INTRODUCCIN:

Las tcnicas cromatogrficas se emplean para separar los componentes

individuales de una mezcla y, en ciertos casos, para identificar un
compuesto comparando su comportamiento cromatogrfico con el
desustancias conocidas empleadas como patrn.La base de la tcnica es que
cuando un determinado soluto interacta con dos fases, una de ellas,
habitualmente slida, llamada fase estacionaria, experimenta una serie
de procesos (adsorcin en fase slida, solubilizacin en cada fase, arrastre
por la fase mvil, etc.) que, en ltimo extremo, llevan a que el soluto se reparta
entre ambas fases. En el equilibrio, la relacin entre las concentraciones del soluto
entreambas fases es constante, y se denomina coeficiente de reparto. Si en
una mezcla, cada componente tiene un coeficiente de reparto diferente del de
los otros, la separacin ser buena. Naturalmente, dicho coeficiente depende de la
naturaleza de las fases, as como de las condiciones de la cromatografa. Una de
las tcnicas cromatogrficas ms sencillas es la que se realiza en capa fina,
llamada as porque la fase estacionaria es una capa fina de un material
poroso (gel de slice, almina, etc.) extendida para su manejo mecnico
sobre un soporte inerte. La fase mvil es una mezcla de disolven tes en
diferentes proporciones, que emigra por la fase estacionaria debido, sobre todo,
a la capilaridad. En su movimiento, a r r a s t r a m s o m e n o s a l o s
componentes de una mezcla en funcin de sus mayores o
m e n o r e s coeficientes de reparto. El coeficiente de reparto es poco empleado en
la prctica. En su lugar, y relacionado con l, se emplea el denominado Rf,
caracterstico de cada sustancia, definido como la relacin entre la distancia que
recorre dicha sustancia y la que recorre la fase mvil. Las ms insolubles tendrn,
en el disolvente empleado, unRf prximo a cero, mientras las ms solubles se
acercarn a uno.
Cromatografa en columna:
Se emplea para la separacin de mezclas o purificacin de sustancias a
escala preparativa. Como fasee s t a c i o n a r i a s e u s a , g e n e r a l m e n t e ,
gel de slice o almina dentro de una columna. La eleccin del
disolvente es crucial para una buena separacin. Dicho disolvente pasa a travs
de la columna por efecto de la gravedad o bien por aplicacin de presin
(cromatografa flash). La columna se prepara mezclando el soporte con disolvente
y se rellena la columna poniendo en el fondo de sta un poco de algodn o lana
de vidrio, para evitar que la slica o la almina queden retenidas en la
columna y que el disolvente se engrasada hasta el nivel del soporte. A
continuacin se introduce la muestra por la parte superior de la columna
y se eluye con el disolvente elegido, recogindose por lo general en tubos de
ensayo. Una columna de cromatografa es un tubo de vidrio relleno con
una sustancia slida de propiedades adsorbentes constituida por pequeas
partculas: gel de slice y almina son las ms usadas. Este relleno es lo que se
conoce en cromatografa como la fase estacionaria. A travs de la
columna se har pasar una corriente de un lo o mezcla de disolventes
denominada eluyente y/o fase mvil.La mezcla de compuestos a separar se
disuelve en una pequea cantidad de disolvente y se coloca sobre el
adsorbente, en la parte superior de la columna, quedando adsorbida por
el mismo. A continuacin se p a s a u n f l u j o d e e l u y e n t e a t r a v s d e
la columna. Los compuestos constituyentes de la mezcla son
arrastrados por el eluyente a su paso, hacindoles avanzar a lo largo de
la columna. Sin embargo, no todos los compuestos avanzan a la misma
velocidad, y esta es precisamente la clave de la cromatografa. Algunos
compuestos se ven ms fuertemente retenidos por el adsorbente ( fase
estacionaria) y p o r l o t a n t o a v a n z a r n m s d e s p a c i o . P o r e l
contrario, otros ape nas son retenidos y avanzarn a
m a y o r velocidad. En general se dice que la separacin en la cromatografa se
basa en la afinidad diferencial de los distintos compuestos por la fase mvil o la
fase estacionaria.
El orden aproximado de elucin de compuestos y de polaridad es
aproximadamente el que se indica: