UNIVERSIDAD AUTNOMA DE COAHUILA

ESCUELA DE CIENCIAS BIOLGICAS

UNIDAD TORREN

MANUAL DE PRCTICAS DE
LABORATORIO DE
MICROBIOLOGA GENERAL
L.B. MANUEL RAMREZ P.
2017
 PREFACIO

Durante las ltimas dcadas, las clulas microbianas han proporcionado un modelo til para el estudio
de los procesos de la vida, a causa de su diversidad, versatilidad y fcil manejo. Los estudios con
microorganismos han contribuido en gran medida a lo que hoy se sabe de gentica, fisiologa y metabolismo.
Los microorganismos han sido, adems, foco de creciente inters a causa de que pueden contribuir con
soluciones a los principales problemas de la humanidad y en la bsqueda de la produccin de sus satisfactores.

Es por eso, que la creciente importancia de la microbiologa, como ciencia bsica y aplicada, ha
contribuido a aumentar el inters por su estudio por un gran nmero de estudiantes y profesionistas vinculados
con el conocimiento y aplicacin de los microorganismos en procesos de la transformacin y en el rea de la
salud pblica.

Por consiguiente, te ofrezco el presente manual de laboratorio, con el fin de que te introduzcas en el
interesante estudio del mundo de los microorganismos, desde sus principales tcnicas de tincin, hasta las
tcnicas de cultivo de los microorganismos ms utilizadas por el hombre, que nos interesa conocer, estudiar y
aplicar en los procesos que involucren su actividad biolgica.

Esperando contar con tu invaluable apoyo para la aplicacin de las prcticas y la bsqueda del mejor
resultado, te saluda tu amigo, LIC.BIOL. MANUEL RAMREZ PREZ, maestro de la materia de
Microbiologa General.

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Prctica 1 Fecha:______/______/______

CONTROL DE MICROORGANISMOS POR MEDIOS FSICOS Y QUMICOS

OBJETIVO
El estudiante determinar el punto trmico letal de un microorganismo y determinar las propiedades
bactericidas de un detergente comercial.

INTRODUCCIN
Las actividades enzimticas de los microorganismos, determinantes en la existencia de los mismos, son
regulados en parte por la temperatura. Las temperaturas superiores a la mxima inhibe la actividad enzimtica
y por ende el desarrollo microbiano, ocasionado por lo general efectos letales, en cambio temperaturas
menores a la mnima ejerce una accin esttica, esto es, solo se inhibe su multiplicacin sin causarle
necesariamente la muerte.
Existen infinidad de productos qumicos comerciales empleados como sustancias germicidas. Su modo
de accin es en unas conocida y desconocida para otros. Generalmente, sin embargo, bien pueden alterar la
permeabilidad celular, la naturaleza coloidal del protoplasma o inhibir la actividad enzimtica. La evaluacin
de la accin germicida de un producto se determina por lo general en comparacin con el coeficiente de fenol.
Uno de los procedimientos de rutina para determinar el contenido bacteriano de muchos materiales diferentes
es la tcnica de recuento en placa. Este procedimiento est basado en el supuesto de que cada clula visible
desarrollar una colonia; de aqu que al nmero de colonias en la placa revelar el nmero de organismos
contenidos en la muestra que son capaces de crecer bajo las condiciones especficas de incubacin.
El espcimen se diluye para que una de las placas finales tenga entre 30 y 300 colonias. El nmero de
colonias dentro de este rango da la ms adecuada aproximacin de la poblacin microbiana.
Debido a que la poblacin en el espcimen original no se conoce de antemano, debe ser preparado y
sembrado una serie de diluciones para obtener una placa dentro del rango citado anteriormente.

CONCEPTOS ANTECEDENTES
- Temperatura de muerte trmica - Letalidad
- Actividad enzimtica - Bactericida
- Bacteriosttico - Detergente
- Compuesto de amonio cuaternario - Iodoforo
- Fenol - Desinfeccin
- Desinfectante - Sanizante

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.

EXPERIMENTO 1
CONTROL DE MICROORGANISMOS POR MEDIOS FSICOS

1.- A una serie de 4 tubos de ensaye de 16 x 150 mm que contengan 10 ml de agua estril, hacer una
suspensin de microorganismos (Escherichia coli) y colocarla a bao mara a diferentes temperaturas 20 C,
45 C, 80 C y 100 C cada tubo por un trmino de 15 minutos.

2.- Despus tomar 1 ml de cada tubo y transferirlo a cada caja de petri estril (una caja por cada tubo
utilizado), y agregar despus el medio de cultivo correspondiente (agar nutritivo), preparar cuatro tubos de
ensaye de 16 x 150 con 15 ml de agar nutritivo cada uno de ellos.

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3.- Homogenizar las cajas con la muestra y el agar como se lo indique su instructor, dejar solidificar las cajas e
incubar las mismas en forma invertida en una estufa de incubacin a 35 C 2 por 24 hrs.

4.- Sacar las cajas de la incubacin y leer los resultados.

EXPERIMENTO 2
CONTROL DE MICROORGANISMOS POR MEDIOS QUMICOS

1.- En un tubo de ensaye de 16 x 150 mm poner 10 ml de solucin salina estril y hacer una suspensin
bacteriana con el microorganismos problema ( Escherichia coli).

2.- Preparar tres tubos de ensaye de 16 x 150 mm con 9 ml de solucin salina estril cada uno.

3.- De una muestra concentrada de detergente a utilizar tomar 1 ml con pipeta de 1 ml estril (esterilizar
cuando menos 4 pipetas de 1 ml por muestra a probar), poner este mililitro en el primer tubo esta ser la
dilucin 1: 10, de este dilucin tomar 1 ml y ponerlo en el segundo tubo, esta ser la dilucin 1.100 y de esta
dilucin tomar 1 ml y ponerlo en el tubo 3, esta ser la dilucin 1. 1000.

4.- Para cada dilucin se tendr una caja de petri estril y un tubo de 16 x 150 ml con 15 ml de agar cuenta
estandar de contenido por cada caja de petri, incluyendo una caja de petri para hacer una prueba con el
detergente concentrado.

5.- De cada dilucin de microorganismo realizada se toma un ml de muestra y se coloca en el centro de cada
caja de petri marcada con la dilucin correspondiente, se funde el agar de los tubos a bao mara y se baja su
temperatura a 24 C aproximadamente, al tener esta temperatura se vierte cada tubo con agar en cada caja de
petri correspondiente, se homogeniza y se deja solidificar el agar ya homogenizado con la muestra.

