GC Lipidos

MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN INSTITUTO DE LA GRASA
Estado actual del anlisis de

lpidos
M.C. Dobarganes
Departamento de Caracterizacin y
Calidad de los Alimentos
Instituto de la Grasa
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Resumen INSTITUTO DE LA GRASA
Clasificacin de lpidos
Etapas en el anlisis de lpidos
Uso combinado de las tcnicas de
separacin
Posibilidades y tendencias en el anlisis
de lpidos
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Que son los lpidos?
- Difciles de definir y clasificar
- Conjunto muy heterogneo de molculas cuya

caracterstica distintiva aunque no general es la
insolubilidad en agua siendo, por el contrario,
solubles en disolventes orgnicos.
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Clasificacin de lpidos
Saponificables
Simples
No saponificables
cidos grasos
Ceras Hidrocarburos
Glicridos: mono, di y Esteroles
triacilgliceroles Tocoferoles y tocotrienoles
Complejos Carotenoides
Glicridos Alcoholes grasos
Fosfoglicridos
Glicosilglicridos
Cardiolipinas
Esfingolpidos
Ceramidas
Esfingomielinas
Glucolpidos
Esfingosina
Glicerol
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Principales cidos en los lpidos de la INSTITUTO DE LA GRASA
dieta
CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO PALMTICO
CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO ESTERICO
CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH=CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO OLEICO:MONOINSATURADO N-9
CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 CH = CH CH2 CH= CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO LINOLEICO: DIINSATURADO N-6
CH3 CH2 CH = CH CH2 CH= CH CH2 CH = CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO LINOLNICO: TRIINSATURADO N-3
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Principales cidos grasos INSTITUTO DE LA GRASA
poliinsaturados
CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 CH = CH CH2 CH= CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO LINOLEICO: DIINSATURADO w-6
CH3 CH2 CH2 CH2 CH2 CH = CH CH2 CH= CH CH2 CH =CH CH2 CH =CH CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO ARAQUIDNICO: POLIINSATURADO w-6
CH3 CH2 CH = CH CH2 CH= CH CH2 CH = CH CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO LINOLNICO: TRIINSATURADO w-3
CH3 CH2 CH = CH CH2 CH= CH CH2 CH = CH CH2 CH = CH CH2 CH = CH CH2 CH2 CH2 COOH
CIDO EICOSAPENTAENOICO: POLIINSATURADO w-3
CH3 CH2 CH = CH CH2 CH= CH CH2 CH = CH CH2 CH = CH CH2 CH = CH CH2 CH = CH CH2 CH2 COOH
CIDO DOCOSAHEXAENOICO: POLIINSATURADO w -3

MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Ceras INSTITUTO DE LA GRASA
steres de cidos grasos y alcoholes

grasos (normalmente C16 a C30)
http://lipidlibrary.aocs.org/
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Glicridos Simples
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Glicridos complejos: INSTITUTO DE LA GRASA
Fosfoglicridos (grupos amino)
Colina
Serina
Etanolamina
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Glicridos complejos: INSTITUTO DE LA GRASA
Fosfoglicridos (Carbohidrato)
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Glicridos complejos: INSTITUTO DE LA GRASA
Glucoglicridos
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Glicridos complejos: Cardiolipinas
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Esfingolpidos : esfingomielinas
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Glucoesfingolpidos INSTITUTO DE LA GRASA
Esfingolpidos compuestos por una ceramida

(esfingosina + cido graso) y un glcido de cadena corta
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Otros lpidos saponificables de INSTITUTO DE LA GRASA
inters: Eicosanoides
cido araquidnico
Cicloxigenasa Lipoxigenasa
Prostaglandina
Leucotrieno
Tromboxano
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Lpidos no saponificables INSTITUTO DE LA GRASA
La mayor parte son molculas

isoprenoides
Hidrocarburos
Escualeno, licopeno, caroteno
Esteroles
Colesterol, fitoesterles
Tocoferoles y tocotrienoles
Carotenoides
Vitaminas A y Q
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Lpidos no saponificables: INSTITUTO DE LA GRASA
Esteroles
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Otros lpidos de inters: Hormonas y

vitaminas esteroideas
Vitamina D3 Vitamina D2
Colesterol
Testoesterona Estradiol Progesterona

