UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS PECUARIAS

FACULTAD DE ZOOTECNIA

PRCTICA IV: OBSERVACION DE

MUESTRAS invivo

CURSO : MICROBIOLOGIA ANIMAL

PROFESOR : Med.Vet.TAFURZEVALLOS, LIZANDRO ROGER

ALUMNO : MOREL CASTRO WILDER ALEX

FECHA DE ENTREGA: 04-10-2017

TINGO MARIA PER

 I. INTRODUCCIN

En la naturaleza, los microorganismos se encuentran formando poblaciones

mixtas con otros tipos de microorganismos. Los cultivos de estas mezclas se
llaman por ello cultivos mixtos. Sin embargo, el conocimiento de los
microorganismos se consigue mediante el estudio de cepas aisladas,
cultivadas en el laboratorio en cultivos puros (o axnicos). En ocasiones
el estudio molecular conduce a la caracterizacin de los microorganismos, an
en poblaciones mixtas. Sin embargo la identificacin bacteriana y la
caracterizacin completa solo es posible tras el aislamiento de la bacteria y la
obtencin de cultivos puros. Por ello el primer problema al estudiar una
bacteria es su aislamiento del resto de los microorganismos presentes (enn una
muestra patolgica, de agua, de suelo, de alimentos, etc.). Una vez que se ha
logrado el aislamiento es posible obtener la bacteria de inters en cultivo puro.
Un medio de cultivo intenta el crecimiento y reproduccin in vitro de las
bacterias, para observar sus propiedades y conseguir un mejor estudio
bioqumico e inmunolgico, al contar con material en cantidad suficiente. Por
ello constare de lagunas propiedades (pH adecuado, sales, nutrientes,
condicione de aero-anaerobiosis, etc.), que sern las ms idneas para la
bacteria que deseamos estudiar y se citan en cada una de ellas en particular,
en la bacteriologa sistemtica.

Los medios de cultivo se dividen por su finalidad en: medios de

enriquecimiento que tratan de aumentar el nmero de bacteria existentes , si
consideramos que se encuentran en cantidad muy exigua, a la vez que inhiben
la flora de asociacin acompaante( y de aislamiento ( que tienen por fin
conseguir una colonia o clon, es decir, grupo de bacterias procedentes de una
sola, con todas sus propiedades); los dos primeros son principalmente lquidos
y los segundos, slidos

OBJETIVOS
Identificar mtodos eficaces para el aislamiento de microorganismos.
Conocer algunos mtodos para obtener un cultivo puro.
 II. REVISIN BIBLIOGRAFICA

Microorganismos en la boca: estas son las especies que podemos encontarr

segn el estado del paciente:

PACIENTESANO

Gram +
Streptococcus: sanguis, gordonii, oralis, mitis
Actinomyces: naeslundii, israelii, viscosus

Gram
Veillonellaparvula
Fusobacteriumnucleatum

GINGIVITIS

Gram +
Streptococcus: sanguis, oralis, mitis, intermedius
Peptostreptococcus micros
Actinomyces: naeslundii, israelii, odontolyticus
Eubacterium: brachy, timidum

Gram
Veillonellaparvula
Fusobacteriumnucleatum
Campylobacterrectus
Bacterioidesgraciis
Prevotella: nigrescens, loeschii
Capnocytophaga: ochracea, gingivalis, sputigena
Selenomonasnoxia
Eikenellacorrodens
Factores qumicos: La acidez de las secreciones gstricas mantienen sin
duda la esterilidad habitual del estmago. El Ph bajo de la piel (3-5), debido en
gran parte a los productos cidos del metabolismo bacteriano, frena sin duda
el crecimiento de muchos microorganismos que toman contacto con sus
superficie.

Factores microbianos: La flora de la regin farngea presenta problemas

peculiares para el aislamiento e identificacin de microorganismos, por lo
tanto se refiere a los componentes de la flora normal como a microorganismos
con accin patgena. Se encuentran ampliamente distribuidos por la
naturaleza, y a menudo forman parte de la flora bacteriana de la piel y el tracto
respiratorio superior; muchas de las especies que se encuentran en el hombre
son comensales. La especie predominante patgena para el hombre es
el staphylococcus aureus, constituye la causa ms comn de las infecciones
supurativas para el hombre. El aislamiento de S. aureus a partir del exudado
farngeo y exudado de piel, no tiene importancia diagnstica, ya que se
considera parte de la flora normal de la faringe y nasofaringe, por lo que no
tiene significado clnico.
PROCEDIMIENTO:

A). Raspado de piel

1. Limpiar y esterilizar el rea a trabajar con fenol al 5%
2. Prender el mechero fischer cerca de donde se va a trabajar, si es posible
colocar otro
3. Humedecer el hisopo en solucin salina estril, pasarlo sobre la superficie de
la piel (con o sin pelo)
4.- Descargar el hisopo en dos cajas de petri con el medio ya preparado. (Es
recomendable que para cada dos cajas se utilice un solo hisopo con muestra).
No retires completamente las tapas de losmedios de cultivo para evitar que se
contaminen
5.- quemar el hisopo y tirarlo.
6.- Esteriliza el Asa de platino hasta el rojo vivo, enfralo introducindolo en un
extremo del Agar
7.- Realiza el sembrado de los microorganismos por el mtodo de estra
utilizando el asa y como se muestra en la figura. Evita destapar completamente
la tapa de los medios de cultivo.
8- Repetir el mismo proceso con otro hisopo estril y con solucin salina para
otras dos cajas . siembra por estra utilizando el Asa de platino y as hasta que
se terminen se sembrar todos los medios preparados.
9.- Incubar a 37C por 24-48 horas y observar resultados.10.- Repite el
mismo procedimiento pero ahora toma muestra de la faringe con hisopos
estriles en las zonas afectadas como: amgdalas,pared posterior de la
faringe, en general cualquier rea que manifiesta signos de inflamacin,
exudados y lceras, procurando no tocar con el hisopo la lengua.
B) CULTIVO DE BACTERIAS A PARTIR DE UN FROSTIS FARNGEO

OBJETIVOS
Comprender el concepto de colonia bacteriana, medio de cultivo y halo
de inhibicin
Conocer las tcnicas de siembra y cultivo de bacterias
Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en
la manipulacin de materiales biolgicos.
Comprender la importancia de la eliminacin de los residuos orgnicos
Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiologa y los
procedimientos para su utilizacin
MATERIALES
Depresor de lengua
Torunda o hisopo estril
Placas de agar-sangre
Asa de siembra
Rotulador de vidrio
Cinta adhesiva
Contenedor de residuos orgnicos

DESARROLLO DE LA PRCTICA
Antes de empezar
No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra
biolgica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para
evitar contaminaciones.
Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor
especial. Estos contenedores sern llevados posteriormente a
una planta de tratamiento de residuos biolgicos, donde sern
incinerados.
Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente
identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra.
 Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para
evitar su contaminacin o la nuestra.
Al acabar la prctica, se deben lavar bien las manos.

Toma de la muestra
Se abre con cuidado, por un extremo, el depresor de madera, sin tocar
el otro extremo para mantenerlo estril.
Distribuidos por parejas, uno de los miembros de la pareja sujeta con el
depresor la lengua del otro, colocndola pegada al suelo de la boca,
manteniendo despejada la abertura bucal.
CON CUIDADO, se introduce una torunda y se tocan suavemente las
amgdalas, en donde se encuentran bacterias, intentando evitar el
contacto con la lengua u otras zonas. Es normal que se provoque un
reflejo de arcada. En este caso, se separa la torunda y se vuelve a
intentar.
Al finalizar, se tira el depresor al contenedorde desechos orgnicos.
Se tapa la torunda y se rotula con el nombre del donante y la fecha,
indicando con una F, que se trata de un frotis farngeo.

SIEMBRA : A continuacin se toma una placa de agar-sangre y se procede a la

siembra del material recogido con la torunda o Hisopo. Se extrae la funda de la
torunda y se pasa SUAVEMENTE por la superficie, cubriendo el rea sealada
en el dibujo como (A) Al finalizar, se tira el hisopo al contenedor de
desechos orgnicos.
AISLAMIENTO

Para intentar que las colonias crezcan separadas tomamos un asa de siembra
y se realizan resiembras en dos zonas:
(B) Tocando con el asa la zona (A) se realiza una lnea zig-zagueante
SUAVEMENTE sobre la superficie (no hay que perforar la superficie del
agar-sangre) (C) Sin tocar las anteriores zonas. Se tapa y se sella la
placa con cinta adhesiva.
Se rotula la tapa indicando el nombre del donante, su grupo-clase, la
fecha y la F (de frotis farngeo).

INCUBACIN Y OBSERVACIN
Se llevan las placas a incubar a 37C (temperatura corporal), durante 24 horas.
Tras este perodo se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el
crecimiento bacteriano.
Al finalizar la prctica se entregan las placas al profesor para que sean
destruidas junto con el resto de material empleado.

OBSERVACIN
El medio de cultivo agar-sangre es un medio nutritivo general, no selectivo, en
el cual pueden crecer casi todos los tipos de microorganismos. Su nombre
deriva de que contiene un 5-10% de sangre desfibrinada (no coagula) extrada
de caballo, conejo o, sobre todo, de carnero.
Las bacterias existentes en la faringe pueden ser de dos tipos:

Flora bacteriana propia o normal, de vida saprofita (crecen sobre restos

de comida).
Flora patgena, que provoca enfermedades
(especialmenteStreptococcus pyogenes, responsable de la faringitis
aguda, la fiebre reumtica, angina estreptoccica, escarlatina, erisipela)

Al tomar una muestra de la faringe, las bacterias existentes empiezan a

dividirse. De una bacteria se forman miles o millones, dando lugar a una
colonia, visible a simple vista.