6.- Ya solidificadas las muestras se incuban por 24 horas a una temperatura de 35 C 2 en forma invertida
para prevenir la evaporacin.

7.- Despus de este tiempo de incubacin, saque las cajas de la incubadora y registre sus resultados.

CUESTIONARIO

1.- Por qu es importante la temperatura de incubacin?

2.- Por qu la utilizacin de los diferentes gradientes de temperatura aplicados a los microorganismos?

3.- Por qu es importante la dilucin de los microorganismos en 10-1, 10-2 y 10-3?

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Prctica 2 Fecha:______/______/______

TCNICAS DE TINCIN 1

OBJETIVO
El estudiante se familiarizar con el manejo y partes del microscopio ptico y aprender las tcnicas de
tincin bsicas: tincin simple, tincin de Christian Gram y tincin de Zeel-Neelsen.

INTRODUCCIN
El microscopio ptico o compuesto es un aparato de precisin que consiste en una serie de lentes
diseadas y acomodadas para proveer, en condiciones ptimas las mximas amplificaciones posibles que
pueden ser de 1000 a 2000 veces (x) el dimetro del espcimen que se va a observar. El aceite de inmersin
tiene las mismas caractersticas pticas (ndice de refraccin) que el vidrio. Si no se utilizara dicho aceite los
rayos de luz se refractaran (desviaran) debido al aire presente entre el portaobjetos y el objetivo, y entrara
menos luz al microscopio. En las tinciones simples solamente se usa uno de estos tipos de colorantes para teir
las estructuras celulares. El mtodo de coloracin diferencial de Christian Gram sirve para dividir las bacterias
en dos grupos: a.- Los llamados organismos Gram positivos, que conservan el color morado del colorante de
Cristal Violeta. b.- Los organismos Gram negativos, que pierden el color morado y se colorean de rojo por
contrate con el colorante de Safranina. En consecuencia, la coloracin diferencial de Gram ayuda para la
identificacin de bacterias desconocidas, ste mtodo de coloracin da mucha seguridad en el diagnstico de
enfermedades infecciosas mediadas por bacterias. La tincin cido resistente se llama as debido a la
naturaleza cida del agente decolorante empleado (una solucin de HCl al 3% en alcohol etlico al 95%). Los
organismos cido resistentes son capaces de retener el colorante primario a pesar de lo enrgico del
procedimiento de decoloracin; los organismos cido resistentes son capaces de retener el colorante primario
debido a que este colorante es ms soluble en las sustancias lipoides presentes en estos organismos, que en la
solucin decolorante. Otra caracterstica de la tincin cida resistente es el empleo de calor como agente
intensificador del colorante primario, de hecho el colorante primario es forzado a penetrar en la clula por
medio de la aplicacin de calor hasta que el colorante empiece a vaporizarse, este procedimiento es necesario
debido a que los miembros de este grupo, poseen una concentracin elevada de material graso en su
citoplasma.

CONCEPTOS ANTECEDENTES
- Colorante - Grupo cromgeno
- Tincin - Grupo auxocrmico
- Coloracin diferencial - Frtis
- Decolorante - Mycobacterium
- Bacteria Gram positiva - Bacteria Gram negativa

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL.
A.- TINCIN SIMPLE.
1.- Hacer un frote fijo al calor de la bacteria entregada por el maestro, colquele en la regin marcada dos o
tres gotas del colorante de azul de metileno por 60 a 90 segundos.
2.- Despus de este tiempo, lave perfectamente bien con agua corriente (de la llave) procurando que el agua no
toque de lleno la preparacin del frotis.
3.- Seque la preparacin al aire
4.- Enfoque la preparacin al microscopio con los objetivos de 10X y 40X y observe la preparacin con el
objetivo de 100X o de inmersin.
5.- Dibuje o tome las imgenes vistas al microscopio y describa sus observaciones.

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B.- TINCIN DIFERENCIAL DE CHRISTIAN GRAM
1.- Prepare frotis de las siguientes bacterias: Escherichia coli (Gram Negativa) y Staphylococcus aureus
(Gram Positiva). Agregue a cada frote en la regin marcada de 3 a 5 gotas del colorante de cristal violeta de
Gram por un trmino de un minuto.
2.- Lave la coloracin con agua corriente procurando que el chorro no peque de lleno sobre la muestra.
3.- Aada a las preparaciones yodo de Gram por un trmino de un minuto y vuelva a lavar la preparacin.
4.- Decolore las muestras con el preparado de alcohol acetona al 50%, hasta que no salga colorante y vuelva
a lavar la preparacin.
5.- Por ltimo adales a ambas muestras el colorante de contraste de Safranina de Gram por un trmino de 30
segundos.
6.- Lave y seque la muestra, observe con objetivo de inmersin (100X).
7.- Dibuje o tome fotos de las imgenes vistas al microscopio y describa sus observaciones.

C.- TINCIN ALCOHOL CIDO RESISTENTE

1.- En un portaobjetos limpio y desengrasado marque un rea con el marcador permanente.
2.- Prepare un frote con el esputo autoclaveado.
3.- Seque el frote al aire y fjelo al calor.
4.- Coloque la preparacin sobre una tela de asbesto en el tripie de metal.
5.- Cubra la preparacin con el colorante de carbol fucsina de Ziehl Neelsen.
6.- Caliente la preparacin con el mechero a la llama lenta, procurando que se desprendan vapores y no hierva
el colorante, evitando que el colorante se seque, agregue el colorante perdido continuamente. Continu
calentando por 15 minutos, siempre agregando el colorante perdido.
7.- Despus de este perodo de tiempo, lave la preparacin con agua corriente hasta que se retire el exceso de
colorante.
8.- Decolore su preparacin con el alcohol cido al 3% hasta que no se desprenda ms colorante.
9.- Lave la preparacin con agua corriente y despus agregue el colorante de contraste (azul de metileno)
dejndolo actuar por 5 minutos.
10.- Lave la preparacin con agua corriente, seque al aire y examine con el objetivo de inmersin.
11.- Dibuje o tome fotos de las imgenes vistas al microscopio y describa sus observaciones.

