Prctica 2

CULTIVO IN VITRO DE PLANTAS

I.INTRODUCCIN
Cultivo de Tejidos vegetales "in vitro", es una tcnica fisiolgica que consiste en cultivar en un
ambiente de vidrio asptico cualquier estructura vegetal, sea una clula, un conjunto de clulas o un rgano,
hasta constituir una planta completa capaz de ser transferida a suelo para su evaluacin agronmica
correspondiente. Obviamente que las sustancias qumicas que conforman el medio de cultivo y las
condiciones fsicas controladas, determina el crecimiento y desarrollo del explanto o estructura vegetal
sometida a cultivo.
Esta tcnica tiene diversas aplicaciones en agricultura, citando entre las ms destacadas: la erradicacin
de patgenos sistmicos, la propagacin clonal masiva y rpida y el mejoramiento gentico. Esto significa
que podemos obtener actualmente una planta sana a partir de otra infectada, propagar con facilidad y rapidez
aquellas especies vegetales de multiplicacin lenta y difcil y lo que es ms importante en tubas de ensayo
se pueden obtener y seleccionar plantas con mayores y mejores rendimientos, resistencia a enfermedades y
tolerancia a condiciones estresantes externas como heladas, sequia, salinidad, etc.

II. OBJETIVOS
Preparar medio de cultivo Murashige y Skoog (MS)
Introducir semillas
Evaluar el crecimiento del explante in vitro

III. MATERIAL DE PRCTICA

Material biolgico: Semillas de alfalfa.

Material de laboratorio:
01 litro de alcohol comercial 01 litro de ron comercial
01 paquete de papel de aluminio 01 bolsa de detergente (250 gr)
01 paquete de algodn (100 g) 01 botella de leja (250 ml)
01 pinza de punta fina 01 bistur con navaja
10 frascos de vidrio 01 plumn marcador
01kg de agar-agar 01 mechero de vidrio
01liego de papel de filtro 01 mascarilla
01 caja de fsforos 250 ml de agua estril
02 placas petri 100 g de azcar blanca

IV.PROCEDIMIENTO
A. Preparacin de medios de cultivo (MS)
1. Preparar medio basal MS, segn indicaciones del profesor.
2. Incluir la sacarosa, el agar y medir el pH.
3. Repartir MS en recipientes de vidrio
4. Cubrir recipiente de vidrio con papel de aluminio
5. Autoclavar en autoclave por treinta minutos
6. Dejar enfriar para luego introducir explantes.

B. Preparacin e introduccin de explante

1. Seleccionar el explante a trabajar (semillas).
2. Lavar varias veces (3) con agua corriente.
3. Cortar en segmentos de tres centmetros, depositar en recipiente de vidrio y lavar con detergente al
10% durante 30 minutos y con agitacin permanente. Lavar con agua corriente hasta que desaparezca
detergente.
4. Limpiar su mesa de trabajo con leja (2,5%) utilizando algodn.
5. Prender sus mecheros que contienen ron.
6. Desinfeccin de los explantes: Colocarlos en alcohol (70%) por treinta segundos, luego lavar con agua
estril.
7. Dejar en leja (2.5%) por dos minutos. Agitacin constante. Lavar con agua estril por tres veces.
8. Los explantes desinfestados colocarlos en placa petri estril en cuyo interior hay papel de filtro estril.
9. Desinfestar pinza y bistur (quemar en llama del mechero) y cortar en segmentos de un centmetro
10. Introducir en recipiente de vidrio con medio nutritivo.
11. Colocarlos en sala de incubacin con fuente luminosa (fluorescentes)
11. Observar a los cinco das.

V. RESULTADOS
A los cinco das anotar sus resultados.

Tabla 1. Evaluacin de germinacin de semillas in vitro a los 07 das de edad

Variables Contaminados Necrosados Medio Semillas Tallo
Explante fenolizado germinadas Raz
1 - -
2 - -
3 - -
4 - -
5 - -
6 - -
7 - -
8 - -
9 - -
10 - -
11 - -
12 - -
13 - -
14 - -
15 - -
Promedio - -

VI. CUESTIONARIO
1. Cules son las reas de un Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales?
Un laboratorio de cultivo de tejidos se puede dividir en reas separados para las diferentes
funciones que se desarrollan en la prctica.
1. rea negra oficina
2. rea gris o de preparacin de medios de cultivo
3. rea de esterilizacin o preparacin de medios de cultivo
4. rea blanca (rea de transferencia)
5. rea blanca (rea de incubacin)
6. rea anexa

2. Cul es el material de vidrio que se utiliza con frecuencia?

-Tubos de ensayo

3. Cules son los equipos/aparatos indispensables en un laboratorio de cultivo de tejidos?

-Hornos para Secado
-Cmara de Flujo Laminar
-Autoclave
-Refrigerador y congelador
-Balanzas
-Medidor de pH
 -Destilador
-Agitador Magntico

4. Qu desinfectantes se utilizan para introducir explantes libres de patgenos?

- Etanol
-Hipoclorito de sodio
-Surfactantes

5. En el medio MS, cuales son los macronutrientes?

6. Cul es el rango de pH que debe tener un medio de cultivo?
7. Porque se agrega sacarosa al medio de cultivo?
8. Cules es la finalidad de suplementar el medio de cultivo con reguladores del crecimiento?

VII. CONCLUSIONES

El tratamiento de desinfeccin inicial empleado en la reduccin de la

contaminacin bacteriana proveniente de los bulbos cultivados en tierra result
efectivo.
La experticia adquirida por el investigador permiti reducir la contaminacin
introducida por el mismo.

VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

http://annymojica.blogspot.pe/2012/02/212-material-y-equipo-de-laboratorio.html
https://es.scribd.com/doc/3246492/Material-de-laboratorio
https://repository.icesi.edu.co/biblioteca_digital/bitstream/10906/76972/1/cultivo_invitro_tejidos.pdf