UNIVERSIDAD NACIONAL

FEDERICO VILLARREAL
Facultad de Oceanografa, Pesquera, Ciencias
Alimentarias y Acuicultura

CROMATOGRAFA

INGENIERIA DE ANALISIS
INTRUMENTAL

Por:
- Bustos Coronado, Joel

- Carrasco Sotomayor, Rodrigo

- Felix Taipe, Ricki

- Huiza T, Rafael

- Olave Cerna, Carlos

- Ramrez Agero, Juan Luis

 UNIVERSIDAD NACIONAL FEDERICO VILLARREAL

FACULTAD DE OCEANOGRAFRA, PESQUERA, CIENCIAS

ALIMENTARIAS Y ACUICULTURA

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERA ALIMENTARIA

ANALISIS INTRUMENTAL

Trabajo bimestral:

Cromatografa

Elaborado por:

Bustos Coronado, Joel

Carrasco Sotomayor, Rodrigo

Flix Taipe, Ricky

Huiza T, Rafael

Olave Cerna, Carlos

Ramrez Agero, Juan Luis

Docente:

Ing. Hinojosa

2017
 RESUMEN

El presente documento describe de forma general y breve la metodologa de la

cromatografa, una breve historia de su desarrollo, conceptualizacin bsica,
campos de aplicacin, alternativas de solucin y ante todo pretende mostrar la
importancia y gran utilidad de dicha metodologa dentro de los procesos en la
industria alimentaria. La descripcin de la metodologa se llevar a cabo
ilustrando ejemplos de aplicacin con datos correspondientes.

Palabras claves: cromatografa, metodologa

ABSTRACT

This document describes in a general and brief way the chromatography

methodology, a brief history of its development, the basic conceptualization, the
fields of application, the solution alternatives and above all it is intended to show
the importance and great utility of this. the food industry. The description of the
Methodology is shown below illustrating examples of application with
corresponding data.
Keywords: chromatography, methodology
 INTRODUCCIN

La cromatografa es una tcnica que permite la separacin de los componentes

de una mezcla debido a la influencia de dos efectos contrapuestos.
a) Retencin. Efecto producido sobre los componentes de la mezcla por una
fase estacionaria, que puede ser un slido o un lquido anclado a un soporte
slido.
b) Desplazamiento. Efecto ejercido sobre los componentes de la mezcla por
una fase mvil, que puede ser un lquido o un gas.
El fenmeno de migracin de los componentes de una mezcla a lo largo de la
fase estacionaria, impulsados por la fase mvil, recibe el nombre de elucin. La
mezcla a separar se deposita sobre la fase estacionara, mientras que la mvil
atraviesa el sistema desplazando a los componentes de la mezcla a distinta
velocidad, dependiendo de la magnitud de sus interacciones relativas con ambas
fases. Las dos fases se eligen de forma que los componentes de la muestra se
distribuyan de modo distinto entre la fase mvil y la fase estacionaria. Aquellos
componentes que son fuertemente retenidos por la fase estacionaria se mueven
lentamente con el flujo de la fase mvil; por el contrario los componentes que se
unen dbilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez. Como
consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se separan
en bandas o zonas discretas que pueden analizarse cualitativa y/o
cuantitativamente.

Imagen N1 cromatografa
 FUNDAMENTO TEORICO

Cromatografa

En 1906, el botnico Ruso M. Tswett realiz un experimento que condujo al

descubrimiento de lo que hoy conocemos como cromatografa. Coloc un
extracto de pigmentos vegetales en la parte superior de una columna de vidrio
rellena de carbonato de calcio (CaCO3). Al agregar ter, observ que la mezcla
original se separaba en diversas bandas coloridas que descendan a travs de
la columna a diferentes velocidades.

Un rasgo caracterstico de la cromatografa es la presencia de dos fases;

dispuestas de tal manera que mientras una permanece estacionaria dentro del
sistema (fase estacionaria), la otra se desplaza a lo largo de l (fase mvil). La
clave de la separacin en cromatografa es que la velocidad con la que se mueve
cada sustancia depende de su afinidad relativa por ambas fases (equilibrio de
distribucin). En el experimento de Tswett, la separacin de los pigmentos
vegetales se logr gracias a que cada uno de ellos tena una afinidad diferente
por las fases. En general, los componentes ms afines a la fase estacionaria
avanzan lentamente (ms retenidos) mientras que los ms afines a la fase mvil
(menos retenidos) se mueven con mayor rapidez. Por consecuencia, el medio
cromatogrfico (columna, placa o papel) funciona como un controlador de la
velocidad de cada sustancia que constituye la mezcla, logrando as su
separacin y mediante el uso de un detector, su caracterizacin qumica.