CUESTIONARIO
1.- Qu papel desempea la pared celular en la tincin de Christian Gram?
2.- Cules son las principales diferencias entre las paredes celulares de las bacterias Gram negativas y las
Gram positivas?
3.- Cul es la composicin molecular de la pared celular de las bacterias alcohol cido resistentes?
4.- Mencione y explique las caractersticas que se relacionan con las bacterias cido resistentes.
5.- Qu sustancia o compuesto qumico podra utilizar junto con el colorante de carbol fucsina para suprimir
la utilizacin del calor en la tcnica de Zeel-Neelsen?.
6.- Pueden las clulas de levadura, animal y vegetal ser divididas en Gram positivas o Gram negativas?
Porque?

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Prctica 3 Fecha:______/______/______

TCNICAS DE TINCIN 2
OBJETIVO
El estudiante se familiarizar con el manejo y partes del microscopio ptico y aprender las tcnicas de
tincin bsicas: tincin de pared celular, tincin de esporas y tincin de Wright.
INTRODUCCIN
La pared celular bacteriana es una estructura que delimita la clula bacteriana, que est situada sobre
la membrana citoplasmtica, la cual, a su vez, recubre el citoplasma. Por su parte externa, la pared est
rodeada por la cpsula, cunado sta existe o por la capa mucoide peri celular. Segn Knaysi (1951) la
existencia de la pared celular fue sospechada hacia 1872 por Cohn, que atribuyo la resistencia de la clula
bacteriana hacia la desintegracin por parte de cidos y lcalis, no la insolubilidad del citoplasma sino la
existencia de una membrana que ejerca una accin protectora. La primera demostracin directa de la pared
celular es debida Fischer (1894), el cual se sirvi para tal final del fenmeno de la plasmlisis, obtenindose
una patente separacin de la pared celular del resto del cuerpo bacteriano. La propiedad fundamental de la
pared celular es la rigidez; si no fuese as, las bacterias, por accin de las fuerzas de tensin superficial
relativamente enormes, estaran obligadas a tomar nicamente la forma que corresponde a la mnima relacin
entre la superficie y volumen, esto es, la forma esfrica, posee adems de la rigidez, otras importantes
cualidades: la ductilidad y la elasticidad. El espesor de la pared celular presenta amplias diferencias, no solo en
relacin con la especie bacteriana, sino tambin con el mtodo de medida; los valores medios que han sido
obtenidos demuestran que la pared celular ocupa una parte considerable del volumen total del organismo
bacteriano. Sus componentes principales son los hidratos de carbono (celulosa y hemicelulosa), algunas
sustancias nitrogenadas (quitina), protenas, una fraccin lipdica y en los organismos Gram Positivos cidos
teicoicos, a excepcin del magnesio, no ha sido demostrada la presencia de metales. Cuando las esporas son
desarrolladas, cada clula forma una sola espora. En este caso la formacin de esporas no es un tipo de
reproduccin definitiva; estas clulas pueden resistir la destruccin en un medio hostil o desfavorable.
Diversas bacterias terrestres, especialmente Gram positivas, pueden inducirse al estado de espora mediante un
mecanismo llamado esporulacin, logrando as resistencia contra la desecacin, trituracin, escasez de
nutrientes, fro, calor, radiacin (UV, X, ), sal, oxidantes, desinfectantes, pH extremo, etc. debido a su
cubierta dura e impermeable. Es un estado inactivo o latente en el que no crece y no hay reproduccin, pues de
una bacteria se produce una sola espora. Su activacin en condiciones favorables se denomina germinacin.
Hay 3 tipos de esporas bacterianas: las endoesporas, las exoesporas y el acineto. La Tincin de Wright fue
diseada al principio de la dcada de los noventas por James Homer Wright. Dicha tincin est compuesta por
azul de metileno y eosina. La tincin de Wright. Es de gran trascendencia clnica ya que gracias a ella es capaz
de identificarse diversas estructuras en una clula as como la morfologa y en su caso patologa celular no
solo de las clulas del sistema inmunolgico sino de todas aquellas que componen la sangre ya sea en un
paciente sano o con un
estado patolgico.

CONCEPTOS ANTECEDENTES
- Pared celular bacteriana - Espora bacteriana
- Peptidoglicano - Antgeno H
- Elementos de la sangre
PROCEDIMIENTO EXPERIMETAL
A.- TINCIN DE LA PARED CELULAR
1.- Prepare un frote relativamente concentrado de B. subtillis sobre un portaobjetos limpio
y desengrasado.
2.- Antes de que la suspensin bacteriana se seque sobre el portaobjetos, cbrala
7
 directamente con la solucin fosfomolbdico y djelo reaccionar cuatro minutos.
3.- Incline completamente el portaobjetos sobre el fregadero para drenar totalmente el cido
fosfomolbdico; luego agregue el colorante de verde de metilo directamente sobre el
frote hmedo y djelo reaccionar durante cinco minutos.
4.- Lave suavemente en la llave. Es inevitable que al lavar en la llave, algo del material se
desprenda del frote; trate de minimizar el desprendimiento, pero al mismo tiempo lave
bien hasta que el agua ya no arrastre colorante.
5.- Seque al aire, despus examine con el objetivo de aceite de inmersin.
6.- Si tio correctamente, las paredes celulares aparecern de un verde obscuro o azul, mientras que el
citoplasma se vera de un verde claro bien incoloro.
7.- Con esta tincin es necesario examinar tres campos bien hasta encontrar al ms
demostrativo.
8.- Dibuje las imgenes vistas al microscopio y describa sus observaciones.
B.- TINCIN DE ESPORAS.
Es importante no fijar de antemano el frotis, ya que el vapor afloja la espora para permitir entrar al verde de
malaquita. Las esporas fijadas no ceden al reblandecimiento con vapor.

1.- Se coloca un frote seco, no fijado, sobre un vaso de precipitado, lleno con agua hirviendo, descansando
sobre el borde del vaso, con el frotis en la parte superior.
2.- se deja que se forme el agua de condensacin en grandes gotas en la parte inferior del portaobjetos. Luego
se aniega el portaobjetos con el colorante de verde de malaquita, dejndolo sobre el vaso de precipitado
con agua hirviente.
3.- Djese el colorante reaccionar de uno a tres minutos.
4.- Qutese con unas pinzas para crisol el portaobjetos del vaso de precipitado, y enjuguese con agua
corriente.
5.- Aplquese fucsina por 30 segundos.
6.- Lvese con agua corriente, y qutese el exceso de agua para secar.
Las esporas deben teirse de un color verde ligero mientras el resto del organismo se tie de rojo.

C.- TINCIN DE WRIGHT.

