Guia Laboratorios Microbiologia 201504 PDF

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD
ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

GUIA COMPONENTE PRCTICO DEL CURSO: 201504 MICROBIOLOGA
UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

GUA COMPONENTE PRCTICO
201504MICROBIOLOGA
MARTHA CECILIA VINASCO GUZMN
MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ
PASTO
AGOSTO DE 2011
1
2. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO
El contenido didctico del componente prctico del curso de Microbiologa, fue diseado en el ao
2004 por la Dra. Carmen Eugenia Pia Lpez, docente de la UNAD, de Bogot. M.Sc. Ciencias
Biolgicas. Universidad Estatal de Jarkov (Ucrania), M.Sc. Docencia Universitaria. Universidad de la
Salle. Bogot, Especialista en Nutricin Animal Sostenible. UNAD. Bogot, Especialista en
Informtica y Multimedios. Fundacin Universitaria Los Libertadores. Bogot y quien actualmente
se encuentra cursando el Doctorado en Tecnologa Instruccional y Educacin a Distancia (Nuevas
Tecnologas) con la Universidad NOVA en Estados Unidos.
El contenido didctico de este componente prctico ha sido apoyado por las Dras. Anglica Yara y
Roco Gmez y ha tenido actualizaciones anuales a partir de su creacin. Esta actualizaciones han
sido llevadas a cabo por la Dra. Marta Cecilia Vinasco Guzmn, tutora del Cead Pitalito, quien ha
trabajado en la UNAD desde ao 2004, y que se encuentra cursando el doctorado en Desarrollo
Sostenible con la Universidad Catlica de vila.
Actualmente la direccin del curso de Microbiologa est a cargo de la Dra. Mery Liliana Lpez
Martnez, Biloga de la Universidad Nacional de Colombia, Especialista en Microbiologa de la
Universidad Catlica de Manizales y estudiante de Maestra en Ingeniera Ambiental, Docente
Auxiliar de la UNAD en el CEAD de Pasto.
Este documento se puede copiar, distribuir y comunicar pblicamente bajo las condiciones
siguientes:
Reconocimiento. Debe reconocer los crditos de la obra de la manera especificada por el

autor o el licenciador (pero no de una manera que sugiera que tiene su apoyo o apoyan el
uso que hace de su obra).
No comercial. No puede utilizar esta obra para fines comerciales.
2
Sin obras derivadas. No se puede alterar, transformar o generar una obra derivada a partir
de esta obra.
Al reutilizar o distribuir la obra, tiene que dejar bien claro los trminos de la licencia de
esta obra.
Alguna de estas condiciones puede no aplicarse si se obtiene el permiso del titular de los
derechos de autor.
Nada en esta menoscaba o restringe los derechos morales del autor.
3
3. INDICE DE CONTENIDO
Caractersticas generales 5
Prctica 1. Normas generales de Bioseguridad 7
Prctica 2. Medios de cultivo 11
Prctica 3. Siembra de Microorganismos 15
Prctica 4. Observacin de Microorganismos y tcnicas de tincin 19
Prctica 5. Microorganismos del ambiente 24
Prctica 6. Observacin y recuento de colonias 29
Prctica 7. Efecto de los desinfectantes sobre los Microorganismos 33
Fuentes Documentales 36
4
3. CARACTERSTICAS GENERALES
Introduccin La microbiologa estudia los microorganismos u organismos

generalmente microscpicos, aunque algunos pueden ser observados a
simple vista.
Su estudio comprende la identificacin y clasificacin de los
microorganismos, su origen y evolucin, la dinmica del crecimiento, el
rol interactivo de los microorganismos con el sistema inmunolgico, las
enfermedades que pueden producir y su importancia en la produccin
industrial.
Hay muchos campos de estudio especfico en microbiologa:
bacteriologa, protozoologa, micologa, virologa, microbiologa
agrcola, microbiologa de alimentos, microbiologa ambiental, entre
otras.
El objeto material de la microbiologa viene delimitado por el tamao de
los seres que investiga, lo que supone que abarca una enorme
heterogeneidad de tipos estructurales, funcionales y taxonmicos:
desde partculas no celulares como los virus, viroides y priones, hasta
organismos celulares tan diferentes como las
bacterias: eubacterias, arqueas, los protozoos, parte de las algas,
los hongos y levaduras
Justificacin La microbiologa es una disciplina que aporta tanto conceptos como
tcnicas y metodologas tiles para la gestin industrial de muchos
procesos que aprovechan la capacidad de los microorganismos para la
produccin rpida de una serie de insumos y de transformaciones de
materiales, necesarios para el desarrollo humano y econmico, tales
como aumento y rendimiento de
cultivos, biofertilizantes, biocontrol,vectores para transferencias de
informacin gentica en el desarrollo de plantas
transgnicas, produccin de compuestos qumicos y aditivos para
alimentos, eliminacin de materiales contaminantes y residuos txicos
del medio ambiente entre otras.
En el desarrollo de los laboratorios el estudiante va a llevar a contextos
prcticos los conceptos aprendidos en el desarrollo del curso.
Intencionalidades Propsitos:
formativas El contenido de esta gua de componente prctico est orientado a la
autogestin estudiantil de los conocimientos tericos necesarios para la
comprensin de los enfoques tericos de la microbiologa moderna y las
condiciones de manejo seguro de los microorganismos, a nivel de
laboratorio y en los procesos de aplicaciones industriales.
5
Objetivos:
Permitir al alumno conocer, comprender y aplicar los conceptos y
procedimientos relacionados con la microbiologa, en el contexto de
su vida cotidiana.
Familiarizarse con las tcnicas bsicas de manejo de los
microorganismos en un laboratorio.
Saber hacer uso y conocer los fundamentos de los mtodos de
bioseguridad que deben considerarse en el manejo de muestras
potencialmente patgenas para el hombre.
Aprender a observar y a interpretar resultados experimentales
obtenidos en un laboratorio de Microbiologa.
Valorar la importancia de un resultado microbiolgico en su
aplicacin a problemas reales.
Metas
Desarrollar 7 prcticas de microbiologa, que desarrollen
competencias bsicas de trabajo de laboratorio
Competencias:
Al finalizar las prcticas de componente prctico de microbiologa, el
estudiante ser capaz de:
Realizar e interpretar los datos obtenidos en prcticas bsicas, como
la siembra, la preparacin de medios de cultivo, las tcnicas de
tincin, recuento de colonias, etc.
Aplicar las normas bsicas de bioseguridad y esterilizacin.
Denominacin de Prctica 1 : Normas Generales de Bioseguridad
practicas Prctica 2: Medios de Cultivo, Mtodos de Siembra de microorganismos
Prctica 3: Observacin de microorganismos y tcnicas de tincin
Prctica 4 : Determinacin de flora ambiental, humana y de superficie
Prctica 5: Recuento de Colonias de las cajas de Agar Nutritivo de la
Prctica de Flora ambiental y Flora Humana
Prctica 6: Factores que afectan el crecimiento de los microorganismos.
Prctica 7: Metabolismo microbiano, reacciones bioqumicas de algunas
bacterias.
Prctica 8: Efecto de los desinfectantes sobre microorganismos.
Nmero de horas 18 horas
Porcentaje 30% de la nota final del curso
Curso Evaluado por SI___ NO_x_
proyecto
Seguridad industrial Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad, descritas en la
prctica No. 1
6
4. DESCRIPCIN DE PRCTICAS
PRACTICA No. 1 Normas Generales de Bioseguridad
Tipo de practica Presencial x Autodirigida Remota

