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Resumen Abstract
Objetivo. Determinar el serotipo y perfil de resistencia a Objective. To determine the serotype and antibiotic re-
antibiticos de cepas de Salmonella spp. presentes en la carne sistance profile of Salmonella spp. isolated from retail ground
de res que se expende en la capital mexicana. Material y beef in Mexico City. Materials and methods. A total of
mtodos. Se analizaron 100 muestras de carne molida. Se 100 samples of ground beef were analyzed. The pathogen
aisl el patgeno por mtodos convencionales y se confirm was isolated by conventional methods and confirmed by
por PCR (gen InvA, 284 pb). El perfil de resistencia a antibiti- PCR (invA gene, 284 bp).The antibiotic resistance profile was
cos se determin por el mtodo de Kirby-Bauer y la seroti- determined by the Kirby-Bauer method while serotyping was
pificacin por el esquema de Kauffman-White. Resultados. performed according to the Kauffman-White scheme. Re-
Se detectaron los serotipos Lomita (6), Derby (4), Senftenberg sults. We isolated a total of 19 strains of Lomita (6), Derby
(2), Javiana y Cannsttat (1). Se observ alta resistencia a (4), Senftenberg (2), Javiana and Cannsttat (1) and undeter-
ampicilina (18/19), carbenicilina (16/19), tetraciclina (13/19) mined (5) serotypes. The strains showed a high resistance
y trimetoprim-sulfametoxasol (13/19). Cinco cepas fueron no rate to ampicillin (18/19), carbenicillin (16/19), tetracyclin
tipificables y 14 mostraron multirresistencia. Conclusiones. (13/19), and trimethoprim-sulfamethoxazole (13/19). Multi-
La carne de res que se vende en el principal centro de consu- drug resistance was observed in 14 isolates. Conclusions.
mo del pas est contaminada con serotipos de Salmonella spp. Several Salmonella spp. serotypes of public health significance
relevantes para la salud pblica. Una importante proporcin are circulating in ground beef sold in the major Mexican city.
de stos es resistente a mltiples antibiticos. Some of these strains are multi-drug resistance.
Palabras clave: Salmonella; serotipificacin; resistencia a anti- Keywords: Salmonella; serotyping; multidrug resistance; Mexico
biticos; Mxico
(1) Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Nacional Autnoma de Mxico. Mxico.
(2) ELANCO Animal Health. Mxico.
(3) Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional. Mxico.
crobiolgico. Asimismo, el aislamiento microbiolgico (Cb; 100 g) y tetraciclina (Tet; 30 g). Se utilizaron como
se realiz de acuerdo con la Norma Oficial Mexicana organismos de control de calidad: Escherichia coli ATCC
NOM-114-SSA1-1994,17 segn el cual se deben seguir 8739, Enterococcus faecalis ATCC 29212, Staphylococcus
los pasos de preenriquecimiento, enriquecimiento se- aureus ATCC 25923 y Pseudomonas aeruginosa ATCC
lectivo, aislamiento selectivo diferencial e identificacin 9027. stos fueron donados por el laboratorio de Mi-
bioqumica. crobiologa General de la Escuela Nacional de Ciencias
Biolgicas (ENCB) del Instituto Politcnico Nacional de
Confirmacin molecular Mxico. Las cepas fueron consideradas multirresistentes
cuando fueron resistentes a tres grupos de antibiticos o
Para la confirmacin molecular de la Salmonella, se de- ms. Se utilizaron las herramientas de anlisis de datos
termin la presencia del gen invA (284 pb), caracterstico de Microsoft Excel para elaborar la estadstica descripti-
de Salmonella spp. y relacionado con su capacidad inva- va. Para el anlisis de la relacin entre de la frecuencia
siva. Se usaron iniciadores especficos para Salmonella, de muestras positivas a Salmonella y los distintos puntos
utilizados anteriormente por Rahn y colaboradores.18 de venta, se utiliz la prueba de ji cuadrada (2), con un
La reaccin con estos iniciadores fue llevada a cabo en nivel de significancia de 95%.
2.5 L de buffer 10X para PCR (500 mM KCL, 200 Mm
Tris HCL), 1.25 L de dNTPs (10Mm), 1.6 L de MgCl2,
0.5 L de Taq DNA polimerasa (Fermentas) y 1.5 L de
Resultados
la extraccin de cada aislado. La PCR se corri bajo las Se encontr una frecuencia relativa promedio de
siguientes condiciones: incubacin inicial a 94C por Salmonella spp. en carne de res molida de 16% en la
60 segundos; seguida por 35 ciclos de desnaturaliza- muestra estudiada. No obstante, en los supermercados,
cin a 94C por 60 segundos; alineacin a 64C por 30 el porcentaje de muestras positivas fue del 6% (3/50);
segundos; finalmente una amplificacin a 72C por 30 mientras que en el sector informal fue del 32% (16/50):
segundos, seguida de un periodo de extensin final de 2 de tianguis, 4 de carniceras y 10 de mercados pblicos
7 minutos a 72C. La amplificacin de los productos de (cuadro I). La prueba de ji cuadrada evidenci que el
PCR fue analizada usando geles con 1.2% de agarosa, porcentaje de muestras positivas a Salmonella spp. estuvo
teidos con bromuro de etidio y visualizados con un asociado significativamente (P<0,05) con el tipo de mer-
transiluminador. cado (formal o informal) en el que se expende la carne.
