Microbiologa clnica 1

Accin de la melitina sobre la patogenicidad del virus de

la inmunodeficiencia humana (VIH)
Carolina Ordoez Toro, Departamento de Biologa, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales,
Universidad de Nario
Noviembre de 2017

Introduccin

El virus de inmunodeficiencia humana VIH es un RNA virus, perteneciente a la familia de

los retrovirus, llamados as por poseer una enzima llamada retrotranscriptasa que es
indispensable para completar su ciclo vital, dentro de los retovirus existen dos subfamilias
que contienen patgenos para el humano, los oncovirus y los lentivirus. El virus del VIH
pertenece a los lentivirus donde se reconocen dos tipos; VIH-1 y VIH-2, los dos tipos son
causantes del sndrome de inmunodeficiencia humana tambin tienen de 40 a 60% de
homologa de secuencia de aminocidos, pero se distinguen claramente desde el punto de
vista epidemiolgico. El tipo 1 est diseminado en todo el mundo y es el responsable de la
mayor parte de los casos de infeccin por VIH y el tipo 2 se encuentra restringido a frica
Oeste, adems el VIH-2 tiene un periodo de incubacin ms largo que el VIH-1 entre 15 y
20 aos. [1]

Como el VIH de mayor importancia epidemiolgico es el VIH-1 este estudio se centrara en

este tipo, como pasa en todos los virus necesitan de una clula husped para poder
completar su ciclo de vida, las clulas blanco del VIH en el cuerpo humano son el linfocito
T CD4+ y los macrfagos aunque es capaz de infectar otros linfocitos, clulas de
sostn(gla) del sistema nervioso central y neuronas, clulas enterocromafines del intestino
y clulas dendrticas incluyendo las clulas de Langerhans, as como precursores de
mdula sea. [2]

El VIH-1 entra generalmente por las mucosas durante las relaciones sexuales, una vez a
entrado al cuerpo este reconoce los receptores especficos CD4, y los correceptores CCR5,
y CXCR4 estos dos ltimos son receptores de quimiocinas beta de las protenas integrales
de membrana, estos receptores y correceptores se encuentran en la membrana de las
clulas blanco, El contacto del VIH-1 con el receptor y correceptor origina una serie de
cambios en la estructura viral, a nivel de las glicoprotenas de superficie que desemboca en
la fusin de las membranas viral y celular y la internalizacin del virin. Cuando el material
gentico del virus (virin) ha entrado en la clula acta la enzima retrotranscriptasa la cual
lleva a cabo la transcripcin reversa con la formacin de DNA de cadena sencilla a partir
del RNA viral. Este DNA de cadena sencilla sirve de molde para crear un DNA de doble
cadena, que pueda incorporarse al material gentico de la clula husped en donde se
denomina provirus. El provirus es el encargado de dirigir la creacin de nuevas partculas
virales y as dar inicio a la colonizacin del husped. [3]

A lo largo de los aos luego del descubrimiento de este virus y de su sndrome asociado
(SIDA) se han desarrollado un sinfn de tratamientos con el fin de controlar la reproduccin

Accin de la melitina sobre la patogenicidad del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) |

Microbiologa clnica 2

del virus y evitar el dao de las clulas blanco del husped, uno de estos tratamientos se
basa en el uso de pptidos antimicrobianos

Los pptidos antimicrobianos son componentes evolutivamente conservados de la

respuesta inmune innata. Aunque originalmente fueron descubiertos por sus propiedades
microbicidas, su rango de accin se ha incrementado al demostrarse que ejercen
actividades inmunomoduladoras y reparadoras de dao. Sus caractersticas qumicas y
fsicas correlacionan con sus actividades microbicidas, que se ejercen a travs de la
formacin de poros en membranas de patgenos o inhibiendo el metabolismo bacteriano al
internalizarse en el citoplasma. Varios de estos pptidos presentan un amplio espectro de
actividad contra bacterias, hongos, parsitos y virus envueltos. [4]

En este trabajo se va a tratar especficamente la melitina, uno de los pptidos

antimicrobianos que estn siendo estudiados para el tratamiento contra el VIH, la melitina
es un pptido membranoltico anfiptico de 26 aminocidos, que es el componente principal
de la apitoxina o veneno de abeja Apis Mielifera. Diversos estudios han confirmado la accin
antimicrobiana de la melitina, por ejemplo, la investigacin in vitro ha demostrado que
ejerce efectos inhibitorios "profundos" en la Borrelia burgdorferi, la bacteria que causa
la enfermedad de Lyme.1 Tambin se ha demostrado que mata las levaduras de Candida
albicans,2 y suprime infecciones por Mycoplasma hominis y Chlamydia trachomatis. [5]

Teniendo en cuenta estos antecedentes la presente investigacin pretende establecer la

accin de la melitina sobre el VIH, entender su actividad antivrica y al mismo tiempo su
efectividad.