Aunque los principios fundamentales son los mismos, se acostumbra clasificar

los mtodos cromatogrficos segn el estado fsico de la fase mvil:

Cromatografa lquida. La fase mvil es un disolvente o mezcla de disolventes

y la fase estacionaria un slido que interacta con las sustancias que se desea
separar (cromatografa lquido-slido), o bien un lquido inmiscible con la fase
mvil, depositado en la superficie de un slido (cromatografa lquido - lquido).
Esta forma de cromatografa puede realizarse con diferentes arreglos
experimentales: en columna, en capa delgada o en papel. En el primer caso, la
fase estacionaria se encuentra rellenando un tubo; en el segundo, se dispersa
sobre una lmina de vidrio o aluminio formando un lecho de espesor uniforme;
en la cromatografa en papel, la fase estacionaria es la solucin acuosa
contenida en el interior de las celdas formadas por las fibras de la celulosa, y es
por tanto una forma de cromatografa lquido - lquido.

Cromatografa de gases. En este caso la fase mvil es un gas inerte (helio o

nitrgeno) y la fase estacionaria es un slido (cromatografa gas-slido) o un
lquido sostenido por un slido inerte (cromatografa gas-lquido). Este tipo
de cromatografa siempre es en columna, ya que es la nica manera de que la
fase mvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema. La
columna puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la
cromatografa lquida, o bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las
paredes de un tubo muy delgado (0.25mm de dimetro) y largo (hasta 100m).
Este tipo de columnas se conocen como columnas capilares y proporcionan la
mayor capacidad de separacin. De acuerdo con el mecanismo de retencin, la
cromatografa se puede clasificar en los siguientes tipos:

Adsorcin (normal, de fase reversa)

Particin lquido-lquido
Intercambio inico
Permeacin sobre gel
De afinidad

Las reas de aplicacin son muy diversas y abarcan prcticamente todas las
actividades en las que interviene la qumica, por ejemplo: se emplea en:

El anlisis de drogas y frmacos en fluidos biolgicos como la saliva, la

sangre, la orina;
Seguir la transformacin de las sustancias responsables de la transmisin
neurolgica;
Determinar la presencia de contaminantes en el medio ambiente;
Descifrar la composicin de los combustibles fsiles;
Realizar el control de calidad de los productos qumicos y farmacuticos
manufacturados; en fin, la lista de ejemplos es interminable.

1. Cromatografa en papel

La cromatografa en papel es un proceso muy utilizado en los laboratorios para

realizar anlisis cualitativos ya que pese a no ser una tcnica potente no requiere
de ningn tipo de equipamiento. La fase estacionaria est constituida
simplemente por una tira de papel de filtro. La muestra se deposita en un extremo
colocando pequeas gotas de la disolucin y evaporando el disolvente. Luego el
disolvente empleado como fase mvil se hace ascender por capilaridad. La
separacin se realiza en funcin de la afinidad de los solutos con las dos fases,
las ms solubles en agua se quedarn cerca del punto donde se aplic la
muestra, y las menos solubles en agua y ms solubles en el disolvente llegarn
ms lejos. Las sustancias separadas se identifican mediante diversos
procedimientos fsicos o qumicos.

La cromatografa en papel es una tcnica utilizada para anlisis inorgnico

cualitativo, permite llevar a cabo la separacin e identificacin de iones,
trabajando con cantidades mnimas de sustancia. Pertenece al tipo de
Cromatografa de particin se fundamenta en que las sustancias problema,
pueden tener diferentes coeficientes de reparto en dos disolventes de
inmiscibilidad limitada, uno permanece fijo en la superficie del papel fase
estacionaria generalmente en agua, la fase mvil constituida generalmente por
una mezcla de disolventes parcialmente miscibles en ella. Hay varios tipos de
cromatografa, la ascendente (papel hacia arriba), descendente (papel invertido),
radial y de separacin de zonas y sectores.
Al entrar en contacto con los disolventes empieza su fase de movilidad lo que
produce unas manchas caractersticas sobre el papel, generalmente, estas no
son coloreadas y se revelan con una lmpara fluorescente, los contornos se
marcan con lpiz. Como medida en cromatografa sobre papel se emplea el Rf
(Retention factor), el cual se define como el cociente de dividir el recorrido de la
sustancia por el disolvente, esto es, la distancia media desde el origen hasta el
centro de la mancha (X) dividida por la distancia que media desde el origen hasta
el frente del disolvente (S).

