Universidad Nacional

Pedro Ruiz Gallo

Facultad de Ciencias Biolgicas

Curso:

Microbiologia acutica

Docente :

Olga Francia Arana

Alumno:

Ortega Regalado Charles Virgilio

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 PRCTICA N6

COLIMETRIA DE AGUA POTABLE. TCNICA DE TUBOS MLTIPLES.

COLIFORMES FECALES.
I. INTRODUCCION:

El agua de calidad apta para consumo humano cuando entra al sistema de distribucin, puede
contaminarse a travs de conexiones cruzadas, retrosifonaje, rotura de las tuberas del sistema de
distribucin, conexiones domiciliarias, cisternas y reservorios defectuosos, grifos contraincendios
daados y durante el tendido de nuevas tuberas o reparaciones realizadas sin las mnimas medidas
de seguridad (OMS, 1985; OMS, 1995; VARGAS, 1996). Asimismo, defectos en la construccin o en
las estructuras de pozos, depsitos, ausencia o irregular mantenimiento de dichas instalaciones son
causas que predisponen el ingreso y proliferacin de microorganismos desde distintas fuentes
(GOYA, 1997). Adems, existen factores secundarios que permiten el crecimiento de
microorganismos en el agua dentro de los sistemas de distribucin y almacenamiento como:
cantidad y tipo de nutrientes, oxgeno, temperatura, pH, concentracin de desinfectante y material
de las tuberas (GALARRAGA, 1984).

Las bacterias del grupo de los coliformes totales que son capaces de fermentar lactosa a 44-45 C
se conocen como coliformes termotolerantes. Se considera que Escherichia coli es el ndice de
contaminacin fecal ms adecuado. En la mayora de las circunstancias, las poblaciones de
coliformes termotolerantes se componen predominantemente de E. coli; por lo tanto, este grupo
se considera un ndice de contaminacin fecal aceptable, pero menos fiable que E. coli.

La determinacin de coliformes se usa como indicador de la eficacia del tratamiento (CACERES,

1990). Los coliformes fecales (termorresistentes) se definen como el grupo de organismos
coliformes que pueden fermentar la lactosa a 44-45C, comprenden el gnero Escherichia y en
menor grado, especies de Klebsiella, Enterobacter y Citrobacter (EASTON, 1998). Los coliformes
termorresistentes distintos de E. coli pueden provenir tambin de aguas orgnicamente
enriquecidas, por ejemplo, de efluentes industriales o de materias vegetales y suelos en
descomposicin. Como los organismos coliformes termorresistentes se detectan con facilidad,
pueden desempear una importante funcin secundaria como indicadores de la eficacia de los
procesos de tratamiento del agua para eliminar las bacterias fecales (OMS, 1995).

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La evaluacin de la Numeracin de Coliformes Totales y Termotolerantes por el Mtodo de Tubos
Mltiples (NMP), es un mtodo se basa en el principio de que una nica clula viva puede
desarrollarse y producir un cultivo turbio. El mtodo requiere la realizacin de una serie de
diluciones en serie de la muestra de cultivo, en un medio lquido adecuado para el crecimiento de
dicho organismo de un volumen diez veces mayor. Luego, se incuban las muestras de esos tubos y,
pasado un tiempo, se examinan los tubos. Aquellos tubos que recibieron una o ms clulas
microbianas procedentes de la muestra, se pondrn turbios, mientras que los tubos que no
recibieron ninguna clula permanecern transparentes. Se calcula mediante una tabla de acuerdo
a la serie y dilucin o alcuotas segn se utilice. (Apha, 1995)

Segn el reglamento de la calidad del agua para consumo humano (D.S. N 031-2010-SA), nos
muestra en la siguiente tabla los lmites mximos permisibles de parmetros microbiolgicos y
parasitolgicos:

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 II. OBJETIVOS:
Determinar la calidad microbiolgica del agua.
Aplicar en mtodo del Nmero Ms Probable (NMP)