Materiales y mtodos

Obtencin de la melitina
La melitina es asilada y purificada de la apitoxina o veneno de abeja obtenido de
especmenes de Apis mellifera comnmente conocida como abeja domstica o abeja
melfera, no obstante este compuesto ya se comercializa en forma pura por lo cual la
melitina que se utilizara para este trabajo se obtendr de una casa comercializadora.

Cepas de virus de VIH-1

Las cepas del virus del VIH-1 fueron proporcionadas por la fundacin hospital san pedro en
el municipio de pasto departamento de Nario.

Lnea celular para el cultivo de virus

El cultivo celular se realiz a partir de clulas TZM-bl, estas son clulas HeLa diseadas
para expresar el receptor CD4, el correceptor CCR5 y el correceptor CXCR4. Tambin
expresan luciferasa bajo el control de un promotor de VIH-1 que permite la cuantificacin
de la infectividad de VIH-1. Las clulas se cultivaron en medio completo compuesto por;
medio RPMI 1640, 20% suero bovino fetal, 5% IL-2 (Boheringer Manheim), 100 g/ml de
penicilina y 100 g/ml de estreptomicina.

Incubacin de las cepas virus VIH-1 con melitina

Accin de la melitina sobre la patogenicidad del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) |

Microbiologa clnica 3

Se incubo una cantidad de 50 ng de cepas del virus VIH-1 con melitina a una concentracin
de 10mM durante 1h a 37 C.

Infeccin de clulas TZM-bl con VIH-1 tratado con melitina

Los virus obtenidos despus del tratamiento con melitina se usaron para infectar las clulas
indicadoras de TZM-bl cultivadas anteriormente durante 2 das a 37 C. Despus de la
infeccin, se eliminaron los medios de cultivo y las clulas se lisaron con PBS que contena
Triton-X100 al 0,2%. La actividad de la luciferasa en unidades de luz relativa se determin
entonces como una medida de la infectividad del VIH-1 usando un luminmetro Opticomp.
[6,7,8]

Resultados esperados y discusin

Como se conoce en base a estudios previos la melitina, es un pptido membranoltico

anfiptico de 26 aminocidos, que es un componente del veneno de abeja. La melitina se
integra rpidamente en las bicapas lipdicas y forma poros que producen lisis osmtica. Ms
all de su actividad citoltica directa formadora de poros, la protena de melitina puede
facilitar indirectamente la apoptosis celular y la necrosis (Hood J. et al. 2012). Por lo cual se
esperara que cause este mismo efecto en las envolturas lipdicas virales

Segn lo reportado por Hood J. y colaboradores en 2012, la melitina libre puede inhibir la
infeccin por VIH-1 dependiente de CXCR4 y CCR5 como correceptores, pero puede ser
txica para las clulas normales. Esto debido a que la melitina es el componente activo y
ms letal en el veneno de la abeja, este se adhiere a las membranas de los glbulos rojos,
produciendo hemlisis (Valderrama R. 2003), tambin segn el estudio realizado por
Andrew P. y colaboradores en 2014, la melitina libre es un potente toxico para los
espermatozoides y el epitelio vaginal a concentraciones superiores a 2 M.

La accin de la melitina sobre la patogenicidad de los virus de VIH ha sido probada en

diferentes estudios, segn Wachinger M y colaboradores en 1998 la absorcin de melitina
por las clulas infectadas por VIH-1 conduce a la disminucin de la expresin y replicacin
del gen del VIH-1. Con lo cual se reduce significativamente la patogenicidad del virus.

Segn los estudios realizados en cuanto a la accin de la melitina sobre el virus de VIH se
podra afirmar que este estudio dara como resultado que la melitina efectivamente reduce
la infeccin de las clulas por el VIH-1, pero esto como resultado experimental in vitro ya
que como se reporta la melitina libre es muy toxica para los tejidos celulares vivos y una
administracin de este compuesto de forma libre en el cuerpo podra causar daos en las
clulas como espermatozoides, clulas del epitelio vaginal y glbulos rojos. Por lo cual para
el desarrollo de tratamientos con este compuesto se estn desarrollando tcnicas como el
uso de nanoparticulas que funcionen como transportadores dentro del cuerpo humano para
as reducir la citotoxicidad del este compuesto.