=

En la cromatografa en papel se utiliza como fase estacionaria una hoja de papel
de celulosa de elevada pureza recubierta de una capa de agua asociada a las
fibras de celulosa. La fase mvil, en la que ir disuelta la muestra, se forma por
disolventes cuya naturaleza se elige en funcin de los componentes que se
pretenden separar.

2. Cromatografa en capa fina

La cromatografa en capa fina se basa en la preparacin de una capa, uniforme,

de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio u otro soporte. Los
requisitos esenciales son, pues, un adsorbente, placas de vidrio, un dispositivo
que mantenga las placas durante la extensin, otro para aplicar la capa de
adsorbente, y una cmara en la que se desarrollen las placas cubiertas. Es
preciso tambin poder guardar con facilidad las placas preparadas y una estufa
para activarlas.
La fase mvil es lquida y la fase estacionaria consiste en un slido. La fase
estacionaria ser un componente polar y el eluyente ser por lo general menos
polar que la fase estacionaria, de forma que los componentes que se desplacen
con mayor velocidad sern los menos polares.
Polaridad de los compuestos orgnicos en orden creciente:

Hidrocarburos < olefinas < flor < cloro < nitro < aldehdo
Aldehdo < ester < alcohol < cetonas < aminas < cidos < amidas

La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a otros

mtodos cromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa) ya que el
utillaje que precisa es ms simple. El tiempo que se necesita para conseguir las
separaciones es mucho menor y la separacin es generalmente mejor. Pueden
usarse reveladores corrosivos, que sobre papel destruiran el cromatograma .El
mtodo es simple y los resultados son fcilmente reproducibles, lo que hace que
sea un mtodo adecuado para fines analticos.

Al realizar la eleccin del adsorbente se debe tener en cuenta el tamao de las

partculas del adsorbente, cuanto ms finamente dividido est mayor ser su
adhesin al soporte, aunque tambin se le puede aadir un adherente.

En la eleccin del eluyente influyen varios factores:

Precio.
Pureza.
No utilizar mezclas de eluyentes (reproducibilidad).
No utilizar compuestos muy voltiles.
Evitar que contengan trazas de metales (catalizadores).

La eleccin del eluyente se realiza de forma emprica. Hay que estudiar la

polaridad del componente y probar con eluyentes cada vez menos polares.

Generalmente se utiliza como reactivo revelador yodo, el cual forma complejos

coloreados con los componentes orgnicos (con tonos amarillo-marrn), pero las
manchas desaparecen con el tiempo con lo que es conveniente sealar las
manchas aparecidas.
Otro reactivo revelador bastante utilizado es el cido sulfrico, que reacciona con
los componentes orgnicos produciendo manchas negras. Sin embargo debe
tenerse en cuenta que el tamao de las manchas no est relacionado con la
cantidad de componente separado.
3. Cromatografa de permeacin en gel

La cromatografa de permeacin en gel, tambin conocida como cromatografa

de exclusin es una variante de la CLAE que consiste en una columna
cromatogrfica empacada de tal manera que las partculas de dicho
empacamiento tienen diferentes tamaos de poros o de redes de poros con el
fin de que las molculas de soluto sean retenidas o excluidas basndose en su
forma y tamao y no en el peso molecular.

Bajo este entendido, las molculas de mayor tamao no caben dentro de los
poros y son arrastrados alrededor de la fase estacionaria, por lo que son
excluidas y eluyen en el volumen de cama de vaco de la fase mvil. Por el
contrario, las partculas de menor tamao eluyen hasta el final porque tiene ms
espacio de columna que recorrer debido a un fenmeno de difusin haca los
poros que tienen accesibles. Las molculas de tamaos intermedios tardan
diferentes tiempos en eluir, debido a la cantidad de poros por los que puedan
pasar.

Empaquetamientos de columna. Existen distintos tipos de empacamientos

columna. Entre ellos estn los polmeros macromoleculares semirgidos, los
entrecruzados, las slices rgidas o las de poro controlado. Los materiales
semirgidos se hinchan ligeramente se debe tener cierto cuidado en su uso ya
que se limitan a una presin de 300psi. Las cuentas de poliestireno parcialmente
sulfonado que tienen un tamao usual de 5m, son buenas para usarse con
sistemas acuosos mientras los no sulfonados son compatibles con sistemas no
acosos.