INTERPRETACIN DE RESULTADOS:

A) REACCIONES POSITIVAS EN DISTINTOS MEDIOS

GELOSA SANGRE
Para el aislamiento, cultivo y deteccin de actividad hemoltica de
Staphylococcus, Streptococcus y otros microorganismos fastidiosos. Se
observan colonias blancas casi grises, Grandes, convexas de consistencia
butircea, Presentan bordes regulares. Se observa que Presenta hemlisis.

MANITOL SAL AGAR (MSA)

Se utiliza como medio selectivo, para cultivar y enumerar especies clnicas de
estafilococos El manitol cuando es utilizado por los microorganismos, vira de su
color original rojo a amarillo. Se observan colonias chicas, blancas, convexas,
de consistencia butircea , presentan bordes irregulares. S. aureus Manitol sal
Colonia amarilla S. epidermidis Manitol sal Colonia incolora

AGAR VOGEL Y JONSON (AVJ)

Para la deteccin de Staphylococcus aureus coagulasa-positivo, se observan
colonias negras Pequeas. bordes irregulares con halo amarillo. Para S.
epidermidis y otros Pequeas, negro-grisceos, sin halo, El medio presenta un
vire de rojo plido a amarillo.

ESTAFILOCOCO S110
S110 Colonias blancas un poco amarillentas, Se observan colonias chicas,
convexas, De consistencia butircea y bordes Regulares.

B) DESCRIPCIN DEL TIPO DE COLONIAS OBTENIDAS

Observar las colonias obtenidas y describirlas teniendo en cuenta las
siguientes caractersticas:
Forma: Puntiforme, Circular, Rizoide, Irregular, Filamentosa.
Tamao: Grande (ms de 3Mm.), Mediana (2-3Mm.), Pequea (1-2
Mm.)
Color: Reportar el color final despus de la incubacin
Borde: Entero, Ondulado, Lobulado, Filamentoso, Ondeado
Elevacin: Plano, Elevado, Convexo, Pulvinado, Umbonado
Superficie: Suave, Brillante, Rugosa, Plegada, Seca, Polvorienta
 III. MATERIALES Y METODOS

3.1. Lugar y Fecha

La practica acerca de observacin de microorganismos invivo lo realizamos

en el laboratorio de sanidad animal de la facultad de zootecnia de la
Universidad Nacional Agraria de la Selva (UNAS - Tingo Maria) ubicado en
el distrito de Rupa Rupa, provincia de Leoncio Prado, departamento de
Huanuco. Geogrficamente, esta zona se encuentra situada entre las
cordilleras central y oriental. Esta considerada como bosque Tropical.
Ubicado a una latitud sur 9 1758 y longitud oeste 76 0107 a 660
m.s.n.m. el clima que presenta es tropical hmedo, temperatura media
anual de 24C, tiene un precipitacin pluvial de 3.660 mm y una humedad
relativa de 84% .

3.2. Materiales

Asa de COLLE
Mechero
Placas Petri con la muestra de la bacteria respectiva
Plumn indeleble
Tubos de caldo nutritivo
Guantes quirrgicos
Mascarilla

3.3. Mtodos
El mtodo utilizado en la prctica fue terico prctico con las adecuadas
indicaciones del encargado del curso.

IV. RESULTADOS
 V. DISCUSION

En la preparacin de medios de cultivos en forma

liquida (caldo nutritivo) y slida (gelificantes) se trata
es de conseguir un medio que rena las condiciones
fisiolgicas necesarias para que las clulas se
desarrollen. Los parmetros ms importantes a tener
en cuenta son la presencia de agua, la temperatura,
el pH y el oxgeno. Los medios de cultivo pueden ser
slidos, semislidos o lquidos, con composicin
qumica conocida o indefinida.

VI. CONCLUCIONES

Al finalizar el trabajo prctico estamos en capacidad y condiciones de:aislar

yPreparar adecuadamente medios de cultivo a partir de sus ingredientes y a
partir de medios de cultivo deshidratados. El medio de cultivo lquido (caldo
nutritivo) y gelificante fue preparado especficamente para el aislamiento de
salmonella shigella bacteria estudiada y posteriormente aislada.
 VII. BIBLIOGRAFIA

- http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html
- http://www.ucv.ve/Farmacia/Micro_web/Catedras02/medicult.pdf
- http://www.geocities.com/CapeCanaveral/Hall/3081/natural/caldo.htm
- http://www.wikilearning.com/diferenciacion_en_los_medios_de_cultivo-
wkccp-17561-3.htm
- http://www.etsea2.udl.es/invitro/preparac.htm
- http://100cia.com/opinion/foros/showthread.php?t=2585