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cromatográficas
Federico Williams
fwilliams@qi.fcen.uba.ar
2do. cuatrimestre 2007
Invención de la cromatografía: Mikhail Tswett (1906)
“If a petroleum ether solution of chlorophyll filters through a column of an adsorption material (I use chiefly
calcium carbonate which is firmly pressed into a narrow glass tube), the pigments will separate according to
the adsorption series from above downward in differently colored zones, and the more strongly adsorbed
pigments will displace the more weakly held ones which will move downward. This separation will be
practically complete if, after one passage of the pigment solution it is followed, by a stream of pure solvent
through the adsorbing column. Like the light rays of the spectrum, the different components of a pigment
mixture in the calcium carbonate column will be separated regularly from each other, and can be
determined qualitatively and also quantitatively. I call such a preparation a chromatogram and the
corresponding method the chromatographic method.”
Berichte der Deutschen botanischen Gesellschaft 24, 316-23 (1906) [traducido en: Henry M. Leicester,
Source Book in chemistry 1900-1950 (Cambridge, MA: Harvard, 1968)]
Descripción general de la cromatografía
Las dos fases se elijen de tal modo que los componentes se distribuyen de modo distinto
entre la fase móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente
retenidos por la fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil. Por el
contrario, los componentes que se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con
rapidez. Como consecuencia de la distinta movilidad, los componentes de la muestra se
separan en bandas que pueden analizarse cualitativa y cuantitativamente.
Clasificación de la Cromatografía
Cromatografía en Plano Cromatografía en Columna
El ancho de la banda aumenta a medida que se mueve a través de la columna, debido a que
se dispone de más tiempo para que la dispersión tenga lugar. El ancho de la banda está
relacionado directamente con el tiempo de residencia en la columna e inversamente
con la velocidad con la que fluye la fase móvil.
Efectos de las velocidades de migración y del
ensanchamiento de banda sobre la resolución
L
Fase móvil u=
tM
L
Soluto v=
tR
constante de distribución: cromatografía lineal
cS
Amóvil ←
→ Aestacionaria K= Tener en cuenta que NO hay un equilibrio ya que
cM no se puede alcanzar con la fase móvil moviéndose
continuamente
L cM VM 1 1
v = = u× = u× = u×
tR cM VM + cSVS 1 + KVS / VM 1 + k ´A
Factor de retención Factor de selectividad (definido mayor que 1)
K AVS t R − tM K B k B´ (t R ) B − t M
kA =
´
= α= = ´ =
VM tM K A k A (t R ) A − t M
Efecto de la isoterma
Se asume que la constante de distribución es constante y por lo tanto un gráfico de C(S)
vs C(M) es lineal.
C(S)
C(M)
Eficacia de la columna
L La eficacia de la columna aumenta cuanto mayor es el número de platos
N= (N) y cuanto menor es la altura del plato (H). (L es la longitud del relleno de
H la columna). Tanto N como H se toman como medidas de la eficacia de la
columna.
LW 2 tR 2
H= 2
N = 16( )
16t R W
B
H = A + + Cu
u
A = 2λd p Caminos múltiples
de flujo
B 2γDM
= Difusión longitudinal
u u
Transferencia de
masa entre las fases
Cu = (CS + CM )u =
f S (k ´ )d 2f f M (k ´ )d p2
=( + )u
DS DM
Coeficientes A, B y C
2(t R , B − t R , A )
R= =
wB + wA
N ⎛ α − 1 ⎞ ⎛ k B' ⎞
⎜ ⎟⎜ ⎟
4 ⎝ α ⎠ ⎝ 1 + k B' ⎠
N α A, B − 1 ⎛ k B ⎞
⎛ ⎞ '
R= ⎜⎜ ⎟⎟ ⎜ ' ⎟
4 ⎝ α A, B ⎠ ⎝ 1 + k B ⎠