Disolventes. La cromatografa de exclusin requiere un solo disolvente durante

el anlisis en el cual se pueda disolver la muestra. El nico inconveniente que
pude presentarse con los disolventes es la relacin de viscosidades. Cuando la
viscosidad de la muestra inyectada difiere mucho con la viscosidad de la fase
mvil se pueden dar, una distorsin en los picos cromatogrficos y cambios
anmalos en los tiempos de retencin.
4. Cromatografa de exclusin de iones

Una variante de la cromatografa de permeacin en gel o cromatografa de

exclusin, es cuando se realiza para la exclusin de iones. Mediante esta
modificacin, se tienen separaciones que dependen de factores como tamao
de partcula de la resina, forma inica e incluso distribucin de ismeros. Esto
permite separar especies que de otra forma eluiran al mismo tiempo. Las
separaciones se llevan a cabo en resinas de intercambio con base en
poliestireno de alta capacidad como eluyentes, cidos minerales diluidos.

Mucho del trabajo en la industria de alimentos y bebidas (vino, cerveza, jugo de

frutas, etc.) o de muestras fisiolgicas en donde la mayora de los cidos del ciclo
de Krebs estn presentes, puede ser hecho fcilmente mediante el uso de una
columna de exclusin aninica. El uso de las columnas de exclusin aninica,
en su modalidad con iones de calcio, se extiende a la separacin de
oligosacridos usando agua como eluyente a una temperatura de 90C,
aplicando tambin la separacin por exclusin estrica.

5. Cromatografa de intercambio inico

La cromatografa de intercambio inico se lleva a cabo con empaques de

columna que tiene grupos funcionales cargados unidos a una matriz polimrica.
Los grupos funcionales enlazados permanentemente y asociados con
contraiones de carga opuesta. El mecanismo de retencin ms comn es el
intercambio simple de los iones de la muestra y de la fase mvil con el grupo
cargado de la fase estacionaria.

En el caso de empaques cargados negativamente sirven para intercambiar

especies catinicas.
Los ms comunes son los sulfnicos, los cuales son fuertemente cidos y tiene
las propiedades de los cidos fuertes cuando est en la forma H. los empaques
cargados positivamente se utilizan para el intercambio con especies aninicas.
Los ms comunes son las aminas cuaternarias, las cuales son fuertemente
bsicas y en su forma OH presentan las propiedades de una base fuerte. Ambos
grupos funcionales estn totalmente disociados. As, sus propiedades de
intercambio son independientes del pH de la fase mvil.

La cromatografa de intercambio inico puede efectuarse con alguno de los

varios tipos de empaques. El tipo pelicular consiste en un recubrimiento de
resina, alrededor de 1-2 m de espesor, sobre una cuenta de vidrio con dimetro
de 30-40 m. Las resinas superficialmente porosas se obtienen recubriendo
cuentas de vidrio con un lecho delgado de microesferas de slice en el que se
impregna o enlaza un intercambiador de iones. Para ambos tipos de empaques
la capacidad de intercambio es baja:

0.01- 0.1 meq/g.

El intercambiador puede tambin estar enlazado a macropartculas de slice por
medio de reacciones de sililacin o polimerizado dentro de los poros de un gel
suficientemente poroso.
El proceso primario en la cromatografa de intercambio inico involucra la
adsorcin/desorcin de materiales inicos cargados en la fase mvil con una
fase estacionara permanentemente cargadas (de signo contrario). Ejemplo, una
resina ionizada, inicialmente en forma H, en contacto con una solucin que
contiene iones K+, existe un equilibrio:

Resina, H + K+ Resina, K+ + H+

Las diferencias de retencin estn gobernadas esencialmente por las

propiedades fsicas de los iones solvatados. La fase de resina presenta
preferencia por:

1. El ion de carga mayor.

2. El ion con menor radio solvatado.
3. El ion que tenga mayor polarizabilidad.

Aplicaciones de intercambio catinico:

Los cationes inorgnicos se pueden determinar en alimentos, tales como los
alimentos dietticos bajos en sodio, y en muestras de orina.

Aplicaciones de intercambio aninico:

Se pueden separar los cidos HCN, carbnico, silcico y brico de los cidos
fosfrico, sulfrico y clorhdrico. Los metales que forman complejos cloruro y
floruro.

6. Cromatografa de fluidos supercrticos

La temperatura crtica de una sustancia es la temperatura por encima de la cual

no puede existir en la fase lquida independientemente de la presin. La presin
crtica es la presin de vapor de una sustancia a su temperatura crtica. Una
sustancia a temperaturas y presiones por encima de su temperatura y de su
presin crtica (punto crtico) se denomina fluido supercrtico.

