Fluorescence & Color

An overview of the fundamentals

of measuring fluorescent color

written by Arthur W. Springsteen, Ph.D.

Leadership in Reflectance Technology

P.O. Box 70, Shaker Street, North Sutton, NH 03260
Tel: 603-927-4266 Fax: 603-927-4694
Email: labsphere@labsphere.com www.labsphere.com
Table of Contents

1 Introduction

1 Fluorescence and Color

2 Fluorescence

3 Color

3 Types of Fluorescent Pigments

5 Measurement of Fluorescence and Color

with Standard Spectrophotometers

7 Integrating Sphere Spectrophotometers

8 Illuminants and Their Effect on Fluorescence

10 Bispectral Fluorescent Color Measurement


An overview of:
Measuring fluorescent color
Chemistry & physics of
fluorescent colors
Measurement techniques
Effects of different illuminants on
fluorescent pigments
Achieving accurate bispectral
measurements for fluorescent colors
Fluorescence and Color
Introduction
Fluorescent pigments add brightness and color to our lives, but brightness and
light to the consumer can spell difficulties in color matching and formulation
for a manufacturer. While fluorescent pigments have been around for quite a
few years, the proper formulation and quality control of colored materials
containing them has been a challenge. This is primarily due to lack of proper
instrumentation to make the necessary measurements. Another difficulty has
been a general lack of understanding of how such materials function.
This technical note is intended to present an overview of the general principles
associated with measuring fluorescent color. It will address the chemistry and
physics of what causes fluorescent pigments to work and give a few examples
of applications for the pigments. Well also consider why standard spectropho-
tometers and colorimeters fail to give completely accurate results in measuring
such materials. After an overview of the effects of different illuminants on
fluorescent pigments, well discuss how geometry of measurement can affect
results, and how several national laboratories are making such measurements.
Finally, well take a look at one industrial solution that provides accurate
bispectral measurements of fluorescent colored materials.
How we see colored objects is a well-studied phenomenon. The perceived color
of an object is determined by the spectral composition of the light leaving it.
The makeup of this light is a combination of the light that illuminates the
object, and the way the object modifies that light. An object may appear quite
different under daylight, fluorescent lights, or standard incandescent lamps,
as is often observed when buying clothing. How many times has that brown
pair of pants you liked in the store turned out to be olive green when seen
in the sunlight?
For non-fluorescent materials, the spectral reflectance can be determined using
a spectrophotometer, and the color computed for specific illuminants. The
determination of color becomes even more complex when one or more of the
components of a pigment mixture exhibits fluorescence.
1
 Fluorescence

Fluorescence is a phenomenon that occurs when a substance absorbs radiation

of a certain wavelength, or group of wavelengths, and re-emits photons of
different wavelength.

When certain compounds absorb light, an electron is excited to a higher

vibrational energy state. The molecule then loses its excess of vibrational
energy by collisions and falls to the lowest vibrational level of the energy state.
In addition, almost all molecules occupying an energy state higher than the
second undergo internal conversion and pass from the lowest vibrational level
Figure 1 of the upper state to a higher vibrational level of a lower state which has the
Energy level diagrams same energy. From there, the molecules again lose energy until the lowest
for absorbtion/ energy level of the first excited state is reached. From this level, the molecule
phosphorescence/ can return to any of the vibrational levels of the ground state, emitting its
fluorescence energy in the form of fluorescence. This phenomenon is illustrated in Figure 1.

Typically, molecules that display fluorescence are of two types: organic com-
pounds with a high degree of conjugated unsaturation and extended p- cloud
structure or inorganic compounds where it is relatively easy to promote an
electron to a higher vibrational energy state (usually a d- or f- level). The
spectrum of the emitted light is called the emission spectrum. Due to the
conservation of energy, the wavelength of the emitted light is almost always
at longer wavelength than the excitation radiation. This discussion will only
address these cases. The difference between the excitation and the emission
wavelength is called the Stokes Shift. Typically, the Stokes Shift for
organic compounds is much smaller than for inorganic compounds
and also usually occurs at longer wavelengths.

