INFORME 5

DETERMINACIN CUANTITATIVA DE PROTEINAS SOLUBLES POR EL

MTODO DE BIURET
*1Erika Cortes Lamprea
1,2 Estudiante del programa de Qumica de Universidad de la Amazonia
Programa de Qumica, Facultad de Ciencias Bsicas, Universidad de la Amazonia
Florencia- Caquet
Resumen: Durante la prctica se extrajo por solubilidad en cloruro de sodio las
protenas presentes en 2,0045g de harina de trigo, mediante la tcnica curva de
calibracin empleando concentraciones 0,1660 - 0,33 0,5 - 0,666 y 0.833mg/mL de
albumina se determin que la muestra de harina de trigo contiene 3,526mg 0,025
de protenas. Adems se emple el mtodo colorimtrico reaccin de Biuret que
absorbe a una longitud de onda de 540nm.

Introduccin:

Las protenas ocupan un lugar de mxima importancia entre las molculas

constituyentes de los seres vivos (biomolculas). Prcticamente todos los procesos
biolgicos dependen de la presencia o la actividad de este tipo de molculas. 1
Existen diferentes mtodos para la cuantificacin de protenas. Muchos de estos
mtodos se basan en: a) la propiedad intrnseca de las protenas para absorber luz
en el UV, b) para la formacin de derivados qumicos, o c) la capacidad que tienen
las protenas de unir ciertos colorantes. 2

Las protenas se pueden clasificar de acuerdo a su solubilidad en:

- Albminas que son solubles en agua

- Globulinas: solubles en soluciones salinas diluidas.
- Glutelinas: Solubles en cidos y bases diluidas
- Prolaminas: Solubles en soluciones acuosas de etanol. 3

El mtodo de Biuret se basa en la formacin de un complejo coloreado entre el

Cu2+ y los grupos NH de los enlaces peptdicos en medio bsico. 1Cu2+ se
acompleja con 4NH. La intensidad de coloracin es directamente proporcional a la
cantidad de protenas (enlaces peptdicos) y la reaccin es bastante especfica, de
manera que pocas sustancias interfieren. La sensibilidad del mtodo es muy baja y
slo se recomienda para la cuantificacin de protenas en preparados muy
concentrados.

Materiales y mtodos:

La prctica se llev a cabo de la siguiente manera:

- Preparacin de la muestra:

Se peso 2,0045 gramos de harina de trigo y se adicion 10 ml de NaCl al 5%. Se

agit durante 5 minutos y se centrifug a 2.800 r.p.m. El sobrenadante se transfiri
a un matraz aforado de 25 mL, se repiti este procedimiento 2 veces ms.
Seguidamente en un Beaker de 50mL previamente rotulado como muestra se
disolvi el precipitado final en 10 mL de NaCl,

- Curva de calibracin
Para la determinacin cuantitativa de protenas por el mtodo de Biuret se realiz
una curva de calibracin utilizando un patrn de albmina de 5 mg / mL.

Se rotularon 8 tubos de ensayo (B,1,2,3,4,5,6,7 y S) y se agreg a cada uno los

respectivos volmenes (mL) de las sustancias como lo indica la siguiente tabla

Se agit y se dej en reposo por 20 minutos a temperatura ambiente para el

desarrollo del color. Finalmente se midi la absorbancia a una longitud de onda de
540 nm.

RESULTADOS Y DISCUSIN:
En la prctica se utiliz las protenas de tipo albmina, en cuanto a estas se puede
recordar que precipitan en soluciones salinas concentradas proceso que se
denomina precipitacin por salado o salting out.

A medida que se adiciona soluciones salinas concentradas, la fuerza inica

aumenta, la solubilidad de una protena comienza a disminuir. A una fuerza inica
lo suficientemente elevada, una protena puede ser casi completamente precipitada
de su disolucin, efecto llamado precipitacin por salado o salting out, que es el
resultado de la competencia por molculas de solvatacin entre los iones salinos
agregados y los otros solutos disueltos. Uno de los factores que explican este efecto
es que la concentracin elevada de la sal puede eliminar el agua de hidratacin de
las molculas de protena, reduciendo entonces su solubilidad.

BIBLIOGRAFA:
2:
Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular, Campus Universitario de Rabanales, Edificio
Severo Ochoa, 14071-Crdob