A lo largo del tiempo se han desarrollado muchos tratamientos para el virus de

inmunodeficiencia humana con el fin de detener su reproduccin y evitar que se
desemboque el sndrome de inmunodeficiencia adquirida (SIDA) ya que en esta etapa la

Accin de la melitina sobre la patogenicidad del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) |

Microbiologa clnica 4

enfermedad ya no se puede detener y termina destruyendo los linfocitos T y macrfagos

dejando as el organismo desprovisionado del sistema inmune con lo cual llegan las
enfermedades oportunistas las cuales terminan acabando con la vida de la persona, una
de los principales obstculos que se han presentado en cuanto al desarrollo de estos
tratamientos es que la enzima transcriptasa reversa al realizar las copias de DNA a partir
del RNA viral comete un error de copia (mutacin) en cada genoma que copia generando
poblaciones virales cada vez ms diferentes de la cepa predominante inicial a la cual se le
denomina silvestre. A las diferentes variantes presentes en un individuo se les denomina
cuasiespecies, pudiendo existir cientos de miles de variantes coexistentes en un solo
organismo, las cuales estn relacionadas con patogenicidad y resistencia a antirretrovirales.
Por esta razn se hace cada vez ms indispensables el desarrollo de tcnicas que no se
centren en el genoma del virus ya que este cambia constantemente si no en la estructura
de este como lo es su cpside la cual conserva sus caractersticas. Como es el caso de la
utilizacin de pptidos como la melitina.

Conclusiones
La melitina es uno de los pptidos antimicrobianos ms eficaces ante la mayora de
bacterias, por esto se propuso como candidato para el tratamiento contra el VIH por su
accin citoltica sobre las membranas lipdicas, por lo cual se asumi que tambin podra
actuar sobre los lpidos de la cpside de los virus del VIH. Como se mencion anteriormente
segn los estudios realizados se ha comprobado la accin que tiene la melitina sobre los
virus de VIH aunque tambin el inconveniente es la toxicidad de la melitina ya que al ser el
componente activo y letal ms importante del veneno de las abejas al ser suministrado al
cuerpo de forma libre podra causar la destruccin de varias clulas por lo cual se hace
necesario el estudio de tcnicas que permita la utilizacin de la melitina para la terapia
contra el SIDA.

Bibliografa
1. Tang H, Kuhen KL, Wong Staal F. Lentivirus replication and regulation. Annu Rev
Genet 1999; 33: 133-70.
2. Pope M. Mucosal dendritic cells and immunodeficiency viruses. J Infect Dis 1999;
179(Suppl. 3): S427-S30.
3. Schacker T, Little S, Connick E, et al. Rpida acumulacin de virus de la
inmunodeficiencia humana (VIH) en reservorios de tejido linftico durante la infeccin
aguda y temprana por el VIH: implicaciones para el momento de la terapia antirretroviral.
J Infect Dis 2000; 181: 354-7.
4. Castaeda J, Ortega J, Venegas A, Aquino A, Serafn J, Estrada S, Estrada I, 2009.
Pptidos antimicrobianos: pptidos con mltiples funciones. Escuela Nacional de
Ciencias Biolgicas, IPN. Vol. 18, Nm. 1
5. Lazarev VN, Parfenova TM, Gularyan SK, Misyurina OY, Akopian TA, Govorun VM
(febrero de 2002). La expresin inducida de melittin, un pptido antimicrobiano, inhibe
la infeccin por Chlamydia trachomatis y Mycoplasma hominis en una lnea celular
HeLa. En t. J. Antimicrob. Agentes (en ingls) 19 (2): 133-7.
6. Joshua L Hood, Andrew P Jallouk, Nancy Campbell, Lee Ratner, Samuel A Wickline.
2013. Cytolytic nanoparticles attenuate HIV-1 infectivity. Antiviral Therapy. Washington
University School of Medicine. 18:95103 (doi: 10.3851/IMP2346).

Accin de la melitina sobre la patogenicidad del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) |

Microbiologa clnica 5

7. Jallouk AP, Moley KH, Omurtag K, Hu G, Lanza GM, Wickline SA, et al. (2014)
Nanoparticle Incorporation of Melittin Reduces Sperm and Vaginal Epithelium
Cytotoxicity. PLoS ONE9(4): e95411. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0095411.
8. M.A. Muoz Fernndez, E. Obregn Gonzlez, J. Navarro Caspistegui, M.D. Gurbindo
Gutirrez, T. Hernndez Sampelayo, E. Fernndez-Cruz. 1996. Estudio comparativo de
tcnicas para el diagnstico del virus de la inmunodeficiencia humana en nios menores
de 15 meses por: cultivo viral, reaccin en cadena de la polimerasa y antgeno p24.
ANALES ESPAOLES DE PEDIATRIA. Servicio de Inmunologa. 2Departamento de
Pediatra. Hospital General Universitario Gregorio Maran. Madrid. VOL. 44 N 6.

Accin de la melitina sobre la patogenicidad del virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) |