Comparacin de las propiedades de los fluidos supercrticos con las de gases y

lquidos. (Los datos slo indican el grado de magnitud).
Las propiedades seleccionadas son aquellas que son significativas para la
cromatografa de gases, lquidos y fluidos supercrticos, as como la extraccin
de fluidos supercrticos. Una propiedad importante de los fluidos supercrticos,
que est relacionada con sus densidades elevadas (de 0,2 a 0,5 g/cm 3), es su
notable capacidad para disolver molculas grandes no voltiles. Por ejemplo, el
dixido de carbono supercrtico disuelve fcilmente n- alcanos que poseen entre
5 y 30 tomos de carbono. Una segunda propiedad notable de los fluidos
supercrticos es que los analitos disueltos en ellos pueden ser fcilmente
recuperados por el procedimiento simple de permitir que las disoluciones se
equilibren con la atmsfera a temperaturas relativamente bajas. Otra ventaja de
los fluidos supercrticos es que son baratos, inocuos y no son sustancias txicas,
por lo que se pueden dejar evaporar libremente en la atmsfera sin efectos
ambientales dainos.

La cromatografa de fluidos supercrticos (SFC) es una modalidad hbrida entre

la cromatografa de gases y de lquidos que combina algunas caractersticas de
cada una de ellas. Esta tcnica es una de los tres tipos importantes de
cromatografa en columna, sta permite la separacin y determinacin de
compuestos que no son manipulados ni por la cromatografa de gases ni por la
de lquidos: compuestos no voltiles o trmicamente lbiles para los que la
cromatografa de gases es inaplicable y (2) los compuestos que tienen grupos
funcionales que no son detectables por las tcnicas espectroscpicas o
electroqumicas empleadas en cromatografa de lquidos.

Los equipos instrumentales para la cromatografa de fluidos supercrticos son

bastante parecidos en lo referente a los componentes instrumentales a los
equipos de HPLC. Existen, sin embargo, dos diferencias importantes: (1) Es
necesario un horno, similar para mantener la columna termostatizada y adems
proporcionar un control preciso de la temperatura de la fase mvil; (2) un
restrictor o un dispositivo de contrapresin, que se utiliza para mantener la
presin en la columna en el nivel deseado y para convertir el eluyente, de fluido
supercrtico en un gas, y arrastrarlo al detector.

Las variaciones de presin en cromatografa de fluidos supercrticos tienen un

efecto muy marcado sobre el factor retencin o de capacidad, k. Este efecto es
una consecuencia del incremento de la densidad de la fase mvil a medida que
aumenta la presin. Tal incremento de la densidad origina un aumento de la
capacidad disolvente de la fase mvil, lo cual acorta los tiempos de elucin. La
mayora de los perfiles de presin utilizados en cromatografa de fluidos
supercrticos son: presin constante (isobrica) para un perodo de tiempo dado
seguida de un aumento lineal o asinttico de la presin hasta alcanzar el valor
de la presin final.

Fases estacionarias. En SFC se emplean tanto las columnas abiertas como las
columnas rellenas, aunque las primeras son las ms empleadas. Las columnas
abiertas son similares a las columnas de slice fundida con recubrimientos
internos de varios tipos de siloxanos enlazados y de enlaces cruzados. Las
columnas tienen una longitud de 10 a 20 m y un dimetro interno de 0,05 a
0.10mm. El espesor de la pelcula vara entre 0.05 1 micrmetro.
Fases mviles. La fase mvil ms utilizada en SFC es el CO2. Es un disolvente
excelente par un conjunto de molculas orgnicas no polares. Adems, es una
sustancia transparente en el ultravioleta, es colora, no txica, fcilmente
disponible y muy barata cuando se compara con otras fases mviles
cromatografas.

La temperatura crtica del CO2. ES 31 C y su presin crtica 72,9 atmsferas,

lo cual permite jugar con una banda amplia de temperaturas y presiones sin
superar las condiciones de operacin de un equipo de HPLC moderno.
Sustancias como etano, butano, xido nitroso, diclorodifluorometano, ter
dietlico, amonaco y tetrahidrofurano han sido utilizadas como fases mviles de
cromatografa de fluidos supercrticos.

Detectores. La principal ventaja de la SFC frente al HPLC es que se pueden

utilizar como en la cromatografa de gases, detectores de ionizacin de llama.
Este detector es de respuesta universal a compuestos orgnicos, de elevada
sensibilidad. Los espectrmetros de masas tambin se pueden adaptar como
detectores ms fcilmente para SFC que para HPLC. Otros detectores utilizados
son de absorcin en el ultravioleta y en el infrarrojo, de emisin de fluorescencia,
termoinico y fotomtrico de llama.

