisis por electroforesis en gel de
agarosa. En la electroforesis solo se evidenci la
presencia de RNA y en el pocillo del DNA la
banda no estaba presente.
-Extraccin de RNA
-Electroforesis de cidos nucleicos
Resultados

Figura 1. Extraccin de DNA por el mtodo de DNazol. DNA, leucocitos de sangre perifrica ( ,hebras de DNA )

Figura 2. Extraccin de RNA por el mtodo Trizol. RNA, leucocitos de sangre perifrica ( , hebras de RNA)
Tabla 1. Aplicacin de las muestras y resultados de electroforesis. MP (marcador de peso molecular), BC (buffer de carga). Resultados; +++, bandas
definidas de cidos nucleicos en la electroforesis; ++, bandas parcialmente definidas o borrosas de cidos nucleicos en la electroforesis; +, presencia
de bandas muy dbiles en la electroforesis; -, no hay presencia de bandas en la electroforesis.

No. de pozo 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
No. De equipo - 1 2 3 4 4 1 2 3 4
Muestra MP DNA RNA
Descripcin Hind III 10L de muestra + 3L de BC para DNA 10L de muestra + 3L de BC para RNA
Volumen 3L 10L 10L
Resultado +++ - ++ ++ - + + + + +

Figura 3. Electroforesis en gel de agarosa al 1% de RNA y DNA. Pozo 1, marcador de peso molecular . Pozos 2 y 5 no hay presencia de bandas,
pozos 3 y 4 bandas borrosas, pozos 6,7,8,9,10 bandas dbiles o casi nulas. Pozos 3 y 4, numero de pares de bases 23130, corresponde a DNA, pozos
del 6-10, no corresponden a ningn nmero de pares de bases del MP.

Discusin biomolcula de inters de manera adecuada si

se usan los reactivos correctos. El DNA es una
Los resultados obtenidos en la prctica no
molcula polar, pero la reaccin con el etanol
fueron satisfactorios ni coincidieron con lo
a muy baja temperatura hace que se vuelva
reportado en la bibliografa. En la extraccin
apolar e insoluble en el etanol, formndose un
de DNA de leucocitos de sangre perifrica
precipitado justo entre la capa con etanol
(Fig. 1) se observaron las hebras de DNA
lquido y la capa con el extracto. El DNA es
como filamentos blancos a travs de la
el nico componente de la solucin que no es
precipitacin con alcohol absoluto, esto
soluble en el etanol, y se hace visible porque
debido a que la molcula de DNA es ms
las diferentes cadenas se van aglutinando
grande y es bicatenaria. En cambio, en la
entre s al precipitar debido a la accin de
extraccin de RNA de leucocitos de sangre
fuerzas fsicas. Para la extraccin de RNA se
perifrica (Fig. 2), las hebras de RNA fueron
utiliza isopropanol debido a que es ARN es
casi imperceptibles al realizar la precipitacin
insoluble en el mismo permitiendo su
con isopropanol, esto porque el RNA es una
precipitacin.
molcula ms pequea y de cadena sencilla.
Los resultados de la electroforesis (Tabla 1 y
La precipitacin de los cidos nucleicos es
Fig. 3) para el equipo corresponden los
muy importante porque nos permite obtener la
pozos 2 y 7 de la electroforesis. En el pozo 1
se coloc la muestra de DNA y en el pozo 7
la muestra de RNA. No se obtuvo DNA de
acuerdo a lo obtenido en la electroforesis
(Tabla 1 y Fig. 3), estos resultados no
coinciden con lo que se visualiz en la
extraccin de DNA (Fig. 1), que fueron
filamentos blancos que corresponden a hebras
de DNA, aunque la molcula de DNA es
estable debido a su estructura (bicatenaria)
esto no la exime de la degradacin por
factores qumicos o fsicos , debido a que la
electroforesis se realiz una semana despus
de la extraccin y a que la muestra se
manipul en considerables ocasiones, esta se
pudo degradar y, por lo tanto, en la
electroforesis no se obtuvo un banda y no se
evidenci la presencia de DNA. En cuanto al
ARN, en la electroforesis aparece una banda
muy dbil (Tabla 1 y Fig. 3), estos resultados
coinciden en cierta manera con la observacin
de la extraccin de ARN (Fig. 2), que fueron
unas hebras muy delgadas,
imperceptibles que corresponden a hebras de
ARN. Este resultado puede ser consecuencia
de la inestabilidad de ARN por su cadena
sencilla y a que no se utilizaron en su totalidad
materiales libres de RNasas durante la
extraccin del cido nucleico. Por lo tanto, el
RNA se degrad y solo se observa una banda
muy dbil en la electroforesis.
Todos los equipos obtuvimos los mismos
resultados en cuanto a la electroforesis de
RNA, presencia de bandas dbiles, lo que
indica que la tcnica no se realiz de manera
adecuada y por lo tanto el RNA se degrad.
Para DNA, solo dos equipos, 3 y 4,
obtuvieron bandas marcadas de DNA y
corresponden con el nmero de pares de bases
que debe tener el DNA (20-23 Kpb), lo que
indica que la extraccin y electroforesis de
DNA se realiz de manera adecuada. Nuestro
equipo y el equipo 5 no obtuvimos bandas en
la electroforesis en los pozos
correspondientes a DNA, esto nos demuestra
que tanto la extraccin y la electroforesis no
se realizaron de manera adecuada.
Es importante realizar de manera adecuada la
extraccin de AN porque es un procedimiento
imprescindible de la biologa molecular. Una
vez que se extrae el AN, este tiene numerosos
usos: en ingeniera gentica en animales, en la
creacin de medicamentos que pueden
utilizarse en humanos, es utilizada para el
diagnstico mdico, identificacon de
criminales e identificacon histrica.
Conclusin
Con base en los objetivos establecidos para
esta prctica, se realiz un anlisis
electrofortico de las muestras de DNA y
RNA extradas de leucocitos con el mtodo
DNazol y Trizol, respectivamente, para
evaluar su cantidad y calidad. En este caso, la
cantidad y calidad de las muestras de DNA y
RNA fueron muy bajas debido a que las
casi tcnicas de extraccin de cidos nucleicos
(DNA y RNA) no se realizaron de manera
correcta.
Referencias
Brown TA. (2007). Genomas. 3 ed. Editorial
Mdica Panamericana. Mxico, pp34.
Faraga J et al. Comparacin entre cinco
mtodos para la extraccin de ADN. Rev
cubana Med Trop. 2004; 56(3): 208-220.
Lodish et al. (2005). Biologa celular y
molecular. 5 ed. Editorial Mdica
Panamericana. Mxico, pp 87, 88 y 410.
Watson JD et al. (2008). Biologa molecular
del gen. 5 ed. Editorial Mdica
Panamericana. Mxico, pp 35, 74, 109-111,
137 y 141.