Otra Cul
Porcentaje de evaluacin 10%
Horas de la practica 2
Temticas de la prctica Esterilizacin, Desinfeccin y Manejo de Equipos de
Laboratorio
Intencionalidades formativas Propsito(s): Durante el trabajo del laboratorio de
microbiologa, se dan situaciones de potenciales riesgos que
varan segn el agente infeccioso y los procedimientos
utilizados. Las Normas de Bioseguridad pretenden reducir a un
nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulacin de
material peligroso.
Objetivo(s):
1. Establecer normas y principios bsicos de comportamiento
en el laboratorio.
2. Aprender y utilizar los mtodos de esterilizacin disponibles
en el laboratorio.
3. Conocer los materiales y equipos utilizados en el laboratorio
de microbiologa.
Meta(s):
Competencia(s)
Fundamentacin Terica
El trabajo en el laboratorio de microbiologa es un trabajo de grupo. La actitud ante las practicas
seguras de cada uno de los integrantes del equipo, determinan su propia seguridad, as como la de
sus compaeros y la de la colectividad del Laboratorio.
Las caractersticas especiales del trabajo en el laboratorio, hacen importante que todos los
participantes conozcan y respeten las normas mnimas de bioseguridad. La primera actividad que
debemos desarrollar antes de realizar el trabajo de laboratorio es la de conocer y aplicar los
principios de bioseguridad para ser conscientes de los riesgos a que se puede estar expuesto.
Se recomienda revisar los videos microscopio parte 1 y microscopios parte 2 disponibles en
http://www.unad.edu.co/curso_biologia/multimedia.htm.
Descripcin de la practica
7
Procedimiento:
Observe el material de vidrio y pida al Tutor y coordinador que le ensee su adecuada
manipulacin. (cajas de petri, pipetas diferentes volmenes, pipetas de Pasteur).
El material de vidrio en microbiologa siempre debe ser utilizado estril por lo que debe ser
empacado con papel kraft antes de ser sometido a un proceso de esterilizacin, se debe tener
especial cuidado en la manipulacin del material ya que se puede contaminar con
microorganismos provenientes de las manos, etc.
Identifique las asas de platino y reciba las indicaciones de uso por parte del Tutor o coordinador
de laboratorio.
Prepare el material (vidriera) para hornear, recbralo con papel Kraft, y sllelo con cinta
indicadora de esterilidad. Proceda a esterilizarlo en el Horno a temperatura de 160 - 180 C,
durante 2 horas.
Esterilice los medios de cultivo que el tutor le suministre en el autoclave a presin de 15 lb y 121
C durante 20 minutos. Tenga en cuenta las instrucciones de manejo de la autoclave.
Teniendo en cuenta lo observado en el vdeo sobre esterilizacin realice el lavado del material
de laboratorio suministrado, realice la prueba de azul de bromotimol y verifique si el material fue
lavado correctamente.
Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)
Cajas de petri, pipetas diferentes volmenes, pipetas de Pasteur, horno, autoclave, azul de
bromotimol
Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la prctica
Recomendaciones
Para iniciar el desarrollo de la prctica debe previamente realizar un estudio atento de la teora
sobre: Bioseguridad, Equipos y materiales para manejo microbiolgico con bioseguridad ,
Esterilizacin, agentes esterilizantes. y observar los vdeos correspondientes: Normas de
Bioseguridad parte 1 - Normas de Bioseguridad parte 2 - Vdeo Esterilizacin y desinfeccin
No olvide las recomendaciones de seguridad que dan en la ficha tcnica de este documento.
Seguridad Industrial
Se deben tener en cuenta las normas de bioseguridad
Metodologa
Se deben llevar los materiales solicitados y desarrollar un preinforme que responda el siguiente
cuestionario y luego del desarrollo de la prctica, se debe entregar el informe de prctica:
Cuestionario de entrada para entregar en el preinforme
1. Qu es bioseguridad?
2. Cules son las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa?
3. Mencione las clases de esterilizacin, cuales son los agentes de esterilizacin con ms uso en
el laboratorio, en qu consiste cada uno de ellos y para qu materiales se utilizan:
8
Agente de Temperatura de Equipo Material que se puede

esterilizacin uso (si se aplica) utilizado esterilizar por este
mtodo.
Esterilizacin
con
calor seco
Esterilizacin
con
calor hmedo
Radiaciones
Filtracin
4. Establezca las diferencias entre esterilizacin y desinfeccin

5. Qu es un medio de cultivo; de qu estn compuestos principalmente; cmo se clasifican
segn su proporcin de agar y segn su suministro de nutrientes?
6. Cul es la utilidad de los medios de cultivo y qu diferencia un caldo de un medio slido?
7. Cul es el fundamento de la coloracin de Gram?
8. Qu diferencias encuentra entre bacterias Gram positivas y Gram negativas?
9. Indique las principales caractersticas y estructuras en hongos y levaduras
Sistema de Evaluacin
El aprestamiento del laboratorio (los materiales que se deben llevar para el desarrollo de las
prcticas y los pre informes) vale un 25% de la nota; el dominio de los temas y el desarrollo del
laboratorio tienen un valor del 45% y la entrega del informe vale un 30%.
Informe o productos a entregar
Informe de prctica
Rbrica de evaluacin
tem Calif. Baja Calif. Media Calif. alta Puntaje
Aprestamiento No se lleva Solamente se Se llevan al 25
aprestamiento o no se lleva laboratorio la
lleva preinforme (0 aprestamiento o totalidad de
puntos) preinforme, o se materiales
presentan solicitados y el
incompletos (10 preinforme
puntos) completamente
diligenciado (25
puntos)
Prctica No se presenta a la Llega tarde a la Se cumplen los 45
prctica (0 puntos) prctica o no objetivos de la
desarrolla los prctica (45
laboratorios en puntos)
su totalidad (15
9
puntos)
Informe No presenta informe El informe se Se entrega el 30
(0 puntos) presenta preinforme
incompleto o sin completamente
conclusiones diligenciado (30
(10 puntos) puntos)
100
Retroalimentacin
10
PRACTICA No. 2 Medios de Cultivo

Otra Cul
Temticas de la prctica Medios de cultivo
Intencionalidades formativas Propsito(s):
Los estudiantes deben conocer que para el desarrollo
microbiano se requieren diferentes condiciones, que les
brindan los medios de cultivo y que nos permiten diferencias y
aislar los microorganismos
Objetivo(s):
1. Aprender la preparacin y manipulacin de los medios de
cultivo.
Meta(s):
Preparar al menos dos medios de cultivo
Competencia(s):
El estudiante desarrolla habilidades para preparar medios
de cultivo para el trabajo en laboratorio
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su
crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.
El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el
crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.
Para que los microorganismos crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial ste debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno
adecuada, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener
los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a

los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una
infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
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Procedimiento:
Preparacin de medio de cultivo
Revise la etiqueta de los medios de cultivo, anote el nombre, la composicin y forma de
preparacin.
Realice los clculos para preparar los siguientes volmenes de medio de cultivo tanto lquido
como slido: 325, 356 ml, 1567 ml, 131 ml y 24 ml
Prepare en un elenmeyer 325 mililitros de agar. De acuerdo a las indicaciones de preparacin
se utilizan 20 gramos de medio deshidratado por litro de agua. Recuerde para el clculo se
realiza una regla de tres:
20 gr....... 1000 ml
X= (20 gr.x 325ml)/1000= 6.5 gr.
X gr......... 325ml
Pese 6.5 gramos del agar deshidratado. Mida 325 mililitros de agua destilada con una
probeta. De esos 325 mililitros de agua destilada coloque la mitad en un erlenmeyer
previamente lavado con agua destilada, para eliminar residuos de otras sustancias. El
erlenmeyer debe ser de volumen superior a la cantidad que se va a preparar. Agregue los 6.5
gramos de agar deshidratado al agua contenida en el erlenmeyer y posteriormente adicione
el resto del agua destilada. Mezcle con el agitador.
A continuacin lleve la preparacin a disolver en la plancha de calentamiento, agite
constantemente con ayuda de la varilla de vidrio hasta que ebulla para lograr la disolucin
total del Agar. Mida el pH con ayuda de cinta indicadora de pH. El rango de pH en este medio
es de 7.0 a 7.5. Si se hace necesario la correccin del pH, aada al medio de cultivo preparado
la cantidad adecuada de solucin de cido clorhdrico o de hidrxido sdico segn el caso.
Tape la boca del erlenmeyer con un tapn de papel kraft y selle con cinta de enmascarar. Si
las normas de preparacin no indican otra cosa, la esterilizacin se lleva a cabo en autoclave,
a 121 grados centgrados, durante 15 minutos.
Esterilizado el medio deje enfriar aproximadamente a 45C.
Proceda a servir el medio en presencia del mechero y en cajas de Petri, previamente
esterilizadas. Las burbujas de aire en la superficie de la placa se eliminan abanicando
brevemente la superficie con la llama no luminosa de un mechero Bunsen. Deje enfriar hasta
que solidifique.
A continuacin realice la prueba de esterilidad que consiste en llevar los medios a incubar a
37 grados centgrados durante 12 o 24 horas. Esta prueba se evala por la presencia o
ausencia de crecimiento posterior a la incubacin. Las placas con medio de cultivo y el caldo
preparado son claros e incoloros hasta con una tonalidad amarillenta.
Prepare caldo nutritivo para tal fin solamente se emplean 8 gramos de Agar deshidratado por
litro de agua. Realice la preparacin de la misma manera. Dispense el caldo directamente en
los tubos con tapa rosca. Posteriormente lleve los tubos con caldo a esterilizar en autoclave.
No olvide que cuando se va a esterilizar medios directamente en los tubos estos no deben
tener la tapa ajustada. Finalmente tenga en cuenta que para preparar Agar inclinado en tubo,
solo cambia el momento en que se pone a solidificar ya que los tubos deben colocarse sobre
una pipeta para lograr que se forme el pico de agar inclinado.
Reunir todas las cajas de agar nutritivo con la tapa hacia arriba, envulvalas con cinta de
enmascarar y mrquelas con el nmero del grupo. Incubar a 37 c por 24 a 48 horas.
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Reunir todas las cajas de agar sabouraud con la tapa hacia arriba, envulvalas con cinta de
enmascarar y marquelas con el nmero del grupo. Incubar a temperatura ambiente por 3 a 5
dias.
DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Frasco con medio de cultivo deshidratado, medio lquido y
slido, matraz o erlenmeyer de 500 mililitros , balanza, probeta, plancha de calentamiento, varilla
de vidrio, agar nutritivo y cinta indicadora de pH. agar nutritivo (para crecimiento de bacterias),
agar sabouraud (para crecimiento de mohos y levaduras)
PARA TRAER: Esptulas de madera, papel de cocina o servilletas finas que no suelten pelos, cinta
de papel, cinta trasparente, clips, papel kraft, Papel absorbente, Frasco de boca ancha
sobre: Medios de Cultivo.
Metodologa
Cuestionario de entrada para hacer el preinforme
1. Qu es un medio de cultivo; de qu estn compuestos principalmente; cmo se clasifican
segn su proporcin de Agar y segn su suministro de nutrientes?
2. Cul es la utilidad de los medios de cultivo y qu diferencia un caldo de un medio slido?
3. En qu momento se esteriliza un medio de cultivo y por qu?
Informe de prctica
Rbrica de evaluacin
lleva preinforme (0 aprestamiento totalidad de
puntos) o preinforme, o materiales
se presentan solicitados y el
diligenciado (25
puntos)
13

su totalidad (15
puntos)
incompleto o completamente
sin conclusiones diligenciado (30
(10 puntos) puntos)
100
Retroalimentacin
14
PRACTICA No. 3 Siembra de microorganismos

