PONTIFICIA UNIVERSIDAD CATLICA DEL ECUADOR

FACULTAD DE MEDICINA
ANLISIS INSTRUMENTAL
CUARTO NIVEL
JOSSELYN ARROYO
FECHA: 17-julio-2017

TITULO: DETERMINACIN DEL SINDROME DE CUSHING MEDIANTE LA

SALIVA Y ORINA A TRAVS DE LA CROMATOGRAFA LIQUIDA
ACOPLADA A ESPECTOFOTOMETRA DE MASAS
En la actualidad la cromatografa liquida -espectrometra de masas en
cuadrupolo (LC - MS /MS) ha logrado un crecimiento realmente grande durante
los ltimos 15 aos, se logr evidenciar que ofrece una especificidad analtica
bastante superior a la de los inmunoensayos. A continuacin en el desarrollo de
este ensayo, se mostrar de forma breve la tcnica que actualmente se utiliza
para la LC -MS, adems de los experimentos que con estos instrumentos se
pueden realizar. En el siguiente ensayo tambin se hablar sobre las mediciones
de cortisol y el mtodo para determinar la concentracin de la misma en saliva y
orina, y as poder determinar el sndrome de Cushing tomando en cuenta las
concentraciones que nos brinda el equipo y su uso clnico actual. Se analizar
un estudio realizado por la Universidad San Francisco de Quito a los leoncillos,
que son una especie de primates que habitan en la amazonia del Ecuador. Se
espera que a travs de este estudio se logre determinar por qu el estrs es un
factor determinante por el que se presentan valores de cortisol ms altos en esta
especie que se encuentra en cautiverio, adems de otros factores tambin
determinantes para presentar dichos valores (Ravinder, 2011).
El LC - MS/MS es uno de los equipos ms utilizados entre los laboratorios
analticos de investigacin, se utiliza el principio de separacin que es la diferente
afinidad de un compuesto hacia un par de fases, una denominada mvil y otra
estacionaria que se encuentra en el interior de una columna de separacin.
Dichos compuestos se desplazan a travs de la columna cromatogrfica y son
atrados hacia el detector por la denominada fase mvil. De esta manera cada
uno de los compuestos experimenta un reparto entre las fases anteriormente
nombradas, dando lugar a su separacin en su camino hasta el detector. En
pruebas de laboratorio se desarrollaron y validaron mtodos de LC MS/MS son
ms robustos y se pueden realizar en un entorno semiautomatizado (Lopez,
2010) .
Mediante una comparacin entre LC MS/MS y GC-MS, se determin que la
diferencia ms destacada es el tipo de muestra ya que en GC-MS se tiene que
volatilizar la muestra mediante la derivatizacin, ya que como su nombre lo dice
es una tcnica que solo trabaja con gases y para esto se deben utilizar varios
solventes para lograr la volatilizacin de la muestra realizando la derivatizacin,
se puede mejorar su estabilidad trmica adems de de evitar una posible
adsorcin trmica. A diferencia del LC MS/MS este es mucho ms sensible y
su tiempo de determinacin es mucho ms corto; adems, de que el manejo de
la muestra es mucho ms fcil por su estado. Otra gran ventaja que tiene el LC-
MS/MS a comparacin del GC-MS es que se pueden determinar varios analito
sin la necesidad de que este sea voltil. (Maidana. 2013).
El LC MS/MS es una de las principales tcnicas para la ayuda de la
determinacin del sndrome de Cushing el cual es un trastorno hormonal
causado por la exposicin prolongada de los tejidos del cuerpo a altos niveles de
cortisol. Este sndrome es raro y afecta comnmente a adultos de edades que
comprenden entre 20 a 50 aos, las pruebas para el diagnstico de este
sndrome no son perfectas por lo que en general se deben realizar varias
pruebas diferentes, las cuales se centran en las mediciones de cortisol
(Espinosa, 2016).
Por lo tanto para la determinacin de la presencias del sndrome de Cushing es
necesario tener en cuenta cuales son los niveles mximos que se debe presentar
el cuerpo, por ejemplo en saliva por el momento aunque no se dispone de un
valor de referencia estandarizado para poder interpretar esta prueba, algunos
autores proponen que un valor mayor a 0,14 ug/dL hace que el diagnostico de