III. MATERIALES:

Muestra:

Agua de pozo subterrneo

Medios

5 tubos con Caldo Lauril Sulfato Triptosa doble concentrado con campanas de Durham
10 tubos con Caldo Lauril Sulfato Triptosa concentrado simple con campana de Durham
Agar Endo para confirmacin
Tubos con caldo EC con campana de Durham para coliformes totales termotolerantes
Pruebas para IMVIC
Pipetas de 1 y 10ml
Mechero
Gradilla
IV. PROCEDIMIENTO:

DESCRIPCIN DE LA MUESTRA:

MUESTRA: Agua de pozo

LUGAR: Casero La Pursima - Lambayeque
MUESTREADOR: Kelly Olivos
FECHA: 26/10/17
HORA: 4:00 pm
CARACTERISTICAS ORGANOLPTICAS:
Color: transparente
Olor: Inodora
pH: 6.5
Pocas partculas en suspensin.
Sin sedimento

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PREPARACIN DE LA MUESTRA
Homogenizar la muestra (agitar 25 veces la muestra de agua antes de verter en
placa).

*PRUEBA PRESUNTIVA-COLIFORME TOTALES

1. Tomar 10 ml de la muestra de agua y agregarle a la primera serie de tubos con 10 ml
de caldo Lauril Sulfato Triptosa doble concentrado.
2. Despus tomaremos 1 ml de la muestra de agua y le agregaremos a la segunda serie
de tubo con 10ml de caldo Lauril Sulfato Triptosa concentracin simple.
3. Por ltimo, tomamos 0.1 ml de la muestra y lo diluimos en 10ml de caldo Lauril Sulfato
Triptosa concentracin simple.
4. Homogenizar e incubar a 35oC por 24 h y 48 h.

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 Tubos doble Tubos con Tubos con
concentrados concentracin concentracin
simple simple

LECTURA: Si se observa produccin de gas y turbidez: La prueba se considera positiva, debiendo

anotar el nmero de tubos positivos para posteriormente hacer el clculo del NMP.

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PRUEBA CONFIRMATIVA
1. Todos los tubos gas positivos sembrarlos en agar ENDO.
2. Incubar a 35c por 24h a 48h

LECTURA: Lactosa positivos y con brillo metlico.

*COLIFORMES TERMOTOLERANTES TOTALES

1. De los tubos gas positivos de Caldo Lauril Sulfato Triptosa, tomar tres asada y los
sembraremos en los tubos que contienen caldo E.C.
2. Incubamos a 45oC por 24 h.- 48 h.

Tubos con caldo

EC

LECTURA: Se observar la turbidez y gas.

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V. RESULTADOS

1. COLIFORMES TOTALES

10ml 1ml 0.1ml

Codigo Presuntivo del Nmero ms Probable es: 5-5-5

2. PRUEBA CONFIRMATIVA

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 3. COLIFORMES TERMOTOLERANTES

Sembramos en tubos con caldo EC para confirmar coliformes termotolerantes y

el resultado nos dio los 15 tubos positivos (turbidez y presencia de gas).

Cdigo de Nmero ms Probable fue de: 5-5-5

Para las realizar las pruebas bioqumicas primero sembramos en agar ENDO solo
la primera serie de 5 tubos positivos de la prueba confirmativa para termotolerantes.

Seleccionamos 3 colonias lactosa positivo y con brillo metlico.

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PRUEBAS BIOQUIMICAS: IMVIC, TSI, LIA

COLONIA 1 COLONIA 2 COLONIA 3

INDOL VP RM

colonia 1: colonia 2:
Indol: negativo Indol: negativo
Rojo de metilo: positivo Rojo de metilo: positivo
VP: negativo VP: negativo
Citrato: negativo Citrato: negativo
TSI: A/A, +, - TSI: A/A, +, -
LIA: K/K LIA: K/K

colonia 3:
Indol: negativo
Rojo de metilo: positivo
VP: negativo
Citrato: negativo
TSI: A/A, +, -
LIA: K/K

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 VI. INTERPRETACIN :

El limite establecido en el Reglamento de la Calidad del Agua para Consumo

Humano - DS N 031 2010-SA - Direccin General de Salud Ambiental -
Ministerio de Salud, en el artculo 60, el cual es <1,8 NMP/100ml.