Otra Cul
Temticas de la prctica Prcticas de siembra
Que el estudiante conozca los mtodos bsicos de siembra de
microorganismos
Objetivo(s):
1. Determinar las condiciones necesarias para realizar la
siembra de microorganismos
2. Reconocer los distintos sistemas de siembra y su utilidad.
Meta(s):
Desarrollar las prcticas de 9 sistemas de siembra
Competencia(s):
El estudiante reconoce los diferentes sistemas de siembra
de mircoorganismos
Observar vdeos: Mtodos de siembra parte 1 , parte 2 y parte 3
Sembrar es colocar una muestra de inculo, en un medio de cultivo para obtener el crecimiento
de los microorganismos. Para ello se extiende la muestra sobre caja de Petri, que contiene un gel
(Agar) al que se han aadido las substancias que necesitan los microorganismos para crecer. A
esto lo llamamos medio de cultivo. A veces se aaden otras clases de sustancias; por ejemplo,
para impedir el crecimiento de otras bacterias que podran contaminar el cultivo. La siembra se
puede hacer en otros tipos de medios de cultivo, como tubos de vidrio con gel, frascos con
lquidos nutritivos para los microorganismos.
A continuacin se procede a la "incubacin" del medio ya sembrado. En cada caso se hace en
condiciones particulares de presin de oxgeno, temperatura, agitacin, duracin, etc. Muchas de
las bacterias patgenas crecen bien a temperaturas cercanas a los 37C habituales de nuestro
organismo.
Si el cultivo bacteriano tiene xito, crecern "colonias" de bacterias en el medio de cultivo. Estas
colonias tienen caractersticas de color, forma, tamao etc. propias de cada bacteria y esto nos
ayuda a identificarlas. Tambin se puede someter a las bacterias de las colonias a pruebas
bioqumicas o de otro tipo para lograr su identificacin. Algunas bacterias son muy difciles de
cultivar, otras tardan mucho tiempo en crecer y algunas, finalmente, no se han conseguido
cultivar.
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Siembra de medio slido a medio lquido
Marque correctamente los tubos con el nmero del grupo, sistema de siembra utilizado y la
fecha.
Para crear un ambiente de esterilidad encienda el mechero y trabaje siempre al lado de el.
Esterilice un asa recta a la llama de un mechero y djela enfriar.
Tome el tubo que contiene la muestra a sembrar, retire la tapa del tubo, flamee la boca del
tubo. Introduzca el asa en tubo sin tocar las paredes y tome un poco de colonia del cultivo,
flamee nuevamente la boca del tubo, tpelo y djelo en una gradilla. Tome el tubo de caldo
nutritivo estril en el cual va a colocar la muestra, destapelo, flameando la boca el tubo con el
mechero e introduzca el asa con la muestra obtenida.
Realice movimientos de rotacin con el asa para emulsionar con el caldo las paredes del tubo.
Retire el asa, flamee la boca del tubo y tape.
Esterilice el asa en el mechero despus de usarla.
Incube los tubos a 37C por 24 horas.
Observar el crecimiento obtenido. Si no hay crecimiento el caldo queda transparente
Siembra de medio lquido a slido
Proceda en la misma forma que en la siembra anterior pero con el asa de argolla. Si la
siembra es en tubo recuerde hacer puncin y estra. Si es en caja puede utilizar diferentes
sistemas como estra, agotamiento, rejilla con el fin de lograr un cultivo puro.
Siembra de medio slido a slido
Proceda de la misma forma que en la siembra anterior pero utilizando el asa recta.
Los medios slidos contienen agar en proporcin de 1.5 a 2.0% y se emplean para obtener
colonias aisladas. Las placas de agar se pueden inocular mediante varios mtodos: como
estras, agotamiento y rejilla con el fin de lograr un cultivo puro.
Siembra en rejilla
Realice una estra que atraviese el centro del agar. Luego realice estras en ngulo recto con
respecto a la estra inicial. Voltee el agar en ngulo de 90 grados y realice estra hasta cubrir
todo el agar.
Siembra por agotamiento
Tome una placa de agar, marque la base de la caja de petri con los nmeros 1, 2 y 3. Coloque
la muestra a sembrar en el nmero 1, realice estras hasta la mitad de la caja. Esterilice el asa
y gire la caja hasta el nmero 2, tome las dos ltimas estras y siga estriando hasta el nmero
3. Gire la caja y termine de estriar, tenga cuidado de no tocar las estras ya hechas.
Siembra por estras
Marque la caja en 6 puntos. Coloque la muestra en el punto nmero uno, realice estras hasta
el nmero 2. Esterilice el asa, tome las dos ltimas estras y extindalas hasta el nmero 3,
tome las dos ltimas estras y extindalas hasta el nmero 4 y as sucesivamente hasta llegar
al nmero 6.
Siembra masiva
Tome un hisopo estril e introdzcalo en el tubo que contiene la muestra a sembrar, luego
frote toda la superficie del agar. La evaluacin del crecimiento en las placas de agar se hace a
travs de la observacin de colonias en la superficie.
Siembra en agar inclinado
Esta se realiza por puncin y por estra. Por puncin: Introduzca el inoculo con el asa recta
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hasta el fondo del medio con un solo movimiento y teniendo cuidado de hacer el mismo
trayecto de entrada que de salida. Por estra: Extienda el inoculo sobre el agar inclinado
deslizando suavemente el asa por la superficie en forma de zigzag.
No olvide flamear la boca del tubo antes y despus de la siembra.
Evalu la presencia de crecimiento en el agar por la formacin de una pelcula o por el
crecimiento de colonias en la superficie.
Siembra en profundidad
Marque la caja de petri estril con el nmero de grupo, la fecha y siembra en profundidad.
Abra ligeramente la caja de Petri cerca del mechero.
Abra un tubo con cultivo de bacterias y con ayuda de una pipeta de Pasteur plstica,
transfiera 1 ml de ste cultivo a la base de la caja de petri estril. Descarte la pipeta en el
frasco de boca ancha con clorox.
Vierta un poco de agar nutritivo en la caja de Petri, tape la caja y luego realice movimientos
suaves sobre el mesn, en el sentido de las agujas del reloj, luego al contrario, en forma de L
y L invertida, y por ltimo en forma de 8. Esto garantiza una distribucin homognea de las
bacterias en todo el agar para facilitar su posterior recuento.
Envuelva las cajas de Petri y los tubos con cinta de enmascarar, mrquelos con el nmero de
grupo, la fecha. Luego incube 37 c por 48 horas.

PARA TRAER: Asas bacteriolgicas (Traer palitos de paleta, clips y cinta de enmascarar)
Cepa pura de microorganismo (Favor traer material vegetal infectado con Aspergillus, Fusarium,
Erwnia, Bacillus, etc), Fsforos
DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Tubos con caldo nutritivo, Tubos con agar nutritivo inclinado,
Cajas con agar nutritivo, Mechero de bunsen, Agar nutritivo fundido, Cajas petri estriles
Recomendaciones:
sobre: Sistemas de siembra y los vdeos: Mtodos de siembra parte 1, parte 2 y parte 3
(http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/3_4_2siembra.htm
Metodologa
Cuestionario de entrada:
1. Cul es el medio de cultivo que se emplea para el aislamiento de hongos y levaduras?
Informe de prctica
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Rbrica de evaluacin
diligenciado (25
puntos)
su totalidad (15
puntos)
(10 puntos) puntos)
100
Retroalimentacin
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PRACTICA No. 4 Observacin de microorganismos y tcnicas de tincin