La cromatografa de fluidos supercrticos se ha aplicado a la separacin de un

amplio conjunto de sustancias, entre los que se cuentan productos naturales,
frmacos, alimentos, pesticidas y herbicidas, tenso activos, polmeros, aditivos
de polmeros, combustibles fsiles y explosivos y propelentes.

7. Cromatografa de afinidad

La cromatografa de afinidad separa las protenas (analitos) en funcin de su

especificidad de fijacin de ligandos. Los ligandos de afinidad son molculas
polimricas que sirven de soporte porque estn unidas covalentemente sobre la
columna cromatogrfica o matriz inerte que debe de tener una estructura de poro
abierta y estabilidad en condiciones de cambio de pH, detergentes y agentes
disociantes, para as, retener y adsorber especficamente a las protenas, la fase
estacionaria es slida.

Estos ligandos se clasifican segn su naturaleza qumica o su selectividad para

la retencin de analitos, esta ltima se clasifica en ligandos especficos
(anticuerpos) y generales (como las lecitinas). Cuando las protenas no
especficas se han lavado a travs de la columna, se eluye la protena ligada con
solucin que contiene ligando libre. Despus se introduce una nueva fase mvil
que se desactiva, generalmente por el acoplamiento o alteracin de los sitios
activos inhibidor-ligando, para que esto pueda ser posible, se necesita un cambio
en el pH, la fuerza inica o la polaridad, debido a que estas condiciones
modifican las caractersticas de los sitios activos, la finalidad de este proceso es
hacer fluir a la protena para continuar con la regeneracin de la columna
cromatogrfica.
La cromatografa de afinidad tiene la ventaja de ser altamente selectiva para la
retencin de protenas afines a la columna, para ello, emplea sistemas de baja
presin, columnas cortas y un campo restringido para la separacin.
Esquema de cromatografa de afinidad: En el primer vaso, se encuentra una
mezcla de protenas que se aaden a la columna, la cual contiene un ligando
especfico ligado al polmero, para la protena de inters. En el segundo matraz
se encuentra una solucin de ligando, el cual se aade a una probeta para que
eluya a la protena de inters. La bureta de en medio indica que las protenas
deseadas se lavan a travs de la columna.

Los puntos rojos representan la protena de inters, los negros, el ligando y las
bolas beige unidas a los puntos negros, representan el ligando acoplado con el
polmero.

8. Cromatografa de lquidos de alta resolucin

La cromatografa de lquidos de alta eficacia es la tcnica analtica de separacin

ms ampliamente utilizada. Las razones son la sensibilidad, su fcil adaptacin
a las determinaciones cuantitativas exactas, es ideal para la separacin de
especies no voltiles o termolbiles y por su gran aplicabilidad a sustancias que
son de inters en la industria. Algunos ejemplos son: aminocidos, protenas,
cidos nucleicos, hidrocarburos, carbohidratos, frmacos, terpenoides,
plaguicidas, antibiticos, esteroides, especies organometlicas y gran variedad
de sustancias inorgnicas. La fase mvil es un lquido y la fase estacionaria es
una columna que puede ser de acero inoxidable.

Aplicaciones de la cromatografa en general y en la Ingeniera Alimentaria.

Anlisis Cualitativo

Un anlisis cromatogrfico puede dar una amplia informacin cualitativa si se

escoge el sistema de deteccin adecuado para determinar y evaluar los analitos
separados, as si se utiliza un detector que permita obtener un espectro de cada
compuesto separado y a su vez contenga una base de datos que pueda realizar
su comparacin con una biblioteca de espectros se podra, de una forma muy
precisa, establecer la identidad de los componentes de una muestra, de hecho
esto se logra fcilmente con cromatgrafos que contienen sistema de deteccin
como el Infrarrojo (IR), el de Resonancia Magntica Nuclear (RMN) o el
espectrmetro de Masas (MS). Sin embargo, estos sistemas son muy costosos,
es por ello que la mayora de los laboratorios cuentan con cromatografos con
sistemas de deteccin sencillos como el detector de ionizacin a la llama (siglas
en ingles, FID) o el detector de conductividad trmica (siglas en ingls (TCD) en
el caso de cromatografa de gases o detectores de absorbancia o ndice de
refraccin para los casos de cromatografa de lquidos.