1.- Colocar el frotis secado al aire sobre una rejilla o cubeta de tincin con la sangre hacia arriba.
2.- Cubrir completamente el portaobjetos con el colorante de Wright gota a gota. Dejarlo que permanezca en
el frotis aproximadamente de 5-8 minutos, para fijar los glbulos sanguneos. El colorante deber cubrir
completamente el portaobjetos, pero no debe derramarse por los bordes. Deber agregarse una cantidad
adicional si ste se comienza a evaporar.
3.- Agregar directamente al colorante un volumen igual de amortiguador de Wright, para evitar la coloracin
dbil. Esperar la formacin de brillo metlico. Puede usarse de igual manera agua des ionizada. Dejar
actuar de 10-15 minutos.
4.- Lavar con agua en el chorro cuidadosamente hasta que la extensin presente un aspecto rosado al
examinarlo a simple vista.
5.- Limpiar el dorso del portaobjetos con una gasa o algodn humedecido en alcohol para eliminar cualquier
resto de colorante.
6.- Secar al aire y observar con el microscopio con el objetivo de inmersin (100X).

CUESTIONARIO
1.- Que antgenos puede producir la cpsula bacteriana?
2.- Qu bacterias producen el antgeno H?
3.- Qu es una espora bacteriana y de hongos filamentosos?
4.- Cul es la constitucin molecular de la espora bacteriana)
5.- Cules son los tipos de clulas que componen la sangre?
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6.- Por qu es importante en teido del frotis de sangre?

Prctica 4 Fecha:______/______/______

TCNICA DE SIEMBRA POR ESTRIAS, EXTENSIN EN PLACA

AGAR PROFUNDO Y AGAR INCLINADO

OBJETIVO
El estudiante aprender las tcnicas de siembra bsicas en agar slido preparados en caja de Petri como
son estra y extensin y en agares slidos y semislidos preparados en tubos de ensaye como inclinados y
profundos.

INTRODUCCIN
Los cultivos en agar u otro medio slido realizados en cajas de petri se llaman cultivos en placa, con
frecuencia cuando aludimos a la caja de petri la llamamos simplemente placa. La placa por estras se inicia
cuando el medio de agar estril fundido y enfriado se vierte primero en una caja de Petri estril y se deja que
se solidifique completamente, despus se siembra sobre la superficie del agar slido, haciendo sobre ella con
el asa bacteriolgica estras, en este caso, el crecimiento slo se producir en la superficie de la placa. Para la
extensin en superficie se emplean placas con el medio slido adecuado, sobre estas se coloca un pequeo
volumen de la muestra, el que se mide con una asa calibrada o con una microjeringa y se extiende sobre la
superficie con el asa de Drigalski. Los medios semislidos se preparan en tubos, se inoculan con aguja (asa
recta) o con pipeta; en este ltimo caso es necesario calentar el medio (bao mara) y cuando se encuentra en
estado lquido y a una temperatura de 42 C se agrega el inculo, se homogeniza y se deja solidificar. Estos
medios se emplean para estudiar la movilidad de los microorganismos y para favorecer la separacin de
microorganismos con diferentes requerimientos de oxgeno. Los medios slidos se preparan en tubos, despus
de esterilizarlos, estos se inclinan sobre una hilera de pipetas de 5 ml para desarrollar el pico de flauta o
inclinacin del agar, la siembra se realiza con el asa bacteriolgica rayando la superficie del agar y con
suavidad, tratando de que las colonias se desarrollen en forma aislada.

CONCEPTOS ANTECEDENTES
- Caja de petri - Microorganismo microaerfilo
- Agar Agar - Microorganismos mesoflicos aerobios
- Siembra microbiana - Inculo
- Colonia microbiana - Agar semislido
- Agar inclinado

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A.- ESTRIADO EN PLACA

1.- Lave y esterilice una caja petri por miembro del equipo, posteriormente agregue 15 ml del agar estril a
utilizar, el agar fue preparado previamente con las indicaciones de su instructor.
2.- Permita que se enfri el medio de cultivo hasta unos 42 C antes de verterlo en las cajas de petri.
3.- Cubra la caja de petri con la tapa inmediatamente despus de haber agregado el agar, djela sobre la mesa
de trabajo hasta que solidifique.
4.- Inocule la caja, dibuje con el asa una serie de lneas estriadas sobre la superficie del agar (segn se lo
indique su instructor)
5.- Debe tener cuidado de no penetrar la superficie del agar durante el sembrado.
6.- Etiquete la caja de petri con el nombre de cada integrante del equipo, del grado y seccin, incube las caja
en forma investida a 35 C 2 durante 24 horas.
7.- Al trmino de este tiempo saque las cajas de la incubadora, observe el crecimiento de las cajas e identifique
9
 las caractersticas de cada colonia que observe.
8.- Haga sus dibujos y observaciones para realizar su reporte.
B.- SIEMBRA POR EXTENSIN EN PLACA DE AGAR
1.- Preparar tres cajas de Petri con agar nutritivo, dejar solidificar el medio.
2.- De la dilucin 10-1 tomar 0.1 ml de ella con una pipeta y dejarla en el centro de la caja marcada con la
dilucin 10-1, hacer lo mismo con las diluciones 10-2 y 10-3, colocarlas en el centro de sus cajas
correspondientes.
3. A continuacin con el asa de Drigalski extender cada una de las muestras sobre la superficie del medio,
hacerlo de tal manera que se este seguro de una homogenizacin en el medio.
4.- Esperar un momento hasta que se haya absorbido la muestra extendida en el medio.
5.- Invertir las cajas e incubar a 35 2 por 24 hrs.
6.- Despus de este tiempo contar el nmero de colonias desarrolladas en la superficie y calcular el nmero de
microorganismos por mililitro de la muestra.

C.- SIEMBRA POR PICADURA (AGAR PROFUNDO)

1.- Coloque en un tubo de ensaye de 16x150 con tapn 12 ml de agar semislido y djelo enfriar.
2.- Inoclelo con la cepa de microorganismo que el instructor le haya dado utilizando el asa recta.
3.- La picadura no deber de llegar hasta el fondo del tubo, sino que deber solo llagar a tres cuartas partes de
su profundidad para conservar el estado anaerbico del sistema.
4.- Incube el tubo o los tubos en una estufa bacteriolgica a 35 2 por un trmino de 24 hrs.