A similar phenomenon that can occur is phosphorescence, which can

be observed in many pigments used in safety illumination of corridors
or other places where directional markers are needed during power
failures. While the mechanism on a molecular level is similar, phospho-
rescence will not be covered in this paper. Typically, the emis-
-4
sion of phosphorescence takes place at least in >10 seconds
(it may last for minutes or even hours) while fluorescent
emission takes place in <10-4 seconds or less. One usually sees
fluorescence in the 10-4 to 10-9 second range. Anything longer
is considered phosphorescence. Perhaps the easiest definition
is if you can see the emission after the illuminating source is
removed, it is phosphorescence. If the emission stops when
the illuminating source is removed, it is fluorescence.

2

Organic fluors in nature are not
all that rare. In fact, on a warm
summer night, while enjoying a
gin and tonic, you are consuming
a very common fluorescent
material quinine! Those of us
who work in fluorescence know
that if we forget our standards
when calibrating a spectrofluo-
rimeter, relief is just a Schweppes
away, as the quinine in
tonic water is an excellent,
reliable standard!
Types of Fluorescent Pigments
Typical applications of inorganic
fluors are in security documents,
invisible markings on postage
stamps and currency, and in
fluorescent lamps, and CRT
display tubes.
What Does All This Have To Do With Color?
The reflectance of an object determines the color. In a non-fluorescent
molecule, photons are still absorbed but they immediately drop back to the
original energy state, dissipating the energy in the form of heat or simply
emitting a photon of equal wavelength. The result is a typical absorption
spectrum, since absorption is merely the log (1/R). If there are molecules in
the pigment mixture that fluoresce, the resulting spectrum is a combination
of a number of factors: (a) the reflectance of the non-fluorescing materials;
(b) the absorbance of the fluorescent material due to the excitation of electrons
to a higher energy state; (c) the emission spectrum of the fluorescing material.
Truly a mess to interpret since both the absorption and fluorescence depend
on the distribution of wavelengths in the illuminant used.
Fluorescence is also not uncommon in nature. Many organic and inorganic
species fluoresce to some extent. Most soils containing humus fluoresce, as
do many bacteria. Fluorescence is common in minerals as well. Many science
museums will usually include a display of minerals illuminated by both
tungsten lamps and black lights (UV source) to demonstrate this phenomenon.
Almost all uranium compounds, commonly found in granite, fluoresce as do
many zinc, cadmium, and copper ores.
Commercial fluorescent pigments can be divided into three major groups
inorganic fluors, optical whiteners, and daylight fluorescents. All are significantly
different in chemical structure and consequently all have their own particular
niche applications due to their chemical and optical properties.
Inorganic fluorescent materials are perhaps the least utilized for industrial
applications. These materials, generally based on zinc sulfide or cadmium
sulfide doped with small amounts of another transition or rare earth element,
are very stable. They do have a number of disadvantages that discourage their
use in many applications. They are generally mildly toxic due to the heavy
metals present in the compounds. Most all of the compounds are also only
activated by UV to very Near-VIS radiation (300-420 nm), although some
activate into the mid-visible range and a few even activate in the Near-IR.
They also tend to have fairly low quantum efficiencies. Quantum efficiency is
basically the number of photons out at the emission wavelength compared to
number of photons in at excitation wavelengths. Many of these fluors tend to
be somewhat phosphorescent, which may be an unwanted side effect.
Typical applications of inorganic fluors are in security documents (invisible
markings on postage stamps and currency) and in fluorescent lamps, and CRT
display tubes. A more recent application, based on their stability, is as fluores-
cence standards when combined with fluorocarbon resins at high temperature.
3
 Optical whiteners are a particular class of organic compounds that have very
specific fluorescent properties. These materials are used heavily in the textile,
paper, and plastics industries to whiten materials. They have excitation maxima
in the very near-UV (generally 340-400 nm) and emit in the 430-460 nm
wavelength range, generally peaking around 440-450 nm. Optical whiteners
act by adding a blue component to counteract the yellowness found in paper
and textiles such as cotton and polyester, taking non-visible UV radiation and
upconverting to blue. This effect is also used to brighten the appearance of
pastel colors. The production and measurement of optical whiteners (a.k.a.
brighteners) is a multi-million dollar industry throughout the world. Optical
whiteners can take many forms. Typically the function groups on a highly
unsaturated organic compound are modified to enhance solubility and uptake
depending on the substrate upon which they are used. Two typical optical
whiteners are shown in Figure 2.