La nica informacin cualitativa que pueden ofrecer estos sistemas es el tiempo

de retencin del analito, el cual, solo puede ser usada controlando bien las
condiciones cromatogrficas como: flujo, temperatura, tipo de fase estacionaria
en el caso de gases o composicin qumica de la fase mvil adems de las otras
variables mencionadas anteriormente para el caso de cromatografa de liquida,
adems de que se debe tener conocimiento de los posibles compuestos de la
muestra y una amplia variedad de patrones para realizar comparaciones. Sin
embargo, se puede dar el caso que dos compuestos tengan el mismo tiempo de
retencin, lo que imposibilita su identificacin. Por supuesto que, a partir de
cromatogramas obtenidos con diferentes fases mviles (para cromatografa
liquida) y estacionarias y a diversas temperaturas de elusin (para cromatografa
gaseosa), se puede obtener datos adicionales.
Anlisis Cuantitativo
El uso de la cromatografa se ha extendido en todo el mundo, en las ltimas
cuatro dcadas, no solo por su capacidad de separar compuestos sino porque
se puede realizar un anlisis cuantitativo de las especies proporcionadas. En la
cromatografa en columna, el anlisis cuantitativo se basa en la comparacin de
la altura, o del rea, del pico del analito con la de uno o ms patrones inyectados
bajo las mismas condiciones cromatogrficas.

Para lograr un anlisis cuantitativo de los componentes separados de una

muestra existe una gran variedad de mtodos de anlisis entre los que se
pueden mencionar:

1. Calibracin absoluta
2. Mtodo del estndar interno.
3. Normalizacin de rea (con y sin factor de respuesta) Cada mtodo tiene sus
ventajas y desventajas.

Campos de aplicacin:

1. Industria farmacutica Separacin y cuantificacin de ingredientes activos.

2. Industria de alimentos Cuantificacin de edulcorantes, preservantes y
vitaminas.
3. Materias primas Cuantificacin de pureza.
4. Otras aplicaciones Separacin de componentes en muestras botnicas, de
productos naturales y bioqumicas
Aplicabilidad de la cromatografa gas-lquido

Las aplicaciones concretas de la CGL son extraordinariamente numerosas, pues

cada ao se publican miles de artculos en relacin con el tema y la tcnica se
ha extendido a muchos otros campos aparte de la qumica. Por ello, a
continuacin solo se mencionan algunas aplicaciones puntuales de inters. En
anlisis de alimentos, ya se ha mencionado que la tcnica de espacio de cabeza
se usa frecuentemente para determinar especies voltiles, las cuales son, en
muchas ocasiones, responsables de olores y sabores caractersticos. A veces
se recurre a procesos de derivatizacin, tales como la formacin de steres
metlicos para la determinacin de lpidos y cidos grasos,hidrlisis cida
seguida de esterificacin para las protenas, o procesos de sililacin para
hidratos de carbono. l anlisis de drogas por cromatografa de gases suele
complementarse por HPLC, si bien, enanlisis fornsico se utiliza extensamente
la CG para la caracterizacin de ciertas sustancias. El material de partida suele
ser muy diverso; desde preparaciones comerciales a fluidos biolgicos (sangre,
orina). Lo que hace necesaria la correspondiente extraccin previa. Adems, en
ocasiones, despus de la extraccin o disolucin se requiere un proceso de
derivatizacin.La pirlisis en CG se utiliza para la caracterizacin de alquitranes,
pinturas, pelculas y fibras sintticas, e incluso material biolgico. As, por
ejemplo, se ha descrito la caracterizacin de hasta cuarenta y siete especies de
Salmonella de forma correcta en muestras de la bacteria sometidas a pirlisis.La
CGL se aplica extensamente para el seguimiento y control de la distribucin de
contaminantes en el medio ambiente. En este sentido, y por ejemplo, la Agencia
de Proteccin del Medio Ambiente en Estados Unidos y la Unin Europea ha
publicado un conjunto de mtodos para el anlisis de polutantes en aguas*,
donde se incluyen hasta 40 derivados clorados, 40organofosforados y varios
carbamatos.

Tcnica cromatogrfica utilizada en la separacin d protenas

Cromatografa de exclusin molecular

La cromatografa de exclusin molecular (Size Exclusin Chromatography, SEC)

es el nombre general para los procesos de separacin de biomolculas de
acuerdo a su tamao cuando una solucin fluye a travs de una cama empacada
con un medio poroso (Irvine 1997; Kostanski y col., 2004).