Los serotipos predominantes fueron Lomita y
Serotipificacin Derby, aunque tambin se encontraron cepas de Senf-
tenberg, Javiana y Cannstatt. Cinco de los aislamientos
La serotipificacin se realiz de acuerdo con el esquema tuvieron resultados no concluyentes, por lo que se
de Kauffmann-White,7 para lo cual los aislamientos reportan como no serotipificados.
fueron enviados al Instituto de Diagnstico y Referencia En materia de susceptibilidad a antibiticos (cuadro
Epidemiolgicos (InDRE) de la Secretara de Salud. II), las resistencias ms frecuentes se presentaron en
-lactmicos; mientras que 73.7% (14/19) de los aisla-
Resistencia a antibiticos mientos resultaron multirresistentes. Como se muestra
en la figura 1, entre 70 y 95% de las cepas presentaron
Para determinar la sensibilidad de los aislamientos a resistencia a ampicilina (18/19), carbenicilina (16/19),
antibiticos, se utiliz la prueba de difusin en discos tetraciclina (13/19) y trimetoprim-sulfametoxasol
(sensidiscos individuales BIO-RAD) mediante el M- (13/19). En los dems antibiticos, el porcentaje de cepas
todo de Kirby-Bauer.19 Los resultados se reportaron de resistentes fue mucho ms bajo (entre 5 y 30%).
acuerdo con los criterios de interpretacin propuestos
por el Clinical & Laboratory Standards Institute (CLSI).20
Se probaron 14 antibiticos: ampicilina (Am; 10 g),
Discusin
amoxicilina-cido clavulnico (Ax; 30 g), amikacina Estudios previos en cortes de carne cruda9 y molida21
(Ak; 30 g), ceftriazona (Cro; 30 g), cefalotina (Cf; reportan porcentajes de positividad a Salmonella spp.
30 g), cefotaxima (Ctx; 30 g), cloranfenicol (Chl; 30 mucho mayores a los aqu observados. Sin embargo,
g), pefloxacina (Pef; 5 g), gentamicina (Ge; 10 g), estas diferencias no son necesariamente el reflejo de un
nitrofurantona (Nf; 30 g), netilmicina (Net; 30 g), mejor control del patgeno en fechas ms recientes, pues
trimetoprim sulfametazol (Stx; 250 g), carbenicilina se ha demostrado que su prevalencia en el ganado puede
Cuadro I
Frecuencia relativa de Salmonella spp. y serotipos identificados en muestras de carne
de res molida de la Ciudad de Mxico. Abril-noviembre 2013
Cannstatt 1
Supermercados 50 6.0
N.D.1 2
Lomita 1
Tianguis 5 40.0
Senftenberg 1
Derby 2
Carniceras 15 26.7
Lomita 2
Derby 2
Javiana 1
Mercados pblicos 30 33.3 Lomita 3
N.D.* 3
Senftenberg 1
*
Serotipo no determinado en aislamientos con resultados no concluyentes
Cuadro II
Perfil de resistencia a antibiticos de los serotipos de Salmonella spp. aislados
de carne molida de res en la Ciudad de Mxico. Abril-noviembre 2013
Derby Am/Cb/Sxt/Tet
Javiana Am/Cb/Cf/Chl/Tet Cro/Ge
N. D. Am/Cb/Cf/Sxt/Ge/Nf/Net/Tet
Mercados
N. D. Am/Cb/Sxt/Ge/Tet Nf
N. D. Cb/Nf Cf/Ge
Lomita Am/Cb/Sxt/Tet
Lomita Am/Cb/Sxt/Tet
Lomita Am/Cb/Sxt/Tet
Carniceras
Derby Am Cb
Derby Am/Cb
Senftenberg Am/Cb/Sxt/Chl/Tet
Tianguis
Lomita Am/Cb/Cf/Sxt/Tet
Senftenberg Am/Cb/Cf/Sxt/Chl/Ge/Tet Ak
Lomita Am/Cb/Sxt/Pef/Tet Cf
Mercados
Lomita Am/Cf/Sxt/Ge/Tet Cb
Derby Am/Cf Cb
Cannstatt Am/Cb/Tet
Supermercados N. D. Am/Cb/Sxt/Ge/Net/Nf
N. D. Am/Cb/Sxt/Ge
*
Am:Ampicilina; Cb: Carbenicilina;Tet:Tetraciclina; Sxt: Sulfa-trimetoprim; Cf: Cefalotina; Nf: Nitrofurantona; Ge: Gentamicina; Pef: Pefloxacina; Chl: Cloranfenicol;
Net: Netilmicina; Cro: Ceftriaxona; Ak: Amikacina
ND: No determinado
variar con la zona geogrfica y con la poca del ao.22 Se ha sugerido que la presencia de ndulos linfti-
En cualquier caso, la frecuencia relativa observada en cos en los recortes y carne molida de res podra ser una
este estudio dista mucho de ser baja, lo que indica que de las principales fuentes de contaminacin con Salmone-
la carne bovina se mantiene como un vehculo potencial lla.23 Lo anterior a partir de la clonalidad observada entre
para la transmisinde Salmonella spp. cepas presentes en ndulos linfticos y carne cruda.