Otra Cul
Temticas de la prctica Siembra de Microorganismos
El estudiante comprende el funcionamiento de los colorantes
para la observacin y diferenciacin de microorganismos
Objetivo(s):
1. Conocer y estudiar la morfologa de bacterias, mohos y
levaduras.
2. Conocer y aplicar diferentes mtodos de tincin para la
identificacin de los microorganismos
3. Determinar las caractersticas morfolgicas microscpicas
como forma y agrupacin.
4. Aprender a diferenciar los microorganismos Gram positivos
de los Gram negativos.
Meta(s):
Desarrollar una prctica de tincin simple, otra para hongos y
levaduras
Desarrollar una prctica de tincin de Gram
Competencia(s):
Al finalizar la prctica el estudiante debe estar en capacidad de
realizar tcnicas de tincin en el laboratorio
El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultan difciles de ver con el
microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la clula y el medio que la
rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es la utilizacin de colorantes. Estos
pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de clulas o para revelar la presencia de
determinados constituyentes celulares, tales como flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares,
centros de actividad respiratoria, etc.
Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas, proceso
llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente, aunque tambin puede
fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos y alcoholes. Despus de la fijacin, si
se aade el colorante, no se producen ulteriores cambios estruturales en el protoplasma. La
fijacin se realiza habitualmente en clulas que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando
despus ste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin
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produce habitualmente el encogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las
clulas aparezcan mayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas
que han sido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin.
La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por
los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados
negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes
catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas
cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados
positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y
el rojo Congo. Otro grupo de colorantes son sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo
se combinan con los materiales lipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la
localizacin de las grnulos o depsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro
Sudn.
Algunos colorantes teirn mejor slo despus de que la clula haya sido tratada con otra
sustancia qumica, que no es un colorante por s mismo. Esta sustancia se denomina mordiente;
un mordiente habitual es el cido tnico. El mordiente se combina con un constituyente celular y
lo altera de tal modo que ahora s podr atacar el colorante.
Procedimiento:
A. Tincin Simple
Realice 2 extendidos con cepas bacterianas diferentes
Encienda el mechero y esterilice el asa, (curva para el cultivo lquido y recta para el cultivo
slido). Djela enfriar cerca del mechero.
Recoja con el asa estril cultivo de la bacteria, al lado del mechero.
En una lmina portaobjetos limpia, desengrasada y marcada, coloque una pequea gota de
solucin salina estril y realice una suspensin homognea del cultivo, (si el cultivo es slido). Si el
cultivo bacteriano es lquido coloque una pequea gota de ste en la lmina portaobjetos y
extindala.
Dej que es frotis se seque a temperatura ambiente. Luego pase la lmina portaobjetos por el
mechero 3 veces (con el frotis en la parte de arriba) con el fin de fijar el extendido.
Coloque la lmina en el soporte de coloracin y cubra el frotis con azul de metileno durante 2
minutos.
Lave suavemente el frotis con agua con un frasco de boca ancha y deje escurrir sobre papel
absorbente hasta que seque.
Observe al microscopio con el Objetivo 100 x (de inmersin) colocando una gota de aceite de
inmersin sobre el frotis. Recuerde colocar el condensador arriba y el diafragma abierto.
Dibuje sus observaciones.
Para hongos y levaduras
20
Coloque cerca al mechero el alimento con hongos y con ayuda de cinta pegante, recoja muestra
de la superficie.
Marque la lmina con cinta de enmascarar: nmero del grupo y coloracin.
Coloque en el centro de la lmina portaobjetos una pequea gota de azul de Lactofenol, y luego
pegue la cinta a la lmina. Presione ligeramente para eliminar burbujas de aire.
Observe en el microscopio en los objetivos de 10x y 40x. Realice una posible identificacin del
hongo con los diagramas que encuentra en el laboratorio.
Dibuje sus observaciones
B. Coloracin de Gram
Realice 2 extendidos con cepas bacterianas diferentes
Realice 2 frotis como se indic para la coloracin simple.
Deje secar al aire libre y luego fije el frotis.
Marque la lmina con cinta de enmascarar: nmero del grupo y coloracin.
Coloque la lmina en el soporte de coloracin.
Coloque sobre el frotis una pequea cantidad de Cristal Violeta durante 1 minuto
Lave con el frasco de boca ancha y escurra el exceso de agua.
Aplique la solucin de Lugol por 1 minuto.
Decolore aplicando Alcohol - acetona durante 30 segundos
Aplique el colorante de contraste Safranina durante 1 minuto.
Por ltimo lave con agua y deje escurrir sobre papel absorbente a temperatura ambiente.
Observe al microscopio con el Objetivo 100 x (de inmersin) colocando una gota de aceite de
inmersin sobre el frotis.
Dibuje sus observaciones.
Una vez terminada sta actividad, coloque las lminas portaobjetos usadas dentro del frasco de
boca ancha con agua y Clorox. Deseche en la basura los alimentos analizados. Desconecte el
microscopio, limpie sus lentes con Xilol y pauelos desechables triple hoja (nicamente), las
dems superficies del microscopio puede limpiarlas con los paos absorbentes y alcohol
antisptico. Por ltimo realice la entrega del microscopio al coordinador del laboratorio.
DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Cepas de microorganismos, Azul de Lactfenol. Azul de
metileno, Colorantes de Gram: Cristal violeta, Lugol, Alcohol acetona, Fucsina, Microscopio,
Soporte para tincin, Lminas portaobjetos, Lminas cubreobjetos, Mechero de Bunsen,
PARA TRAER: Cinta pegante, un alimento contaminado con hongos, Asas bacteriolgicas, Papel
absorbente, Frasco de boca ancha, Solucin salina fisiolgica estril
Recomendaciones:
21
sobre: Observacin de microorganismos y tcnicas de tincin

Metodologa
Cuestionario de entrada:
1. Segn su morfologa, como se clasifican las bacterias?
2. Cmo se diferencia una tincin simple de una tincin diferencial? Escriba algunos ejemplos de
cada una de las tinciones
3. Cul es el fundamento de la coloracin de Gram?
4. Qu diferencias encuentra entre bacterias Gram positivas de Gram negativas?
5. Cmo se realiza el frotis bacteriolgico y en qu consiste el proceso de fijacin?
laboratorio tienen un valor del 45%
Informe de prctica
Rbrica de evaluacin
diligenciado (25
puntos)
su totalidad (15
puntos)
(10 puntos) puntos)
22
100
Retroalimentacin
23
PRACTICA No. 5 Microorganismos del ambiente