D.- SIEMBRA EN UN MEDIO INCLINADO (AGAR EN PICO DE FLAUTA)

1.- Coloque en un tubo de ensaye de 16x150 con tapn 12 ml de agar slido y djelo enfriar.
2.- Inoclelo con la cepa de microorganismo que el instructor le haya dado utilizando el asa recta.
3.- La picadura no deber de llegar hasta el fondo del tubo, sino que deber solo llagar a tres cuartas partes de
su profundidad para conservar el estado anaerbico del sistema.
4.- Incube el tubo o los tubos en una estufa bacteriolgica a 35 2 por un trmino de 24 hrs.

CUESTIONARIO
1.- Qu importancia tiene para la microbiologa la tcnica de aislamiento por estras?
2.- Qu otro tipo de tcnica de aislamiento puede desarrollar usted?
3.- Qu fundamento tiene el cultivar bacterias por picadura?

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Prctica 5 Fecha:______/______/______

CLASIFICACIN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO EN SELECTIVOS, ENRIQUECIDOS,

DIFERENCIALES Y DE ENRIQUECIMIENTO.

OBJETIVO
El estudiante aprender el manejo de los diferentes tipos de medios de cultivo, de acuerdo a su
aplicacin, as mismo, aplicar las tcnicas correctas de preparacin de medios de cultivo y de siembra
microbiolgica.

INTRODUCCIN
Las distintas mezclas de sustancias nutritivas empleadas en el laboratorio microbiolgico para el
cultivo de microbios se denominan medios de cultivo.
Existen muchos tipos de medios de cultivo que van desde los ms simples, como el agar nutritivo,
hasta los agares ms complejos como los medios enriquecidos y selectivos.
Los medios selectivos y diferenciales son los que utiliza el microbilogo para el cultivo primario de
alguna muestra, a veces utiliza un medio preparado de modo que ponga de manifiesto las diferencias cuando
se inicia el desarrollo entre aquellos organismos que se quieren estudiar y otros grmenes que puedan existir
en la muestra; los medios especiales y enriquecidos son los que se preparan enriqueciendo caldo o agar simple
con la adicin de carbohidratos, sangre, suero sanguneo, casena digerida, extracto de levadura u otras
substancias nutritivas especiales.
Los medios sintticos se utilizan para estudios precisos de nutricin y metabolismo; la mayora de los
medios de cultivo utilizados se encuentran en el comercio en forma de polvos secos (deshidratados), los cuales
se transforma fcilmente en medios de cultivo por la adicin de agua y su ulterior esterilizacin.
Los medios lquidos (caldos) se preparan en tubos o matraces que se cubren con tapones de algodn o
tapas especiales, un cultivo lquido puede ser transferido mediante una asa microbiolgica, un hisopo, una
pipeta o una pipeta Pasteur; el lquido se deposita dentro del caldo o medio lquido. En este tipo de cultivos
los microorganismos presentan un desarrollo particular que se manifiesta en la superficie o a travs de todo el
lquido.

CONCEPTOS ANTECEDENTES
- Medio selectivo - Medio enriquecido
- Medio de enriquecimiento - Microbio
- Germen - Medio diferencial
- Siembra microbiana - Mezclas

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

1.- Lave y seque el material de vidrio y prepare las cajas de petri y tubos de ensaye de 16 x 150 mm con tapn
de rosca para esterilizar.

2.- Cada equipo deber preparar los medios de cultivo que se van a utilizar en la prctica (Agar Eosina-Azul
de Metileno, Agar S-110, Agar Base Sangre, Agar MacConkey, Caldo de Tioglicolato) de acuerdo a las
indicaciones de su instructor.

3.- Cada alumno preparar un tubo de 16 x 150 mm con tapn de rosca con 15 ml de cada medio de cultivo
que se vaya a utilizar y esterilizar solo aquellos que lo requieran (ver indicaciones del empaque de cada
medio)
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4.- Despus de esterilizar el material de vidrio y medios de cultivo proceder a preparar una caja de petri con
cada agar que se vaya a sembrar por la tcnica de estrias. Deje que los agares solidifiquen perfectamente.

5.- El caldo de tioglicolato mantngalo en el tubo con rosca hasta que se enfre a temperatura ambiente.

6.- Divida la superficie de la caja en tres regiones del mismo tamao y proceda a inocular la caja en cada rea
marcada con el microorganismo que le corresponda:
En la parte A.- Inocular por siembra recta con Salmonella sp.
En la parte B.- Inocular por siembra recta con Escherichia coli
En la parte C.- Inocular por siembra recta con Staphylococcus aureus

7.- En el tubo de ensaye con caldo de tioglicolato inocular con cualquier microorganismo que elija el
estudiante.

8.- Rotula cada caja y tubo de ensaye con el nmero de equipo, grado y seccin.

9.- Incubar las cajas de Petri inoculadas en forma investida a 35 C 2 por 24 horas, el tubo con caldo de
tioglicolato incubarlo a la misma temperatura y tiempo, evitando que este se agite al observarlo.

10.- Al trmino de la incubacin hacer sus dibujos y observaciones para realizar su reporte.

CUESTIONARIO

1.- Cules de los medios de cultivo empleados son diferenciales. Enriquecidos, de enriquecimiento y
selectivos.

2.- Qu importancia tiene sta prctica para el estudio microbiolgico?

3.- Qu caractersticas tienen los microorganismos utilizados en este trabajo?

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Prctica 6 Fecha:______/______/______

DETERMINACIN DEL NMERO MS PROBABLE (NMP)

OBJETIVO
El estudiante aprender la tcnica de determinacin de nmero ms probable (NMP) para la
identificacin de organismos coliformes en cualquier muestra problema en la que se desee conocer la carga
microbiana de estas bacterias