MINISTERIO DE
CIENCIA E
Tocoferoles y tocotrienoles
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Carotenoides INSTITUTO DE LA GRASA
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Vitaminas A y K
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Problemas en el anlisis de lpidos
Grupos de compuestos con estructura muy variada

La presencia de cidos grasos y de derivados
isoprenoides, en muchos casos con alto grado de
insaturacin, indica inestabilidad de la mayor parte de
las molculas lipdicas
El primer aspecto de importancia es la necesidad de
preservar la muestra antes de la extraccin y/o el
anlisis
Caractersticas ideales de
MINISTERIO DE
CIENCIA E
los anlisis
Mnimo nmero de etapas (tiempo y errores)

Mnima cantidad de muestra (disolventes y
tiempo)
Mnimo tiempo de anlisis
Automatizacin de tcnicas (costes
laborales)
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Cual es el objetivo del anlisis de INSTITUTO DE LA GRASA
lpidos?
Objetivo del anlisis de lpidos

Contenido (extraccin)
Caracterizacin o identificacin de sustrato
(componentes mayoritarios y minoritarios)
Control de procesos (tcnicas rpidas)
Evaluacin de calidad (hidrlisis, oxidacin,
contaminantes)
Control de compuestos especficos (aditivos,
contaminantes, etc)
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Polaridad de lpidos y disolventes
Lpidos Disolventes
Hidrocarburos Hexano
steres de cidos grasos Ciclohexano
Triacilgliceroles Benceno
cidos grasos ter dietlico
Alcoholes grasos Cloroformo
Esteroles Dioxano
Diglicridos Acetona
Monoglicridos Acetonitrilo
Eicosanoides Piridina
Fosfolpidos Butanol, propanol, etanol,
Esfingolpidos metanol
Agua
MINISTERIO DE
CIENCIA E
La extraccin depende del objetivo
Extraccin de aceites de semillas (hexano)

Extraccin completa de steres
Extraccin mnima de lpidos polares
Extraccin de lpidos de alimentos y
biolgicos
Cloroformo-metanol
Extraccin de lpidos polares
Extraccin con hidrlisis cida previa
Obtencin de lpidos ligados a molculas no
lipdicas
Disminucin del nmero de especies moleculares
Extraccin con hexano o ter etlico
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Aspectos importantes de la INSTITUTO DE LA GRASA
extraccin de lpidos
Diferenciar entre muestra para determinar el contenido
total de lpidos o para conocer algn aspecto de su
composicin
Contenido total: El objetivo fundamental es la cantidad de
lpidos
Composicin: El objetivo fundamental es la preservacin
de los componentes a analizar
Eliminacin de agua a baja temperatura: liofilizacin
Proteccin con antioxidantes y/o nitrgeno en muestras de
baja estabilidad
La eleccin del disolvente influye en el contenido graso

Baja polaridad: Elevada selectividad para lpidos aunque
baja solubilidad para lpidos `muy polares
Elevada polaridad: menor selectividad y posibilidad de
solubilizar compuestos no lipdicos
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Extraccin de la muestra de lpidos
Mtodo ISO-774-1 Extraccin en Soxhlet con hexano o ter etlico

Mtodo ISO-1443: digestin de la muestra con HCl 3N previa a la
extraccin de la grasa en Soxhlet
Mtodo de Folch et al. (1957): solucin de cloroformo:metanol 2:1

Mtodo de Bligh and Dyer (1959): solucin de cloroformo:metanol
2:1
Mtodo de Hara et al. (1978): solucin de hexano :2-propanol 3:2
http://www.cyberlipid.org/cyberlip/home0001.htm
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Sistemas de extraccin de la INSTITUTO DE LA GRASA
muestra de lpidos
Extraccin discontinua con mezcla de disolventes