Para la separacin en SEC, se utilizan las propiedades de tamiz molecular de

una variedad de materiales porosos. El proceso de separacin depende del
tamao y el volumen hidrodinmico (volumen que ocupa una molcula en
solucin), el cual define la capacidad de la molcula de penetrar o no en los
poros de la fase estacionaria. De tal forma que, las molculas de alto peso
molecular son excluidas de los poros debido a un efecto estrico y pasan
rpidamente a travs de la matriz (ver Fig. 1). En el caso de biomolculas
pequeas, estas tienen diferente accesibilidad en las cavidades de la matriz
porosa.
En la Fig. 1 se observa que las molculas que son completamente excluidas
eluyen primero en el volumen vaco, (Irvine 1997). El volumen de elucin de las
molculas que pueden entrar en los poros libremente es designado como
volumen total, Vt. El volumen de elucin de una protena que esta entre V0 y
Vt es designado como V0 (Cutler 2008).
IMPORTANCIA DE LA CROMATOGRAFA
Es la tcnica ms desarrollada en los ltimos aos, empleada en la qumica
analtica. Su empleo presenta notables ventajas:
Es sencilla, rpida y no requiere aparatos complicados.

Abarca escalas micro analticas hasta escalas industriales. empleada en

la industria principalmente en las plantas de gases, donde se obtienen los
productos acabados como son el propano y el butano. En cada uno de
estos gases, adems de controlar los procesos de obtencin en distintos
puntos, es de inters conocer el grado de pureza de los mismos una vez
acabado dicho proceso, para lo cual por medio de la cromatografa se
realiza un anlisis cualitativo y cuantitativo de los componentes anterior y
posterior de cada uno de ellos.

Es una tcnica poca o nada destructiva que puede aplicarse a sustancias

lbiles. Constituye una metodologa imprescindible en estudios
bioqumicos, toxicolgicos, estructurales, etc. No solo utilizando como
tcnica de separacin e identificacin, sino como mtodo preparatorio,
incluso a escalas industriales.

Tambin se emplea para saber el porcentaje de reaccin de ciertos

procesos como son la eliminacin del SH2y SO2por obtencin de azufre
elemental en el que es muy importante saber la relacin entre ambos
componentes a la salida de dicho proceso.
 CONCLUSIONES
La cromatografa es un conjunto de tcnicas basadas en el principio de retencin
selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes.
La cromatografa es un proceso de separacin, para el anlisis de sustancias,
mediante el desplazamiento diferenciando a travs de un medio poroso,
arrastrados por un disolvente en movimiento.
Con el estudio de la cromatografa de los cidos y sus distintos tipos de
reacciones qumicas se pudo determinar que las sustancias pueden estar unidas
en un factor que mediante la cromatografa de las reacciones pueden separarse.
La cromatografa de gases es la mejor y ms confiable va para obtener la
composicin real de una mezcla estos datos pueden ser de gran utilidad debido
a que se pueden calcular diferentes propiedades de la mezcla partiendo de las
propiedades de cada componente.
El proceso de cromatografa de gases es sencillo, automatizado y general lo que
le hace una prueba ampliamente usado en diferentes industrias.
El factor de retencin depende de la afinidad de los aminocidos con el
disolvente o eluyente utilizado y esto mismo depende del tipo de aminocido que
se utilice, es decir si son polares, apolares, neutros, etc., por lo cual es importante
esta tcnica ya que de esta manera se nos facilitaran saber las caractersticas
del aminocido que se est utilizando.
BIBLIOGRAFIA

Braithwaite, A. Mtodos cromatogrficos, 4 ed., ED. Chapman & Hall, Londres,

1985. Pginas 216217, 271-272.
Burriel Marti, Felipe Lucena Conde, Siro Arribas Jimeno, Jess Hernndez
Mndez, Qumica Analtica Cualitativa, Ed. Thompson, Espaa, 2003 pp 321-
322.
Kenneth A. Rubinson, Judith F. Rubinson, Anlisis Instrumental, Ed. Prentice
Hall, Espaa 2004, pp 730-739.
Principios de Anlisis Instrumental. 5 ed (2001). Douglas A. Skoog, F.J.
Holler,T.A. Nieman. Mc Graw-Hill Interamericana.Anlisis Instrumental. (2001).
K.A. Rubinson, J.F. Rubinson. Prentice Hall.Anlisis de los Alimentos. (1992).
Matissek, Schnepel, Steiner. Ed. Acribia, S.A.Composicin y Anlisis de los
Alimentos de Pearson. 2 ed (1996).
R.S. Kirk, R.Sawyer, H. Egan.Qumica Analtica. 6 ed. (1997). Skoog,
West, Holler. Mc Graw-Hill.
Skoog, Douglas A. y Leary, James J. (1994), Anlisis Instrumental,
Madrid: McGraw-Hill.2.Mc Master, Marvin (1994) HPLC: A Practical User's
Guide. Wiley-VCH