INTRODUCCIN
En la tcnica del NMP (tambin denominada prueba de fermentacin por tubos mltiples), las
bacterias coliformes pueden aislarse y enumerarse usando medios selectivos y tcnicas de dilucin standard y
placa. La identificacin de bacterias coliformes especficas en los alimentos y muestras de agua, por lo
general, no se requiere, sino que normalmente se enumeran como coliformes totales y posiblemente como
coliformes fecales, en medios de cultivos lquidos, usando la tcnica del NMP.
Esta tcnica requiere de diluciones decimales previas, y siendo un mtodo de probabilidad estadstica,
no es una enumeracin de la poblacin como tal, sino que es una estimacin del nmero de microorganismos,
nos dan el resultado observado en una prueba de fermentacin por tubo mltiple de la muestra.
Puesto que el NMP es una estimacin basada en la probabilidad estadstica, el grado de seguridad o
confiabilidad de la estimacin, aumenta con el nmero de rplicas de los tubos inoculados, de cada dislucin.
Las tablas del NMP en un conjunto de tubos que resulten positivos, da un lmite de confiabilidad del
95%. La seleccin de la serie de 3, 4 5 tubos, generalmente se determina por los propsitos y la muestra a
analizar.
La U. S. Public Health Service, requiere de un mnimo de una serie de 5 tubos por dilucin, para el
examen bacteriolgico de la calidad de agua potable. Por otro lado, a veces, se acepta una serie de 3 tubos,
como mnimo, para otros exmenes de agua o alimentos.
Generalmente las inoculaciones son de 10, 1.0 y 0.1 gramos o mililitros de la muestra por tubo, en una
serie, no obstante se pueden utilizar diluciones decimales, usndose el factor de dilucin o conversin
apropiado.
Al seleccionar cuidadosamente el medio de cultivo y el resultado especfico, el cual es una indicacin
de que el microorganismo est presente en la muestra, se puede realizar el anlisis de NMP, aunque existan
otros microorganismos.
Por ejemplo, los coliformes se pueden estimar por el crecimiento y la produccin de gas durante la
fermentacin de caldo lactosado, despus de incubarse a 35 C 2 durante 24 horas.

CONCEPTOS ANTECEDENTES
- Caldo lactosado - Coliformes
- Fermentacin de lactosa - Agua residual

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A.- PRUEBA PRESUNTIVA.- SIEMBRA EN UN MEDIO LQUIDO (CALDO LACTOSADO) EN
TUBOS DE 18 X 150 mm CON TUBO DE FERMENTACIN DE DURHAN

1.- En una gradilla prepare tres series de 3 tubos de ensaye de 18 x 150mm con tapn de rosca que contengan
10 ml de caldo lactosado y un tubo de fermentacin de durhan invertido. La primer serie de 3 tubos debern
estar preparados a una doble concentracin de caldo lactosado.

Nota.- Poner atencin a las indicaciones del instructor para preparar estos tubos con su campana de
fermentacin.

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2.- De la muestra problema homogenizada, con una pipeta de 10 ml estril, transferir 10 ml de ella a cada tubo
de la primera serie preparada a doble concentracin de caldo lactosado.

3.- Con la misma pipeta, trasfiera 1 ml de la muestra a cada tubo de la segunda serie de tubos preparados con
caldo lactosado a concentracin sencilla.

4.- Con una pipeta de 1 ml estril, transfiera 0.1 ml de la muestra a cada uno de los tubos de la tercera serie
preparados con caldo lactosado a concentracin sencilla.

5.- Incube los tubos durante 24 a 48 horas a 35 C 2, la presencia de gas en el tubo de durhan (campana de
fermentacin) en cualquier cantidad.

Nota: consulta la tabla de Numero Ms Probable (NMP) para tres tubos y busca tu resultado de los tubos
positivos.

CUESTIONARIO

1.- Qu ventajas y desventajas presentan la tcnica empleada en esta prctica?

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Prctica 7 Fecha_____/_____/_____

ESTUDIO DE MORFOLOGA DE LEVADURAS, HONGOS Y CULTIVO DE HONGOS

OBJETIVO
Observar la morfologa general de la levadura Sacharomyces cerevisiae y las estructuras anatmicas
bsicas de los hongos imperfectos, as como su cultivo.

INTRODUCCIN
Entre mohos y levaduras no hay una distincin patente, se han definido las levaduras como hongos
cuya forma corriente y dominante de crecimiento es unicelular. Las clulas de levadura son esfricas, elpticas
y cilndricas, su tamao varia notablemente. El protoplasma de la clula de levadura est incluido en una pared
celular y por una membrana citoplasmtica, y contiene un ncleo, una gran vacuola y numerosos grnulos y
glbulos de grasa; no se encuentran flagelos u otros rganos de locomocin.
Las levaduras se dividen en dos grupos, segn sus mtodos de reproduccin; un grupo de divide o
reproduce por germinacin y formacin de esporas y el otro por gemacin; el primero pertenece a los
Ascomicetos y los segundos a los Hongos imperfectos Las levaduras tienen gran importancia Industrial,
suelen utilizarse en la preparacin de bebidas alcohlicas (Saccharomyces cerevisiae), en la preparacin de
leches fermentadas y en la produccin de algunos quesos, entre otros usos.
Las talofitas suelen dividirse en tres grupos: 1)algas, 2)hongos y 3)lquenes. Los hongos muchas veces
son filamentosos, por lo menos en estructura microscpica, a veces unicelulares; hay cinco clases principales
de ellos: Myxomycetes, Phycomycetes, Ascomycetes, Basidiomycetes y Deuteromycetes u hongos
imperfectos; los trminos mohos y levaduras no tienen significacin taxonmica. Suelen describirse los mohos
como hongos filamentosos multicelulares en que los filamentos, hifas, se ramifican y a veces se unen para
formar una masa enmaraada; cualquier parte grande de la misma se conoce como micelio.
Muchas hifas de mohos estn divididas por tabiques transversales o septa en clulas independientes, y
cada una de ellas contienen uno o ms ncleos, las hifas de otos mohos son poco tabicadas y son
esencialmente tubos largos que contienen protoplasma con numerosos ncleos dispersos, donde se pueden
observar corrientes protoplasmticas activas, son las hifas cenocticas. Las clulas del moho suelen ser
cilndricas y su tamao es variable, no se ha observado fcilmente el ncleo de los mohos; se necesita emplear
para ello mtodos especiales de coloracin. El crecimiento de los mohos de inicia por germinacin de una
espora o aumento de tamao de cualquier fragmento de hifa que llega a un substrato adecuado que tengo
circunstancias apropiadas de temperatura, humedad y aire. Algunos mohos crecen abundantemente y producen
un micelio algodonoso que llena cualquier recipiente que lo contenga. El crecimiento del micelio, de los
mohos contina indefinidamente en medio favorable; las hifas antiguas mueren y se desintegran y aparecen
nuevas.
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CONCEPTOS ANTECEDENTES