Otra Cul
Temticas de la prctica Determinacin de flora ambiental, humana y de superficie
El estudiante entiende que los microorganismos estn
presentes en todos los ambientes y hacen parte de la
cotidianidad.
Objetivo(s):
1. Realizar la determinacin de flora humana, ambiental y de
superficies
2. Revisar el grado de contaminacin por bacterias, mohos y
levaduras de las muestras de ambientes y superficies.
3. Verificar la efectividad en el proceso de limpieza y
desinfeccin
Meta(s):
Desarrollar dos prcticas para determinar los microorganismos
presentes en su entorno
Competencia(s):
El estudiante reconoce la presencia de microorganismos y
su importancia en la vida diaria
Los microorganismos se encuentran en todas partes. Son llevados de un lugar a otro por
diferentes mtodos entre los que estn las corrientes de agua, aire, insectos, etc. El aire no es un
medio de reproduccin, en l y junto a las gotitas, se transportan gran cantidad de
microorganismos.
Se encuentran en los sedimentos marinos, en la piel del hombre, en las escamas de los peces, en
la superficie de las hojas de los vegetales, en los alimentos, en el conducto digestivo, narz, boca,
etc.
Son de especial importancia en la fertilidad de los suelos, la transformacin de desechos o ciertos
procesos agroindustriales en los que se involucra la fermentacin (cerveza, lcteos fermentados,
productos de soya fermentados, etc.)
La piel y las mucosas sirven de albergue a un gran nmero de microorganismos que se pueden
determinar como flora residente y flora transitoria, si stos son permanentes o se pueden
controlar cuando cambian las condiciones para su desarrollo.
Procedimiento:
24
Determinacin de Flora Ambiental

Marque una caja de Agar nutritivo y otra de Agar Sabouraud con cinta en la base, con los
siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y flora ambiental.
Escoja un sitio seguro en el laboratorio o en la Universidad. Recuerde: No salir con la bata del
laboratorio
Abra las cajas y exponga al aire por 15 a 30 minutos.
Pasado el tiempo, Reunir todas las cajas de Agar nutritivo con la tapa hacia arriba, envulvalas
con cinta de enmascarar y mrquelas con el nmero del grupo. Incubar a 37 c por 24 a 48 horas.
Reunir todas las cajas de Agar Sabouraud con la tapa hacia arriba, envulvalas con cinta de
enmascarar y mrquelas con el nmero del grupo. Incubar a temperatura ambiente por 3 a 5 das.
Determinacin Flora de Superficie

El anlisis de la superficie se realiza antes de hacer la limpieza y despus
Antes de Limpiar
Marque una caja de agar nutritivo y otra de agar sabouraud con cinta en la base, con los
siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y superficie antes de limpiar.
Escoja una superficie en el laboratorio (mesones, pisos, pared)
Delimite con la plantilla de cartulina (4x4 cm. aproximadamente) el sitio a muestrear
Abra el tubo tapa rosca con el agua destilada estril, introduzca el hisopo para humedecer el
algodn. Coloque el tubo en la gradilla.
Pase el hisopo humedecido sobre toda la superficie delimitada
Encienda el mechero de Bunsen
Abra la caja de agar nutritivo marcada cerca del mechero y pase suavemente el hisopo sobre el
agar, haciendo un zig-zag en la superficie. Cierre la caja.
Abra la caja de agar Sabouraud marcada cerca del mechero y realice el mismo procedimiento
que realiz con el Agar nutritivo. Cierre la caja.
Descarte el hisopo en el frasco de vidrio con agua y clorox.
Deje las cajas utilizadas en un sitio determinado del mesn de trabajo.
Procedimiento de Limpieza
Limpie la zona delimitada con agua y jabn. Enjuague, seque y luego desinfecte con alcohol,
agua mezclada con clorox o algn desinfectante de su inters. Deje secar.
Despus de Limpiar
Marque una caja de agar nutritivo y otra de Agar Sabouraud con cinta en la base, con los
siguientes datos: No. de grupo, fecha, medio de cultivo y superficie despus de limpiar.
Pase el hisopo humedecido sobre toda la superficie delimitada y limpia.
25
Abra la caja de agar sabouraud marcada cerca del mechero y realice el mismo procedimiento
que con el agar nutritivo. Cierre la caja.
enmascarar y mrquelas con el nmero del grupo. Incubar a temperatura ambiente por 3 a 5 das.
Determinacin de Flora Humana

Antes de Limpiar
Marque una caja de Agar nutritivo con cinta en la base, con los siguientes datos: No. de grupo,
fecha, medio de cultivo y flora humana antes de limpiar.
Escoja un rea en el cuerpo de un compaero de grupo.
Pase suavemente el hisopo humedecido sobre el rea escogida.
Procedimiento de Limpieza
Limpie el rea elegida con agua y jabn. Enjuague y seque. No aplique alcohol ni clorox.
Despus de Limpiar
Marque una caja de agar nutritivo con cinta en la base, con los siguientes datos: No. De grupo,
fecha, medio de cultivo y flora humana despus de limpiar.
Pase suavemente el hisopo humedecido sobre el rea escogida, limpia.
enmascarar y mrquelas con el nmero del grupo. Incubar a temperaturaambientepor 3 a 5 das.

DISPONIBLES EN EL LABORATORIO: 5 cajas Petri con Agar nutritivo (para crecimiento de
bacterias), 3 cajas Petri con Agar Sabouraud (para crecimiento de mohos y levaduras), gradilla,
mechero de Bunsen, fsforos, plantilla en cartulina de 4 x4 cm, microscopio.
PARA TRAER: frasco de boca ancha con agua y decol, tubos con agua destilada estril, hisopos
estriles con palo de madera, cinta de enmascarar
26

Recomendaciones:
Antes de iniciar la prctica, debes ver los videos: Determinacin de Flora ambiental parte 1
Determinacin de Flora ambiental parte 2, Determinacin de Flora ambiental parte 3
Metodologa para la presentacin del preinforme
Cuestionario de entrada
1. Cules son las diferencias entre flora residente y flora transitoria?
Informe de prctica
Rbrica de evaluacin
diligenciado (25
puntos)
su totalidad (15
puntos)
(10 puntos) puntos)
100
27
Retroalimentacin
28
PRACTICA No. 6 Observacin y recuento de colonias