Extraccin semicontinua (soxhlet)
Extraccin continua (Soxtec)
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Mejoras en las tcnicas de INSTITUTO DE LA GRASA
extraccin
Posibilidad de automatizacin
Tcnicas limpias y selectivas
Mayor rapidez y eficacia
Idealmente, baratas, sencillas y sin
utilizacin de disolventes txicos
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Extraccin de lpidos: Nuevas tcnicas

Extraccin Acelerada con Disolventes (ASE)

130-140 atm; 30-200 C
Extraccin Asistida por Microondas (MAE)
(300 W; 1-15 min)
Extraccin con Fluidos Supercrticos (SFE)
(31 C; 73 atm)
ASE MAE SFE

MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Separacin de componentes de la INSTITUTO DE LA GRASA
muestra de lpidos
Primaca de las tcnicas cromatogrficas de separacin en
todas las etapas posteriores a la extraccin:
Purificacin de la muestra extrada

Concentracin, en su caso, de los compuestos de inters
Separacin de los compuestos de inters
Distincin entre separacin por grupos y por componentes

individuales
Tcnicas de baja resolucin
Tcnicas de elevada resolucin
Mtodos de separacin
MINISTERIO DE
CIENCIA E
cromatogrficos
Base de la Fase Interaccin

Fase mvil
separacin estacionaria entre fases
Fuerzas de Van
Adsorcin Slido Lquido/gas
der Waals
Diferencias de
Reparto Lquido Lquido/gas
solubilidad
Tamao
Exclusin Gel Lquido
molecular
Intercambio Lquido Fuerzas

Resina
inico electrostticas
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Sistemas de purificacin y INSTITUTO DE LA GRASA
separacin de grupos
Extraccin liquido lquido

TLC
Cromatografa en columna clsica
Extraccin en fase slida (SPE)
Todas las tcnicas se siguen utilizando aunque la extraccin en fase slida

se utiliza cada vez ms debido a su adaptacin a tiempos mnimos de
separacin y a distintos tamaos de muestra
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INSTITUTO DE LA GRASA
Sistemas de purificacin y separacin:

INNOVACIN
Extraccin en fase slida
SiOH
Si(CH2)3 NH2
Fase normal Si(CH2)3 CN
Si(CH2 )3 OCH2 CH(OH)CH2
OH
SiC18 H37
SiC8 H17
Fase reversa
SiC2 H5
Si C6 H5
Cromatografa lquida de alta
MINISTERIO DE
CIENCIA E
eficacia
Adsorcin o Fase normal:

Separacin por polaridad
(fase estacionaria polar)
Reparto o Fase reversa :

Separacin por solubilidad
(fase mvil polar)
Exclusin: Separacin por

tamao molecular
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Cromatografa lquida de alta INSTITUTO DE LA GRASA
eficacia (HPLC)
Los parmetros que influyen en la

resolucin (n de platos tericos)
Fase estacionaria
Naturaleza
Cantidad de fase o Geometria de la columna
(Longitud/ diametro)
Tamao de partcula
Disolvente de elucin
Rgimen isocrtico o gradiente
Flujo (mL/min)
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN ltimos avances en la INSTITUTO DE LA GRASA
cromatografa lquida (UPLC)
Cromatografa ultra
Ultra presin
Mejora de los sistemas de control
de presin (hasta 12.000 psi)
Ultra eficacia
Tamao de partcula (1-3 m)
Desarrollo de detectores
universales
Detector de aerosol cargado
Columna de slice (10% NO3Ag)
(CAD) de 3 m de tamao de partcula
http://lipidlibrary.aocs.org
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Anlisis de triglicridos
Columna 200 2.1 mm

Hypersil MOS, 3 m
Acetone/ACN (30:70)
Flow rate 0.5 ml/min
Detector de ndice de refraccin
(
CIENCIA ESeparacin de lpidos de yema de