-Hongos -Hifa
-Conidio -Micelio
-Moho -Septo
-Fermentacin -Levadura

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

A.- OBSERVACIN DE FROTIS DE LEVADURAS

1.- Prepare un frote de regular densidad con las clulas de levadura en agua destilada seque al aire.
2.- Fije a la flama muy suavemente.
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3.- Bae la preparacin durante un minuto con la solucin de etanol al 40%. Lave con agua corriente.
4.- Bae el frote con solucin de KOH 0.1M y djelo reaccionar por una hora; s s empieza a deshidratar,
Agregue ms KOH, lave con agua corriente.
5.- Aplique a la preparacin el azul de metileno por dos minutos.
6.- Lave con etanol al 10%, sacuda el exceso de alcohol y seque al aire.
7. - Prepare un segundo portaobjetos como el anterior pero preceda nicamente hasta l tercer paso.
8.- Aplique el verde de malaquita por dos minutos y contine como en el primer frote.
9.- Compare ambas preparaciones.
10.- Examine las preparaciones con el objetivo de inmersin y dibjelas.
11.- Los ncleos se tien de azul oscuro verde y el citoplasma de un color mucho ms claro.
12.- Prepare un montaje hmedo usando Yodo de Gram en vez de agua.
13.- Detectar los grnulos y las estructuras internas tales como grandes vacuolas.
14.- Observe con el objetivo de 40X y con el de inmersin.

B.- CULTIVO MACROSCPICO DE HONGOS FILAMENTOSOS.

1.- Vierta el medio de cultivo Agar Sabouraud y Agar Patata Dextrosa (PDA) en las cajas Petri estriles
2.- Djelos que solidifiquen
3. - Inocule por PROPGULO las placas de agar con la muestra contaminada de los hongos que se va a
estudiar (se recomienda de algn alimento)
4.- Incubar las cajas inoculadas a 35 C durante 5 das.
5.- Prepare montajes hmedos con los hongos que hayan crecido en las placas de agar
6.- Use KOH al 10% y colorante de Azul Algodn Lactofenol
7.- Observe al microscopio en objetivo seco fuerte y de inmersin
8.- Dibuje sus resultados en lo referente al tipo de hifas y cuerpos reproductivos, as como las caractersticas
del crecimiento en la placa, forma y coloracin.

C.- CULTIVO MICROCPICO (TCNICA DE RIDELL) DE HONGOS FILAMENTOSOS.

1.- Preparar en una caja de Petri cuadriculada de 1.0 cm por lado y 3 mm de espesor de Agar Patata Dextrosa
(PDA).
2.- Cortar cuadros de PDA y colocarlos en portaobjetos que estn sobre una varilla de vidrio doblada en forma
de V en una caja de Petri previamente esterilizada.
3.- Tomar con el asa l inoculo del moho previamente seleccionado.
4.- Inocular por picadura en cada uno de los lados del cuadro de agar.
5.- Colocar sobre el agar un cubre objetos y presionar ligeramente para que se adhiera al medio.
6.- Adicionar 5 ml de glicerol al 10% en la caja de Petri para mantener la humedad.
7.- Incubar la caja de Petri a 28 C durante 5 das.
8.- Antes de observar el Moho desarrollado, retirar el glicerol con una pipeta Pasteur.
9.- Adicionar 5 ml de formaldehdo para inactivar el Moho durante 15 minutos.
10.- Desprender con cuidado el cubreobjetos que se encuentra sobre el cuadro de agar y colocarlo sobre un
portaobjetos que contenga una gota de azul de algodn, sellar la preparacin con barniz de uas
transparente.
11.- Desprender con cuidado el cuadro de agar y colocar una gota de azul algodn, colocar un cubreobjetos
sobre el colorante y sellar la preparacin. Observar las preparaciones a 10X y 40X.
12.- Dibujar o fotografiar las estructuras observadas.

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CUESTIONARIO
1.- En que radica la importancia del estudio de las levaduras?

2.- Investigue algunos de los usos comerciales de las levaduras

3.- Investiga las formas de reproduccin de las levaduras.

4.- Qu importancia tiene el estudio de la presencia de hongos en un alimento?

5.- Cules son las estructuras principales de los hongos?

6.- Cree usted que existen hongos en el aire? Explique

PROCEDIMIENTO DEL MICROCULTIVO

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Prctica 8 Fecha:______/______/______

CUANTIFICACIN DIRECTA E INDIRECTA DE MICROORGANISMOS

OBJETIVO
El alumno aprender a medir la turbidez de los cultivos mediante espectrofotometra; cuantificar el
nmero de clulas totales por cuenta en cmara de Neubauer y determinar el nmero de unidades formadora
de colonias (UFC) por dilucin de microorganismos y siembra en placa.

INTRODUCCIN
Existen diferentes mtodos para cuantificar la biomasa de clulas microbianas en un cultivo; los
mtodos pueden ser directos e indirectos. Entre los directos se puede mencionar el recuento de clulas en cama
de Neubauer y entre los indirectos est el de la medicin de la turbidez de los cultivos por espectrofotometra y
el de cuenta de dilucin en placa.
El mtodo de cuenta directa en cmara tiene la ventaja de ser muy rpido y econmico, an que no se
puede distinguir entre clulas viables y no viables. Se puede calcular el nmero de microorganismos en una
muestra a partir del volumen de la cmara y de las diluciones de la muestra que sean necesarias. Sin embargo,
tiene el inconveniente de que la observacin y cuantificacin se dificultan en clulas muy pequeas (1 a 5 m)
o en poblaciones de baja densidad debido al pequeo volumen de muestra que se utiliza (0.1 a 0.2 mm3).
El mtodo de medicin de la turbidez de los cultivos en un espectrofotmetro, es relativamente rpida
y se basa en la capacidad de las clulas microbianas de dispersar la luz que incide sobre stas. Como el tamao
de las clulas en una poblacin es casi constante, el grado de dispersin es proporcional a la concentracin de
clulas presentes pero no se puede diferenciar la turbidez dada por clulas viables o no viables.
Una de las tcnicas ms utilizadas en microbiologa para cuantificar clulas, es la de hacer diluciones y
cuenta en placa con medios de cultivo especficos para la poblacin de inters. Est tcnica se basa en la
suposicin de que cada bacteria incluida en un medio de agar o en la superficie se multiplicar y producir una
colonia visible, en consecuencia el nmero de colonias que se observarn a simple vista ser igual al nmero
de bacterias viables o UFC inoculadas en el agar multiplicadas por la dilucin.