Otra Cul
Temticas de la prctica Observacin y recuento de colonias de las cajas de Agar
Nutritivo de la Prctica de Flora ambiental y Flora Humana
Que el estudiante sea capaz de hacer un recuento directo al
microscopio
Objetivo(s):
1. Diferenciar las formas de crecimiento bacteriano en los
diferentes medios de cultivo utilizados.
2. Realizar el recuento de las diferentes colonias.
Meta(s):
Realizar la observacin y descripcin de dos colonias de
microorganismos
Competencia(s):
El estudiante adquiere las habilidades para hacer el
recuento de colonias microbianas
Para el recuento de microorganismos presentes en una muestra de agua, suelo, aire, alimento,
cultivos, entre otros, existen diferentes mtodos o tcnicas: Algunas tcnicas son directas y
permiten un recuento de todas las clulas, tanto las vivas como las muertas. Las medidas directas
incluyen los recuentos directos al microscopio o recuento electrnico, el recuento en placa, o el
clculo del nmero ms probable (NMP).
Otras son medidas indirectas y miden una propiedad de la masa de las clulas como son la
turbidez, el peso seco, o una actividad metablica.
Ver tambin: Factores que afectan el crecimiento bacteriano parte 1 y parte 2
Procedimiento:
Solicite al coordinador del laboratorio las cajas sembradas en la prctica: Mtodos de siembra
de microorganismos y "Microorganismos del ambiente"
Al lado del mechero abra las cajas correspondientes a flora humana y ambiental y observe la
presencia de colonias. Preferiblemente utilice el estereoscopio colocando debajo de la caja un
fondo negro. El crecimiento se observa como puntos de diferentes colores y formas sobre la
superficie del agar. Realice el recuento de colonias en cada una de las cajas.
Cuente las colonias de bacterias presentes en la superficie del Agar. Exprese el recuento en
unidades UFC.
29
Revise el grado de contaminacin bacteriana de las cajas sembradas. Un nmero de colonias

superior a 15 indica alto grado de contaminacin, por lo tanto deben revisarse las medidas de
limpieza
Verifique la efectividad de la limpieza y desinfeccin que realiz.
A cada tipo de colonia que se observa, se le debe hacer el estudio macroscpico teniendo en
cuenta las siguientes caractersticas:
Tamao: puntiforme, pequea, mediana, grande, extendida
Forma: Redonda, ovalada, irregular, filamentosa, rizoide
Elevacin: Plana, elevada, convexa, monticular, umbeliforme, umbilicada
Borde: Entero, ondulado, lobulado, aserrado, filamentoso, rizado.
Superficie: Brillante o mate.
Consistencia: dura, blanda
Aspecto: hmedo, seco, cremoso, mucoso, granuloso, algodonoso.
Color: blanco, crema, gris, transparente.
Crecimiento: Abundante, moderado, escaso
Caractersticas especiales: pigmentos, hemlisis.
Anote y dibuje sus observaciones.
Observe el crecimiento de mohos y levaduras. Los primeros se observan algodonosos, de
diferentes colores; y las levaduras como colonias opacas de color crema, amarillo o rosado.
Realice el recuento y recuerde: cuando se obtiene un recuento mayor a 15 colonias indica un
ambiente muy contaminado.
Qu nivel de contaminacin tiene el ambiente que usted eligi? (Informacin que debe analizar
en el informe):
Analice los resultados de los recuentos antes y despus de limpiar, escriba algunas
sugerencias en cuanto a las metodologas de limpieza utilizadas.
Observe el crecimiento bacteriano en los caldos nutritivos y en las cajas de agar. Anote las
diferencias.
Realice una evaluacin objetiva de sus aislamientos y siembras, escriba algunas
recomendaciones para sus prximas siembras.
Una vez terminada esta seccin de la prctica, envuelva las cajas Petri con cinta de enmascarar.
Marque en la cinta el nmero del grupo. Entregue el material al grupo encargado de la
esterilizacin.
Despus del proceso de esterilizacin, espere que el material este fro para proceder con el
lavado de la siguiente manera:
1. Retire los restos de agar y cinta de enmascarar y depostelos en una bolsa para basura. No deje
residuos en los vertederos!!!
2. Enjabone las cajas y dems material utilizado.
3. Enjuague bien, deje escurrir y seque el material.
4. Entregue todo el material al coordinador del laboratorio.
Recuerde dejar el laboratorio en perfecto estado de limpieza.
DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: microscopio, estereoscopio, lminas portaobjetos y
cubreobjetos, cuentacolonias, cajas de Petri y tubos con cultivos realizados en el laboratorio No 2:
30
Mtodos de siembra de microorganismos y en el laboratorio 4: Flora ambiental humana y de

superficie, Azul de lactofenol, aguja de diseccin.
PARA TRAER: Mechero, papel carbn
Recomendaciones:
sobre: Recuento microbiano
Metodologa
1. Identifique y describa las caractersticas de cada una de las fases de la curva de crecimiento de
los microorganismos (latencia, logartmica, estacionaria y muerte)
Informe de prctica
Rbrica de evaluacin
diligenciado (25
puntos)
su totalidad (15
puntos)
31

(10 puntos) puntos)
100
Retroalimentacin
32
PRACTICA No. 7 Efecto de los desinfectantes sobre microorganismos.

Otra Cul
Temticas de la prctica Efecto de los desinfectantes sobre microorganismos
El estudiante distingue entre esterilizacin y desinfeccin
Objetivo(s):
1. Evaluar la eficacia de algunos desinfectantes sobre algunos
microorganismos
Meta(s):
Probar la eficacia de al menos 4 desinfectantes
Competencia(s):
El estudiante conoce la forma de utilizar los desinfectantes
para el control microbiano.
Se define esterilidad a la condicin de ausencia de cualquier microorganismo. Significa
destruccin de toda forma de vida microbiana incluyendo esporas. Los mtodos de esterilizacin
ms usados en el laboratorio son calor seco, calor hmedo, flameado, utilizacin de soluciones
qumicas.
La desinfeccin se refiere a la reduccin de los organismos patgenos (organismos que ocasionan
enfermedades). Los desinfectantes de acuerdo a su composicin qumica se clasifican en: Fenoles,
Hipocloritos (cloro), Yodoformos (yodo Povidona), Amonio Cuaternario, Formaldehdos,
Perxidos. Los desinfectantes pueden ser de bajo nivel, de nivel intermedio o de alto nivel.
Los desinfectantes de bajo nivel (Fenoles, amonio cuaternario) pueden destruir la mayor parte de
las formas vegetativas bacterianas, tanto grampositivas como gramnegativas, algunos virus (virus
con envoltura lpidica) y hongos (levaduras), pero no Mycobacteriumspp, ni las esporas
bacterianas.
Los desinfectantes de nivel intermedio consiguen inactivar todas las formas bacterianas
vegetativas, incluyendo Mycobacterium tuberculosis, la mayora de los virus (virus con y sin
envoltura) y hongos filamentosos, pero no destruyen necesariamente las esporas bacterianas.
En cambio, los desinfectantes de alto nivel (formaldehdos, perxidos, hipocloritos) consiguen
destruir todos los microorganismos, excepto algunas esporas bacterianas.
Marque las 2 cajas de agar nutritivo con: el nmero del grupo, fecha y microorganismo en la
tapa de la caja.
Codifique los desinfectantes a emplear con un cdigo. Ejemplo Hipoclorito 01, CTmanos 02, CT
33
industrial 03, Creolina 04, Glutaraldehido 06.