MINISTERIO DE
INNOVACIN
P
G
) INSTITUTO DE LA GRASA
huevo
Spherisorb Silica, 3, 100 x 4.6 mm
1. Colesterol
1. Colesterol
2. cido palmtico
3. Fosfatidiletanolamina 2. Fosfatidiletanolamina
4. Fosfatidilserina 3. Fosfatidilcolina
5. Fosfatidilcolina
6. Esfingomielina 4. esfingomielina
http://www.discoverysciences.com/Library_home.aspx
MINISTERIO DE
CIENCIA E
0.4 mL/min 0.8 mL/min 1.2 mL/min
a. Ergosterol
b. Lanosterol
c. Colesterol
Columna: Acquity UPLC-BEH C18 (50 x 2.1 mm, 1.7 m)
d. Estigmasterol
e. Campesterol
f. -sitosterol
Lerma-Garca et al., 2010

Nuevos sistema de deteccin universal:
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Detector de aerosol cargado
La fase mvil es nebulizada, el disolvente se elimina

a temperature ambiente y los analitos se mezclan con
nitrogeno ionizado. Se mide la carga que adquieren,
que depende de la cantidad de compuesto.
MINISTERIO DE
Cromatografa de gases
CIENCIA E
Separacin de compuestos con

volatilidad alta o media
Elevada resolucin de especies

moleculares
Todava es la tcnica ms
adecuada en la separacin de
compuestos lipdicos, siempre
que la volatilidad de los
compuestos a separar lo permita
o sea posible aumentar la
volatilidad mediante reacciones
de derivatizacin
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Principales reacciones de INSTITUTO DE LA GRASA
derivatizacin
Tranesterificacin
O
O C R O H
O OH- O
O H
O C R + CH3O H 3 CH3O C R +
O
O C R O H
Silanizacin
R-OH R
MINISTERIO DE
ltimos avances en la cromatografa

CIENCIA E
de gases
Cromatografa de gases ultrarrpida

(UFGC)
Cromatografa de gases a temperatura
elevada (HTGC)
CIENCIA E
INNOVACINEvolucin de la cromatografa
MINISTERIO DE
de gases
Dimensiones de columna Calentamient Tiempo de

Ancho de
CG o Analisis
pico (s)
Longitud (m) D.I. (mm) (C/ min) (min)
Inicial 14 32 - 64 1 - 10 30 - 60 10 - 20
Convencional 15-60 0.25 - 0.32 1 - 20 20 - 30 2 - 5
Rpida 5 - 15 0.10 - 0.18 20 - 60 5 - 15 0.5 - 2
Ultrarrpida 2 - 5 0.10 60 - 600 2 - 3 0.05 0.5

MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Necesidad de un nuevo sistema INSTITUTO DE LA GRASA
cromatogrfico
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Cromatografa de gases ultrarrpida
Columnas 2.5, 5, 10 m con d.i. de 0.1 mm
Velocidades de programacin de temperaturas de

hasta 20C/s (1200 C/min)
Rango de temperaturas desde 35 to 370C (siempre

que sea compatible con la fase estacionaria)
Rpido enfriamiento de 350C to 50C (1 min)

MINISTERIO DE
CIENCIA E
steres metlicos de aceite de oliva
Columna: MEGAWAX
5m x 0.1mm, 0.1 m
Temperature program:
C18:1 150 (10 s), 1.7 C/s, 250 (20 s)
C16:0 C18:2
C18:0
C16:1
C18:3
C20:0
C20:1 C24:1
0 0.25 0.5 0.75 1 1.25 1.5

time (min)
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Anlisis de steres metlicos INSTITUTO DE LA GRASA
Columna: MEGAWAX (5m x 0.1mm, 0.1

m
Programa de temperatura: 17+1
1. C4:0 20. C18:2n6t
40 (10 s), 1.7 C/s, 250 (20 s) 16 8
23 31 2. C6:0 21. C18:3n6
27 35
26 28 3. C8:0 22. C18:3n3
14 15 24 32 34 4. C10:0 23. C20:0

19 20 33 36+ 5. C11:0 24. C20:1
21 22 25 29
30 37 6. C12:0 25. C20:2
1
12
7. C13:0 26. C20:3n6
8. C14:0 27. C21:0

2 3 4 6
1.7 1.8 1.9 2 2.1 2.2 2.3 2.4
9. C14:1 28. C20:3n3

8
10. C15:0 29. C20:4n6
11
11. C15:1 30. C20:5n3
5 10 12. C16:0 31. C22:0

7 13
9 13. C16:1 32. C22:1n9
14. C17:0 33. C22:2
15. C17:1 34. C23:0
16. C18:0 35. C24:0
17+18. C18:1n 9t+ c 36+37.C24:1+C22:6n3

0 0.5 1 1.5 2 2.5
Time (min) 19. C18:2n6c
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Anlisis de triglicridos
INNOVACIN
Columna:100% dimetilpolisiloxano,
Dimensiones: 2.5 m 0.32 mm, 0.05 m
Temperatura: 150C(0.5 min), 60C/min hasta
340C (0.5 min).
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Cromatografa de gases de alta INSTITUTO DE LA GRASA
temperatura
Desarrollo de fases
cromatogrficas de
bajo sangrado,
estables a elevada
Temperatura (350
400 C)
1. Glycerol
2. Butanotriol
3. Monooleina
4. Tricaprina
5. Dioleina
6. Trioleina
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Tcnicas de identificacin: INSTITUTO DE LA GRASA
Espectrometra de masas
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Tcnicas de ionizacin INSTITUTO DE LA GRASA
Baja energa:
Facilidad de formacin
del in molecular
Alta energa:
Fragmentacin de la
muestra con formacin
de mltiples iones
La combinacin de
ambos sistemas facilita
enormemente la
identificacin de lpidos
MINISTERIO DE
Utilizacin combinada de tcnicas

CIENCIA E
para obtener la mxima informacin
En muchos casos es necesario

obtener una informacin detallada
de los componentes presentes en
la muestra
Ejemplo: Anlisis de destilados de

desodorizacin
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Proceso de refinacin INSTITUTO DE LA GRASA
Refinacin Compuestos
Refinacin qumica Subproducto
fsica eliminados
Desgomado Desgomado Fosfolpidos Lecitinas
cidos grasos
Neutralizacin Jabones
libres
Decoloracin Decoloracin Pigmentos
Desodorizacin Desodorizacin Voltiles Destilado
Destilacin/ cidos grasos

libres y Destilado
neutralizacin voltiles
MINISTERIO DE
Combinacin de tcnicas:Anlisis de
CIENCIA E
destilados de desodorizacin
Compuestos
presentes
Triglicridos
Diglicridos Bases de la separacin
Monoglicridos Polaridad
Acidos grasos Peso/ tamao molecular
Esteres alqulicos Volatilidad
Hidrocarburos
Esteres de esteroles
Ceras
Esteroles
Tocoferoles
MINISTERIO DE
Cromatografa de adsorcin:
CIENCIA E
Separacin por polaridad
Hexano:ter etlico ter

90:10 etlico
Fraccin no polar Fraccin polar

steres alqulicos cidos grasos
steres de Tocoferoles
esteroles Esteroles
Ceras Diglicridos
Triglicridos Monoglicridos
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Cromatografa de exclusin
Triglicridos 900 Ceras/esteres esteroles 600

Diglicridos 600 Esteroles 400
Monoglicridos 400 Hidrocarburos 400
cidos grasos 300 cidos grasos 300
MINISTERIO DE
Cromatografa de exclusin
CIENCIA E
(A) Total
(B) Fr. no polar
(C) Fr. polar
100% 4% 96%
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN Cromatografa de gases de alta INSTITUTO DE LA GRASA
temperatura
(A) Total
(B) Fr. no polar
(C) Fr. polar
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Evolucin del anlisis de lpidos
El desarrollo del anlisis

de lpidos ha estado
asociado al de los
mtodos
cromatogrficos y al de
la qumica orgnica.
En el momento actual,
sin embargo, el avance
de las tcnicas analticas
est ms relacionado
con la bioqumica de
lpidos y con las ciencias
de la salud
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Reconocimiento del papel de los INSTITUTO DE LA GRASA
lpidos
Los lpidos estn relacionados con funciones