SO3Na

Figure 2
SO3Na
Chemical structures
N O O of two optical whiteners

Daylight fluorescents are a fairly new and very heavily used class of organic
compounds. These materials have both excitation and emission maxima in the
visible region of the spectrum, so almost any illuminant can cause the excita-
tion of the materials. These materials have many applications, from brightly
colored papers to plastics products. An extremely important use is the formula-
tion of these materials in safety applications such as protective garments and
traffic safety signs. The latter two applications often combine the fluorescent
component for daylight with retroreflective materials for night time usage to
further enhance their night time conspicuity.

These materials and their formulations are effective because they greatly
enhance the output of light at particular wavelengths far above what can be
produced by reflectance alone. A red, yellow, or orange material of apparent
reflectances far greater than 100% R can be produced by a combination of
reflectance of the non-fluorescent component and emission of the fluorophor.
Another advantage is that most of these materials are easily compounded into
thermoplastics or incorporated into textile dyes. The problems in formulation
are two-fold. First, too much of the fluorescent component adds expense and
also may serve to be self-quenching, lowering the fluorescent component.
Second is knowing exactly how much of the fluorescent component to add to
achieve the desired color, since most color formulation software is not set up to
accommodate the effects of fluorescent components.

4
 Measurement of Fluorescence and Color with
Standard Spectrophotometers

Spectrophotometers come it two types. First, there are those that scan over
the spectrum, almost always from higher wavelength to lower using monochro-
matic illumination of the sample, stepping from wavelength to wavelength with
a detector that indiscriminately collects the reflected or emitted photons. This
type of instrument is typical of most analytical UV-VIS spectrophotometers.

The second type measures in the opposite way. The source illuminates the
sample with all wavelengths at once, usually with a tungsten-halogen source
then sorts out the reflected/absorbed wavelengths by use of an array of silicon
1
photodiodes . This is a diode array spectrometer. For materials that do not
fluoresce, the spectral data obtained from either of these instruments will, in
theory, be identical. If a fluorescent material is part of the pigment mix, the
results are greatly different, as shown in Figure 3.
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Figure 3 shows a red/orange daylight fluorescent type material measured on

a scanning spectrophotometer. Notice that the absorbance due to excitation
shows up as a combination of absorbance and emission, since the detector is
unable to differentiate between photons of different wavelengths. The second
curve shows the same red/orange daylight fluorescent type material measured
on a diode array spectrophotometer with polychromatic illumination. Notice
that the absorbance due to excitation shows up as an absorbance and the
emission appears as an enhancement to the reflectance.

1. Many instruments either use a xenon arc source or a combination of tungsten-halogen and deuterium lamps to increase the range
further into the ultraviolet wavelength region.

5
 Geometric Considerations for Colorimetry
The geometries well discuss are those of illumination angle the angle at
which the illuminating beam strikes the object to be measured, and collection
angle the angle at which the detector views the measured object.

According to ASTM and CIE definitions, the illumination angle is always

the first number (or letter) you will see with the collection angle following
separated by a slash (/) or colon (:). Thus, if one illuminates a sample with
45 incident light and has a detector that views the samples from above
(normal to the sample or 0) the geometry is properly described as 45/0.
This geometry is quite common in inexpensive color analyzers and compact
Figure 4 reflectance measurement instruments. If one reverses the detector and light
Measurement Geometries source, the geometry now becomes 0/45. Pretty simple, right? Now, suppose
you illuminate at 0 but use an integrating sphere as a
collector, which catches all forward scatter over 180. This
is called diffuse collection, abbreviated as d. The geometry
is called 0/d.2 The reverse geometry, using the sphere as
the illuminant and viewing the sample at normal incidence,
is d/0. The four geometries shown in Figure 4 describe
most of the applications youll see. There is the odd 30/d
geometry designated in one ASTM specification and
multi-angle geometries as well, but if you remember
incidence angle first, collection angle second, youll have
no trouble deciphering geometric nomenclature.