Coliformes totales. Cdigo NMP: 5-5-5, Contiene > 1600/100ml.

Prueba confirmativa. Cdigo NMP: 5-5-5, Contiene > 1600/100ml.

Coliformes termotolerantes. Cdigo NMP: 5-5-5, Contiene >

1600/100ml.

Las pruebas bioquimicas para las 3 colonias trabajadas nos dio:

De las 6 pruebas, 5 pruebas son positivas para Escherichia coli; sin

embargo el indol que debi ser positivo, dio negativo; esto podria deberse
a algun problema del medio o una mala siembra de las colonias. An asi
se determina que hay presencia de E. coli ya que todas las pruebas,
incluida la prueba de termotolerancia ha sido positiva para dicha bacteria.

VII. CONCLUSIN

Se concluye que el agua no es apta para el consumo humano debido a la

presencia de coliformes totales y ms an, debido a la presencia de bacterias
coliformes termotolerantes como lo es E. coli.

VIII. RECOMENDACIONES:

Se recomienda que los depositos donde se recolecta el agua estn

bien lavados con agua y leja antes de hacerlo.
Se recomienda que el agua sea hervida y no solo calentada, antes de
su consumo.
Se recomienda que no se consuma el agua directamente del grifo o
de los depositos.

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

http://www.fortunecity.es/expertos/profesor/171/agua.html
http://mazinger.sisib.uchile.cl/repositorio/lb/ciencias_quimicas_y_farmac
euticas/schmidth/14.html

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 ANEXOS

Cuadro NMP y lmites de confianza de 95% cuando se usan diversas combinaciones de

resultados positivos de series de 10, 1 y 0.1 ml en series de 5 tubos.

NMERO DE TUBOS CON REACCIN INDICE DE LIMITE DE CONFIANZA DE

POSITIVA NMP/100 ml 95%
10 ml 1 ml 0.1 ml. Inferior Superior
0 0 0 <2 --- ---
0 0 1 2 1 10
0 1 0 2 1 10
0 2 0 4 1 13
1 0 0 2 1 11
1 0 1 4 1 15
1 1 0 4 1 15
1 1 1 6 2 18
1 2 0 6 2 18
2 0 0 4 1 17
2 0 1 7 2 20
2 1 0 7 2 21
2 1 1 9 3 24
2 2 0 9 3 25
2 3 0 12 5 29
3 0 0 8 3 24
3 0 1 11 4 29
3 1 0 11 4 25
3 1 1 14 6 35
3 2 0 14 6 35
3 2 1 17 7 40
4 0 0 13 5 38
4 0 1 17 7 45
4 1 0 17 7 46
4 1 1 21 9 55
4 1 2 26 12 63
4 2 0 22 9 56
4 2 1 26 12 65
4 3 0 27 12 67
4 3 1 33 15 77
4 4 0 34 16 80
5 0 0 23 9 86
5 0 1 30 10 110
5 0 2 40 20 140
5 1 0 30 10 120
5 1 1 50 20 150
5 1 2 60 30 180
5 2 0 50 20 170

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5 2 1 70 30 210
5 2 2 90 40 250
5 3 0 80 30 250
5 3 1 110 40 300
5 3 2 140 60 360
5 3 3 170 80 410
5 4 0 130 50 390
5 4 1 170 70 480
5 4 2 220 100 580
5 4 3 280 120 690
5 4 0 350 160 820
5 5 0 240 100 940
5 5 1 300 100 1300
5 5 2 500 200 2000
5 5 3 900 300 2900
5 5 4 1600 600 5300
5 5 5 > 1600 --- ---

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