celulares crticas, por ejemplo, en las membranas
La actividad de los lpidos se puede modificar en
estados patolgicos
Enfermedades importantes ateroesclerosis,
diabetes, obesidad, accidentes vasculares y
enfermedad de Alzheimer- estn relacionadas
con alteraciones del metabolismo lipdico
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Desarrollo de las micas
Genmica
Protemica
Metabolmica
Lipidmica: Caraterizacin completa de las
especies moleculares de lpidos y de su papel
biolgico respecto a la expresin de las
protenas envueltas en el metabolismo lipdico
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Necesidades y consecuencias
Anlisis de muestras de elevada complejidad

con mnimo tratamiento
Evaluacin directa de muestras biolgicas
Desarrollo de tcnicas de identificacin de

compuestos
Espectroscopa de resonancia magntica
nuclear
Espectrometra de masas (MALDI)
Desarrollo de los sistemas de tratamiento
informtico para la gestin de datos
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Anlisis de lpidos sin separacin
cromatogrfica previa
Identificacin
Plasma Extraccin Anlisis y Anlisis
Anlisis
de lpidos EM cuantificacin de EM
datos
automticas
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Espectrometra de masas de imagen

(neurona)
(a) distribucin de colina

(b) distribucin de C22:6
(c) distribucin de vitamina E
(d) Intensidad
CIENCIA E
INNOVACINVentajas del desarrollo de la
MINISTERIO DE
lipidmica
Mejora rpida de las tcnicas de

identificacin
Disminucin del coste de los sistemas
CG-EM y LC-EM
Desarrollo de las tcnicas de separacin
cromatogrfica rpidas
Posibilidades de disminucin del
tratamiento de la muestra y utilizacin
directa de los mtodos de identificacin
Consecuencias del avance en el
MINISTERIO DE
CIENCIA E
anlisis de lpidos
Cada vez es posible detectar concentraciones
menores de lpidos
Se aprovecha la sensibilidad y elevada
resolucin de los nuevos sistemas de
deteccin
Importancia de nuevos contaminantes
presentes en concetraciones de g/kg (ppt)
que se determinan cuantitativamente
mediante el uso de istopos
FTALATOS
MONOCLORO PROPILDIESTERES
ACRILAMIDA
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Ftalatos: Aditivos en plsticos
Probable carcinognico
Contaminacin generalizada por la facilidad de migracin
Debido a su carcter lipoflico, se encuentran con facilidad
en aceites grasas y alimentos grasos
Anlisis (GC-EM) difcil por la facilidad de contaminacin
de la muestra
Anlisis mediante LC/MS:
MINISTERIO DE
CIENCIA E
determinacin cuantitativa mediante

istopos
Los espectros corresponden a los compuestos puros
y a los istopos utilizados como estandar interno
a. 2-etilhexil ftalato; b. 2-etil hexil ftalato d-4

c. di(2-etilhexil) ftalato; d. di(2-etilhexil) ftalato d-4
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Esteres de Monocloropropanodiol
Presente en muchos alimentos (proteinas hidrolizadas, salsas,

patatas fritas, pan tostado, caf, donuts, etc)
La Comisin Europea limita el contenido en algunos alimentos a
20 m/kg
Entre los aceites y grasas se encuentra en cantidades
significativas en el aceite de palma (> 4 mg/kg)
La deteccin de cantidades significativas en aceite ENOVA
(digliceridos) que origin su retirada del mercado
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Formacin de steres de INSTITUTO DE LA GRASA
monocloropropanodiol
Monosteres y disteres monocloropropanodiol
Su formacin depende de la temperatura, de la presencia de iones cloruro,