Helmholtz Reciprocity
Helmholtz Reciprocity states, in simple terms, that light
doesnt care what direction its coming from or going to,
so that 0/45 and 45/0 geometries are equivalent. For
directional/directional geometry (a number followed by
another number), that is true. The definitive experiment
3
work was done by Frank Clarke at the National Physical
Laboratory in the UK about 10 years ago. This principal also holds in most
cases for directional/hemispherical or hemispherical/directional geometry
(#/d or d/#). It does not hold true if materials are luminescent and the
illuminating radiation causes the material being measured to luminesce.

That last sentence is the rub. There is not a consensus in the fluorescence
community as to what is the proper geometry of measurement. The paper
and textile industries, under the auspices of TAPPI and AATCC, have
traditionally written their measurement specifications around d/0 or d/8.
Paint and plastics researchers within CIE and ASTM dont yet have final
standards, but many of the draft standards are leaning towards 0/45 or
45/0. The real problem is that there are good technical arguments to be
made for each geometry.

2. You will occasionally (especially in European circles) see 8/t and 8/d. The t is for total reflectance (specular component included)
and the d is for diffuse only (specular component excluded).
3. F.J.J. Clarke and D.J. Parry, Helmholtz Reciprocity: its validity and application to reflectometry, Lighting Research and Technology
17 (1) 1985.
6
Integrating Sphere Spectrophotometers

Integrating sphere-based spectrophotometers are generally used in industry for

color matching. They are much better at eliminating effects due to sample
non-homogeneity or variation in scattering effects of surfaces. When designed
with diffuse polychromatic or monochromatic illumination and a diode array
detector, the fluorescent component can be discriminated from the reflected
component by subtraction. The problem lies in that once a sample fluoresces,
its fluorescent emission becomes part of the diffuse illumination. Fluorescent
emission is lambertian in its character. In other words, the emitted component
is non-directional. The problem now lies with the secondary illumination the
combination of the original illuminant and the fluorescent component. If the
fluorescing species has a small Stokes Shift, and the excitation and emission
bands overlap at all, there is some uncertainty as to what illumination is
responsible for what. Granted, the amount of radiation emitted is very small
compared to the main illumination, there are concerns about the overall effect
of this secondary illumination. If the excitation and emission bands dont over-
lap, this problem doesnt exist. One shortcoming of sphere-based measurements
is the problem of gloss. Gloss adds a lightness component (the L in L*a*b* or
L*c*h*) that is totally dependent on illumination and viewing angle.

Generally, one wants to do formulations in a specular excluded mode. This can

be done with an integrating sphere you can illuminate or collect at 0, so the
specular component goes out the port (or the sample isnt illuminated at that
angle). Another method is to use a light trap. But, how big should the light
trap be? Or, how big should the input/collection port be? Both of these issues
cause problems with sphere efficiency and inter-instrument comparisons.

When one uses a 0/45 or 45/0 geometry, sample re-emission is no longer a

problem, since there is no re-radiation by the sphere. The only illuminant the
sample sees is that of the original illumination source. While this sounds like a
true solution to the problem of the sphere geometry, its not quite so simple
since directional/directional geometries have difficulty with samples that have
different scattering characteristics. So, while a 45/0 instrument may be fine
for determining the color of a matte paper sample or uniform plastic part, it
doesnt work as well for a textured cloth sample or samples with effect pigments
included (e.g. those found in metallic or pearlescent paints). Another advantage
of directional/directional geometry is that it is by geometry specular excluded,
so sample gloss is not a complicating factor.

7
 Illuminants and Their Effect on Fluorescence

The color of objects is dependent upon both the pigments used and the
illumination under which we observe them. This becomes even more of
a problem when one or more of the pigments involve luminesce, since
fluorescent emission is dependent on both the wavelength distribution and
intensity of the illuminating source.
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If there were only one illuminant, say sunlight, color matching would be
simplified to a great extent. Its quite difficult to use sunlight as a source for
a spectrophotometer, as you might imagine, but artificial concepts of daylight
simulation exist. Perhaps the closest is D65, which simulates daylight with a
correlated color temperature of 6500 K. While a close approximation of D65
has been realized at B.A.M. the Federal Institute for Materials Research and
Testing Germany, by use of a complex series of filters, it is usually thought
of as a construct upon which calculations are based.