CONCEPTOS ANTECEDENTES
- Biomasa - Neubauer - Dilucin
- Mesoflicos aerobios - Colonia microbiana - Espectrofotometra

PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
A.- TECNICA DE TURBIDIMETRA
1.- Encender el espectrofotmetro y dejar que el instrumento se caliente por 20 minutos.
2.- Ajustar el espectrofotmetro a la longitud de onda de 520nm.
3.- Calibrar el espectrofotmetro a cero por ciento de transmitancia, para leer en la escala, observar la aguja a
nivel de los ojos y tomar el dato donde la aguja coincida sobre su reflejo en el espejo.
4.- Colocar una celda con medio de cultivo estril como testigo (sin inocular) y calibrar el instrumento a
100 % de transmitancia.
5.- Para medir la turbidez de una muestra, vaciarla en otra celdilla, limpiar perfectamente con papel suave la
celdilla y medir el valor de %T.
6.- Calcule la absorbancia con la frmula A= -log (%T/100).
7.- En caso de disponer de un aparato digital ajustar la medicin a absorbancia (D.O).

B.- TECNICA DE CUENTA DIRECTA EN CMARA DE NEUBAUER

1.- Se coloca 1 ml de la muestra en un tubo de ensaye. Cuando se trata de cuantificar muestras muy
concentradas ser necesario preparar diluciones de la misma con solucin salina isotnica. Agregar 0.5ml
de solucin de fenol al 2% y dos gotas de safranina. Mezclar y dejar en reposo durante 5-10 minutos.
2.- Lavar cuidadosamente la cmara de Neubauer sin frotar la zona brillante del centro y el portaobjetos. Secar
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 con papel suave. Colocar el portaobjetos sobre la zona central limitada por dos excavaciones laterales,
donde se aprecian una zona cuadriculada a simple vista.
3.- Homogenizar perfectamente la muestra con un vrtex, tomar inmediatamente una muestra con una pipeta
Pasteur de punta fina y depositar una gota entre la cmara y el cubreobjetos por el borde de la cmara.
Dejar que la muestra se distribuya por capilaridad, evitando el exceso que dificultar la evaluacin precisa
de la poblacin microbiana.
4.- Dejar reposar durante 5 minutos, colocar la cmara en la platina del microscopio y localizar con el objetivo
seco dbil (10X) la zona cuadriculada de la cmara.
5.- Localizar el cuadro central grande (C1) que mide 1.0 mm por lado, que se encuentra dividido en 5x5
cuadros pequeos (C2) limitados por triple lnea que miden 0.2 mm por lado. Estos cuadros pequeos a su
vez se encuentran divididos en 16 cuadros ms pequeos (C3) de 0.05 mm de lado.
6.- Hacer la cuantificacin de clulas con el objetivo seco fuerte (40X), contando el nmero de clulas que se
localicen en el cuadro C1, los cuadros de menor tamao C2 sirven de gua para el cmputo. Se empieza a
contar desde la parte superior de los cuadros C2 y se contina hasta la base. Si las clulas tocan los lmites
de los cuadros C2; debern contarse solamente aquellas que toquen la parte superior y el lado derecho del
cuadro. Si las clulas tocan la parte inferior o el lado derecho no se cuentan. Este mtodo reduce las
posibilidades de contar la misma clula dos veces.
7.- Cuente hasta cerca de 200 a 250 clulas antes de determinar el nmero de clulas por mL. En el proceso de
contar se pueden presentar tres situaciones diferentes, que son:

a).- Si hay de 200 a 250 clulas por cuadro grande (C1), multiplicar directamente x 104 para reportar el
nmero de clulas por mL.
b).- Con menos de 200 clulas por cuadro grande (C1), ser necesario contar algunos de los cuadros de
las esquinas (miden 1x1 mm de lado y divididos en 4x4). De esta manera se cuantificarn ms de
200 clulas. Despus dividir el nmero total de clulas entre el nmero de cuadros empleados y
sacar el valor promedio por cuadro grande. Despus multiplicar este valor por 104 para reportar el
nmero de clulas por mL.
c).- En el caso de que se observen ms de 200 clulas por cuadro grande (C1), se debern contar las
clulas de los cuadros de menor tamao (C2) hasta contar cerca de 200 clulas. Dividir este valor
entre el nmero de cuadros usados para la cuenta para sacar el valor promedio por cuadro C2.
Multiplicar este valor promedio por 25 para obtener el nmero de clulas aproximado en un cuadro
grande (C1) y despus multiplicar por 104 para reportar el nmero de clulas por mL.
8.- El factor de 104 por el cual se debe multiplicar el nmero de clulas por cuadro grande (C1) es porque este
cuadrado contiene un volumen de 0.1 mm3 (mide 1mm por lado y la cmara tiene una profundidad de 0.1
mm).
#clulas/cuadroC1 (25cuadrosC2) = #clulas/0.1mm3 X 104 = #clulas/mL

9.- En el caso de que el # de clulas sea muy grande, la suspensin deber diluirse y se har la correlacin
como sigue:
#clulas/mL en la muestra diluida X (factor de dilucin) = #clulas/mL en la suspensin original.

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C.- TCNICA DE DILUCIN Y SIEMBRE EN PLACA
1.- Hacer diluciones decimales de cultivos de 10-5 hasta 10-9 en condiciones estriles. Se colocan en cajas de
Petri con agar nutritivo por duplicado 0.1 mL de las ltimas tres diluciones.
2.- Distribuir cuidadosamente el inculo en toda la caja con ayuda de una hasa de Drigalsky previamente
esterilizada a la flama del mechero y enfriada.
3.- Dejar absorber el lquido durante 10 minutos.
4.- Incubar las cajas en forma investida a 35 C durante 24 a 48 horas para bacterias y levaduras y de 5 a 7 das
para hongos filamentosos.
5.- Hacer la cuenta de las colonias de las placas, seleccionando la dilucin donde el nmero de colonias sea
entre 30 y 300.
6.- Si la inoculacin fue por duplicado o triplicado, se calcula el nmero promedio de colonias por dilucin y
este nmero se multiplicar por el inverso de la dilucin X 10 (por ajuste de volumen inoculado) para
obtener el nmero total de UFC/mL en la muestra original.

NOTA: Reportar los resultados de acuerdo a la siguiente tabla:

CUESTIONARIO
1.- Compare el mtodo de dilucin en placa con el mtodo de cuenta directa en cmara de Neubauer para la
cuantificacin de microorganismos. En qu casos conviene usar cada uno?

2.- Explica cules son las ventajas y desventajas del mtodo turbidimtrico de cuantificacin de clulas.

3.- Mencione dos aplicaciones concretas en las que se utilicen cada una de las tcnicas de cuantificacin
realizadas.

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