Coloque en la base de la caja en forma equitativa, los cdigos de los desinfectantes con un
marcador de vidrio.
Encienda el mechero.
Humedezca un hisopo estril en el tubo del microorganismo a sembrar. Escurra el exceso con
las paredes internas del tubo.
Siembre masivamente cada una de las bacterias en la caja de agar nutritivo que le corresponde.
Tenga en cuenta que las levaduras y el hongo se siembran en agar sabouraud.
Descarte los hisopos en el frasco de boca ancha con solucin de hipoclorito.
Con las pinzas estriles tome un disco de papel de filtro y sumrjalo en la solucin de
desinfectante y colquelo sobre el nmero que le corresponde segn la codificacin de la base de
la caja. Repita lo mismo con cada uno de los desinfectantes utilizados en cada una de las cajas.
Coloque las pinzas dentro del frasco de boca ancha.
Envuelva las cajas de agar nutritivo con cinta y mrquelas con el nmero del grupo. Lleve las
cajas a incubar a temperatura de 37 C. por 24 horas.
Cumplido el tiempo de incubacin tome las cajas y con ayuda del cuenta colonias observe la
formacin de halos de inhibicin del crecimiento, que aparecen como zonas transparentes
alrededor del crecimiento bacteriano.
Mida el tamao de los halos de inhibicin con una regla. Segn sus observaciones indique cul
sustancia es mejor en el control de cada microorganismo de prueba
Una vez terminada la prctica, descarte los escobillones desinfectados en una bolsa para este fin,
envuelva las cajas en cinta de enmascarar, mrquelas con el nmero del grupo y entrguelas al
grupo encargado de la esterilizacin.
Una vez esterilizado el material, proceda al lavado como se ha indicado en prcticas anteriores

DISPONIBLE EN EL LABORATORIO: Hisopos estriles, Discos de papel filtro estriles, Pinzas
estriles, Hipoclorito de sodio al 5%, 4 cajas de petri con agar nutritivo, 2 cajas con Agar
Sabouraud, Cepas bacterianas en caldo nutritivo, cuenta colonias.
PARA TRAER: Isodine solucin, Jabn desinfectante, Timsen, Creolina, Alcohol antisptico, Frasco
de boca ancha, regla.
Recomendaciones:
Ver vdeos: Esterilizacin parte 1 y parte 2 , Efecto de los desinfectantes sobre los
microorganismos
Metodologa
34
1. Cuales agentes qumicos son ms efectivos en el control de microorganismos?

2. Con que criterios se selecciona un agente qumico para desinfectar: superficies, ambientes,
objetos contaminados, la piel?
3. Qu pruebas se utilizan para probar la efectividad de un desinfectante?
Informe de prctica
Rbrica de evaluacin
diligenciado (25
puntos)
su totalidad (15
puntos)
(10 puntos) puntos)
100
Retroalimentacin
35
6. FUENTES DOCUMENTALES
PIA LPEZ, Carmen Eugenia. Mdulo de Microbiologa. Unad

MARTNEZ, Mara Mercedes. UNAD. Microbiologa. Facultad de Ciencias Bsicas e Ingeniera.
MERCK. MANUAL DE MEDIOS DE CULTIVO.
http://www.scribd.com/doc/5203044/Medios-de-Cultivo-y-Pruebas-Bioquimicas
RECURSOS:
Videos de las experiencias, disponibles en en el CD de microbiologa o en
http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/6_1multimedia.htm.
Para visualizar los vdeos y animaciones, es necesario tener el software Authorware_web_player y
el software Flash player en su PC. Los cuales puede descargar de la siguiente carpeta: programas
flash y authoware , que adems de los programas contiene las instrucciones de instalacin.
Vdeos
1. Normas de Bioseguridad parte 1
2. Normas de Bioseguridad parte 2
3. Esterilizacin, desinfeccin y manejo de equipos parte 1
4. Esterilizacin, desinfeccin y manejo de equipos parte 2
5. Preparacin de medios cultivo parte 1
6. Preparacin de medios cultivo parte 2
7. Mtodos de siembra parte 1
10. Determinacin de Flora ambiental parte 1
13. Efectos de los desinfectantes sobre los microorganismos
14. Factores que afectan el crecimiento de los microorganismos Parte 1
15. Factores que afectan el crecimiento de los microorganismos Parte 2
16. Metabolismo Microbiano parte 1
17. Metabolismo Microbiano parte 2
18. MetabolismoMicrobiano parte 3
36

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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA UNAD

ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIA E INGENIERIA

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

GUA COMPONENTE PRCTICO

MARTHA CECILIA VINASCO GUZMN

MERY LILIANA LPEZ MARTNEZ

2. ASPECTOS DE PROPIEDAD INTELECTUAL Y VERSIONAMIENTO

Reconocimiento. Debe reconocer los crditos de la obra de la manera especificada por el

No comercial. No puede utilizar esta obra para fines comerciales.

Nada en esta menoscaba o restringe los derechos morales del autor.

Introduccin La microbiologa estudia los microorganismos u organismos

PRACTICA No. 1 Normas Generales de Bioseguridad

Tipo de practica Presencial x Autodirigida Remota

Agente de Temperatura de Equipo Material que se puede

4. Establezca las diferencias entre esterilizacin y desinfeccin

PRACTICA No. 2 Medios de Cultivo

Tipo de practica Presencial x Autodirigida Remota

La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a

prctica (0 puntos) prctica o no objetivos de la

PRACTICA No. 3 Siembra de microorganismos

Tipo de practica Presencial x Autodirigida Remota

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

PRACTICA No. 4 Observacin de microorganismos y tcnicas de tincin

Tipo de practica Presencial x Autodirigida Remota

Para hongos y levaduras

sobre: Observacin de microorganismos y tcnicas de tincin

PRACTICA No. 5 Microorganismos del ambiente

Determinacin de Flora Ambiental

Determinacin Flora de Superficie

Determinacin de Flora Humana

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Software a utilizar en la prctica u otro tipo de requerimiento para el desarrollo de la prctica

PRACTICA No. 6 Observacin y recuento de colonias

Revise el grado de contaminacin bacteriana de las cajas sembradas. Un nmero de colonias

Mtodos de siembra de microorganismos y en el laboratorio 4: Flora ambiental humana y de

sin conclusiones diligenciado (30

PRACTICA No. 7 Efecto de los desinfectantes sobre microorganismos.

industrial 03, Creolina 04, Glutaraldehido 06.

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

1. Cuales agentes qumicos son ms efectivos en el control de microorganismos?

PIA LPEZ, Carmen Eugenia. Mdulo de Microbiologa. Unad

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