superior (23.1) al reportado en este trabajo. Ello reafirma Estudios futuros sobre diversidad gentica, presencia
la importancia de evaluar los riesgos relacionados con y mecanismos de transmisin de genes de resistencia
el empleo de antibiticos en medicina humana y vete- y de virulencia, e incluso de secuenciacin completa
rinaria. del genoma de las cepas circulantes, podran ofrecer
Por otra parte, se observ que casi 60% de las cepas informacin vital para mejorar la gestin de este riesgo
de Salmonella mostraron resistencia a sulfa-trimetoprim, microbiolgico.
utilizado para tratar infecciones tanto en humanos
como en animales. Cabe mencionar que el porcentaje Agradecimientos
de resistencia aqu encontrado es tres veces superior al
reportado hace seis aos.10 Adicionalmente, un nmero Esta investigacin fue realizada con financiamiento del
considerable de aislamientos resistieron antibiticos de proyecto SAGARPA-CONACYT 109127. Los autores
amplio espectro, tales como la gentamicina, usada en agradecen la colaboracin del personal del laboratorio
medicina veterinaria y humana en el tratamiento de de microbiologa general de la Escuela Nacional de
mltiples infecciones como septicemias, meningitis, Ciencias Biolgicas, Instituto Politcnico Nacional.
peste, neumonas, entre otras. Asimismo, la resistencia
a pefloxacina, si bien se present slo en una cepa, es Declaracin de conflicto de intereses. Los autores declararon no tener conflicto
de intereses.
de las ms preocupantes, pues se trata del antibitico
de eleccin para tratar casos de salmonelosis entrica
en adultos.34
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vincular las cepas aisladas de la carne con casos clnicos 1. CDC. National Salmonella Surveillance Annual Report Appendices,
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combinacin de alta virulencia (la infeccin provoca in 2008. EFSA Journal 2010;8(1):410.
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al reportado para dicho serotipo en este trabajo (Am/Cb/ 4. Rhoades JR, Duffy G, Koutsoumanis K. Prevalence and concentration
Cf/Chl/Tet). El tratamiento de infecciones causadas por of verocytotoxigenic Escherichia coli, Salmonella enterica and Listeria
cepas con estas caractersticas puede ser muy compli- monocytogenes in the beef production chain: a review. Food Microbiol
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contribuyan a prevenir la presencia del patgeno en la 5. Sibhat B, Molla Zewde B, Zerihun A, Muckle A, Cole L, et al. Salmonella
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carne que se expende en los puntos de venta. house personnel and slaughterhouse environment in Ethiopia. Zoonoses
Si bien los resultados de este estudio no son nece- Public Health 2011;58(2):102-109. http://doi.org/dhtcqn
sariamente representativos de la situacin nacional, el 6. Zaidi MB, Calva JJ, Estrada-Garca MT, Len V,Vzquez G, Figueroa G,
muestreo en la principal urbe del pas constituye una et al. Integrated Food Chain Surveillance System for Salmonella spp. in
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pases desarrollados.29 Esto es, que se identifique y se WebdriveActionEvent/oid/01s-000036-089
tipifique de manera sistemtica a los patgenos causan- 8. EFSA. The European Union Summary Report on Trends and Sources of
Zoonoses, Zoonotic Agents and Food-borne Outbreaks in 2013. EFSA
tes de brotes/casos, as como al alimento involucrado Journal 2015;13(1):3991-4152.
en los mismos. De esta forma, se puede realizar una 9. Zaidi MB, McDermott P, edorka-Cray P, Leon V, Canche C, Hubert S, et
mejor gestin de los riesgos asociados con el consumo al. Nontyphoidal Salmonella from human clinical cases, asymptomatic chil-
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La presencia de serotipos de Salmonella multirresis- 28. http://doi.org/cbr6c7
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