8
 The use of sunlight or one of its simulants would be fine if materials were only
used outdoors. Unfortunately, for formulators, mankind spends a great deal of
time indoors under a wide variety of illumination conditions. Some of these
illuminants have very little structure, such as tungsten filament lamps, and are
quite predictable. Others, such as fluorescent lamps or high intensity discharge
lamps have a great deal of spectral structure. Incidentally, the only official
CIE illuminants are A (incandescent lighting) and D65 (daylight). Industrial
color matching, however, uses many other illuminants to more closely match
real life situations.
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While each of these sources require consideration in formulation of color, they

may wreck havoc on formulations in which fluorescent pigments are included.
Consider a compact fluorescent source as shown in Figure 6. If the excitation
band for the fluor is narrow and occurs in a region of the spectrum where the
output of the source is zero, there will be no fluorescent contribution to the
color. Move the excitation band or shift the lamp output a few nanometers
and the fluorescent component may dominate the color. As there are dozens
of fluorescent illuminants and quite a few other sources used in commercial
lighting, color matching becomes more and more challenging.

9
 Bispectral Fluorescent Color Measurement

To properly match fluorescent color, quite a bit more information is needed

than is measured by standard spectrophotometers or colorimeters. One needs
to separate the reflected component from the fluorescent component from a
theoretically spectrally flat source, then apply the corrections for an illuminant.
This can be accomplished by a number of methods. Perhaps the most univer-
sally accepted is using a system with two monochromators, one on the illumi-
nation side, and one on the collection side.

The illumination (or excitation) monochromator is set to a wavelength with

the collection (or emission) side scanned over the wavelength range of interest.
The excitation monochromator is then stepped to the next wavelength, and the
process repeated. The result is a data table that is not simply data pairs as in
color (wavelength/reflectance), but a three dimensional matrix (as shown in
Figure 7) where the reflectance is on the diagonal and the fluorescent emission
is below the diagonal. This is known as a bispectral color measurement as both
a fluorescence and a reflectance spectrum are being generated, with both the
source side and the output side being monitored.
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The method described above is that used by two of the national laboratories
that perform such measurements NRC in Canada and the B.A.M. in
Germany. This method is highly accurate but also highly tedious with measure-
ments literally taking hours to perform. A slightly different tactic has been
taken by the National Physical Laboratory (NPL) in the UK. This is also the
path that we at Labsphere chose to follow in our development of a novel
bispectral fluorescent color analyzer. This instrument uses a source side
monochromator identical to that used in the method described above, but
the collection side is quite different.

10
National Laboratories
with Fluorescence
Measurement Capabilities
National Physical Laboratory,
Quantum Metrology Division,
Queens Road, Middlesex
TW11 0LW United Kingdom
National Research Council, Canada,
Institute for Measurement Standards
Building M-36, Montreal Road,
Ottawa, Ontario K1A 0R6
Bundersanstalt fr Materialforschung
und Prfung,
Optical Properties of Materials Division,
Unter den Eichen 87, W-1000
Berlin 45, Germany
On the collection side, the light which reflects/emits from the sample is
imaged onto a polychromator which splits the radiation into its spectral
components. This spectrum is then projected onto a silicon photodiode array,
which collects all the wavelengths at once, eliminating the need for a scanning
monochromator on the collection side. The resolution of the source side
illumination is dependent on the monochromator, while the resolution on the
collection side is due to both the emission monochromator and the diode
array used. This method greatly speeds up the measurement process.
This concept can be designed into either the sphere or directional/directional
geometries. The current design for the above mentioned instruments is either
45/0 or 0/45.
From the data generated by a bispectral instrument, accurate quality control
and formulation of colored materials containing fluorescent pigments can be
realized. The method of monochromatic illumination and collection allows
other illuminants to be applied to the data to accurately predict how a color
will appear under a variety of illumination and viewing conditions. In addi-
tion, the separation of fluorescent component from the reflected component
allows color formulation software to aid in the color matching of complex
pigment mixtures that cannot be easily done by other means.
Figure 8
Schematic diagram
of a bispectral
fluorescence
instrument
11
Notes