y existe buena correlacin con la cantidad de diglicridos y monoglicridos
Formacin de steres de
MINISTERIO DE
CIENCIA E
monocloropropanodiol durante la
refinacin de aceites de girasol y colza
MINISTERIO DE
CIENCIA E
INNOVACIN
Acrilamida: Anlisis INSTITUTO DE LA GRASA
HPLC/MS/MS
NH2
C O Probable neurotxico y
CH carcinognico
CH2 Anlisis LC/MS
(istopo de 1H o 13C
carbonyl
cono estndar interno)
NH2
C O Lmite de cuantificacin
CH2 1g/kg
NH2 CH COOH
Asparagine
MINISTERIO DE
CIENCIA E
Direcciones recomendadas
Excelente web para el conocimiento detallado de los diferentes
tipos de lpidos y de las tcnicas aplicables a su anlisis. Incluye
tutoriales bsicos, una amplia librera de espectros de masa y
RMN y una bibliografa actualizada.
Especialmente interesante en las tcnicas de preservacin,
extraccin y purificacin
http://www.discoverysciences.com/Library_home.aspx
Excelente librera de GC y HPLC incluyendo con detalle
las condiciones de trabajo

GC Lipidos

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MINISTERIO DE

Estado actual del anlisis de

Que son los lpidos?

- Difciles de definir y clasificar

- Conjunto muy heterogneo de molculas cuya

CIDO ARAQUIDNICO: POLIINSATURADO w-6

CIDO EICOSAPENTAENOICO: POLIINSATURADO w-3

CIDO DOCOSAHEXAENOICO: POLIINSATURADO w -3

steres de cidos grasos y alcoholes

Fosfoglicridos (grupos amino)

Glicridos complejos: Cardiolipinas

Esfingolpidos compuestos por una ceramida

La mayor parte son molculas

Otros lpidos de inters: Hormonas y

Testoesterona Estradiol Progesterona

Problemas en el anlisis de lpidos

Grupos de compuestos con estructura muy variada

Mnimo nmero de etapas (tiempo y errores)

Objetivo del anlisis de lpidos

Polaridad de lpidos y disolventes

La extraccin depende del objetivo

Extraccin de aceites de semillas (hexano)

La eleccin del disolvente influye en el contenido graso

Extraccin de la muestra de lpidos

Mtodo ISO-774-1 Extraccin en Soxhlet con hexano o ter etlico

Mtodo de Folch et al. (1957): solucin de cloroformo:metanol 2:1

Extraccin discontinua con mezcla de disolventes

Extraccin de lpidos: Nuevas tcnicas

Extraccin Acelerada con Disolventes (ASE)

ASE MAE SFE

Purificacin de la muestra extrada

Distincin entre separacin por grupos y por componentes

Base de la Fase Interaccin

Intercambio Lquido Fuerzas

Extraccin liquido lquido

Todas las tcnicas se siguen utilizando aunque la extraccin en fase slida

Sistemas de purificacin y separacin:

Extraccin en fase slida

Adsorcin o Fase normal:

Reparto o Fase reversa :

Exclusin: Separacin por

Los parmetros que influyen en la

cromatografa lquida (UPLC)

Columna 200 2.1 mm

CIENCIA ESeparacin de lpidos de yema de

0.4 mL/min 0.8 mL/min 1.2 mL/min

Lerma-Garca et al., 2010

Detector de aerosol cargado

La fase mvil es nebulizada, el disolvente se elimina

Separacin de compuestos con

Elevada resolucin de especies

ltimos avances en la cromatografa

Cromatografa de gases ultrarrpida

Dimensiones de columna Calentamient Tiempo de

Convencional 15-60 0.25 - 0.32 1 - 20 20 - 30 2 - 5

Rpida 5 - 15 0.10 - 0.18 20 - 60 5 - 15 0.5 - 2

Ultrarrpida 2 - 5 0.10 60 - 600 2 - 3 0.05 0.5

Cromatografa de gases ultrarrpida

Columnas 2.5, 5, 10 m con d.i. de 0.1 mm

Velocidades de programacin de temperaturas de

Rango de temperaturas desde 35 to 370C (siempre

Rpido enfriamiento de 350C to 50C (1 min)

steres metlicos de aceite de oliva