Cushing d como resultado positivo. Y en orina un valor mayor de 8.3 ug/dL en
un paciente despierto a medianoche, es diagnstico de Cushing (Guerrero,
2017).
Actualmente los estudios de cortisol en saliva se han hecho mucho ms
frecuentes, ya que los casos de este sndrome han ido en aumento, por lo que
los laboratorios han tenido que implementar el LC MS/MS para una mejor
determinacin del mismo y as poder seguir estableciendo parmetros para una
posible cura. Segn estudios realizados en Chile la determinacin de cortisol en
saliva, ofrece ventajas sobre la medicin en suero y mantiene una correlacin
estrecha con la medida en la orina, adems entre las ventajas se encuentra que
la toma de muestra es mucho ms fcil porque puede recolectarse en casa
logrando mantenerlo estable por varias semanas (Bruno, 2015).
Estudios en la Universidad San Francisco de Quito (USFQ), sobre los niveles
de cortisol en leoncillos, se determin que en la mayora de mamferos el
principal glucocorticoide es el cortisol, este junto con otros corticosteroides son
llevados en la sangre de manera libre o juntos a globulinas especficas. En los
primates analizados por la USFQ se determin que el cortisol se encuentra en
las heces y tambin se not una mayor concentracin de cortisol en las heces
de los leoncillos machos que en el de las hembras. La concentracin en ambos
sexos se puede deber a la dieta en alta fibra que consumen estos primates. Una
de las maneras de determinar el nivel de cortisol es mediante el uso de la LC
MS/MS, diluyendo la muestra. Tambin se han logrado desarrollar ensayos de
LC- MS/MS cortisol que se basa en la extraccin de muestras en lnea y
multiplexacin. La poblacin de leoncillos analizada radicada en PUYO -
ECUADOR presenta los valores de cortisol ms altos, lo que estara asociado a
los niveles de estrs a los que se encuentran sometidos los individuos en
cautiverio (Espinosa, 2014).
En la realizacin de este ensayo se pudo concluir que es posible la
estandarizacin e implementacin de la cuantificacin de cortisol y cortisona por
LC MS/MS ya que presenta sensibilidad y especificidad adecuada, lo que
confirma su potencial aplicabilidad en la rutina de laboratorio. Se defini que
entre las mediciones de cortisol que se realizan con ms frecuencia son las de
saliva y orina y aunque estas reflejan los niveles en el momento de la recoleccin
o durante un mximo de 24 horas, no proveen informacin ms all de este lapso
de tiempo. Existen estudios recientes en los cuales se propone la medida de
cortisol en cabello y uas como potenciales marcadores del estatus hormonal en
perodos ms prolongados. Hay diversas evidencias que certifican el uso de
cortisol salival como determinacin diagnstica, ya que se correlaciona de forma
predecible con el cortisol total (Martnez, 2013).
La mayora de los estudios publicados referidos al cortisol salival involucran sus
aplicaciones en trabajos de investigacin en el diagnstico del sndrome de
Cushing. Se sabe por el momento que algunos autores proponen que un valor
mayor a 0,14 ug/dL hace que el diagnostico de Cushing d como resultado
positivo en la Saliva y en la orina, un valor mayor de 8.3 ug/dL en un paciente
despierto a medianoche, es diagnstico de Cushing. En cuanto al mtodo de
determinacin de sndrome de Cushing Los mtodos de LC-MS / MS publicados
para la medicin, se utiliza para la extraccin de muestras o la inyeccin directa
de muestras (disolucin), los mtodos directos reducen las necesidades de
mano de obra y reducen el potencial de error humano, ya que tanto los mtodos
extrados como los directos realizan una comparacin con los mtodos
tradicionales de HPLC. La medicin del cortisol y sus fracciones para la
evaluacin est siendo empleada tanto para investigacin como para diagnstico
clnico, siendo los inmunoensayos los mtodos ms corrientemente usados para
su determinacin (Martnez, 2014).
Bibliografa
- Bruno, O. D., Rossi, M. A., Jurez-Allen, L., Serra, H. A., & Albiero, M. C. (2015).
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